B7-1基因转染小鼠EL-4淋巴瘤细胞体外诱导免疫小鼠脾细胞产生的白细胞介素-2

目的　研究B7 1基因转染小鼠EL 4淋巴瘤体外诱导免疫小鼠脾细胞产生的白细胞介素 2。方法　以CTLL 2细胞检测EL 4B7 1 免疫小鼠的脾细胞与瘤细胞共育的MLTC培养上清中的IL 2活性。结果　EL 4B7 1 免疫小鼠的SPL经瘤细胞在体外刺激可诱生出明显的IL 2活性 ,而EL 4免疫小鼠的SPL则无此作用 ,两者具有较明显的差异 (P <0 0 1)。结论　B7 1基因转染小鼠EL 4淋巴瘤可在体外诱导免疫小鼠脾细胞产生较高水平的白细胞介素 2。     

IL-18基因修饰的DC肿瘤融合瘤苗的抗肿瘤效应

目的 :观察腺病毒介导白细胞介素 1 8(Interleukin1 8,IL 1 8)修饰的小鼠树突状细胞 (Dendriticcells,DC)与Hep a1 6肝癌细胞融合后的瘤苗 (IL1 8 DC Hepa)体内诱导的抗肿瘤免疫应答以及对荷瘤小鼠的治疗效果 .方法 :应用T细胞与NK体内删除实验、4h51 Cr释放杀伤实验、酶联免疫吸附实验等方法 ,观察瘤苗对荷瘤小鼠免疫治疗作用及保护性免疫反应作用机制 .结果 :IL1 8 DC Hepa瘤苗组免疫治疗作用明显优于未转染IL 1 8的融合瘤苗组 (DC Hepa)和LacZ转染对照组 (LacZ DC Hepa) (P <0 .0 5 ) ,阻断CD4 + 、CD8+ T细胞都导致瘤苗免疫治疗作用明显降低 ,阻断NK细胞对抗肿瘤免疫应答具有一定影响 ,表明IL1 8 DC Hepa瘤苗的免疫治疗作用有赖于CD4 + 和CD8+ T细胞及NK细胞 .IL1 8 DC Hepa瘤苗体内诱导特异性CTL杀伤活性明显高于DC Hepa和LacZ DC Hepa组 (P <0 .0 0 1 ) ,诱导脾淋巴细胞产生IL 2和IFN γ的能力显著高于对照组DC Hepa和IL1 8 DC (P <0 .0 0 1 ) ,但各组瘤苗诱导脾淋巴细胞产生IL 4和IL 1 0能力无明显差异 (P >0 .0 5 ) ,表明IL 1 8主要是通过诱导IL 2和IFN γ等Th1型细胞因子来增强DC融合瘤苗的抗肿瘤效应 .结论 :IL1 8 DC Hepa瘤苗进行体内免疫保护和治疗 ,能诱导出显著的抗肿瘤免疫反应 ,为DC介     

转染MIP-1α和B7-1基因增强小鼠抗淋巴瘤效应的初步研究

【摘要】 目的 观察转染趋化因子MIP-1α和共刺激分子B7-1基因增强小鼠抗淋巴瘤的效应。方法 将MIP-1α和B7-1基因慢病毒重组载体转染小鼠EL-4淋巴瘤细胞,应用RT-PCR检测MIP-1α和B7-1基因mRNA表达,Western blot法检测MIP-1α和B7-1蛋白表达;转基因EL-4细胞注入小鼠右腋皮下,观察成瘤情况;灭活的转基因EL-4细胞注入成瘤小鼠体内,观察其增强小鼠抗淋巴瘤效应。结果RT-PCR检测发现EL-4/MIP-1α+B7-1细胞内有MIP-1α及B7-1mRNA表达,Western blot显示MIP-1α及B7-1蛋白表达;MIP-1α组、B7-1组较对照组成瘤时间延长,成瘤率降低,肿瘤平均体积较小,而联合组成瘤性消失;MIP-1α和B7-1治疗组的肿瘤平均体积、重量及肿瘤器官转移率明显小于对照组（P＜0.05）,而联合组的肿瘤平均体积及重量明显小于MIP-1α和B7-1组（P＜0.05）,而且联合组小鼠平均生存期,均较单基因组、对照组明显延长（P＜0.05）。结论 转染MIP-1α和B7-1基因能够明显增强小鼠机体抗淋巴瘤效应,明显延长荷瘤小鼠的平均生存期,为淋巴瘤的基因治疗提供了新的思路。     

B7—1基因转染小鼠EL—4淋巴瘤细胞的致瘤性研究

目的研究Ｂ７１基因转染小鼠ＥＬ４淋巴瘤细胞的致瘤性，为制备基因转染瘤苗提供实验依据。方法将Ｂ７１基因转染小鼠ＥＬ４淋巴瘤细胞后，用Ｇ４１８选择和克隆的方法获得高表达Ｂ７１分子的ＥＬ４Ｂ７１＋细胞，然后进行小鼠的体内致瘤试验。结果ＥＬ４Ｂ７１＋细胞接种小鼠后，与野生型ＥＬ４（ＥＬ４Ｗｔ）相比，肿瘤结节形成时间和荷瘤小鼠存活时间明显延长，ＥＬ４Ｂ７１＋细胞协同ＩＬ２接种小鼠后，效果更加显著。结论Ｂ７１基因转染小鼠ＥＬ４淋巴瘤细胞的致瘤性比野生型ＥＬ４（ＥＬ４Ｗｔ）低。     

趋化因子CXCL10与肿瘤细胞RNA修饰树突状细胞抗前列腺癌研究

目的探讨肿瘤细胞RNA和趋化因子CXCL10基因共同修饰的树突状细胞(DC)瘤苗对小鼠抗肿瘤免疫反应的诱导作用。方法将小鼠RM 1前列腺癌细胞RNA加载小鼠骨髓来源的DC后,通过脂质体转染法将CXCL10基因导入DC,制备前列腺癌瘤苗;体内外实验检测该瘤苗诱导的抗前列腺癌免疫治疗作用。结果转染CXCL10基因的DC上清对淋巴细胞有较强的趋化作用;DC瘤苗所诱导的特异性效应细胞(CTL)对RM 1细胞具有特异性杀伤作用;经DC瘤苗治疗的荷瘤小鼠模型瘤体生长减慢,存活期延长;该瘤苗还具有明显的免疫保护作用。结论构建的前列腺癌DC瘤苗能够有效诱导抗肿瘤免疫反应和免疫保护功能。     

IL-2基因逆转录载体的构建与B7联合表达的抗肿瘤研究

目的 :IL - 2是一种具有抗肿瘤作用的细胞因子 ,B7是诱导细胞免疫的共刺激分子 ,联合在肿瘤细胞中表达IL - 2或IL - 2 /B7,诱导机体抗肿瘤免疫应答 ,为IL - 2基因治疗进入临床提供依据 .方法 :利用逆转录载体PLXSN构建了插入IL - 2基因的重组逆转录病毒载体 .将重组逆转录病毒载体引入包装细胞CRIP ,测病毒滴毒为 6× 10 5CFU/mL ,用成熟重组逆转录病毒转染小鼠胰腺癌细胞MPC - 35 ,经G4 18筛选得抗性克隆MPC - 35 1,PCR检测证实目的基因已整合在MPC - 35细胞基因组中 ;引入携带B7基因的腺病毒载体转染MPC - 35 1,经流式细胞仪证实B7基因已在MPC - 35 1中获得表达 ,命名为MPC - 35 2 .结果 :采用ELISA方法检测MPC - 35 1、MPC - 35 2 分泌IL - 2水平分别为 95 5U/mL及 92 5U/mL ,与亲代MPC- 35比较 ,MPC - 35 1体外增长率及形态无明显变化 ;MPC - 35 2 无形态的改变 ,但增长速度减缓 ,流式细胞仪测试显示 :MPC - 35本身不表达MHC -classI类分子 ,MPC - 35 1有ICAM - 1的表达增加 ,MPC - 35 2 有classII和ICAM -I的表达增加 ;小鼠体内移瘤实验表明 :与作为对照的MPC - 35细胞相比 ,MPC - 35 1,MPC - 35 2 在小鼠体内的生长明显受抑制 ,出瘤时间晚 (P <0 0 5 ) ,瘤块小 (P <0 0 1) ,生命时间延长 (P<0     

腺病毒介导人IL-2基因治疗的抗肿瘤作用及机理分析

目的　观察重组人白介素 2腺病毒 (advh IL- 2 )在小鼠肝癌 H2 2中的转染效率、表达时程、体内抗肿瘤作用及其免疫机理。方法　小鼠皮下接种肝癌 H2 2 ,将肿瘤生长至体积为 10 0～ 2 0 0 mm3的荷瘤小鼠随机分组 ,经肿瘤局部注射给药。用 X- gal染色法检测重组腺病毒载体 adv L ac Z的转染效率 ;用 RT- PCR检测人 IL- 2基因的持续表达时间 ;以 H2 2瘤体生长及荷瘤小鼠存活时间评价 advh IL - 2抗肿瘤作用 ;以 51 Cr 4小时释放法测定治疗小鼠脾细胞的 L AK与 CTL 杀伤活性 ,免疫荧光法分析肿瘤组织内 CD4 +与 CD8+ T细胞浸润情况。结果　肿瘤局部单次注射 1× 10 9pfu重组腺病毒 ,可在肿瘤组织中进行有效的转染及表达 ,人 IL- 2基因的表达时间长于 12 d。AdvhIL- 2的抗肿瘤作用具有剂量依赖性 ,与 PBS组比较 ,2× 10 9pfu advh IL- 2可非常明显地抑制 H2 2皮下瘤的生长、延长荷瘤小鼠的生存时间 (P<0 .0 1) ,同时明显增强脾细胞 L AK与 CTL杀伤活性 (P<0 .0 1) ,增加肿瘤组织内CD4 + 与 CD8+ T细胞的浸润。结论　 Advh IL - 2通过介导人 IL - 2基因在小鼠 H 2 2肿瘤组织中的持续表达 ,产生明显的体内抗肿瘤作用 ,其机理与激活荷瘤小鼠抗肿瘤免疫反应有关     

基因修饰DC与Hepa1-6肝癌细胞融合瘤苗的抗肿瘤作用机制

目的 :探讨腺病毒介导白细胞介素 1 8(interleukin1 8,IL 1 8)基因修饰的小鼠树突状细胞 (dendriticcells,DC)与Hepa1 6肝癌细胞融合后的瘤苗 (IL 1 8 DC Hepa)体内诱导的抗肿瘤免疫应答机制 .方法 :应用 4h51 Cr释放法检测NK细胞杀伤活性 .体内阻断试验观察免疫细胞亚群及免疫分子在IL 1 8 DC Hepa瘤苗诱导抗肿瘤免疫应答中的作用 .建立基因缺陷鼠荷瘤模型 ,观察瘤苗免疫治疗作用 .结果 :IL 1 8 DC Hepa瘤苗与DC Hepa瘤苗比较能更有效地诱导NK细胞活性 [(4 2 .5± 4 .7) %vs (1 3.5± 2 .2 ) % ,q =2 0 .8,P <0 .0 1 ].在抗肿瘤免疫应答的诱导过程中 ,必需有CD4 + T细胞[(6 7.8± 6 .1 )mm2 ,q =2 8.3,P <0 .0 1 ]、CD8+T细胞[(5 8.9± 6 .2 )mm2 ,q =2 4 .4 ,P <0 .0 1 ]、NK细胞 [(30 .6±4 .5 )mm2 ,q=1 2 .0 ,P <0 .0 1 ]、B7/CD2 8的共刺激信号途径[(75 .4± 6 .5 )mm2 ,q =31 .6 ,P <0 .0 1 ]和IFN γ[(6 2 .3±6 .8)mm2 ,q =2 5 .9,P <0 .0 1 ]的参与 ;而在其效应阶段 ,则依赖于CD8+ T细胞 [(6 8.9± 4 .5 )mm2 ,q =4 2 .3,P <0 .0 1 ]、NK细胞 [(38.6± 3.3)mm2 ,q =2 2 .7,P <0 .0 1 ]和IFN γ[(74 .4± 5 .8)mm2 ,q =4 5 .8,P <0 .0 1 ]的参与 ,CD4 + T细胞为非必需的 [(4 .2± 1 .9)mm2 ,q     

双表达B7-1、B7-2基因肿瘤疫苗治疗小鼠肝癌优于单表达疫苗的研究

目的:研究B7-1、B7-2基因对肿瘤的免疫治疗作用。方法:应用转染有B7-1、B7-2基因的肝癌细胞株H22/B7-1、H22/B7-2,建立小鼠肝癌模型,观察小鼠成瘤期、荷瘤小鼠存活期及肿瘤结节大小。结果:各实验组动物都发生肿瘤,接种H22/B7-1 H22/B7-2组成瘤率低,对照组动物肿瘤呈进行性生长;组间成瘤潜伏期不同,与对照组相比,凡接种有H22/B7-2的小鼠肿瘤形成有迟发性;接种转B7基因细胞的小鼠肿瘤生长都较对照组慢;同时接种H22/B7-1和H22/B7-的小鼠能负载大于107的肿瘤细胞。转基因细胞在体外刺激淋巴细胞增殖和诱导CTLs的能力明显增强。结论:B7-1、B7-2都能增强肝癌细胞的免疫原性。B7-2在抗肿瘤早期发挥作用,B7-1随后起放大和调节作用。B7-1与B7-2联用效果优于单一应用。     

IL-6和B7双基因转染的小鼠EL-4肿瘤细胞诱导抗肿瘤免疫作用

目的:探讨IL-6和B7双基因转染的小鼠肿瘤疫苗是否具有协同的抗肿瘤效应.方法:利用含小鼠B7分子和人IL-6分子cDNA的逆转录病毒载体pLmB7SN和pLhIL-6SN分别转染包装细胞株CRIP,经G418抗性筛选后以含有B7或IL-6外源基因的病毒颗粒感染小鼠EL-4胸腺瘤细胞,观察EL-4-IL-6、EL-4-B7、EL-4-IL-6+B7细胞在同基因宿主体内的致瘤性及作为抗肿瘤疫苗的能力.结果:相对亲本肿瘤细胞EL-4而言,单基因和双基因转染的EL-4细胞在小鼠体内的生长速度均明显减慢,小鼠存活时间均有一定延长,3种转基因的EL-4细胞经X-射线灭活后免疫小鼠,虽均未能阻止随后接种的EL-4细胞的生长,但小鼠存活时间都明显延长,IL-6和B7双基因转染的EL-4肿瘤细胞在抗肿瘤活性方面与IL-6或B7单基因转染的EL-4细胞差异无显著性.结论:与单基因表达疫苗比较,双基因表达疫苗没有表现出协同的抗肿瘤效应.