二维及微团培养法对软骨细胞表型的影响

目的：探讨二维及微团培养对软骨细胞表型的影响。方法体外高密度二维及微团培养方法培养兔软骨细胞,从细胞形态、细胞外基质表达情况分析软骨细胞表型的差异。结果高密度二维方案培养兔软骨细胞,2周后软骨细胞多层分布, HE染色显示细胞呈圆形,细胞间联系较密,阿尔新蓝染色显示细胞外蛋白多糖分泌较少;微团培养方法培养兔软骨细胞,2周后形成肉眼可见的白色组织,HE染色显示细胞呈多边形,细胞较分散,阿尔新蓝染色显示细胞外蛋白多糖分泌明显多于二维培养,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论微团培养方法培养兔软骨细胞,有利于软骨细胞分泌细胞外基质。     

cofilin对软骨细胞骨架及表型的影响

目的:研究丝切蛋白（cofilin）表达对软骨细胞表型及骨架的影响。方法:通过siRNA及质粒转染分别构建cofilin低表达和高表达模型，对表达不同水平cofilin的软骨细胞进行细胞骨架及相关蛋白的检测，以研究cofilin对软骨细胞表型及骨架方面的影响。结果:降低cofilin蛋白表达后，鬼笔环肽染色后观察到的软骨细胞骨架变得更为紧凑，在细胞延伸方向的肌动蛋白密度相对对照组更密集，同时软骨细胞中Ⅰ型胶原蛋白（COLⅠ）表达稍增高（137.42％[±]25.14％），结果无统计学意义（P>0.05），II型胶原蛋白（COLⅡ）表达明显降低（19.96％[±]14.59％），结果有统计学意义（P<0.05）；增加软骨细胞cofilin表达，软骨细胞骨架的免疫荧光强度较对照组稍暗，且分布稍广，COLⅠ表达降低（44.47％[±]21.67％），结果有统计学意义（P<0.05），COLⅡ表达稍增高（116.16％[±]13.18％），结果无统计学意义（P>0.05）。结论:cofilin蛋白对软骨细胞骨架具有重要的作用，cofilin蛋白的表达有助于软骨细胞维持其软骨细胞特性，cofilin蛋白表达的降低将导致软骨细胞特性的改变，这些改变在软骨损伤相关疾病的发病机制中扮演着重要的角色，将来有望通过调节这种改变来治疗软骨损伤，但其需要更进一步的研究去阐明相关机制与原理。     

青蒿琥酯通过PI3K-Akt通路促进大鼠室管膜下区神经干细胞增殖的体外研究

目的 探讨青蒿琥酯(artesunate,ART)对室管膜下区(subventricular zone,SVZ)神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖的影响.方法 不同浓度的ART(400 nmol/L、800 nmol/L、1.6 μmol/L、3.2 μmol/L)作用于NSCs 24 h后,采用CCK-8法检测其对NSCs增殖的影响.促增殖作用明显的800 nmol/L ART组加入10 μmol/L PI3K-Akt通路阻断剂(LY294002),采用CCK-8法检测该通路对NSCs增殖的影响;分别设置空白对照组、LY294002组、800 nmol/L ART组、800 nmol/L ART+ LY294002组,待细胞培养24h时,行Ki-67免疫荧光染色观察ART对NSCs增殖的影响及PI3K-Akt通路在其中的作用,同时采用Western blot检测各组Nestin、Akt及p-Akt蛋白的表达水平.结果 ①CCK-8法检测结果显示800 nmol/L ART组在波长450 nm处的光密度值较空白对照组明显升高,在加入LY294002后,其光密度值明显下降(P＜0.05),与空白对照组水平相当;②Ki-67免疫荧光染色结果提示800 nmol/L ART可促进NSCs增殖,LY294002可抑制这一作用;③Western blot检测结果显示:神经干细胞表面标志蛋白Nestin及p-Akt蛋白表达水平在800 nmol/L ART组明显上调,在加入LY294002后两者表达水平均下调(P＜0.05).结论 ART可在体外促进SVZ区NSCs的增殖,其机制与PI3K-Akt信号通路相关.     

天冬氨酸修饰纳米羟基磷灰石/聚乳酸复合物制备软骨组织工程支架及其生物性能研究

目的:通过天冬氨酸修饰的纳米羟基磷灰石(Asp-n HA)和左旋聚乳酸(PLLA)复合,制备软骨组织工程支架,并进行体外实验研究,探索其作为软骨组织工程支架的可行性。方法:以碳二亚胺盐酸盐/N-羟基琥珀酰亚胺偶联法制备Asp-n HA,并与PLLA复合,获得新型Asp-n HA/PLLA纳米复合支架。比较成骨细胞在该新型材料表面的粘附、生长和增殖的情况。结果:加入n HA后,Asp-n HA/PLLA复合材料可显著增强细胞的粘附、生长、增殖;Asp-n HA/PLLA的生物学性能明显优于PLLA及HA/PLLA,且Asp-n HA/PLLA具有最强的体外诱导成骨细胞分化能力。结论:Asp-n HA/PLLA制备简单,具有良好的生物相容性和成骨活性,是一种性能良好的骨组织工程支架材料。