人1igatin样基因HCA56的克隆及其生物信息学分析

目的 利用SEREX方法筛选人肝细胞癌(HCC)cDNA表达文库，克隆能引起机体体液免疫应答的抗原编码基因，并对其进行生物信息学分析，以指导对新克隆基因功能的研究。方法采用ZAP—cDNA Gigapack Ⅲ Gold Cloning试剂盒构建人HCC cDNA表达文库，用患者自体血清进行筛选，对筛选得到的阳性克隆进行序列测定。通过生物信息学对筛选得到的阳性克隆HCA56进行染色体定位、基因结构分析、蛋白序列预测以及相似性搜索和功能分析。逆转录多聚酶链反应(RT—PCR)检测HCA56的组织表达谱。结果 通过对一个cDNA表达文库的筛选，获得了一个血清反应阳性克隆HCA56，全长2021bp，编码584个氨基酸，定位于染色体1q31～q32。数据库搜寻表明它与人ligatin编码基因片段有95％的相似性。RT—PCR显示HCA56广泛分布于各种正常组织。结论 HCA56很可能是ligatin的全长编码基因，生物信息学与分子生物学相互结合是进行新基因研究的有效方法。     

低氧对人外周血单个核细胞迁移活性的影响及其临床意义

目的探讨低氧对机体外周血单个核细胞（PBMC）迁移的影响及其临床意义。方法分离外周血单个核细胞，采用Transwell小室实验检测常氧和低氧条件下PBMC迁移能力的变化，流式细胞术（FCM）检测常氧和低氧条件下T、B淋巴细胞，NK细胞及单核细胞迁移的变化。结果低氧环境下PBMC的迁移率降低31％。对其细胞亚群的分析结果显示，NK细胞的迁移率降低31．7％，单核细胞的迁移率降低63．1％，T、B淋巴细胞的迁移率无显著变化。结论低氧能显著影响单核细胞及NK细胞的迁移功能；检测低氧条件下PBMC的迁移能力，可为以免疫细胞迁移功能为靶点的炎症等疾病提供新的治疗对策。     

正常早孕及稽留流产患者NK细胞中整合素αvβ3的表达分析

目的分析正常早孕妇女和稽留流产患者外周血及蜕膜组织中CD56+CD16-和CD56+CD16+自然杀伤(NK)细胞比率以及细胞表面整合素αvβ3的表达。方法分别采集15例正常早孕妇女和7例稽留流产患者外周血和蜕膜组织,Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞悬液,流式细胞术检测样本CD56+CD16-和CD56+CD16+NK细胞的比率以及其细胞表面αvβ3表达。结果 与早孕妇女外周血相比,蜕膜组织中CD56+CD16-NK细胞比率增高而CD56+CD16+NK细胞的比率却降低(P<0.01);正常早孕妇女及稽留流产患者外周血和蜕膜组织中CD56+CD16-和CD56+CD16+NK细胞的比率均无差异(P>0.05)。与正常早孕妇女相比,稽留流产患者蜕膜组织CD56+CD16-NK细胞表面αvβ3阳性表达率降低而其平均荧光强度(GM)值却增高(P<0.05)。结论 NK细胞及其所表达的整合素αvβ3在早孕期胚胎植入及胎盘形成过程中发挥重要作用,稽留流产患者NK细胞表面整合素αvβ3的表达异常,可能是稽留流产发生的免疫致病因素。     

KIF1B在瘦素促进妊娠早期绒毛滋养细胞MMP-2表达中的作用

 目的 观察瘦素对妊娠早期绒毛滋养细胞基质金属蛋白酶2（MMP-2）表达的影响,探讨驱动蛋白家族成员1B（KIF1B）在瘦素对MMP-2调控中的作用。方法 正常妊娠妇女人工流产绒毛组织（6~9周）,按常规分离获得滋养细胞,分为对照组、leptin（100 和500 μg/L）刺激组以及KIF1B-siRNA、leptin（100 和500 μg/L）分别+KIF1B-siRNA组,24 h后,明胶酶谱检测上清MMP-2的表达,RT-PCR检测MMP-2 mRNA、瘦素长型受体（OB-Rl）mRNA及KIF1B mRNA表达,Western blot检测KIF1B蛋白表达。结果 与对照组相比,瘦素（100 和500 μg/L）显著促进滋养细胞MMP-2表达（100 μg/L: mRNA水平由0.11±0.02增至0.18±0.05,P<0.05）;瘦素以剂量依赖方式促进OB-Rl及KIF1B表达（P<0.05）;KIF1B-siRNA部分抑制瘦素对MMP-2分泌的促进作用。结论 瘦素可能通过leptin R-KIF1B途径促进MMP-2分泌,从而促进妊娠早期滋养细胞侵袭,为阐明滋养细胞侵袭调控机制提供了新的基础数据。     

罗勒多糖抗卵巢癌侵袭转移的体外实验研究

目的： 探讨罗勒多糖抗卵巢癌侵袭转移的作用机制及其肿瘤乏氧微环境对其效应的影响,为临床应用研究提供依据。方法：罗勒多糖分别在常氧（21%O2、5%CO2）和乏氧（1%O2、5%CO2和94%N2）环境中作用于人卵巢癌SKOV3细胞,形态学观察不同氧环境下各组细胞形态差异;Transwell小室实验检测各组细胞的侵袭运动能力;明胶酶谱法分析各组细胞分泌的基质金属蛋白酶-2（MMP-2）活性差异;RT-PCR技术检测骨桥蛋白（OPN）mRNA表达水平;免疫细胞化学法观察各组细胞胞内OPN表达情况。结果：与对照组相比,罗勒多糖在常氧和乏氧环境下都能够降低SKOV3细胞的侵袭运动能力,抑制细胞中MMP-2的分泌,抑制人卵巢癌SKOV3细胞中OPN的表达（转录水平、蛋白水平）,且乏氧环境下罗勒多糖的上述作用更为显著。结论：低氧显著增强人卵巢癌SKOV3细胞的迁移能力,罗勒多糖可能通过下调骨桥蛋白表达及基质金属蛋白酶-2的分泌,抑制其侵袭运动能力。     

子宫NK细胞与妊娠关系的研究

子宫NK(uNK)细胞是妊娠子宫最主要的淋巴细胞,它参与了母胎界面免疫平衡的维持。本文简要介绍了uNK细胞的来源、分化和分布特征,重点论述了uNK细胞受体库的组成、功能以及与妊娠的关系。     

复发性口腔溃疡患者血清中微量元素含量及细胞免疫功能的研究

目的 :探讨复发性口腔溃疡 (RAU)患者血清中微量元素含量及细胞免疫功能状态。方法 :采用原子吸收分光光度计检测血清中微量元素的含量 ,流式细胞仪检测外周血 T细胞亚群和 NK细胞百分比 ,ELISA法检测血清中细胞因子。结果 :RAU组血清中锌和硒的含量均明显低于对照组 (均 P<0 .0 1 ) ,而镁、铁、铜的含量与对照组之间的差别无显著性的意义 (均P>0 .0 5 ) ;RAU组外周血中 CD3 + 、CD4 + 、CD4 + /CD8+ 和 CD5 6 + 细胞 (NK细胞 )的比例均明显低于对照组 (均 P<0 .0 1 ) ,RAU组血清中 IL- 1 2产生水平明显低于对照组 (P<0 .0 1 ) ,而 IL- 1 0产生水平明显高于对照组 (P<0 .0 1 )。结论 :RAU患者存在细胞免疫功能缺陷 ,临床治疗须提高 RAU患者的细胞免疫功能 ,合理补锌和补硒对于防治 RAU有重要意义     

胰岛移植研究进展

当前器官与组织移植在医学上已占有不可取代的特殊地位,使许多过去被认为是不治之症的康复成为可能。长期依赖胰岛素治疗的糖尿病患者,常因代谢紊乱而导致小血管病变造成眼、肾、脑及心血管并发症。因此许多学者寄希望于胰腺或胰岛细胞的移植。早在发现胰岛素之前就曾有人设想移植胰岛素分泌组织来治疗糖尿病。但直到60年代胰岛移植才成为现实。近年来胰岛移植进展较快。本文将就胰岛移植研究中的某些问题作一概要综述。     

尖锐湿疣患者HPV感染类型与细胞免疫功能关系的研究

目的　探讨尖锐湿疣 (CA)患者组织中HPV感染的类型与细胞免疫功能的关系。方法　采用PCR技术检测组织中HPVDNA ,流式细胞仪检测外周血T细胞亚群 ,ELISA法检测血清中细胞因子。结果　CA患者组织中HPV阳性率为 96 2 0 % ,假性湿疣 (PCV)患者组织中HPV阳性率为 5 0 0 %。CA组外周血CD3+ T细胞、CD4 +T细胞、CD4 + /CD8+ T细胞分别为 (5 1 2 3± 5 5 1) %、(2 3 5 2± 4 90 ) %、0 90± 0 84均低于PCV组 (6 0 31±9 4 6 ) %、(35 13± 5 94 ) %、1 5 5± 0 77和正常体检对照组 (6 1 0 1± 9 2 1) %、(36 4 6± 6 0 4 ) %、1 5 9± 0 78(均P<0 0 1) ;CA组外周血CD8+ T细胞为 (2 5 98± 5 78) %均高于PCV组 (2 2 6 7± 2 94 ) %和正常体检对照组 (2 2 86± 3 0 1) % (均P <0 0 5 ) ;CA组血清中IL - 12产生水平为 (6 1 38± 5 38) %均低于PCV组 (82 0 3± 9 0 1) %和正常体检对照组 (81 75± 10 18) % (均P <0 0 5 ) ;不同型别HPV感染的CA患者之间外周血CD3+ 、CD4 + 、CD8+ 、CD4 + /CD8+ 和血清中IL - 12产生水平无差异 (P >0 0 5 )。结论　CA患者存在细胞免疫缺陷 ,不同型别HPV感染的CA患者之间细胞免疫功能无差异     

去甲肾上腺素对胶质母细胞瘤侵袭迁移能力的影响及机制研究

目的   研究应激激素去甲肾上腺素(NE)对胶质母细胞瘤侵袭迁移能力的影响及机制,并探讨β受体阻断剂普萘洛尔(propranolol)抗应激所致肿瘤侵袭转移的可行性。方法   培养胶质母细胞瘤细胞系T98G、U251及U87,采用RT-PCR检测胶质瘤细胞系β肾上腺素能受体表达,Transwell评价NE对胶质瘤细胞侵袭迁移的影响,明胶酶谱法检测NE对胶质瘤细胞系MMP 2分泌水平影响。结果   随NE浓度增加(0.1~10μmol/L),胶质瘤细胞侵袭力逐渐增强(P>0.05),普萘洛尔(1nmol/L)可抑制此效应;随NE浓度增加(0.1~10μmol/L),胶质瘤细胞基质金属蛋白酶 2(MMP-2)分泌显著增多,普萘洛尔(1nmol/L)可抑制NE诱导的MMP 2分泌。结论   应激激素去甲肾上腺素可以促进胶质母细胞瘤MMP-2分泌酶活性从而增强其迁移能力,普萘洛尔可以抑制NE诱导的胶质瘤侵袭增强。