脑梗死大鼠外周血中CD4^+CD25^+调节性T细胞表达对神经功能变化的影响

目的观察脑梗死大鼠建模成功后不同时期CD4^+CD25^+调节性T细胞(CD4^+CD25^+Treg)表达对神经功能变化情况及两者之间的相关性。方法选择清洁级雄性大鼠60只,适应性饲养1 w后,选择30只作为假手术组,另外30只建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,分别于建模成功后12、24、72 h后处死大鼠,每次处死10只。检测并对比建模成功后不同时期大鼠CD4^+CD25^+Treg表达与神经功能(以Zausinger六分法评估大鼠神经功能),并分析上述两者之间的相关性。结果建模成功12 h后,模型组神经功能得分显著低于假手术组(P<0.05);两组CD4^+CD25^+Treg比较差异无统计学意义(P>0.05);建模成功24、72 h后,模型组CD4^+CD25^+Treg与神经功能得分显著低于假手术组(P<0.001);经双变量Pearson直线相关性检验结果显示,脑梗死大鼠CD4^+CD25^+Treg与神经功能呈正相关(r=0.593,P=0.001)。结论脑梗死大鼠梗死早期CD4^+CD25^+Treg未见明显改变,随着梗死时间延长,大鼠CD4^+CD25^+Treg逐渐降低、神经功能损伤程度加重,二者间存在相关性,考虑早期通过检测脑梗死CD4^+CD25^+Treg,对预测神经功能、指导治疗有积极意义。     

盐酸戊乙奎醚通过抑制肺组织NF-κB活化减轻胎鼠急性肺损伤

目的 研究盐酸戊乙奎醚(penehyclidine hydrochloride,PHCD)对宫内窘迫致胎鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)时NF-κB的影响.方法 足月胎鼠80只,体质量4.74 ～4.82 g,采用随机数字表法分为4组(n=20):空白对照组、PHCD组、ALI组、ALI +PHCD组.采用钳夹孕鼠两侧子宫角血管的方法建立宫内窘迫模型,ALI+PHCD组在建立宫内窘迫模型前30 min予孕鼠肌注PHCD(2 mg/kg),PHCD组给孕鼠肌注等剂量盐酸戊乙奎醚.剖宫取出胎鼠后立即断头,收集胎鼠外周血行血气检测、肺湿/干质量比值(W/D)测定,HE染色观察胎鼠肺组织病理改变,ELISA测定肺组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)含量,荧光定量PCR检测肺组织NF-κB表达,Western blot检测肺组织NF-κB p65蛋白表达.结果 ALI组血酸碱度(pH)、氧分压均低于空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),ALI+ PHCD组上述指标高于ALI组,差异有统计学意义(P ＜0.05);ALI组二氧化碳分压、乳酸(lactic acid,Lac)、W/D、TNF-α、IL-6含量、NF-κB mRNA表达及NF-κB p65蛋白表达水平均明显高于空白对照组(P＜0.05),ALI+ PHCD组上述各指标均明显低于ALI组(P＜0.05).ALI+ PHCD组肺组织病理学损伤较AH组减轻.结论 PHCD可能是通过抑制肺组织NF-κB活化,减少TNF-α、IL-6的释放,降低炎性反应,从而减轻宫内窘迫导致胎鼠急性肺损伤.     

双氢青蒿素促进胶质瘤GL261细胞的凋亡

目的研究双氢青蒿素对胶质瘤GL261细胞凋亡的影响与作用机制。方法 0、30、60、90μmol/L双氢青蒿素处理GL261细胞,倒置显微镜下观察细胞形态改变,CCK-8法检测处理后GL261细胞活力的改变,Annexin V PI法检测双氢青蒿素对GL261细胞凋亡的影响,免疫荧光显微镜观察双氢青蒿素处理后激活型Caspase-3的表达改变与亚细胞定位,Western blot检测激活型Caspase-3与抗凋亡蛋白Bcl-xL的表达变化。结果双氢青蒿素能有效诱导胶质瘤GL261细胞凋亡,抑制细胞活性,具有浓度依赖性(P<0.05);30μmol/L双氢青蒿素作用12 h即可诱导Caspase-3激活并与细胞核共定位;双氢青蒿素能够下调Bcl-xL、上调激活型Caspase-3的表达水平,且具有浓度依赖性(P<0.05)。结论双氢青蒿素通过抑制抗凋亡蛋白Bcl-xL、诱导Caspase-3激活途径介导胶质瘤GL261细胞凋亡。     

高血压脑出血患者血浆P-selectin表达水平 与预后的相关性研究

目的:研究高血压脑出血患者血浆P-selectin表达水平与预后的相关性。方法:选择高血压患者100例(高血压组)、高血压脑出血患者100例(脑出血组)及健康人员100例(对照组),均检测血浆P-selectin表达水平并比较。脑出血组根据预后情况分为预后良好亚组和预后不良亚组,采用多因素Logistic回归分析观察影响高血压脑出血患者预后的危险因素。结果:3组的血浆P-selectin水平具有组间差异(P<0.05),其中脑出血组的血浆P-selectin水平高于高血压组,高血压组的血浆P-selectin水平高于对照组。预后不良亚组的P-selectin表达水平、入院GCS评分、出血量、并发脑疝比例、发生肺内感染比例、消化道出血比例及合并糖尿病比例均高于预后良好亚组,差异均有统计学意义(P<0.05)。患者P-selectin表达水平高、入院GCS评分低、出血量大、并发脑疝及合并糖尿病是影响高血压脑出血的独立危险因素。结论:P-selectin表达水平可能是影响高血压脑出血发病和预后的重要因素。     

环孢菌素A通过PI3K-Akt通路保护小鼠脑缺血再灌注后血脑屏障损伤

目的 探讨环孢菌素A(cyclosporine A,CsA)对小鼠脑缺血再灌注后血脑屏障的影响及其可能机制.方法 通过线栓法对C57BL/6J及载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠建立大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,用不同剂量(10、20 mg/kg) CsA进行干预,并将两种小鼠各自分为5组:假手术组(Sham)、手术组(I/R)、溶剂组(Vehicle)、小剂量组(10 mg/kg CsA)及大剂量组(20 mg/kg CsA).观察小鼠脑缺血再灌注后神经功能评分、梗死灶体积、脑组织水含量及伊文思蓝漏出量的变化情况,并用Western blot检测各组p-Akt及Claudin-5蛋白表达量的变化.结果①神经功能评分结果显示:MCAO后小鼠出现严重的神经功能障碍,经CsA干预后其损伤情况明显缓解,且大剂量组优于小剂量组(P＜0.05);②小鼠在脑缺血再灌注后表现出现严重的脑水肿、脑梗死及伊文思蓝渗漏,且各组ApoE-/-小鼠表现得比C57小鼠更为明显(P＜0.05),而CsA能缓解这些症状,且大剂量组效果明显优于小剂量组(P＜0.05);③Western blot检测结果显示:ApoE--小鼠脑组织中p-Akt蛋白表达量高于C57小鼠,而Claudin-5相对较低(P＜0.05).经MCAO处理后各组小鼠均出现p-Akt蛋白表达明显增高从而引起Claudin-5减少(P＜0.05),CsA干预后,该效应出现逆转,且大剂量组的效果明显优于小剂量组(P＜0.05).结论CsA可保护脑缺血再灌注后血脑屏障的损伤,从而起到改善预后的作用,其机制与PI3K/Akt信号通路有关,而ApoE-/-可通过该途径加重脑梗死.     

青蒿琥酯通过PI3K-Akt通路促进大鼠室管膜下区神经干细胞增殖的体外研究

目的 探讨青蒿琥酯(artesunate,ART)对室管膜下区(subventricular zone,SVZ)神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖的影响.方法 不同浓度的ART(400 nmol/L、800 nmol/L、1.6 μmol/L、3.2 μmol/L)作用于NSCs 24 h后,采用CCK-8法检测其对NSCs增殖的影响.促增殖作用明显的800 nmol/L ART组加入10 μmol/L PI3K-Akt通路阻断剂(LY294002),采用CCK-8法检测该通路对NSCs增殖的影响;分别设置空白对照组、LY294002组、800 nmol/L ART组、800 nmol/L ART+ LY294002组,待细胞培养24h时,行Ki-67免疫荧光染色观察ART对NSCs增殖的影响及PI3K-Akt通路在其中的作用,同时采用Western blot检测各组Nestin、Akt及p-Akt蛋白的表达水平.结果 ①CCK-8法检测结果显示800 nmol/L ART组在波长450 nm处的光密度值较空白对照组明显升高,在加入LY294002后,其光密度值明显下降(P＜0.05),与空白对照组水平相当;②Ki-67免疫荧光染色结果提示800 nmol/L ART可促进NSCs增殖,LY294002可抑制这一作用;③Western blot检测结果显示:神经干细胞表面标志蛋白Nestin及p-Akt蛋白表达水平在800 nmol/L ART组明显上调,在加入LY294002后两者表达水平均下调(P＜0.05).结论 ART可在体外促进SVZ区NSCs的增殖,其机制与PI3K-Akt信号通路相关.     

盐酸戊乙奎醚通过NF-κB信号通路对胎鼠脑缺血-再灌注损伤的影响

目的研究盐酸戊乙奎醚对宫内窘迫致胎鼠脑缺血-再灌注(IR)损伤的保护作用。方法足月胎鼠80只,体重4.52~4.81 g,采用随机数字表法分为四组:假手术组(S组)、盐酸戊乙奎醚对照组(S+P组)、IR组和盐酸戊乙奎醚治疗组(IR+P组),每组20只。采用钳夹孕鼠两侧子宫角血管的方法建立宫内窘迫模型,IR+P组孕鼠建模前30 min肌注盐酸戊乙奎醚2 mg/kg,S组在假手术前予孕鼠肌注等量生理盐水,S+P组在假手术前予孕鼠肌注等量盐酸戊乙奎醚。再灌注12 h后,剖宫取出胎鼠并断头处死,行外周血血气分析;采用TTC染色法观察胎鼠脑梗死体积并计算脑梗死体积百分比;采用HE染色观察胎鼠脑组织病理改变;采用ELISA法检测脑组织中TNF-α及IL-6的浓度;采用RT-PCR法检测脑组织中NF-κB mRNA表达;采用Western blot法检测胎鼠脑组织中NF-κB p65蛋白表达。结果 IR组和IR+P组p H和Pa O2明显低于S组和S+P组,IR+P组p H和Pa O2明显高于IR组(P0.05)。IR组和IR+P组Pa CO2、Lac、脑梗死体积及梗死体积百分比、TNF-α及IL-6浓度、NF-κB mRNA表达水平、NF-κB p65蛋白水平均明显高于S组和S+P组(P0.05),IR+P组上述各指标均明显低于IR组(P0.05)。IR+P组脑组织病理学损伤明显轻于IR组。结论盐酸戊乙奎醚预处理可减轻宫内窘迫致胎鼠脑缺血-再灌注损伤,其作用机制可能与抑制脑组织NF-κB信号通路活性有关。