地塞米松对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖及细胞周期的影响

目的:观察不同浓度的地塞米松(Dex) 对人乳腺癌细胞系(MCF-7) 细胞增殖、细胞周期分布及P21/WAF1表达的影响.方法:以不同浓度Dex(10-10～10-6 mol/L)处理细胞,采用活细胞计数法观察细胞增殖情况;测定碱性磷酸酶(AKP)活性;通过流式细胞仪技术,测定Dex作用后其细胞周期分布;通过蛋白印迹分析的方法检测Dex对p21/WAF1表达的影响.结果:Dex对MCF-7细胞的增殖有明显抑制作用, 10-7mol/L Dex作用5 d后活细胞计数为对照组的70%,细胞在G0/G1期停滞; Dex还可使MCF-7 细胞AKP活性增高,这种作用具有时间和剂量依赖性;Dex对p21/WAF1表达无明显影响.结论:Dex对MCF-7细胞有明显的增殖抑制作用,细胞在G0/G1期停滞.     

全反式维甲酸对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察全反式维甲酸对体外培养的眼眶成纤维细胞增殖的影响以及促胞凋亡的作用.方法 体外培养甲状腺相关眼病患者眼眶成纤维细胞;将不同浓度的ATRA(0、10-9 mmol/L、10-8mmol/L、10-7mmol/L、10-6 mmol/L和10-5 mmol/L)作用于成纤维细胞细胞分别达24、48和72 h后,用噻唑蓝(MTT)比色法观察ATRA对细胞增殖的影响,采用流式细胞仪检测ATRA处理48h后细胞周期的改变及细胞凋亡率;检测ATRA处理48 h后细胞内bcl-2蛋白的表达水平.结果 MTT法显示ATRA能降低成纤维细胞的A值(P＜0.05),细胞生长抑制率随作用时间和药物浓度的增加而增加.流式细胞仪检测细胞周期阻滞在G1期;凋亡率随着浓度的增加而上升;bcl-2蛋白的表达水平较正常对照组细胞明显下调.结论 ATRA能够抑制成纤维细胞的增殖,抑制作用呈时间和剂量依赖性;ATRA通过将细胞阻滞在G1期而起到抑制作用;ATRA可以诱导成纤维细胞凋亡,诱导细胞凋亡作用与下调细胞内bcl-2蛋白的表达有关.     

二烯丙基二硫对人白血病细胞HL-60增殖、细胞周期及p21表达的影响

目的观察二烯丙基二硫(DADS)作用于人白血病细胞系HL-60后，细胞增殖、细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p21表达的变化，探讨DADS抑制HL-60增殖、诱导G／M阻滞的作用机制。方法不同浓度DADS作用HL-60后，MTF法检测细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞周期，Western blot检测p21蛋白水平。结果在一定浓度范围之内，DADS能抑制HL-60细胞增殖，细胞周期发生G2／M期阻滞，并上调p21蛋白水平。结论DADS能通过上调p21的表达而抑制HL-60增殖，诱导其G／M期阻滞。     

17β-雌二醇对Ishikawa细胞增殖及P21 ras、P-Erk蛋白表达的影响

目的:观察17β-雌二醇(E2)对人子宫内膜腺癌Ishikawa细胞增殖、细胞周期及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路相关蛋白P21 ras和p-Erk表达的影响,初步探讨雌激素通过MAPK通路促进子宫内膜癌形成的可能性.方法:运用MTT法检测不同浓度(0、10-10、10-8、10-6和10-4 mol/L)E2,作用不同时间(24、48、72 h)后Ishikawa细胞的增殖情况;流式细胞技术检测不同浓度(0、10-10、10-8 moL/L)E,作用24 h后细胞周期的变化.免疫细胞化学检测10-6 mol/L的E2作用于细胞不同时间(0、5、15、30 min及1、2 h)后P21ras和p-Erk蛋白的表达,不同浓度E2(0、10-10、10-8、10-6和10-4 moL/L)作用于该细胞最佳时间后2种蛋白的表达情况.结果:随着E2浓度增加,Ishikawa细胞吸光度值上升并呈时间依赖性(P<0.05),细胞周期中G0/G1期比例下降、S期比例升高(P均<0.05).10-6mol/L的E2作用于Ishikawa细胞30 min时P21ras和p-Erk的活化最显著[(74.00±2.54)%,(68.00±4.81)%](P<0.05).随着E2浓度增加P21 ras和p-Erk表达均逐渐增加,呈剂量依赖性(P<0.05).且P21 ras和p-Erk蛋白的表达成正相关(P<0.05).结论:雌激素可以促进子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和周期的进展,而且可以通过非转录效应迅速激活子宫内膜癌细胞中MAPK信号传导通路.     

硼替佐米对A549细胞增殖及p21、p27表达的影响

目的研究蛋白酶体抑制剂硼替佐米对人肺癌A549细胞增殖、细胞周期及在体成瘤的影响。方法采用不同浓度的硼替佐米(0、100、200 nmol/L)作用于A549细胞4 h,观察其对蛋白酶体活性的影响。用硼替佐米(0、100、200 nmol/L)处理A549细胞48 h,采用MTT法、3H-TdR掺入法检测细胞增殖;流式细胞术PI染色检测细胞周期;Westernblot检测p21、p27表达水平的变化;连续注射观察硼替佐米对裸鼠A549细胞移植瘤体积及质量的影响。结果硼替佐米可显著抑制A549细胞的蛋白酶体活性。MTT法、3H-TdR法检测显示,100 nmol/L处理组细胞较对照组增殖率分别降低24.5%、29.5%,200 nmol/L处理组进一步显著下降(P<0.05);细胞周期分析显示,100、200 nmol/L处理组G0/G1期较对照组明显增加(P<0.05)。Western blot检测显示,48 h时100、200 nmol/L处理组p21、p27蛋白表达较对照组明显增加,且呈浓度依赖(P<0.05),48 h蛋白质水平高于24 h。连续注射硼替佐米后裸鼠移植瘤的质量抑制率达(36.0±12.4)%。结论硼替佐米可抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡及发生G0/G1期阻滞,在体注射可抑制裸鼠成瘤,其抗肿瘤活性可能与抑制细胞周期蛋白p21、p27的降解有关。     

烟酰胺对鼻咽癌CNE-1细胞增殖、凋亡与迁移作用机制研究

目的 探讨烟酰胺对人鼻咽癌CNE-1细胞增殖、凋亡及迁移的影响和机制.方法 将人鼻咽癌CNE-1细胞株分为烟酰胺处理组(10、20、40、80μmol/L烟酰胺)及对照组.CCK-8法检测不同浓度烟酰胺作用48、72 h后CNE-1细胞增殖率,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测40μmoL/L烟酰胺作用48 h后CNE-1细胞凋亡率和细胞周期,Transwell小室实验检测CNE-1细胞迁移及侵袭能力的变化,实时荧光定量PCR和Western blot分别检测CNE-1细胞中p53蛋白和基质金属蛋白酶9(MMP-9) mRNA和蛋白水平.结果 与对照组相比,CCK-8法检测结果显示,烟酰胺处理组CNE-1细胞增殖抑制率升高(P＜0.01),且随着烟酰胺处理浓度的升高和处理时间的延长而升高,呈浓度和时间依赖性;40μmol/L烟酰胺处理CNE-1细胞48 h(即40μmol/L实验组)后,CNE-1细胞凋亡率升高(P ＜0.01);40μ mol/L实验组G2/M期细胞比例增加,G0/G1期细胞比例降低(P ＜0.05);CNE-1细胞经40 μmol/L烟酰胺处理后其侵袭及迁移能力均下降(P＜0.01);40 mol/L实验组p53蛋白表达水平升高,MMP-9蛋白表达水平下降.结论 烟酰胺可通过上调p53蛋白的表达、恢复细胞周期从而抑制人鼻咽癌CNE-1细胞增殖,促进其凋亡,同时亦可影响MMP-9蛋白的表达进而降低CNE-1细胞迁移和侵袭能力.     

糖皮质激素对人卵巢癌细胞系HO-8910细胞周期的影响

目的:观察糖皮质激素对人卵巢癌细胞HO-8910细胞周期的影响,并初步探讨其作用机制。方法:将1×10-7mol/L地塞米松(dexamethasone,Dex)和1×10-6mol/L糖皮质激素受体阻断剂RU486分别单用或合用处理HO-8910细胞,采用流式细胞术测定细胞周期,核素掺入半定量RT-PCR检测细胞周期蛋白激酶抑制剂p21/WAF1的表达水平。结果:Dex诱导HO-8910细胞发生G0/G1期停滞,并使p21/WAF1 mRNA表达上调;RU486可逆转Dex引起的p21/WAF1表达的变化。结论:p21/WAF1的表达上调可能参与糖皮质激素引起的HO-8910细胞G0/G1期停滞作用。     

氯化锂通过激活Wnt信号通路促进神经干细胞增殖

目的观察氯化锂（LiCl）作用于神经干细胞（NSCs）后对细胞周期等生物学性状的影响以及经LiCl处理过的神经干细胞在分化过程中Wnt信号通路的主要信号分子β-catenin、GSK-3β的表达改变,评估LiCl激活Wnt信号通路后对NSCs增殖和分化的影响。方法应用分离培养的NSCs体系,流式细胞仪检测不同浓度的LiCl（1、5、10、100mmol/L）处理48h后NSCs细胞周期等生物学性状改变,Western Blot检测LiCl处理后的NSCs中β-catenin、GSK-3β的表达以及动态变化。结果 LiCl处理后的NSCs体系细胞团块分散,呈悬浮状态生长,并能抑制血清诱导下的干细胞分化,分化细胞贴壁时间明显延长。流式细胞仪检测表现为S期、G2/M期细胞数百分比的增加和G0/G1期细胞数百分比的相对减少,其效应呈现一定的剂量依赖关系（P〈0.01）。Western Blot检测显示NSCs中的β-catenin分子在LiCl处理后表达明显增强,GSK-3β分子的表达明显下调,表现出正相关的量效关系（P〈0.01）。结论 LiCl通过激活Wnt信号通路能促进培养NSCs的增殖,抑制干细胞分化,其作用可能与胞内效应分子β-catenin的表达增多有关。     

青蒿琥酯通过PI3K-Akt通路促进大鼠室管膜下区神经干细胞增殖的体外研究

目的 探讨青蒿琥酯(artesunate,ART)对室管膜下区(subventricular zone,SVZ)神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖的影响.方法 不同浓度的ART(400 nmol/L、800 nmol/L、1.6 μmol/L、3.2 μmol/L)作用于NSCs 24 h后,采用CCK-8法检测其对NSCs增殖的影响.促增殖作用明显的800 nmol/L ART组加入10 μmol/L PI3K-Akt通路阻断剂(LY294002),采用CCK-8法检测该通路对NSCs增殖的影响;分别设置空白对照组、LY294002组、800 nmol/L ART组、800 nmol/L ART+ LY294002组,待细胞培养24h时,行Ki-67免疫荧光染色观察ART对NSCs增殖的影响及PI3K-Akt通路在其中的作用,同时采用Western blot检测各组Nestin、Akt及p-Akt蛋白的表达水平.结果 ①CCK-8法检测结果显示800 nmol/L ART组在波长450 nm处的光密度值较空白对照组明显升高,在加入LY294002后,其光密度值明显下降(P＜0.05),与空白对照组水平相当;②Ki-67免疫荧光染色结果提示800 nmol/L ART可促进NSCs增殖,LY294002可抑制这一作用;③Western blot检测结果显示:神经干细胞表面标志蛋白Nestin及p-Akt蛋白表达水平在800 nmol/L ART组明显上调,在加入LY294002后两者表达水平均下调(P＜0.05).结论 ART可在体外促进SVZ区NSCs的增殖,其机制与PI3K-Akt信号通路相关.     

山奈酚对高糖诱导大鼠肾系膜细胞增殖的影响

目的探讨山奈酚对高糖诱导大鼠肾系膜细胞（HBZY-1）增殖、纤维化的影响,并研究其相关的作用机制。方法将HBZY-1细胞分为正常糖浓度组〔葡萄糖（Glu）5.5 mmol/L〕即对照组、高糖（Glu 25 mmol/L)组、10 μmol/L山奈酚+高糖组和 30 μmol/L山奈酚+高糖组。分组处理细胞后,采用MTT实验检测正常糖浓度和高糖下山奈酚对HBZY-1细胞增殖的影响;流式细胞仪检测各组细胞周期变化;Real-time PCR检测各组细胞纤维连接蛋白 (FN)、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA的表达,Western blot检测FN、CTGF、细胞周期相关蛋白以及p38 MAPK信号通路蛋白的表达。结果山奈酚(10、30 μmol/L)对正常糖浓度培养的HBZY-1细胞增殖影响不大(P>0.05),高糖能够增强细胞的增殖能力（P<0.05）, 而山奈酚(10、30 μmol/L)可抑制高糖引起的增强细胞增殖作用（P<0.05）。高糖能减少G0/G1期细胞比例,增加S期细胞比例,并降低细胞周期相关蛋白p21Cip1以及p27Kip1蛋白表达,山奈酚(10、30 μmol/L)能够阻止高糖引起的细胞周期改变以及细胞周期相关蛋白表达的下调。山奈酚(10、30 μmol/L)同时能够抑制高糖引起的细胞FN、CTGF mRNA和蛋白表达水平的上调。高糖能够增加磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)蛋白水平,而山奈酚(10、30 μmol/L)处理能够剂量依赖性的抑制高糖诱导的p-p38MAPK蛋白的表达上调。结论山奈酚对高糖诱导的HBZY-1细胞增殖起抑制作用,其作用机理可能是通过调控p38 MAPK信号通路,对高糖培养下的HBZY-1细胞起到保护作用。