Wnt/β-catenin通路抑制剂Wnt-C59抑制子宫内膜异位症子宫内膜干细胞的增殖

目的分析Wnt/β-catenin通路抑制剂Wnt-C59对子宫内膜异位症(EM)子宫内膜干细胞增殖的影响。 方法分离纯化获得子宫内膜干细胞,随机分为对照组、低剂量组(5 mmol/L Wnt-C59)和高剂量组(30 mmol/L Wnt-C59)。MTT法分析各组细胞增殖情况,Western blotting法分析细胞凋亡蛋白及Wnt/β-catenin通路蛋白的表达变化,酶联免疫吸附测定法分析LC3、Beclin1水平变化。结果与对照组比较,低剂量组和高剂量组细胞增殖受到明显抑制,Wnt3a及β-catenin蛋白水平明显降低,细胞凋亡蛋白Caspase-3及Caspase-9水平明显升高,LC3、Beclin1蛋白水平明显升高(P＜0.05),且高剂量组均更为明显(P＜0.05)。Pearson相关性分析显示,Wnt3a及β-catenin蛋白水平均与细胞增殖抑制率呈负相关(P＜0.05)。结论Wnt/β-catenin通路抑制剂Wnt-C59能有效抑制EM子宫内膜干细胞增殖,促进其凋亡、自噬作用,其作用可能与其对Wnt/β-catenin信号通路的抑制有关。     

消瘤方对子宫内膜异位症模型大鼠子宫内膜细胞Wnt通路的影响

目的:探讨消瘤方对子宫内膜异位症模型大鼠子宫内膜细胞Wnt通路的影响。方法:雌性8~12周龄SD大鼠,采用自体移植法手术造模成功后,随机分为模型组、西药组、消瘤方高剂量与低剂量组;另设正常组、假手术组为对照。模型组和假手术组灌胃0.9%Na Cl溶液,西药组灌胃丹那唑混悬液,消瘤方高、低剂量组灌胃不同剂量(55.0、27.5 g·kg-1·d-1)的消瘤方药液,连续给药4周。剖腹观察子宫内膜组织种植及生长情况,并采用Western-blot法检测药物干预后模型大鼠在位及异位子宫内膜细胞Wnt7a、β-catenin蛋白表达的变化。结果:模型组异位内膜组织生长良好,中药高剂量与西药组异位内膜组织萎缩,而各组在位的子宫内膜组织肉眼观察无明显变化;与模型组比较,中药高剂量组和西药组在位、异位内膜细胞中Wnt7a、β-catenin蛋白的表达水平下降(P0.05),且均优于中药低剂量组(P0.05)。结论:消瘤方可促进子宫内膜细胞凋亡,并可抑制Wnt通路的关键调节因子。     

补肾强督方对骨髓间充质干细胞成骨过程Wnt通路中因子表达的影响

目的:研究补肾强督方含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨过程Wnt/β-catenin通路中因子表达的影响。方法:BMSCs细胞分为空白对照组、西药对照组、补肾强督方低中高剂量组,分别进行成骨诱导分化,茜素红染色法检测各组成骨程度,实时荧光定量PCR检测GSK3β、wnt5a和SOST基因mRNA表达,Western blot检测Wnt/β-catenin通路关键因子GSK3β、wnt5a和SOST蛋白表达。结果:空白组BMSCs成骨分化培养后可见明显矿化结节形成,补肾强督方干预组未见明显矿化结节。与空白对照组比较,补肾强督方含药血清组BMSCs中SOST、GSK3β蛋白表达显著升高,Wnt5a蛋白的表达显著降低(P<0.05)。与空白对照组比较,补肾强督方含药血清组BMSCs中SOST、GSK3βmRNA的表达显著升高,Wnt5a mRNA的表达显著降低(P<0.05)。结论:补肾强督方含药血清具有抑制强直性脊柱炎骨化的作用,其机制可能与抑制BMSCs成骨过程中的Wnt/β-catenin信号通路相关。     

补肾活血汤干预衰老大鼠退变椎间盘模型中经典WNT信号通路β-catenin蛋白含量的研究

目的观察补肾活血汤对衰老大鼠退变椎间盘组织形态结构及β-catenin蛋白含量的影响。方法选取三月龄健康SD大鼠80只,雌雄各半,随机分为空白组、假模型组、模型组、中药低剂量组以及中药高剂量组,每组16只,雌雄各半。除空白组和假模型组外,其余各组注射D-半乳糖建立大鼠衰老动物模型,空白对照组、假模型组与模型组每日生理盐水灌胃,中药低剂量组及中药高剂量组补肾活血汤每日灌胃,持续12周。分别于造模后、灌胃4周后、灌胃8周后、灌胃12周后每组随机抽取雌雄大鼠各2只处死取材,光镜下观察椎间盘组织形态学变化并运用蛋白质印迹法(Western Blot)检测β-catenin蛋白表达差异。结果与模型组比较,经补肾活血汤干预后,中药低剂量组及中药高剂量组大鼠椎间盘组织形态学评分降低(P0.05),β-catenin蛋白表达水平降低(P0.05)。结论补肾活血汤能有效抑制经典Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白分子β-catenin蛋白的表达,从而起到延缓椎间盘退变的作用。     

补肾活血方对肾虚血瘀薄型子宫内膜大鼠子宫内膜容受性的影响研究

目的　探讨补肾活血方对肾虚血瘀薄型子宫内膜大鼠子宫内膜容受性的影响。方法　2016年6月—2017年3月选取SPF级雌性SD大鼠42只,将其随机分为对照组9只,造模组33只。造模组参照《雌性大鼠肾虚血瘀模型初探》建立肾虚血瘀薄型子宫内膜大鼠模型。造模结束后对照组、造模组均随机选取3只大鼠验证造模成功与否,随后将30只造模组大鼠随机分为模型组、补肾活血低剂量组、补肾活血中剂量组、补肾活血高剂量组、补佳乐组5组,每组6只。对照组、模型组均灌服蒸馏水10 ml/kg;补佳乐组灌服补佳乐0.3 mg•kg-1•d-1;补肾活血低剂量组灌服补肾活血方2.16 mg/kg,10 ml/d;补肾活血中剂量组灌服补肾活血方4.32 mg/kg,10 ml/d;补肾活血高剂量组灌服补肾活血方8.64 mg/kg,10 ml/d;均为1次/d,给药3个动情周期即15 d后处死大鼠开腹取子宫,观察子宫内膜厚度、子宫间质厚度、子宫腺体数、子宫血管数、子宫内膜上皮细胞面积和子宫内膜间质细胞面积。结果　对照组子宫内膜结构完整,腺上皮和腔上皮细胞完整,腺体和血管数量正常;模型组子宫内膜厚度变薄,腺上皮和腔上皮细胞呈扁平状,腺体稀少,毛细血管数量减少;补肾活血低、中剂量组腺上皮及腔上皮细胞呈矮柱状,腺体减少,毛细血管增多,内膜稍厚;补肾活血高剂量组、补佳乐组大部分腺上皮和腔上皮细胞完整,排列整齐。模型组大鼠子宫内膜厚度、子宫间质厚度小于对照组（P<0.001）;补肾活血低、中、高剂量组及补佳乐组大鼠子宫内膜厚度、子宫间质厚度大于模型组（P<0.05）;补佳乐组大鼠子宫内膜厚度、子宫间质厚度大于补肾活血低、中剂量组（P<0.05）。模型组大鼠子宫腺体数、子宫血管数少于对照组（P<0.001）;补肾活血中、高剂量组及补佳乐组大鼠子宫腺体数、子宫血管数多于模型组（P<0.001）;补佳乐组大鼠子宫腺体数、子宫血管数多于补肾活血低剂量组(P<0.05）。模型组大鼠子宫内膜上皮细胞面积、子宫内膜间质细胞面积小于对照组（P<0.001）;补肾活血中、高剂量组及补佳乐组大鼠子宫内膜上皮细胞面积、子宫内膜间质细胞面积大于模型组（P<0.05）;补佳乐组大鼠子宫内膜上皮细胞面积、子宫内膜间质细胞面积大于补肾活血低剂量组,小于补肾活血高剂量组（P<0.05）。结论　补肾活血方能够增加子宫内膜各层厚度、腺体数、血管数以及上皮细胞、间质细胞面积。     

Wnt10a/Wnt10b及其Wnt/β-catenin通路在子宫内膜癌患者中的作用机制研究

目的:观察Wnt10a/Wnt10b及其Wnt/β-catenin通路在子宫内膜癌患者中的表达及作用机制。方法:选取2015年1月-2016年7月医院收治子宫内膜癌患者102例,均经过病理确诊,设为观察组,其中95例雌激素依赖型子宫内膜癌,7例非雌激素依赖型子宫内膜癌。选取同期入院子宫内膜增生疾病诊断患者48例,设为对照组。入院后采集相关标本,制作组织芯片,采用免疫组化SP法检测两组Wnt10a/Wnt10b表达水平,采用Western-blot法检测不同组织标本关键蛋白的表达含量。结果:观察组中Wnt10a及Wnt10b阳性表达率,高于对照组(P0.05);观察组中雌激素依赖型子宫内膜癌Wnt10a阳性率,高于非雌激素依赖型子宫内膜癌(P0.05);观察组中雌激素依赖型子宫内膜癌Wnt10b阳性率,低于非雌激素依赖型子宫内膜癌(P0.05);Wnt10a在观察组中呈阳性表达,组织排列无规律性,在对照组中呈阴性表达,组织排列相对整齐。Wnt10b在观察组中多呈阳性表达,组织排列缺乏规律性,对照组中呈阴性表达,组织排列相对整齐。Western-blot法结果显示,子宫内膜癌患者中,Wnt10b表达水平增加,并且β-catenin及c-myc表达均得到增加,APC表达下降。结论:Wnt10a/Wnt10b在子宫内膜癌发生、发展中发挥了重要作用,其机理与经典Wnt/β-catenin信号传导通路激活有关。     

补肾活血中药对无排卵功血患者子宫内膜Bcl-2、Bax表达的影响

[目的]探讨补肾活血中药对无排卵功能失调性子宫出血(功血)子宫内膜Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.[方法]将37例患者随机分为中药组(25例)和西药组(17例),中药组给予补肾活血中药宫血饮(主要由补骨脂、川续断、山茱萸、蒲黄、三七、党参、生龙骨、生牡蛎、白花蛇舌草等组成)治疗,西药组给予安宫黄体酮治疗.两组均以1个月经周期为1个疗程,连用3个疗程.采用免疫组化SP(Histostain-Plus)法检测治疗前后子宫内膜Bcl-2和Bax蛋白表达,并与10例正常对照组进行比较.[结果]无排卵功血患者无论其子宫内膜呈增生期或是增生性改变,其子宫内膜Bcl-2表达均高于正常对照组的分泌期(P＜0.01),且从增生期到增殖症到复杂性增生的的子宫内膜Bcl-2表达逐渐降低,以增生期内膜的Bcl-2表达最强.而Bax的表达与Bcl-2恰好相反,与正常对照组的分泌期内膜比较,增生期或是增生性改变的子宫内膜Bax的表达均呈较低水平(P＜0.01),且从增生期到增殖症到复杂性增生的子宫内膜Bax的表达逐渐增强,以复杂性增生内膜的Bax表达最强.经治疗后,两组患者的子宫内膜Bcl-2表达均降低,而Bax表达均增高(与治疗前比较,P＜0.01),但两治疗组间比较差异无显著性意义(P＞0.05).[结论]合成孕激素和补肾活血中药均能降低子宫内膜Bcl-2的表达而增强Bax的表达,从而诱导无排卵功血患者子宫内膜细胞凋亡的发生,但二者作用途径可能不同.     

补肾活血、调理冲任法治疗子宫内膜异位症不孕的临床研究

目的:观察中医补肾活血、调理冲任法治疗子宫内膜异位症引起不孕的临床疗效及其作用机制。方法:60例子宫内膜异位症患者分为中药治疗组、西药对照组各30例,中药治疗组采用补肾活血、调理冲任法进行治疗,西药对照组采用米非司酮治疗,2个疗程后观察2组患者的临床疗效,检测血清CA125、EMAB水平等。结果:中药治疗组总有效率为96.67%,妊娠率为47%,西药对照组总有效率为76.67%,妊娠率为27%,2组比较差异有统计学意义(P0.05)。与西药对照组比较,中药治疗组治疗后EMAB阳性率、血清CA125水平明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:采用中医补肾活血、调理冲任法治疗子宫内膜异位症引起的不孕能显著改善临床症状,提高受孕率。     

定坤丹联合戊酸雌二醇对肾阳虚薄型子宫内膜大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响

  目的  探讨定坤丹联合戊酸雌二醇对肾阳虚薄型子宫内膜大鼠Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的影响。  方法  选取处于动情期的雌性SD大鼠40只,随机分为空白组、模型组、定坤丹组、戊酸雌二醇组、联合用药组,每组8只。除空白组外,其余各组大鼠建立肾阳虚薄型子宫内膜模型。空白组自由饮食,模型组给予蒸馏水灌胃,定坤丹组灌服定坤丹2.26 g/（kg·d）,戊酸雌二醇组灌服戊酸雌二醇0.3 mg/（kg·d）,联合用药组在戊酸雌二醇0.3 mg/（kg·d）基础上同时给予定坤丹2.26 g/（kg·d）。经过3个动情周期后,处死大鼠,取材。HE染色观察大鼠子宫内膜组织形态学变化。免疫组织化学染色检测血管内皮生长因子（VEGF）的表达,Western blot法检测大鼠子宫内膜中β-catenin、E钙粘蛋白（E-cadherin）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白的表达。  结果  与空白组比较,模型组大鼠子宫腔狭窄或增大,内膜层腺体、血管稀疏,子宫内膜变薄（P<0.01）,VEGF表达降低（P<0.01）,β-catenin、E-cadherin、MMP-9蛋白表达升高（P<0.01）。与模型组比较,各治疗组内膜腺体较多,分布均匀,内膜层血管丰富,内膜增厚（P<0.01或P<0.05）,VEGF表达呈不同程度升高,β-catenin、E-cadherin蛋白表达水平降低（P<0.01）,定坤丹组与联合用药组MMP-9蛋白表达水平降低（P<0.01）。与戊酸雌二醇组比较,定坤丹组β-catenin蛋白水平更高（P<0.05）,MMP-9蛋白水平更低（P<0.01）;联合用药组β-catenin、MMP-9蛋白表达水平均降低（P<0.01）。与联合用药组比较,定坤丹组β-catenin蛋白水平更高,E-cadherin蛋白水平更低（P<0.01或P<0.05）。  结论  定坤丹联合戊酸雌二醇通过上调肾阳虚薄型子宫内膜大鼠子宫内膜VEGF表达,下调β-catenin、E-cadherin和MMP-9蛋白水平,增厚大鼠子宫内膜。     

Expression of cancer stem cell-associated markers in liver cancer cell lines HepG2 and Hep3B

目的 富集培养肝癌干细胞,研究肝癌干细胞相关标志物CD90、CD133、八聚体4(Oct4)和ATP结合盒转运蛋白ABCG2在肝癌细胞HepG2、Hep3B中的表达,并初步分析其意义.方法 使用流式细胞仪从肝癌细胞(检测HepG2、Hep3B两种细胞系)中分选肝癌干细胞并行无血清成球培养.设肝癌细胞组为对照组.单细胞克隆形成实验检测细胞增殖能力.分别给予肝癌细胞及肝癌下细胞阿霉素处理,MTT法测阿霉素处理后各组细胞的存活率,Real-time PCR及Western blot分别检测各组细胞CD90、CD133、Oct4和ABCG2 mRNA及蛋白水平的表达.结果 肝癌干细胞单个细胞增殖能力强于肝癌细胞,克隆形成分析显示培养第14天克隆形成率Hep3B细胞组低于Hep3B CSCs组[8/27(30％)vs 12/23(52％),P＜0.05 ];HepG2细胞组克隆形成率也低于HepG2CSCs组[7/38(18％)vs 9/26(35％),P＜0.05].用阿霉素处理肝癌细胞及肝癌干细胞48 h后,MTT法测定结果显示肝癌干细胞组细胞活性显著高于对照组(P ＜0.05):HepG2细胞组细胞活性为(38.17 ±6.92)％、HepG2CSCs组为(69.88±5.43)％;Hep3B细胞组(50.16±4.89)％,Hep3B CSCs组为(78.53±7.86)％.Real-time PCR结果显示肝癌干细胞组中CD90、CD133、Oct4及ABCG2基因mRNA表达较亲代细胞组显著上调(P＜0.05).Western blot结果显示肝癌干细胞组Oct4及ABCG2蛋白水平显著上调,与亲代细胞组间表达差异有显著性(P＜0.05).结论 肝癌干细胞相关标志CD90、CD133、Oct4及ABCG2均高表达于肝癌干细胞,并且Oct4及ABCG2基因的高表达有可能与肝癌干细胞耐药性相关.     

补肾活血中药对雷公藤致卵巢储备下降大鼠颗粒细胞凋亡的影响

目的探讨补肾活血中药对雷公藤致卵巢储备下降大鼠颗粒细胞凋亡的影响。方法12周龄雌性SD大鼠60只,随机分为6组：空白组、雷公藤模型组、补肾活血方低、中、高剂量组及对照药六味地黄方组。观察灌服上述不同药物后大鼠一般情况、卵巢指数、卵巢组织病理形态、血清E2、FSH水平及卵巢颗粒细胞凋亡因子Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达。结果Bcl-2、Caspase-3表达：模型组、补肾活血方低剂量组与空白组比较有极显著性差异或显著性差异（P〈0.01或P〈0.05）;六味地黄方组和补肾活血方低、中、高剂量组与模型组比较均有极显著性差异或显著性差异（P〈0.01或P〈0.05）。Bax表达：模型组、补肾活血方低剂量组与空白组比较有极显著性差异（P〈0,01）;六味地黄方组和补肾活血方中、高剂量组与模型组比较有极显著性差异或显著性差异（P〈0.01或P〈0.05）。结论细胞凋亡调节因子Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白与卵巢储备密切相关,补肾活血中药抑制卵巢颗粒细胞凋亡、减少卵泡闭锁是其改善卵巢储备功能的可能机制。     

补肾解毒散结方通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抗大肠癌侵袭转移

目的:探讨补肾解毒散结方抑制Wnt/β-catenin信号通路抗人结肠癌HCT-116细胞侵袭转移的作用和机制。方法:采用CCK-8法检测以不同浓度补肾解毒散结方(10、20、40、60、80、100、120μg/ml)对人结肠癌HCT-116细胞增殖的影响;采用划痕实验检测HCT-116细胞转移能力;Transwell实验检测HCT-116细胞侵袭能力;Western blot检测HCT-116细胞的β-catenin、Cyclin D1蛋白表达水平。结果:补肾解毒散结方能够以剂量-时间依赖性方式抑制HCT-116细胞的增殖;补肾解毒散结方能够呈剂量依赖性方式抑制HCT-116细胞的侵袭和转移能力(P0.05);补肾解毒散结方能够下调HCT-116细胞核内β-catenin蛋白表达水平,抑制其下游靶基因Cyclin D1的蛋白表达水平(P0.01)。结论:补肾解毒散结方具有抑制人结肠癌HCT-116细胞增殖、侵袭和转移能力,其机制可能与其通过Wnt/β-catenin信号通路下调β-catenin蛋白表达水平相关。     

补肾活血汤含药血清对骨髓间充质干细胞迁移及CXCR4表达的影响

【目的】探讨补肾活血汤对骨髓间充质干细胞(BMSCs)迁移及趋化因子受体CXCR4表达的影响。【方法】以大鼠BMSCs为研究对象,采用全骨髓贴壁法培养BMSCs。采用流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD90、CD34、CD11b;采用Transwell试验检测不同剂量组补肾活血汤含药血清对BMSCs迁移的影响;采用Western blot法检测细胞CXCR4的蛋白表达水平。【结果】细胞表面抗原标记结果显示所得细胞为高纯度BMSCs。Transwell结果显示,补肾活血汤含药血清可显著增强大鼠BMSCs的迁移能力;Western blot结果显示,高、中、低剂量组补肾活血汤含药血清呈浓度依赖性上调大鼠BMSCs的CXCR4蛋白表达,与空白血清组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。【结论】补肾活血汤含药血清可促进BMSCs的体外迁移,并影响CXCR4蛋白的表达,其机制可能与上调CXCR4的表达、激活SDF-1/CXCR4轴有关。     

补肾活血法对子宫内膜异位症模型大鼠细胞凋亡基因Bc1-2/Bax的影响

[目的]探讨补肾活血法对子宫内膜异位症模型大鼠细胞凋亡基因bc1-2、baxmRNA表达的影响.[方法]将雌性8～12周龄Wister大鼠分为模型组、中药低剂量组、中药高剂量组及西药组.造模成功并分别给药后,采用电镜及RT-PCR法检测药物干预前后模型大鼠异位子宫内膜的病理形态学及凋亡调控基因bc1-2、bax mRNA的阳性表达情况.[结果]补肾活血高剂量组及西药组的异位内膜组织发生凋亡的改变最为明显,并可明显下调bc1-2 tuRNA阳性的表达和提升baxmRNA阳性的表达.而中药低剂量组及模型组的改变不明显.[结论]子宫内膜异位症的发生与细胞凋亡能力的下降有关.补肾活血中药能促进内膜细胞发生凋亡,使异位病灶萎缩、消退.     

补肾活血法对子宫内膜异位症模型大鼠细胞凋亡基因Bcl-2/Bax的影响

[目的]探讨补肾活血法对子宫内膜异位症模型大鼠细胞凋亡基因bcl-2、baxmRNA表达的影响。[方法]将雌性8～12周龄Wister大鼠分为模型组、中药低剂量组、中药高剂量组及西药组。造模成功并分别给药后,采用电镜及RT-PCR法检测药物干预前后模型大鼠异位子宫内膜的病理形态学及凋亡调控基因bcl-2、bax mRNA的阳性表达情况。[结果]补肾活血高剂量组及西药组的异位内膜组织发生凋亡的改变最为明显,并可明显下调bcl-2 mRNA阳性的表达和提升baxmRNA阳性的表达,而中药低剂量组及模型组的改变不明显。[结论]子宫内膜异位症的发生与细胞凋亡能力的下降有关。补肾活血中药能促进内膜细胞发生凋亡,使异位病灶萎缩、消退。     

补肾祛瘀汤对子宫内膜异位症大鼠细胞凋亡的影响

目的:研究补肾祛瘀汤(BQT)对子宫内膜异位症(EMS)模型大鼠肿瘤坏死因子(TNF-α)及survivin蛋白的影响,探讨补肾祛瘀汤对EMS的疗效机理。方法:SD大鼠50只随机分为5组:正常组、模型组、补肾祛瘀汤组、孕三烯酮组、补肾祛瘀汤加孕三烯酮组,除正常组外其余均采用大鼠子宫内膜组织自体移植手术建立子宫内膜异位症模型,灌胃给药28 d后检测各组大鼠血清中和子宫内膜移植物局部TNF-α和survivin蛋白表达。结果:①与正常组相比,模型组大鼠血浆TNF-α显著升高,差异有统计学意义(P=0.004);与模型组相比,西药组、中药组大鼠血清中TNF-α下降,差异有统计学意义(P=0.035,P=0.037);中西结合组大鼠血清中TNF-α与正常组相比,差异有统计学意义(P=0.01);②与正常组相比,模型组大鼠异位内膜中survivin蛋白的表达是显著上调的(P=0.005),与模型组大鼠相比,各个治疗组大鼠异位内膜中survivin蛋白的表达明显下降(P<0.01),而西药组和中西结合组相比,EMS模型大鼠异位内膜当中survivin的含量差异有统计学意义(P=0.018,P<0.05)。结论:补肾祛瘀汤对大鼠子宫内膜异位症具有治疗作用,其作用机制可能与增强异位内膜细胞的凋亡有关,运用传统中药治疗子宫内膜异位症更具优势。     

补肾活血方对去卵巢大鼠子宫ER及Cyclin B表达影响的实验研究

目的观察补肾活血方对去卵巢大鼠子宫的雌激素受体及周期蛋白(Cyclin)B表达的影响,探讨其治疗围绝经期综合征的作用机制。方法选择SD雌性大鼠54只,随机分为假手术组、模型组、雌二醇组、补肾活血方组、联合用药组、补肾活血方+假手术组,每组9只。以双侧卵巢切除法建立大鼠围绝经期模型。各组灌胃给药40 d后取血清和子宫称重;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)浓度;HE染色观察子宫组织病理改变并测定子宫内膜厚度;免疫组化法观察雌激素受体(ER)α、ERβ在子宫组织中分布与表达情况;蛋白质印迹法(Western blot)法检测子宫组织中周期蛋白(Cyclin B)蛋白表达。结果补肾活血方治疗40 d后,与模型组比较,血清LH、FSH明显降低(P0.05或P0.01),血清E2水平升高(P0.05);同时,子宫脏器指数、子宫内膜厚度、子宫组织中ERα、ERβ和Cyclin B蛋白表达均明显升高(P0.05),与雌激素组呈现相似的作用,但作用强度均低于雌激素;补肾活血方+假手术组大鼠各项指标与假手术组比较无明显差异。结论补肾活血方具有雌激素样作用,但作用强度弱于雌激素,对正常大鼠子宫组织无显著影响。     

成血管干细胞标志物CD117及VEGFR-2在女性早孕子宫内膜表达变化及与血管形成关系的研究

目的探讨早孕时期成血管干细胞标志物CD117及VEGFR-2在子宫内膜表达变化及与血管形成关系的研究。方法通过CD31染色进行微血管密度(MVD)的定量测定;采用免疫组化S-P法检测早孕内膜组、增殖期内膜组及分泌期内膜组中CD117、VEGFR-2的表达及分布情况,并观察与微血管密度的相关性。结果 CD117增生期和分泌期主要表达于子宫内膜基底层的腺体细胞中,在早孕内膜中主要表达于间质细胞中,早孕内膜中间质表达达到高峰,明显强于增生期或分泌期(P<0.05);VEG-FR-2在各期主要表达于子宫内膜基底层的腺体中,早孕内膜组达高峰,明显强于增生期或分泌期,差异有统计学意义(P<0.05);子宫内膜的上述各种生理类型中,VEGFR-2的表达均与微血管密度(MVD-CD31)正相关。结论相比非孕期子宫内膜,早孕期子宫内膜成血管干细胞标志物CD117及VEGFR-2更高表达。与新生血管形成密切相关。     

益气活血方和补肾生髓方对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马Wnt3a、Frizzled9和TCF3表达的影响

目的 探讨益气活血方和补肾生髓方对脑缺血大鼠海马Wnt/β-catenin信号通路Wnt3a、卷曲蛋白9(Frizzled9)和T细胞因子3(TCF3)蛋白表达的影响.方法 采用线栓法制作局灶性脑缺血大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、益气活血方组和补肾生髓方组,脑缺血2h后持续灌注7d.采用Western-Blot法检测缺血侧海马Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达,用免疫组化Envision两步法检测缺血侧海马CA1区Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达.结果 在缺血侧海马区,与假.手术组比较,模型组Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白的相对表达量均显著增加(P＜0.01);与模型组比较,益气活血方组Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白的相对表达量均显著降低(P＜0.01),补肾生髓方组Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白的相对表达量均显著降低(P＜0.01或P＜0.05).在缺血侧海马CA1区,与假手术组比较,模型组Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达显著增加(P＜0.01);与模型组比较,益气活血方组与补肾生髓方组能显著降低CA1区Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达(P＜0.01).结论 2种中药复方能通过抑制缺血侧海马Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达,调节Wnt/β-catenin信号通路,促进局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织修复.     

Influence of the Diao-mo-zhi-beng Prescription on Expression of MMP-1 and TIMP-1 in Endometria Hyperplasia Rats

目的:探讨凋膜止崩方靶向干预前后MMP-1和TIMP-1在子宫内膜增生症模型大鼠子宫内膜组织中的表达情况.方法:建立大鼠子宫内膜增生症模型,设立空白组(A)、模型对照组(B)、实验大剂量组(C)、实验小剂量组(D),并进行相应的处理.采用Western-blotting方法检测4组大鼠子宫内膜组织中MMP-1和TIMP-1蛋白的表达.结果:模型对照组与空白组比较,子宫内膜组织中TIMP-1蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);实验大、小剂量组与模型对照组比较子宫内膜组织中TIMP-1蛋白表达水平均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).模型对照组与空白组比较,子宫内膜组织中MMP-1蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);实验大、小剂量组与模型对照组比较子宫内膜组织中MMP-1蛋白表达水平均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).模型对照组与空白组比较,子宫内膜组织中TIMP-1/MMP-1的比值明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01);实验大、小剂量组与模型对照组比较子宫内膜组织中TIMP-1/MMP-1的比值均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:凋膜止崩方治疗子宫内膜增生症的机制可能是通过上调大鼠子宫内膜组织中MMP-1蛋白的表达,下调TIMP-1蛋白的表达,从而加速了子宫内膜组织中ECM的水解,导致子宫内膜崩解、脱落,达到祛除大鼠增生过长子宫内膜作用.