肝脏可溶性复合物不同剂量、不同途径移植对肿瘤细胞增殖抑制的体内外实验

目的:肝脏可溶性复合物具有保护肝脏、刺激肝组织再生等生物学活性,观察天然物质肝脏可溶性复合物对肿瘤细胞生长增殖的抑制作用.方法:实验于2006-05/2007-02在四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室实验肿瘤研究室完成.①分离人胚胎、成年及新生小鼠肝脏组织,生理盐水清洗、剪碎、筛网过滤,用生理盐水制备混悬液,3 000 r/min离心,收集上清,制备肝脏可溶性复合物.②体外实验:用上述不同来源的肝脏可溶性复合物体外处理肿瘤细胞,四甲基偶氮唑盐比色法测定其对乳腺癌细胞EMT6增殖的影响.③体内实验:观察成年鼠肝脏可溶物质对乳腺癌细胞EMT6体内生长的抑制作用及其对荷瘤鼠生存状况的影响,包括不同给药剂量及不同给药途径两个实验,给药途径包括在接种肿瘤细胞部位的对侧腋下、同侧腋下、腹腔注射及灌胃等.结果:①体外实验显示不同来源的肝脏可溶性复合物能明显抑制肿瘤细胞EMT6增殖率,肿瘤增殖抑制率均显著高于血清白蛋白处理组(P＜0.05),并呈剂量依赖性.②成年鼠肝脏可溶物质8mg/L组抑瘤率高于2,4 mg/L组(P＜0.05),未观察到明显毒副效应.③比较不同给药途径,成年鼠肝脏可溶物质同侧注射组的抑瘤率较其他3组的抑瘤率高(P＜0.05),各成年鼠肝脏可溶物质给予组的体质量增长率比相应生理盐水对照组高(P＜0.05).④与相应生理盐水对照组比较,在同侧腋下注射成年鼠肝脏可溶物质的小鼠生存期明显延长(P＜0.05).结论:肝脏可溶性复合物具有抑制肿瘤细胞生长的作用,并且呈一定的剂量依赖性.不同的给药途径中,在接种肿瘤细胞部位的同侧腋下给药抑瘤效果最好.     

ATP1B1真核表达质粒的构建及其对胃腺癌SGC-7901细胞的作用

目的构建Na ,K -ATP酶β1亚基(ATP1B1)真核表达质粒,为利用ATP1B1进行肿瘤基因治疗奠定基础。方法以白细胞文库为模板扩增ATP1B1 cDNA,定向插入到pEGFP-C3真核表达质粒中,构建pEGFP-ATP1B1重组质粒;经酶切分析和测序鉴定后,通过脂质体介导转染胃腺癌SGC-7901细胞,利用real-time PCR检测转染后SGC-7901细胞的ATP1B1基因表达,并进行其ATP酶活性检测;MTT法测定转染后SGC-7901细胞的增殖活性。结果重组质粒经鉴定证实含有ATP1B1 cDNA序列,转染pEGFP-ATP1B1的SGC-7901细胞ATP1B1基因表达增高达129.2%,ATP酶活性增强为(2.95±0.210)%,细胞生长增殖显著受抑。结论成功构建了ATP1B1真核表达质粒,为进一步利用ATP1B1研究恶性肿瘤基因治疗奠定基础。     

干扰人ATP1B1基因对胃腺癌SGC-7901细胞增殖和迁移能力的影响

背景与目的：Na^＋-K^＋ATP酶B1亚基基因ATP1B1在高分化的肿瘤细胞中表达高，低分化的表达低，并且ATP1B1的表达与细胞紧密连接和上皮细胞的极性有关。因此，我们构建了特异性干扰ATP1B1 mRNA的短发夹RNA，以探讨干扰ATP1B1对人胃腺癌细胞株SGC-7901增殖和迁移能力的影响。方法：构建特异性干扰ATP1B1 mRNA的短发夹RNA质粒表达载体，转染SGC-7901细胞，G418筛选阳性克隆细胞，RT-PCR和real-time PCR法检测ATP1B1 mRNA的表达。通过MTT法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期，以及克隆形成实验、Transwell小室迁移实验等方法观察ATP1B1对细胞增殖和迁移的影响。结果：瞬间转染后24h，sh150，sh295，sh562，sh765干扰位点及shNC对SGC-7901细胞ATP1B1 mRNA的抑制率分别为（60．87±4．38）％，（44．93±2．24）％，（49．28±2．02）％，（52．17±2．60）％，（3±0．15）％，4个位点对ATB1B1 mRNA均有抑制效应。150位点对ATB1B1基因的抑制效应强于其它3个位点，用作后续实验。G418筛选后，获得了具有稳定干扰ATP1B1 mRNA效应的细胞株shATP1B1-7901，RT-PCR初步分析，sh150位点对ATP1B1-7901细胞的ATP1B1 mRNA的抑制率为（85．72±5．22）％，与阴性对照组的（3．3±0．22）％相比，P〈0．05；Real-time PCR检测结果显示．shATP1B1-7901细胞中ATP1β1 mRNA的抑制率为（87．53±3．23）％，高于阴性对照组shNC-7901的（4．17±0．33）％，P〈0．05。MTT法细胞增殖实验中，第三天后，shATP1B1-7901细胞的增殖率大于阴性对照组和空白对照组，经统计学分析，P〈0．05，差异有统计学意义。流式细胞术结果显示，shATP1B1-7901的S期和G2／M期细胞比例增加，大于阴性对照组和空白对照组，P〈0．05，差异有统计学意义，阴性对照组和空白对照组的周期分布差异无统计学意义。shATP1B1-7901稳定株细胞的克隆形成率为（68．50±2．65）％，大于?     

肺癌树突状融合细胞的制备及其生物学特征

目的 探讨利用杂交瘤技术制备肿瘤疫苗的方法,研究肺癌树突状融合细胞的生物学特征。方法 用ＰＥＧ法将ＨＧＰＲＴ缺陷型Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞株ＡＬ９９０１与小鼠骨髓诱生的树突状细胞进行融合,ＨＡＴ筛选融合克隆;Ｓ－Ｐ免疫细胞化学法鉴定融合细胞表型;对融合细胞进行生曲线、克隆形成和体内成瘤等鉴定。结果 树突状细胞与ＡＬ９９０１及６：１比例融合,融合率约为３０％。融合细胞ＦＬＤ－Ａ１１可在体外传代培养,表型为ＣＤ８０＾＋、ＣＤ４０＾＋、Ｈ－２Ｋ＾ｂ＋、ＭＩＤＣ＾＋和肺癌抗原阳性。ＦＬＤ－Ａ１１不能在软琼脂培养基中形成克隆,动物体内不能形成肿瘤。结论 利用杂交瘤技术制备的ＦＬＤ－Ａ１１细胞,具备了在体内激活抗特异性地抗肿瘤细胞免疫功能的分子表型;该细胞不存在体内成瘤的危险。本研究为ＦＬＤ－Ａ１１作为肿瘤疫苗,用于特异性抗肿瘤     

抗缺氧物质灌胃小鼠抗缺氧能力测定和Hsp70的表达

目的:研究抗缺氧物质对小鼠抗缺氧能力的影响及Hsp70的表达。方法:小鼠100只,随机分为塞隆(高原鼢鼠)肌肉组、高海拔牦牛肉组、石榴籽组、红景天组和空白对照组,连续灌胃(ig)10天,于常压下进行抗缺氧实验和Western Blot测定Hsp70的表达。结果:红景天组、石榴籽组、塞隆肉组小鼠密闭缺氧存活时间延长;塞隆肉组、石榴籽组、红景天组灌胃的小鼠的Hsp70表达被诱导出现。结论:抗缺氧物质(即红景天胶囊、石榴籽超临界萃取物、塞隆肉超临界萃取物)灌胃的小鼠密闭缺氧存活时间均延长;抗缺氧物质灌胃的小鼠的Hsp70的表达增强,说明抗缺氧药物可诱导Hsp70的表达,Hsp或许可以作为抗缺氧药物研究和测试指标。     

Brdu和PCNA标记观察丹参酮对癌细胞增殖的影响

为了解丹参酮的抗癌作用并探索其机理，用丹参酮处理人肝癌细胞和白血病细胞株，Ｂｒｄｕ掺入标记和ＰＣＮＡ免疫组化染色检测癌细胞增殖学指标。结果：丹参酮处理人肝癌细胞和白血病株后，Ｂｒｄｕ标记率分别为８．９５％和１９．０１％，均显著低于对照组（２８．０％，２５．５７％，Ｐ〈０．０１），ＰＣＮＡ阳性率分别为５７．０％，３０．３２％，均显著低于对照组（７４．３％，４７．０５％，Ｐ〈０．０１），结果表明，Ｂｒ     

中西医结合治疗胆管癌根治术后肝脏多处转移一例报告

中西医结合治疗胆管癌根治术后肝脏多处转移一例报告谭厚生，王朝俊，王修杰，徐祖砚，唐昌炯华西医科大学（６１００４１）赵德明成都军区总医院放射科（６１００８３）肝外胆管癌手术切除困难时，综合治疗、中西医结合治疗可望延长病人生命。本例为总胆管下段低分化腺癌...     

小鼠肺腺癌的形态发生和组织化学观察

在MNNG诱发小鼠肺腺癌过程中,分期处死动物,用光镜、透射电镜及酶组织化学技术观察肺腺癌的形态发生过程及多种酶活性变化,探讨了小鼠肺腺癌的形态发生及相应的代谢变化。