乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群比例和Th1/Th2细胞因子水平检测及其临床意义

目的：研究各型乙型肝炎患者和健康者外周血T淋巴细胞亚群和Th1/Th2细胞因子水平变及其临床意义,为诊断、治疗疾病提供实验依据。方法：采用流式细胞仪检测34例乙型肝炎患者（其中慢性乙型肝炎中度组14例,慢性乙型肝炎重度组7例,重型乙型肝炎组8例,急性乙型肝炎组5例）和20例健康对照者(对照组)的外周血CD3+、CD4+和CD8+T细胞占淋巴细胞的比率;采用酶联免疫吸附技术（ELISA）夹心法检测研究对象血清中IL-2、IL-4及IFN-γ水平的变化。结果：对照组比较,急性乙型肝炎患者外周血CD3+、CD4+T淋巴细胞、血清IL-2、IFN-γ水平明显升高（P<0.05）;重型乙型肝炎患者CD3+、CD8+T淋巴细胞数量下降（P<0.05）,IFN-γ水平升高（P<0.05）;慢性乙型肝炎患者的IL-4和IFN-γ水平明显升高（P<0.05）。结论：Th1细胞因子在乙型肝炎病毒(HBV)感染的疾病发展中可能起一定的作用,HBV感染慢性化可能与Th2细胞因子增高有关。     

乙型肝炎外周血T淋巴细胞上CD28分子表达与病毒载量的关系

目的：分析HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者、HBeAg阳性乙肝病毒携带者外周血T淋巴细胞上CD28表达情况及其与HBV病毒载量的关系。方法采集健康人、HBeAg阳性乙肝病毒携带者、HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者的外周血,抗体标记,采用流式细胞技术检测CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋CD28^＋、CD8^＋CD28^＋T淋巴细胞,同时检测肝功能HBV DNA。结果慢性乙型肝炎组、乙肝病毒携带组CD4^＋CD28^＋T细胞、CD8^＋CD28^＋T细胞百分率明显低于健康对照组（P〈0.05）;HBV DNA≥107组CD8^＋CD28^＋T细胞百分率低于HBV DNA＜107组（P〈0.05）。结论乙型肝炎病毒感染者CD8^＋T细胞上CD28的低表达与高病毒载量有关。     

Association of T regulatory cells with natural course and response to treatment with interferon-α in patients with chronic hepatitis B infection

Background  Regulatory T cell populations, particularly CD4⁺CD25⁺ T regulatory cells, have been implicated in the persistence of hepatitis B virus (HBV) infection. However, no clear relationship has been established between the frequency of CD4⁺CD25⁺ T regulatory cells in the peripheral blood and either the disease phases in the natural history of chronic HBV infection or in the response to interferon-α therapy.

Methods  In the present study, three different common markers of CD4⁺CD25⁺ T regulatory cells were used to determine the numbers of T regulatory cells in healthy controls and in patients with chronic HBV infection.

Results  No significant difference was found when samples were gated for CD25^hi and CD25⁺FoxP3⁺ T cells. A significant correlation was found between the number of CD4⁺ Treg cells that gated with CD25⁺FoxP3⁺ and CD25⁺CD127^low/- in healthy controls and in patients with chronic hepatitis B (CHB) (r=0.67, 0.59; P <0.01). The percentages of Treg cells were (8.56±2.01)% in asymptomatic carriers (Asc), (8.74±3.04)% in inactive HBsAg carriers, (10.7±2.93)% in CHB and (7.42±1.28)% in healthy controls (F=11.1, P <0.001). The percentage of Treg cells in patients with CHB was higher than in asymptomatic HBV patients, inactive HBsAg carriers, or healthy controls (P <0.01). The proportion of CD4⁺CD25⁺CD127^low/- T cells in patients who responded to interferon-α was (11.9±3.3)%, (9.1±2.4)% and (9.0±2.9)% at baseline, week 12 and week 24 after treatment, respectively (Z=2.42, P <0.05; Z=2.67, P <0.01).

Conclusions  These results suggest that the proportion of the CD4⁺CD25⁺ regulatory T cells might be affected by the application of different markers in process to detect T regulatory cells. The frequency of Treg cells was increased in patients with CHB, which might be associated with the disease activity of these patients and contribute to prevention of extensive liver damage. A decline in Treg cells at week 12 of treatment might be associated with a better response to treatment with interferon-α.

     

HBeAg阳性慢性乙型肝炎外周血T淋巴细胞上CD28表达初步研究

目的分析HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞CD28表达特点。方法采集健康人、HBeAg阳性乙肝病毒携带者、HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者的外周血,抗体标记,采用流式细胞技术检测CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+CD28+T细胞、CD8+CD28+T淋巴细胞,同时检测肝功能、HBVDNA。结果慢性乙型肝炎组、乙肝病毒携带组CD4+CD28+T细胞、CD8+CD28+T细胞、CD28+T细胞明显低于健康对照组(P<0.05);高病毒载量组(HBVDNA≥107组)CD8+CD28+T细胞低于低病毒载量组(HBVDNA<107组)(P<0.05)。结论所有结果显示乙型肝炎病毒持续感染状态与CD8+T细胞上共刺激分子CD28的表达低下有关,而CD8+T细胞上CD28的低表达与高病毒载量有关。     

艾滋病合并乙型肝炎患者病毒载量与细胞免疫功能的相关性

目的 探讨艾滋病合并乙型肝炎患者病毒载量与细胞免疫功能的相关性.方法 对2013年2月至2016年2月聊城市中医医院收治的83例艾滋病患者临床资料进行回顾性分析,按照合并或未合并乙型肝炎将其分为观察组38例及对照组45例,比较两组患者生化指标、血常规、病毒学指标,并对T淋巴细胞亚群进行计数,采用Pearson相关分析,分析病毒载量与细胞免疫功能的相关性.结果 观察组谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)分别为(65.43±23.91)U/L、(72.93±33.87)U/L及(16.38±5.51)μmol/L,高于对照组的(32.72±22.15)U/L、(34.53±18.62)U/L以及(11.80±3.17)μmol/L;观察组白蛋白(ALB)为(38.31±6.40)g/L,低于对照组的(42.91±8.02)g/L;观察组患者血小板计数为(160.74±48.60)×109/L,低于对照组(200.85±58.38)×109/L;观察组患者HIV RNA病毒载量为(6.21±1.10)log10 copie/mL,高于对照组(4.26±0.79)log10 copie/mL;上述差异均有统计学意义(P<0.05).观察组患者CD3+、CD4+及CD8+细胞个数及CD4+/CD8+均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).HIV RNA载量与HBV DNA载量呈正相关(P<0.05);CD4+T细胞及CD4+/CD8+与HBV DNA载量以及HIV RNA载量呈负相关(P<0.05);CD3+T细胞及CD8+T细胞与HBV DNA载量以及HIV RNA载量无显著相关性(P>0.05).结论 HIV/HBV合并感染时,两种病毒可能具有相互促进作用,加重患者肝损伤及免疫缺陷.     

乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群变化及临床意义

目的 观察不同类型乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）感染者外周血T淋巴细胞亚群变化特点.方法 对我院2013年6-11月门诊及住院的200例乙肝患者和50例健康对照者采用流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测外周血淋巴细胞（CD45＋）、T淋巴细胞（CD45＋CD3＋、CD45＋CD3＋CD4＋、CD45＋CD3＋CD8＋）、B淋巴细胞（CD45＋CD3-CD19＋）、NK淋巴细胞（CD45＋CD3-CD16＋56＋）百分比和细胞绝对计数.结果 急性乙型肝炎组T淋巴细胞总数、CD4＋和CD8＋T淋巴细胞数较健康对照组显著升高（P＜0.01）.慢性乙型肝炎组、肝硬化组和肝衰竭组：T淋巴细胞总数、CD4＋和CD8＋T淋巴细胞数、CD4＋/CD8＋比值均较健康对照组降低,其中肝衰竭组＜肝硬化组＜慢性乙型肝炎组.慢性乙型肝炎组CD4＋淋巴细胞百分比较健康对照组显著降低（P＜0.01）.肝硬化组CD4＋淋巴细胞百分比较慢性乙型肝炎组显著降低（P＜0.01）,CD8＋T淋巴细胞百分比显著升高（P＜0.01）.肝衰竭组T淋巴细胞和CD4＋T淋巴细胞百分比较肝硬化组显著降低（P＜0.01）.结论 乙型肝炎患者CD4＋T淋巴细胞持续降低,与疾病病程发展密切相关.     

慢性乙肝患者PBMC中HBV感染及其对T细胞亚群的影响

目的 :探讨乙肝病毒 (HBV)感染外周血单个核细胞 (PBMC)对T细胞亚群的影响。方法 :应用聚合酶链反应 (PCR)检测了 6 0例慢性乙肝患者PBMC中HBVDNA ,同时应用直接致敏红细胞花环法检测患者T细胞亚群。结果 :慢性乙肝患者PBMC中HBVDNA总检出率为 6 8.3% ,与PBMC中HBVDNA阴性组相比 ,HBVDNA阳性组患者CD8细胞增加 ,CD4 /CD8细胞比值显著下降。结论 :慢性乙肝患者T细胞亚群变化与HBV感染PBMC有关 ,这种变化可能是PBMC中HBV得以继续感染并长期存在的原因之一     

慢性乙型肝炎患者外周恤T淋巴细胞PD-1表达的研究

目的探讨CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞上PD-1的表达与慢性乙型肝炎患者的关系。方法采用流式细胞技术测定66例慢性乙型肝炎患者、17例HBV携带者外周血CD4＋．CD8^＋T淋巴细胞PD-1,并与19例健康人群对照。结果慢性乙型肝炎患者外周血CD4^＋T淋巴细胞PD-1的荧光强度较对照组明显增强,而慢性乙型肝炎患者CD8^＋T淋巴细胞和HBV携带者CD4^＋T淋巴细胞PD-1的表达量和荧光强度都高于对照组。CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞PD-1表达与血清中乙肝病毒载量无明显关系。慢性乙型肝炎轻度组患者CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞PD-1表达的荧光强度明显高于重度组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论慢性乙型肝炎患者存在细胞免疫功能紊乱和淋巴细胞异常激活现象,CD4＋和CD8＋T淋巴细胞PD-1的表达与其病情发展和转归相关。     

Th细胞极化群体在慢性乙型肝炎病毒感染中的作用

目的　了解慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者外周血中辅助性T细胞（Th）内干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）和转化生长因子-β（TGF-β）的表达情况,以测定Th1/Th2 /Th3细胞的百分数,探明Th细胞各极化群体在慢性HBV感染中的作用.方法　常规分离外周血单个核细胞（PBMC）,在佛波脂（PMA）、钙离子导入剂伊屋诺霉素Ionomycin、细胞内转运阻断剂莫能星Monensin的刺激下,采用流式细胞分析术（FACS）对慢性HBV感染者外周血单个Th细胞内IL-4、IFN-γ和TGF-β的表达进行分析.结果　正常对照组,2.3%-18.6%的CD4+T细胞为Th1细胞,0.9%-9.2%为Th2细胞；0.7%-7.1%的细胞仅表达TGF-β, 为Th3细胞.在慢性HBV感染者外周血单个CD4+T细胞中,以Th0细胞居多；而Th1细胞则随着慢性乙型肝炎肝脏炎症活动的加剧而明显增多,在炎症活动明显的慢性乙型肝炎,其Th1百分数明显高于炎症活动呈静止状态的慢性乙型肝炎；Th2细胞在慢性HBV感染的不同阶段则较为恒定(P>0.05),但明显高于对照组(P<0.05).Th3细胞的百分数则随着肝组织炎症活动的加剧,其比例也明显减少(P<0.05),在无症状携带者（AsC）组,Th3细胞的百分数远高于慢性乙型肝炎组及对照组(P<0.05) .Th3细胞重叠于Th2细胞之中.结论　Th1细胞类因子与炎症活动呈正相关,Th2细胞可能与HBV感染的慢性化相关联.而Th3细胞与Th2细胞协同发挥负性免疫调节作用,并可能与慢性HBV感染的免疫耐受状态相关联.     

Th细胞极化群体在慢性乙型肝炎病毒感染中的作用

目的　了解慢性乙型肝炎病毒 (HBV)感染者外周血中辅助性T细胞 (Th)内干扰素 γ(IFN γ)、白细胞介素 4 (IL 4 )和转化生长因子 β(TGF β)的表达情况 ,以测定Th1/Th2 /Th3细胞的百分数 ,探明Th细胞各极化群体在慢性HBV感染中的作用。方法　常规分离外周血单个核细胞 (PBMC) ,在佛波脂 (PMA)、钙离子导入剂伊屋诺霉素Ionomycin、细胞内转运阻断剂莫能星Monensin的刺激下 ,采用流式细胞分析术 (FACS)对慢性HBV感染者外周血单个Th细胞内IL 4、IFN γ和TGF β的表达进行分析。结果　正常对照组 ,2 3% - 18 6 %的CD4 + T细胞为Th1细胞 ,0 9% - 9 2 %为Th2细胞 ;0 7% - 7 1%的细胞仅表达TGF β ,为Th3细胞。在慢性HBV感染者外周血单个CD4 + T细胞中 ,以Th0细胞居多 ;而Th1细胞则随着慢性乙型肝炎肝脏炎症活动的加剧而明显增多 ,在炎症活动明显的慢性乙型肝炎 ,其Th1百分数明显高于炎症活动呈静止状态的慢性乙型肝炎 ;Th2细胞在慢性HBV感染的不同阶段则较为恒定 (P >0 0 5 ) ,但明显高于对照组 (P<0 0 5 )。Th3细胞的百分数则随着肝组织炎症活动的加剧 ,其比例也明显减少 (P <0 0 5 ) ,在无症状携带者(AsC)组 ,Th3细胞的百分数远高于慢性乙型肝炎组及对照组 (P <0 0 5 )。Th3细胞重叠于Th2细胞之中。结     

HDV感染者细胞免疫状态的研究

为探讨免疫反应在丁型肝炎发病中的作用，采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶（ＡＰＡＡＰ）免疫酶染色技术，观察比较了３０例乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）合并丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）感染患者和３０例单纯ＨＢＶ感染者外周血及肝组织中的细胞免疫状态。结果发现ＨＢＶ合并ＨＤＶ感染者外周血ＣＤ８＋Ｔ细胞和ＣＤ１６＋细胞数显著高于单纯ＨＢＶ感染者，而与ＨＤＶ感染后是否抑制ＨＢＶ复制无关。在感染肝组织中，汇管区浸润细胞以ＣＤ４＋Ｔ细胞为主，小叶内坏死区中以ＣＤ８＋Ｔ细胞为主，与单纯ＨＢＶ感染者比较，两者差异无显著性。表明Ｔ细胞所介导的免疫应答在ＨＤＶ感染后所引起的肝细胞损伤中发挥着重要作用。     

慢性乙型肝炎中医虚实辨证与机体特异性细胞免疫及病毒复制的关系探讨

目的：通过对虚实不同证型的慢性乙型肝炎患者体内HBV特异性的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）及T淋巴细胞亚群及病毒复制水平的检测,探讨慢性乙型肝炎中医虚实辨证分型与机体特异性细胞免疫及病毒复制的关系。方法：抗原特异性CTL及T淋巴细胞亚群采用流式细胞仪检测;HBV病毒学指标由ABBOTT I2000检测;HBVDNA由ABI荧光定量PCR仪完成。结果 （：1）虚实两组患者特异性CTL细胞的阳性率存在差异（P〈0.05）,实证组患者特异性CTL细胞阳性率较虚证组患者高,差异有统计学意义（P〈0.05）。（2）虚实两组CD3＋、CD4＋以及CD4＋/CD8＋值均较正常对照有所下降,其中虚证组患者CD4＋、CD4＋/CD8＋水平下降较正常组明显,有统计学意义（P〈0.05）,虚实两组之间CD4＋水平有显著性差异（P〈0.05）,但实证组与正常对照组相比,二者无显著性差异（P〉0.05）,虚实两组患者CD8＋水平均高于正常组,虚证组升高更明显,差异有统计学意义（P〈0.05）。（3）虚实两组患者病毒复制程度不同,实证组中高病毒载量患者所占比例较大,约为62.2%,虚证组高病毒载量患者所占比例仅为40%,较前者明显减少,虚证组患者病毒复制处于低复制水平,二者有统计学意义（P〈0.05）。结论：虚实两组患者的外周血特异性CTL细胞阳性率、T淋巴细胞亚群及病毒复制水平存在有统计学差异,可以为指导临床辨证分型提供一定的客观参考价值。     

慢性乙型肝炎患者和乙型肝炎病毒携带者外周血T细胞亚群的变化和意义

目的分析慢性乙型肝炎患者、乙型肝炎病毒携带者和正常人外周血T细胞亚群的差异,探讨乙型肝炎的发病机制与宿主细胞免疫功能的关系。方法收集2004年2月至7月在中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院肝炎门诊就诊的的慢性乙型肝炎患者29例、HBV携带者25例及健康献血员35例的外周血,使用流式细胞仪检测T细胞亚群,分析其差异及临床意义。结果慢性乙肝患者、HBV携带者和正常对照外周血CD4+T细胞计数分别为565±192、672±148和816±259;CD8+T细胞计数分别为491±225、445±157和609±177。与正常对照组比较,慢性乙肝患者和HBV携带者外周血白细胞、淋巴细胞、T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+CD28+T细胞、CD8+CD28+T细胞计数均减少,慢性乙肝患者NK细胞计数减少;与正常对照和HBV携带者相比,慢性乙肝患者CD8+CD38+T细胞和CD4+CD45RA-记忆/效应T细胞比例显著升高,CD4+CD45RA+62L+初始T细胞比例及计数均显著减少。结论慢性乙肝患者和HBV携带者体内存在T淋巴细胞亚群失衡和细胞免疫功能紊乱,这可能与乙肝病毒感染后慢性化相关。     

外周血及肝组织T细胞亚群、NK细胞在慢性乙型肝炎不同转归中的变化及其意义

目的探讨外周血及肝组织T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞（natural killer cells,NK细胞）在慢性乙型肝炎不同临床转归中的变化及其意义。方法慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B,CHB）患者34例;HBV相关肝衰竭患者54例,其中,慢性肝功能衰竭（chronicliverfailure,CLF）31例,慢加急性肝功能衰竭（acute-on-chronic liver failure,ACLF）23例。10例CHB患者经肝脏活检、5例ACLF患者行肝脏移植获得肝组织标本。流式细胞仪检测外周血CD4＋CD25＋FOXP3＋调节性T细胞（regulatory T cells,Treg细胞）、CD3＋、CD4＋、CD8＋T淋巴细胞亚群,免疫组织化学观察肝组织中CD8＋T细胞、NK细胞频率。结果 ACLF患者外周血Treg细胞频率（4.79%±2.58%）明显高于CLF患者（3.24%±2.22%）及CHB患者（3.46±1.78%,P〈0.05）;CLF患者Treg细胞频率低于CHB患者,但无显著性差异。动态观察发现,CLF患者Treg细胞频率持续低水平;而ACLF患者Treg细胞频率先升高,随着肝功能恢复,Treg细胞频率下降。CLF患者外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋T淋巴细胞计数分别为939.2±466.2、544.1±300.9、391.8±240.6,明显低于CHB患者（1567.4±556.6、864.2±289.4、563.3±315.1）及ACLF患者（1596.1±1151.6、923.1±701.5、576.8±392.2,P〈0.01）。ACLF患者外周血T淋巴细胞亚群计数与CHB患者比较无显著性差异。免疫组化显示,ACLF患者肝组织CD8＋T细胞、NK细胞浸润较CHB患者明显增加。结论 CLF患者存在严重的T淋巴细胞＂耗竭＂。外周血Treg细胞在ACLF发生机制中可能具有重要的免疫调节作用。肝组织CD8＋、NK细胞浸润增加与慢性乙型肝炎肝脏病理恶化有关。     

干扰素治疗慢性乙型肝炎患者肝组织细胞间粘附分子-1的表达

目的 观察干扰素-?1b(IFN-?1b)治疗慢性乙型肝炎患者前、后肝组织细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的表达及血清HBV DNA载量的变化.方法 对慢性乙型肝炎患者治疗前及治疗结束时6个月行肝穿活检术,分别采用免疫组织化学法与实时荧光聚合酶链反应,检测肝组织ICAM-1的表达及血清中HBV DNA的载量变化.结果 干扰素治疗前、后,慢性乙型肝炎重度与中度患者肝组织ICAM-1表达水平有显著差异(P<0.05);慢性乙型肝炎轻度患者肝组织ICAM-1表达水平无显著差异(P0.05);治疗前肝组织ICAM-1染色强度( )的患者,治疗前、后HBVDNA载量变化无明显差异(P0.05);而肝组织ICAM-1染色强度( )与染色强度( 、 )的患者.治疗前、后HBV DNA载量变化有差异(P<0.05,P<0.01).结论 IFN-?1b治疗慢性乙型肝炎患者疗效与肝组织表达ICAM.1有关.慢性乙型肝炎患者肝组织ICAM-1增强表达有利于IFN发挥抗病毒作用.     

乙肝患者外周血T淋巴细胞上CD28表达及临床意义

目的:研究乙肝患者外周血CD4 T淋巴细胞亚群、CD8 T淋巴细胞亚群CD28分子表达变化。探讨外周血T淋巴细胞CD28的表达对乙型肝炎患者的免疫学意义及临床意义。方法:应用流式细胞仪检测乙肝患者。结果:急性乙型肝炎患者CD8 、CD28 T淋巴细胞明显高于正常对照组和慢性乙型肝炎患者(P<0.01)。慢性乙型肝炎轻中度和重度患者CD4 、CD28 T淋巴细胞、CD8 、CD28 T淋巴细胞明显低于正常对照组(P<0.01),CD8 、CD28-T淋巴细胞明显高于正常对照组(P<0.01)。乙型肝炎患者CD4 /CD8 T淋巴细胞的比值明显低于正常对照组(P<0.01)。结论:乙型肝炎患者存在免疫功能紊乱。外周血淋巴细胞CD28的表达情况可以作为判断乙型肝炎病情的重要参考依据。     

输血传播病毒(TTV)基因变异的临床意义

目的 :研究TTV基因变异与其致病性的关系。方法 :采用巢式多聚酶链式反应 (PCR)扩增TTVDNA ,收集TTVDNA阳性病例 5 2例 ,其中献血员 4例 ,乙型肝炎病毒携带者 5例 ,慢性乙型肝炎患者 11例 ,慢性重型乙型肝炎患者 32例 ,采用单链构象多态性 (SSCP)方法进行TTV基因变异检测。结果 :献血员、乙型肝炎病毒携带者、慢性乙型肝炎、慢性重型乙型肝炎患者中 ,SSCP电泳条带数分别为 1.2 5± 0 .5 0 ,1.6 0± 0 .5 5 ,3.36± 1.36 ,4 .5 9± 1.83;慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者组中SSCP电泳条带数显著多于其他组 (P <0 .0 5 ) ;慢性重型乙型肝炎患者中SSCP电泳条带数显著多于慢性乙型肝炎患者 (P <0 .0 5 )。结论 :TTV存在基因变异 ,TTV基因变异株的复杂性或称准种感染的复杂性可能是TTV与HBV感染者重叠感染使病情加重的因素之一     

程序性死亡因子1高表达影响急性乙型肝炎患者体内乙肝病毒特异性CD8+T细胞凋亡的研究

目的 观察急性乙型肝炎发病过程中患者体内病毒特异性CTL细胞上免疫抑制性分子程序性死亡因子1(programmed death 1,PD-1)的表达与凋亡的关系.方法 针对HBV不同表位合成2种pentamer,同时针对CMV表位合成pentamer作为对照.采集15例HLA-A2阳性的急性乙型肝炎患者(AHB)的外周血,流式细胞仪分析各病毒特异性CTL细胞表面PD-1分子表达水平及其凋亡水平;同时进行体外实验验证PD-1表达与凋亡的关系.结果 AHB患者发病早期HBV特异性的CD8+T细胞表面PD-1表达水平明显增高,增高的PD-1水平与HBV特异性CD8+T细胞自发凋亡呈明显正相关;体外共培养HepG2.215细胞与AHB患者CD8+T细胞,可明显诱导CD8+T细胞凋亡.结论 在HBV急性感染早期,HBV特异性CD8+T细胞PD-1表达明显升高,并明显诱导了病毒特异性CD8+T凋亡,从而避免了AHB患者肝脏遭受更为严重的免疫损伤.     

Frequencies and characterization of HBV-specific cytotoxic T lymphocytes in self-limited and chronic hepatitis B viral infection in China

Hepatitis B virus （HBV）-specific cytotoxic T lymphocytes （CTLs） are believed to play a major role in viral clearance and disease pathogenesis during HBV infection. To clarify the differences in host immune responses between self-limited and chronic HBV infections, we constructed three HLA-A＊0201/HBV tetramers with immunodominant epitopes of core18-27, polymerase 575-583 and envelope 335-343, and analyzed the HBV-specific CTLs in peripheral blood mononuclear cells （PBMCs） from patients infected with HBV. The frequencies and expansion ability of HBV-specific CD8＋T cells in most self-limited HBV infected individuals were higher than those in chronic HBV-infected patients. HBV-specific CD8＋T cells could be induced by in vitro peptide stimulation from chronic patients with a low level of serum HBV-DNA but not from those with a high level of serum HBV-DNA. In chronic infection, no significant correlation was found either between the frequencies of HBV-specific CD8^＋ T cells and the viral load, or between the frequencies and the levels of alanine transaminase. Our results suggested that the frequencies of HBV-specific CTLs are not the main determinant of immune-mediated protection in chronic HBV infection and immunotherapeutic approaches should be aimed at not only boosting a HBV-specific CD8^＋T response but also improving its function.