抑制STAT3增强对吉非替尼耐药的非小细胞肺癌药物敏感性的研究

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中表皮生长因子受体T790M突变导致的吉非替尼耐药与信号转导及转录激活因子3(STAT3)的相关性。方法:不同浓度STAT3特异性抑制剂JSI-124处理NSCLC H1975细胞和PC9细胞后,CCK-8法检测细胞抑制率,Western blot法检测蛋白水平表达,RT-PCR法检测相关基因mRNA水平的表达。结果:NSCLC中EGFR T790M突变的H1975细胞中STAT3的表达明显高于PC9细胞(P0.01);JSI-124可剂量和时间依赖性地抑制H1975突变细胞中STAT3的活性,并能增强其对吉非替尼的敏感性。且此现象未在对吉非替尼敏感的PC9细胞中观察到。结论:STAT3因子与表皮生长因子受体T790M突变导致的吉非替尼耐药机制相关,抑制STAT3活性可逆转吉非替尼耐药。     

非小细胞肺癌患者外周血表皮生长因子受体基因突变的检测及临床意义

目的探讨外周血表皮生长因子受体(EGFR)基因突变在非小细胞肺癌(NSCLC)吉非替尼治疗适宜患者筛选中的价值。方法对2005年12月至2007年12月在广州医学院第一附属医院肿瘤血液中心治疗的170例NSCLC患者,应用EGFR基因突变酶切富集PCR法分析血浆游离核酸EGFR基因外显子19缺失和外显子21L858R突变。分析血浆EGFR基因突变与性别、吸烟史、病理类型、TNM分期、吉非替尼治疗客观缓解率和疾病无进展生存期间的关系。结果 170例血浆标本共检出血浆EGFR基因突变77例,突变率为45.3%。血浆EGFR基因突变主要见于肺腺癌患者(P<0.001)及非吸烟者(P=0.001)。在33例接受吉非替尼治疗的患者中,血浆EGFR基因突变阳性患者的客观有效率和中位疾病无进展生存期均显著优于血浆EGFR基因突变阴性患者(P=0.001)。结论血浆游离核酸酶切富集PCR法能够灵敏而特异地检测NSCLC的EGFR基因突变。突变检测阳性者对吉非替尼的反应率明显高于野生型患者。     

肺腺癌表皮生长因子受体T790M突变裸鼠模型的建立与评价

目的 建立表皮生长因子受体（EGFR）T790M突变的肺腺癌裸鼠模型,为探讨肺腺癌EGFR-TKIs 的继发性耐药机制提供工具。方法 建立对吉非替尼耐药的人肺腺癌细胞株RPC-9,以皮下异位移植法建立EGFR T790M突变肺腺癌裸鼠模型。进行组织病理学分析,以基因测序法检测EGFR基因突变;以Western blot法检测EGFR及磷酸化EGFR表达水平。结果 吉非替尼浓度增到10μmol/L时,基因测序法检测显示PC-9细胞EGFR基因E20发生突变,其氨基酸变化为790T>T/M。在4周内,PC-9移植组及RPC移植组肿瘤体积明显差异;移植后第5周时,RPC移植组肿瘤体积为944±20mm³,PC移植组肿瘤体积为878±8mm³,RPC移植组肿瘤体积显著大于PC-9移植组（P<0.05）。PC-9移植及RPC移植组肿瘤组织病理均为低分化腺癌。RPC-9移植组肿瘤组织EGFR基因存在E20发生突变,其氨基酸变化为790T>T/M。PC-9移植组及RPC移植组肿瘤组织EGFR及Tyr992磷酸化的EGFR表达水平差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 通过皮下移植对吉非替尼继发性耐药的人肺腺癌细胞RPC-9成功建立EGFR T790M 突变的肺腺癌裸鼠模型,为研究肺腺癌EGFR-TKIs 的继发性耐药提供了有力工具。     

阿法替尼与非小细胞肺癌T790M基因的研究进展

【摘要】 第一代表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR TKI）广泛运用于EGFR突变的晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的治疗,使多数患者获得超过两年的生存期,但是获得性耐药的产生,限制了其继续使用的临床疗效,超过50%的耐药患者为20号外显子管家基因EGFR发生T790M突变。 阿法替尼是第二代不可逆抗人表皮生长因子受体（HER）制剂,近年来有学者发现其能抑制T790M突变的肿瘤细胞生长,对使用第一代EGFR TKI耐药的NSCLC患者仍然有一定疗效,但是其作用机制仍不清楚。本文就阿法替尼对T790M基因突变所致耐药的晚期非小细胞肺癌研究进展进行综述,为T790M突变型NSCLC的研究及治疗提供新的参考。     

资讯

吉非替尼对恶性间皮瘤无效，EGFR激酶结构域的再突变与肺癌对吉非替尼或埃罗替尼的继发耐药有关，小细胞肺癌表达EGFR且其酪氨酸磷酸化可被吉非替尼抑制，中国大陆肺腺癌患者可能会从吉非替尼，急性肺损伤是吉非替尼的严重不良反应。     

ABT-737逆转EGFR T790M突变肺腺癌细胞EGFR-TKIs耐药的机制研究

目的通过细胞和在体研究探讨ABT-737联合吉非替尼对EGFR T790M突变肺腺癌细胞EGFR-TKIs耐药的逆转机制。方法利用MTT和FCM法检测ABT-737联合吉非替尼对RPC-9细胞的增殖和凋亡的影响,以RT-PCR检测细胞内Bim、Bak、Caspase-3 mRNA表达水平。以皮下异位移植法建立EGFR T790M突变肺腺癌裸鼠模型,对各组瘤体组织进行组织病理学检查、基因测序法检测、Real-time PCR和免疫组织化学法分析Bim、Bak、Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平。结果 ABT-737联合吉非替尼对RPC-9细胞有生长抑制作用和凋亡作用,且在ABT-737浓度4μmol/L范围内呈浓度依赖性,最大抑制率为(54.113±2.986)%,最大凋亡率为(55.042±3.151)%,差异均有统计学意义(P0.05);Bim、Bak及Caspase-3 mRNA表达水平随着ABT-737浓度的升高而增加(P0.05)。各组瘤体组织病理均为腺癌;ABT-737联合吉非替尼灌胃组裸鼠瘤体体积较其他组小(P0.05),Bim、Bak、Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平较其他组显著增高(P0.05)。结论 ABT-737能增强吉非替尼促细胞凋亡作用,使耐药细胞重新发生凋亡。     

基于CRISPR/Cas9技术敲除PD-L1对非小细胞肺癌 PC-9/T790M细胞吉非替尼耐药敏感性的影响

探讨在具有T790M突变的非小细胞肺癌（NSCLC）细胞中应用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除程序性细胞死亡配体1（PD-L1）后对吉非替尼耐药敏感性的影响，阐明PD-L1对PC-9/T790M细胞耐药敏感性的作用机制。     

吉非替尼对非小细胞肺癌的一线或二线治疗预后相同

在临床上吉非替尼是治疗表皮生长因子受体（EGFR）突变的非小细胞肺癌（NSCLC）的一种有效方法。外显子19的删除和外显子21的L858R是最经典的EGFR突变方法,它与有效的吉非替尼反应性有关。然而,吉非替尼对外显子19的删除或外显子21的L858R患者疗效有何不同,目前尚不清楚。中国国立台湾大学医院的Wu JY等阐明了给予外显子19的删除或外显子21的L858R患者吉非替尼治疗后的不同临床结果。     

生活方式作为老年非小细胞肺癌患者吉非替尼治疗预测因素的研究

目的探讨生活方式对老年非小细胞肺癌(NSCLC)患者吉非替尼治疗的影响。方法将组织学证实的ⅢB～Ⅳ的65岁及以上的老年NSCLC患者,分为吉非替尼敏感组和耐药组。吉非替尼敏感是指患者用吉非替尼治疗时获得客观疗效或疾病稳定时间持续4个月以上,或患者EGFR19、21外显子突变;耐药患者是指鳞癌患者,EGFR是野生型或用吉非替尼治疗4个月内出现疾病进展。调查问卷内容包括吸烟情况(吸烟者或二手烟者),职业接触,是否在家里做饭,居住地是城市还是农村。对于诊断时就是晚期的患者,患者的总生存时间从诊断时计算;对术后完全切除的患者生存时间从发现疾病复发时计算。结果 65岁及以上患者共114例,患者的平均年龄72.34岁(65～86岁),男女比例为66:48。腺癌患者96例,鳞癌患者17例。多因素回归分析显示,老年NSCLC患者吉非替尼的疗效不佳预测因素是鳞癌(风险比7.33,P=0.01),在家做饭(风险比15.19,P=0.000)。而女性(风险比0.19,P=0.000)、不吸烟(风险比0.11,P=0.000)、有职业暴露(风险比0.19,P=0.000)是吉非替尼治疗敏感的预测指标。吉非替尼敏感型42例,占36.84%,耐药型72例,占63.16%,两组患者的中位生存时间分别为28.39个月和10.84个月(P=0.0006)。有利于患者生存的预后因素是吉非替尼治疗有效(风险比0.25,P=0.016),不利于患者生存的预后因素是合并慢性肺部疾病(风险比6.32,P=0.01)。结论吉非替尼有效的预测因素是女性、不吸烟、有职业暴露,治疗无效的预测因素是鳞癌和在家做饭。吉非替尼治疗有效和无效患者的中位生存期有明显差异,但需要大样本调查进一步明确结果。     

采用癌症进化数学模型优化EGFR突变型肺癌的靶向抑制剂剂量

当前包括吉非替尼和厄洛替尼的第一代EGFR－TKI的临床剂量均是来自针对野生型EGFR的研究数据。自EGFR－TKI治疗晚期EGFR突变型肺癌的策略确立以来。如何克服EGFR—T790M的耐药是目前临床亟待解决的问题。     

云南地区多结节肺腺癌EGFR突变及其临床意义

目的 探讨使用下一代测序(Next-generation sequencing,NGS)技术检测云南地区多结节肺腺癌患者肿瘤组织中EGFR基因突变与临床病理特征的关系.方法 收集2018年1月至2020年5月云南省分子诊断中心共检测的79例多结节肺腺癌患者送检的111枚肺结节肿瘤组织样本,以NGS法检测EGFR突变情况...     

Super-ARMS法检测EGFR突变在NSCLC的临床应用

目的:探讨Super-ARMS法检测体液EGFR突变在晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者治疗中的应用。方法:收集天津医科大学肿瘤医院自2019年4月1日—2019年12月30日161例NSCLC患者的血液、脑脊液、心包积液标本,采用Super-ARMS法对EGFR基因片段进行检测,根据突变结果对EGFR突变类型分析判断。结果:161例NSCLC患者标本中,86例（53.4％）EGFR突变阳性。19号外显子（19-del）缺失、21号外显子（L858R）基因点突变及T790M点突变最常见。S768I有5例（3.1%）;G719X突变4例（2.5％）;L861Q有1例（0.6%）;不同性别、是否吸烟者之间突变差异均无统计学意义（均P>0.05）;在年龄、是否存在EGFR-TKIs治疗史间差异均有统计学意义（均P<0.05）。EGFR基因突变率在女性、不吸烟患者中较高。结论:NSCLC患者EGFR突变率较高。Super-ARMS法可用于体液EGFR突变检测,其结果较准确,且可同时检测多种突变及并存突变。     

DNA直接测序技术检测EGFR基因及突变分析

目的：探讨非小细胞肺癌（NSCI,C）患者表皮生长因子受体（EGFR）基因突变的情况及EGFR-TKI的治疗效果。方法：从94例晚期NSCLC患者的肿瘤组织中提取DNA,采用DNA直接测序技术检测EGFR基因18、19、20、21外显子的突变情况。对EGFR基因突变可评估患者采用TKI口服治疗（吉非替尼250mg／d、厄洛替尼150mg／d）,评价客观有效率（RR）、疾病控制率（DCR）及无疾病进展时间。结果：94例患者中39例（41．5％）存在EGFR基因突变,其中27例外显子19突变．2例外显子20突变,9例外显子21突变、1例外显子18突变。女性患者突变率显著高于男性（56．1％vs30．2％．P〈0．05）;腺癌患者突变率高于非腺癌患者（48％／）815．8％,P〈0．05）;不吸烟者突变率显著高于吸烟者（50．8％vs20．7％,P〈0．05）。16例患者口服TKI后部分缓解5例、疾病稳定7例、疾病进展PD4例,客观有效率为31．2％,疾病控制率为75．0％,截至随访结束,仍有14例患者生存,无疾病进展时间为（11．3l±4．44）个月,1年生存率为43．8％,、结论：DNA直接测序检测晚期NSCLC患者EGFR基因突变具有高度敏感性,以EGFR基因突变结果为依据,应用TKI治疗晚期NSCL C疗效明显。     

表皮生长因子受体敏感突变肺癌靶向治疗原发耐药的机制及临床对策

针对伴有表皮生长因子受体（EGFR）敏感突变的非小细胞肺癌,基于小分子抑制剂的靶向治疗在临床上取得了极大成效,但仍面临着原发耐药/不敏感的问题。初始治疗的有效比例及疗效深度决定了患者的远期生存。本文梳理了关于原发耐药的主要机制,包括突变亚型结构、原发T790M、合并突变、免疫状态等的影响及其相互关系,以及目前有效药物的证据,提出了多基因分型、精准靶向、“鸡尾酒”疗法等克服原发耐药的管理策略,并展望了该领域的发展趋势,为同行们的临床实践及科研方向提供思路。     

非小细胞肺癌表皮生长因子受体第19、21号外显子突变研究

目的分析非小细胞肺癌（NSCLC）患者肺癌组织中的表皮生长因子受体（EGFR）第19、21号外显子（exon19、21）的突变率、突变类型及其与患者临床特征的关系。方法从90例可手术的NSCLC患者的肺癌组织中提取DNA,扩增EGFR基因的19和21号外显子基因片段,从正反两个方向对进行DNA测序和分析。结果90例NSCLC患者中检测到29例（32．2％）有EGFR基因的经典突变。29例突变中包括16例（55.2％）发生于exon 19上的缺失突变,13例（44．8％）发生于exon 21上的替代突变。腺癌和细支气管肺泡癌的突变率明显高于鳞癌[13／34（38．2％）,（9／10）90．0％与7／46（15.2％）,P〈0.001];非吸烟者的突变率高于吸烟者[18／36（50．0％）与11／54（20．4％）．P〈0.001];女性突变率也高于男性[15／25（60．0％）与14／65（21．5％）．P〈0．01];而突变率与患者年龄及分期无关（P均〉0．05]。另外,47例（52．2％）患者存在同义突变S749S（A 2244 G）。鳞癌患者突变率高于腺癌或支气管肺泡癌（P〈0．05）,而其突变率与患者性别、年龄、吸烟状况、TNM分期无明显相关（P〉0．05）。结论NSCLC患者EGFR的突变率较高,总突变率为3212％。腺癌（尤其是细支气管肺泡癌）、不吸烟及女性患者是预测突变的四个重要因素。发现同义突变,并且与患者病理类型有关,在鳞癌中多见,与其他因素无关,并探讨其遗传生物学效应,初步猜测可能与EGFR酪氨酸激酶抑制剂（EGFR—TKI）耐药相关。     

非小细胞肺癌患者EGFR基因突变与血清肿瘤标志物之间关系探讨

目的：分析非小细胞肺癌（NSCLC）患者表皮生长因子受体（EGFR）基因突变与血清肿瘤标志物之间的关系,探讨可预测EGFR基因突变的肿瘤标志物。方法：回顾性分析2010年10月至2013年8月在我院经病理确诊为NSCLC的188例患者的临床资料,所有患者进行EGFR基因突变检测并在治疗前2周内完成血清肿瘤标志物的检测。对EGFR基因突变与患者的临床基本特征及血清肿瘤标志物之间的关系进行统计学分析。结果：本研究中NSCLC患者的EGFR基因突变率为44.7%。EGFR基因突变多发生于女性、非吸烟及肺腺癌患者（P＜0.05）,而与患者的年龄及肿瘤分期无明显相关性（P＞0.05）。当血清癌胚抗原（CEA）＞20μg/L时,EGFR基因突变率明显升高;血清鳞状细胞癌抗原（SCCAg）≤1.5μg/L时,EGFR基因突变率也明显升高。其中,SCCAg≤1.5μg/L且CEA＞20μg/L组与SCCAg≤1.5μg/L或CEA＞20μg/L组,SCCAg＞1.5μg/L且CEA≤20μg/L组相比,EGFR突变率最高,差异有统计学意义（P＜0.05）。未发现其他血清肿瘤标志物如细胞角蛋白（CYFRA）21-1、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、CA125和CA199在EGFR基因突变型和野生型中的差异（P＞0.05）。结论：EGFR基因突变主要发生于女性、非吸烟及肺腺癌患者。在无法进行EGFR基因突变检测的患者中,我们可以选择血清SCCAg≤1.5μg/L且CEA＞20μg/L的患者,结合临床优势人群,经验性使用表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）治疗。     

改良Blocker PCR检测EGFR-TKI耐药后非小细胞肺癌血浆EGFR T790M突变的价值

 目的   探讨改良PCR(Blocker PCR)方法在晚期非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)患者血浆游离DNA(cell free DNA,cfDNA)中检测继发EGFR T790M突变的应用价值。方法   采用Blocker PCR方法对127例表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)耐药后肺癌患者的血浆标本行EGFR敏感突变和T790M突变检测,统计T790M突变的检出率;为验证Blocker PCR 血浆检测的可靠性,部分患者血浆标本行二代测序(next generation sequencing,NGS)和Blocker PCR配对比较;获得配对血浆和组织的病例行Blocker PCR配对检测。结果   在127例采用Blocker PCR方法检测的EGFR-TKI耐药NSCLC患者中,T790M耐药突变的检出率为40.15% (51/127),其中21.56% (11/51)为单纯T790M耐药突变,78.44% (40/51)为T790M合并原有EGFR敏感突变。组织与血浆配对检测中,EGFR-TKI耐药后二次活检组织标本T790M的检出率为54.54% (6/11),血浆T790M的检出率为43.75% (14/32)。在同时行Blocker PCR 和二代测序基因检测的18例患者中,敏感突变位点及T790M突变位点在两种检测方法中的一致率均为100%。结论   在EGFR-TKI耐药后的NSCLC患者中使用Blocker PCR 检测血浆T790M突变是对组织活检的重要补充。     

非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变检测及其与临床病理特征的关系

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）表皮生长因子受体（EGFR）基因突变情况及其与临床病理的关系。方法对2010年1月—2014年1月来该院诊治的159份非小细胞肺癌手术切除标本进行分析,实验中采用基因测序方法对标本中的EGFR基因突变情况进行检测,分析其与临床病理的关系。结果 159例样本中,EGFR基因突变检出率12.6%（20/159）,突变主要集中在19号外显子的缺失和21号外显子的点突变。女性患者基因突变检出率明显高于男性患者（P﹤0.01）。腺癌及细支气管肺泡癌患者基因突变检出率明显高于其他组织学分型（P﹤0.01）。高分化患者基因突变检出率高于中-低分化检出率（P〈0.05）。EGFR基因突变与年龄及淋巴结转移与否无关（P〉0.05）。结论非小细胞肺癌患者EGFR基因突变与性别、组织学分型及分化程度密切相关。     

早期非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变分布

目的探索早期非小细胞肺癌（NSCLC）表皮生长因子受体（EGFR）基因突变状况。方法以上海市胸科医院2003年6月1日--2011年6月1日期间早期NSCLC患者为研究对象,收集NSCLC根治术后原发灶标本,采用PCR扩增和直接测序方法检测EGFR突变;EGFR敏感突变和非敏感突变患者之间临床病理特征比较采用x。检验。采用Logistic回归法分析EGFR敏感突变与临床病理特征的相关性。结果共入组165例NSCLC患者,其中EGFR野生型93例（56．36％,93／165）,EGFR突变72例（43．64％,72／165）,敏感突变56例（19del33例和21L858R23例）,占总人群33．94％（56／165）,占所有突变77．78％（56／72）;单因素分析发现,腺癌、不吸烟、原发灶直径〈5cm和EGFR荧光原位杂交（FISH）扩增阳性患者突变概率较高;Logistic回归分析显示,病理类型及原发灶大小是早期NSCLC患者EGFR敏感突变的独立预测因子,腺癌、肿瘤直径〈5cm患者的EGFR突变概率分别是非腺癌、肿块直径≥5cm患者的4．435倍（95％CI1．209～16．273,P：0．025）、4．343倍（95％CI1．393～13．540,P=0．011）。结论在早期NSCLC患者中,腺癌、不吸烟、原发灶直径〈5em和EGFRFISH扩增阳性患者的敏感突变概率高;病理类型及肿瘤大小是早期NSCLC患者EGFR敏感突变的独立预测因子。     

Bevacizumab Combined with Icotinib Overcomes Osimertinib Resistance in a Patient of Non-Small Cell Lung Cancer

A 61-year-old Chinese woman was diagnosed as primary pulmonary adenocarcinoma of left superior lobe with epidermal growth factor receptor (EGFR) 19 del mutation positive. Treatment with icotinib was given, but her disease progressed after 6 months remission. CT-guide needle biopsy for the new lesion in inferior lobe of left lung demonstrated intrapulmonary metastasis, and EGFR gene panel by Amplification Refractory Mutation System Polymerase Chain Reaction (ARMS-PCR) confirmed EGFR T790M mutation. Treatment with osimertinib was initiated. After 2 months remission, the disease progressed. Re-biopsy was performed for the tumor in the inferior lobe of left lung, and ARMS-PCR demonstrated no other gene mutation except EGFR 19 del. Icotinib was re-challenged, but disease progressed continuously. Bevacizumab was added, and partial response was achieved after 2-cycle of combination therapy. The non-small cell lung cancer (NSCLC) in this case maintained EGFR activating mutation and lost EGFR T790M mutation was a genetic change after osimertinib treatment. This case suggests the re-challenge of the first-generation EGFR-TKIs combined with bevacizumab may overcome the tumor resistance and prolong survival of NSCLC patient.