Sox2对宫颈鳞癌细胞增殖能力影响的研究

目的 探讨干细胞转录因子Sox2对宫颈鳞癌细胞增殖能力的影响及其机制。方法 将质粒pIRES-EGFP-Sox2转染宫颈鳞癌SiHa细胞系,采用G418筛选构建稳定表达Sox2的SiHa细胞克隆(SiHa-Sox2),MTT法检测Sox2表达对宫颈鳞癌细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测细胞周期的变化;Western blot检测细胞周期相关蛋白CyclinD1表达变化。结果 pIRES-EGFP-Sox2转染SiHa细胞后（SiHa-Sox2组）,细胞Sox2基因和蛋白均高表达（P均Sox2组细胞增殖速度加快;细胞周期中S期细胞比例明显增加;Western blot检测CyclinD1表达上调（PSox2基因通过上调CyclinD1蛋白的表达加速细胞周期进程,促进宫颈鳞癌细胞的增殖,从而促进宫颈鳞癌的发生发展。     

子宫颈鳞癌组织中MMP-7和CK20的表达及临床意义

目的 探讨基质金属蛋白酶-7(MMP-7)和细胞角蛋白20(CK20)在子官颈鳞癌中的表达特点及其相互关系,以及它们在子官颈鳞癌侵袭转移中的作用.方法 采用RT-PCR法检测33例子宫颈鳞癌和12例正常宫颈组织中MMP-7 mRNA和CK20 mRNA的表达水平,分析其表达水平与临床病理特征的关系.结果 MMP-7 mRNA在子宫颈鳞癌组织中的表达水平显著高于正常宫颈组织(P＝0.018),与子宫颈鳞癌分化程度、淋巴结转移显著相关(P<0.05),而与临床分期、年龄等因素无关(P>0.05);CK20 mRNA在子宫颈鳞癌组织中的表达水平高于正常宫颈组织(P=0.002),与子宫颈鳞癌分期、分化程度、淋巴结转移显著相关(P<0.05),而与年龄等因素无明显相关(P>0.05).在子宫颈鳞癌中MMP-7mRNA与CK20 mRNA的表达之间存在正相关关系(r=0.42735,P=0.0262).PCR法检测MMP7和CK20mRNA阳性率显著高于免疫组化法(P<0.05).结论 MMP-7 mRNA及CK20 mRNA的高表达与子宫颈鳞癌的侵袭转移有关,可作为检测早期官颈鳞癌淋巴转移的生物学指标.     

子宫颈鳞癌中转移相关基因2的表达及其与预后的关系

目的：研究转移相关基因2(metastasis tumor-associated protein 2,MTA2)在子宫颈鳞癌组织中的表达水平,探讨其与子宫颈鳞癌临床病理因素之间的联系及其预后价值。方法：采用免疫组织化学和RT-PCR检测MTA2蛋白及mRNA在子宫颈鳞癌、子宫颈上皮内瘤变及正常宫颈组织中的表达情况,分析其与临床病理因素的关系,同时综合临床病理资料及随访数据对子宫颈鳞癌患者进行预后分析。结果：MTA2蛋白在正常宫颈组织、子宫颈上皮内瘤变组织、宫颈鳞癌组织中的表达率分别为0,30.0%,73.4%,且其表达水平与宫颈癌国际妇产科协会(International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)分期、淋巴结转移有关(P<0.05),而与患者年龄及肿瘤的分化程度无关(P>0.05);MTA2 mRNA 在正常宫颈组织、子宫颈上皮内瘤变组织、宫颈鳞癌组织中的表达量分别为0.437±0.028,0.737±0.102,1.172±0.068,且其表达量亦与宫颈癌FIGO分期、淋巴结转移有关(P<0.05),而与患者年龄及肿瘤的分化程度无关(P>0.05);Kaplan-Meier法进行单因素生存分析,MTA2蛋白表达阳性患者与阴性患者无瘤生存期分别为(23.19±1.87)和(39.57±3.16)个月,经log-rank检验得出两组患者无瘤生存期差异有统计学意义(χ2=20.225,P<0.001);多因素COX比例风险模型预后分析显示,MTA2蛋白表达水平、FIGO分期及淋巴结转移为宫颈癌有效的独立预后指标(P<0.05)。 结论：MTA2的高表达与宫颈癌的发生、进展及转移有关;MTA2蛋白表达水平、FIGO分期及淋巴结转移可作为宫颈癌预后的3个相对独立的因素;MTA2有可能成为判断宫颈癌患者进展及预后的一个新的分子标志物。     

Twist在子宫颈鳞癌中的表达及意义

目的探讨转录因子Twist在人正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变、子宫颈鳞癌中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学法分别对26例正常宫颈组织、92例宫颈上皮内瘤变和43例子宫颈鳞癌中Twist蛋白的表达情况进行检测。结果Twist蛋白在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变、子宫颈鳞癌中的阳性表达率比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Twist的异常表达与子宫颈鳞癌的发生发展有相关性,Twist可能参与了子宫颈鳞癌浸润转移的过程。     

MGMT基因启动子甲基化与新疆维吾尔族子宫颈鳞癌相关性分析

目的 探讨MGMT基因启动子甲基化与新疆维吾尔族妇女子宫颈鳞癌相关性及对基因mRNA表达的影响.方法 采用甲基化特异性PCR方法检测55例新疆维吾尔族妇女子宫颈鳞癌组织和34例子宫颈正常组织MGMT基因启动子甲基化状况,用RT-PCR方法检测7例子宫颈鳞癌组织和7例子宫颈正常组织MGMT基因转录水平的表达.结果 55例新疆维吾尔族妇女子宫颈鳞癌组织有18例发生了MGMT基因启动子甲基化,甲基化率为32.7%;34例子宫颈正常组织MGMT基因启动子未发生甲基化,两者比较差异有显著性.7例子宫颈鳞癌组织MGMT基因mRNA表达水平低于7例子宫颈正常组织.结论 MGMT基因启动子甲基化与新疆维吾尔族妇女子宫颈鳞癌发生相关.并能影响MGMT基因转录水平表达.     

子宫颈上皮内瘤变和子宫颈鳞癌中ARPC2/3蛋白的表达及意义

目的:研究肌动蛋白相关蛋白复合体2/3(Actin-related protein complex2/3,ARPC2/3)在子宫颈上皮内瘤变(Cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及子宫颈鳞癌(Squamous cell carcinoma,SCC)中的表达及其临床意义。方法:采用SP法检测ARPC2/3蛋白在CIN和SCC中的表达,同时与正常宫颈组织中的ARPC2/3蛋白做对照。结果:正常宫颈组ARPC2/3蛋白阳性率13.8%,SCC组ARPC2/3蛋白阳性率59%,CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组ARPC2/3蛋白阳性率分别为39.5%、40.6%、44.7%,正常宫颈组与CIN组及SCC组间ARPC2/3蛋白阳性率表达差异有统计学意义(P<0.005),而CIN各组间ARPC2/3蛋白阳性率表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:ARPC2/3蛋白随着CIN由轻至重表达逐渐增强直至在SCC中的高表达,其增强与宫颈病变的恶性程度呈正比,对诊断子宫颈鳞癌具有重要的参考价值。     

mdm2蛋白在子宫颈鳞癌中的表达及意义

目的 探讨mdm2 蛋白在子宫颈鳞癌中的表达情况及其意义.方法 应用免疫组织化学SP方法检测55例子宫颈鳞癌.及50例正常宫颈和宫颈上皮内瘤样病变中mdm2的表达.结果 mdm2在子宫颈鳞癌中的表达明显高于正常宫颈和宫颈上皮内瘤样病变(P＜0.01),且与临床分期和淋巴转移明显相关(P＜O.O1,P＜O.05).结论 mdm2蛋白表达可能在子宫颈鳞癌的发生发展及判断预后方面具有重要作用,可作为重要的生物学标记物.     

细胞周期蛋白Cyclin D_1和Cyclin E在子宫颈鳞癌的表达及意义

目的:探讨CyclinD1和CyclinE在正常宫颈上皮、CIN和子宫颈鳞癌中表达状况。方法:收集子宫颈活检及手术标本118例,其中正常鳞状上皮14例,子宫颈上皮内瘤样变(CIN)25例,子宫颈鳞癌79例。采用SP免疫组织化学方法,检测CyclinD1和CyclinE蛋白的表达情况。结果:CyclinD1和CyclinE在正常宫颈上皮、CIN和子宫颈鳞癌的中表达水平存在显著性差异(P<0.05),在不同分化程度的宫颈癌间无显著性差异(P>0.05)。结论:在宫颈癌发生过程中伴有CyclinD1和CyclinE表达水平的增高,检测其含量改变有助于宫颈鳞癌诊断。     

蛋白激酶C在人子宫颈鳞癌组织中的表达

目的:探讨人子宫颈鳞癌中蛋白激酶C(PKC)的表达.方法:收集25例新鲜人子宫颈鳞癌组织和15例正常人子宫颈组织,以及45例人子宫颈鳞癌蜡块和20例正常人子宫颈组织蜡块.分别采用Western blotting法、免疫组织化学染色和原位杂交方法在蛋白和RNA水平检测PKC的表达.结果:蛋白激酶C在人子宫颈鳞癌和正常人子宫颈组织中的表达在RNA水平和蛋白水平均无显著差异(P＞0.05).结论:在人子宫颈鳞癌中未发现有PKC表达的改变.     

宫颈鳞癌组织中Snail mRNA和蛋白的表达

目的:检测宫颈鳞癌组织中Snail mRNA和蛋白的表达.方法:采用免疫组织化学及RT-PCR法,检测宫颈鳞癌组织(n=141、48)、癌旁组织(n=48、48)及正常宫颈组织(n=48、48)中Snail蛋白及mRNA的表达,并分析其与临床病理参数之间的关系.结果:宫颈鳞癌、癌旁组织中Snail mRNA的阳性表达率高于正常组织(P均<0.05),且癌组织中Snail mRNA阳性表达率与淋巴结转移情况有关(P<0.05),但与肿瘤的分化程度、FIGO分期无关(P均>0.05).3组组织中Snail mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05).宫颈鳞癌及癌旁组织中Snail蛋白的阳性表达率高于正常宫颈组织(P<0.05),且癌组织中Snail蛋白阳性表达率与分化程度、FIGO分期、淋巴结转移情况有关(P均<0.05).结论:宫颈鳞癌的癌变、侵袭、转移可能与Snail蛋白及mRNA的高表达有关,Snail可作为预测宫颈鳞癌预后的指标之一.     

双向调控FAT10表达对人宫颈癌SiHa细胞裸鼠移植瘤放射敏感度的影响

目的 经过临床病理学标本检测人宫颈癌组织FAT10蛋白异常高表达后,探讨上调和下调FAT10基因表达对宫颈癌细胞株SiHa细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响。方法 采用RT-PCR法检测30例宫颈癌及癌旁组织中FAT10 mRNA的表达水平,FAT10蛋白在人宫颈癌组织中的相对表达水平明显高于癌旁组织,且差异有统计学意义（P<0.05）。通过电穿孔法分别将FAT10 siRNA和重组表达载体pcDNA3.1-FAT10转染宫颈癌SiHa细胞后,G418筛选得到稳定转染细胞系。转染48h后,荧光定量RT-PCR和Western blot法分别检测细胞中FAT10 mRNA和FAT10蛋白表达水平;CCK-8 检测细胞增殖,克隆形成实验观察上调和下调FAT10表达对宫颈癌细胞株SiHa的放射敏感度的影响;TUNEL法检测细胞凋亡影响;裸鼠移植瘤实验检测上调和下调FAT10表达联合X线照射对宫颈癌细胞的生长抑制作用。结果 FAT10蛋白在人宫颈癌组织中的相对表达水平明显高于癌旁组织,且差异有统计学意义（P<0.05）,FAT10下调组宫颈癌SiHa细胞内FAT10基因表达明显降低,FAT10上调组明显升高。FAT10下调组宫颈癌SiHa细胞放射敏感度升高,FAT10上调组宫颈癌SiHa细胞放射敏感度降低（P<0.05）。FAT10下调组宫颈癌SiHa细胞增殖被抑制,细胞凋亡率增加（P<0.05）;FAT10上调组SiHa细胞增殖能力明显增强,细胞凋亡率降低（P<0.05）,FAT10下调组裸鼠移植瘤平均体积明显小于对照组（P<0.05）;FAT10上调组的瘤体平均体积大于对照组（P<0.05）。20Gy γ射线照射后FAT10下调组瘤体平均体积较照射前明显减小（P<0.05）;而上调组裸鼠皮下种植瘤平均体积较照射前无明显变化（P>0.05）。结论 下调FAT10表达能抑制人宫颈癌SiHa细胞裸鼠移植瘤的生长,增强瘤体的放射敏感度,上调FAT10表达则使肿瘤辐射抗拒。     

miR-29a在宫颈癌组织中的表达及其上调后对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响

目的检测微小RNA（miR）-29a 在宫颈癌组织和不同种类宫颈癌细胞系中的表达情况及其上调后对宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移等恶性生物学行为的影响。方法①组织标本检测：收集2014 年7 月-2016 年7 月西南医科大学附属医院活检或手术切除的宫颈组织标本160 例,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-29a 的表达情况,并分析宫颈癌组织中miR-29a 的表达与临床病理特征的关系。②细胞学实验：采用qRT-PCR检测miR-29a在不同种类的人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski及C33a）和人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7中的表达水平,选取miR-29a表达最低的宫颈癌细胞系SiHa进行后续研究,使用miR-29a mimics转染SiHa细胞,qRT-PCR检测转染后细胞miR-29a 的表达变化,CCK-8 法检测转染后细胞增殖活力的变化,流式细胞仪检测转染后细胞凋亡率的变化,Transwell实验检测转染后细胞迁移和侵袭能力的变化。结果宫颈鳞癌组织中miR-29a 表达低于HSIL、LSIL及正常宫颈组织（p <0.05）;HSIL组织中miR-29a表达低于LSIL及正常宫颈组织（p <0.05）,LSIL与正常宫颈组织间miR-29a的表达差异无统计学意义（p >0.05）。宫颈鳞癌组织中miR-29a的表达与患者临床分期和淋巴结转移密切相关（p <0.05）。miR-29a在人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski和C33a）中的表达低于人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7（p <0.05）。SiHa细胞转染miR-29a mimics后,miR-29a表达水平增高（p <0.05）,细胞增殖活力降低（p <0.05）,细胞凋亡率增高（p <0.05）,细胞迁移和侵袭能力下降（p <0.05）。结论miR-29a在宫颈癌组织和细胞中均呈低表达,上调miR-29a的表达能够抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖及侵袭迁移能力,促进细胞的凋亡。     

转染NDRG1基因对宫颈癌细胞COX-2、VEGF表达及增殖的影响

目的： 通过研究人类N-myc下游调节基因1(N-myc downstream regulated gene 1,NDRG1)对人宫颈癌SiHa细胞环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达及细胞增殖的影响,深入探讨NDRG1抑制宫颈癌侵袭转移的作用机制。方法： 经脂质体介导将含有NDRG1真核表达质粒转染人宫颈癌SiHa细胞株,采用G418筛选阳性细胞克隆及RT-PCR、蛋白质印迹鉴定;蛋白质印迹法检测阳性克隆细胞COX-2及VEGF表达的改变;噻唑盐（MTT）比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性。结果： 成功建立高表达NDRG1的阳性SiHa细胞克隆（N-12）,并证实其COX-2和VEGF蛋白表达及细胞增殖活性均显著降低。结论： NDRG1可能通过下调宫颈癌细胞COX-2、VEGF的表达及抑制细胞增殖而起到抑制宫颈癌进展的作用。     

The Effect of RhoC siRNA on the Invasiveness and Proliferation of Human Cervical Cancer Cell Line SiHa Cells

This study investigated the effect of RhoC GTPase on the proliferation and metastasis of cervical cancer cells, SiHa cells, in vitro. RhoC siRNA was introduced into SiHa cells to silence the RhoC gene. The mRNA and protein expression of RhoC, before and after RhoC siRNA transfection, was examined by RT-PCR and Western blotting, respectively. The proliferation and apoptosis of SiHa cells were examined by MTT assay and flow cytometry （FACS）, respectively. Adhesive rate was evaluated by Matrigel adhesive assay, and the invasive capability and migration capability were assessed by transwell invasive assay and migration assay, respectively. The results showed that after the RhoC siRNA transfection, the mRNA and protein expression of RhoC was down-regulated in SiHa cells. The down-regulation of RhoC GTPase did not affect the cell proliferation and apoptosis （P〉0.05）, but it did suppress SiHa cells＇ adhesion to matrigel （P〈0.01）, the invasive capability （P〈0.01） and the migration capability （P〈0.01）. It was concluded that RhoC obviously promotes the adhesion, invasion and migration of SiHa cells in vitro, but not proliferation and apoptosis, suggesting that RhoC plays an important role in the progression in cervical cancer.     

RAGE在不同宫颈鳞癌细胞中的表达及意义

目的 探讨人宫颈鳞癌细胞中晚期糖基化终末产物受体（receptor for advanced-glycation end products,RAGE）的表达水平及定位,筛选出合适的细胞用于研究RAGE对宫颈鳞癌细胞生物学行为的影响。方法 选取人宫颈鳞癌细胞SiHa、MS751、C33-A及CaSki,采用免疫细胞化学染色检测癌细胞中RAGE蛋白的定位,应用qRT-PCR法检测癌细胞中RAGE mRNA的表达水平。应用免疫印迹法检测癌细胞中RAGE蛋白的表达水平。采用酶联免疫吸附法检测4种人宫颈鳞癌细胞分别培养至12、24、36、48及72h时,上清中分泌型RAGE蛋白的表达水平。结果 RAGE蛋白主要在人宫颈鳞癌细胞的胞质和胞膜中表达,大部分位于胞质。RAGE mRNA的表达量在SiHa细胞中最高,为0.986±0.053,而在MS751细胞中的表达量相对最低,仅0.111±0.008（P<0.05）。RAGE蛋白在SiHa细胞中的表达量相对最高的（0.982±0.096）,而在MS751细胞中的表达量相对最低（0.250±0.056）,差异有统计学意义（P<0.05）。SiHa、MS751、C33-A及CaSki细胞各个时间点均检测到其分泌至上清中的RAGE蛋白,且4种细胞随着培养时间的延长,其分泌型RAGE的表达量逐渐增高。结论 RAGE在4种人宫颈鳞癌细胞中均有表达。C33-A和CaSki细胞适合用做后续RAGE干扰和过表达实验;SiHa细胞可在培养液中加入抗RAGE抗体改变RAGE表达量;用于后续研究RAGE对宫颈鳞癌细胞生物学行为的影响。     

乳浆大戟抑制人宫颈癌细胞增殖迁移和诱导细胞凋亡的研究

目的 研究乳浆大戟抑制人宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和诱导细胞凋亡的作用并初步探讨其作用机制。方法 用不同稀释度的乳浆大戟提取液处理人宫颈癌SiHa细胞,MTT实验观察细胞生长抑制现象,吖啶橙染色荧光显微镜观察凋亡细胞的核形态改变并测定凋亡指数,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell法检测细胞迁移能力和侵袭能力,用分光光度法检测caspase-3和caspase-9的表达情况。结果 乳浆大戟对人宫颈癌SiHa细胞有增殖抑制作用,该作用有时间和浓度依赖性。乳浆大戟处理后的人宫颈癌SiHa细胞,凋亡指数和凋亡率均显著上升,均有时间和浓度依赖性。Transwell法检测显示,乳浆大戟提取液处理后的SiHa细胞,迁移能力和侵袭能力显著下降。分光光度法检测发现,乳浆大戟处理后的SiHa细胞中,caspase-3和caspase-9均表达增强。结论 乳浆大戟提取液具有抑制人宫颈癌SiHa细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,其作用通路有caspase-3和caspase-9的参与。     

Pin1通过调控脂质代谢关键酶影响宫颈癌细胞的增殖及凋亡

  目的  探讨下调Pin1表达对宫颈癌SiHa细胞的脂质合成及增殖、凋亡的影响。  方法  Western Blot检测Pin1在Hela、SiHa和H8细胞的表达情况；慢病毒转染技术构建Pin1低表达稳转细胞株，根据不同处理分为对照组（shPin1-NON）、敲低组1（shPin1-1）和敲低组2（shPin1-2），GEPIA2分析脂质代谢关键酶（ACC1、FASN）在宫颈癌及非肿瘤组织中的表达；Western Blot和qRT-PCR检测ACC1、FASN 蛋白和mRNA的表达；Western Blot检测Caspase-8、BCL-2、C-myc 蛋白表达；CCK-8检测细胞增殖能力；克隆形成实验检测细胞集落形成能力；流式细胞术检测细胞凋亡情况。  结果  Pin1在宫颈癌细胞中高表达，且在SiHa细胞中表达最高（P < 0.05）；Pin1低表达慢病毒有效下调了Pin1表达水平；宫颈癌中ACC1、FASN mRNA表达高于非肿瘤组织；shPin1-1组和shPin1-2组ACC1、FASN 蛋白和mRNA表达均低于shPin1-NON组（P < 0.05）；shPin1-1组和shPin1-2组相较于shPin1-NON组Caspase-8蛋白表达被上调，而BCL-2、C-myc的表达均被抑制；shPin1-1组和shPin1-2组细胞增殖能力低于shPin1-NON组（P < 0.05）；shPin1-1组和shPin1-2组细胞集落形成能力小于shPin1-NON组（P < 0.05）。shPin1-1组和shPin1-2组细胞总凋亡率相较shPin1-NON组显著增加（P < 0.05）。  结论  Pin1低表达有效下调宫颈癌SiHa细胞脂质代谢关键酶，抑制细胞增殖，诱发细胞凋亡，为靶向治疗宫颈癌提供新思路。     

HPC2蛋白在HPV16感染的宫颈癌细胞中调控作用初探

目的 探讨人多梳蛋白2 (HPC2)对宫颈癌细胞siha生长的影响及其与E7基因的调控关系.方法 设计siRNA干扰序列,分别沉默siha细胞中E7基因和HPC2基因.检测E7基因沉默后的siha细胞株中HPC2基因及蛋白表达情况,并检测细胞增殖和细胞凋亡率.结果 siha细胞E7基因沉默后,HPC2 mRNA和蛋白的表达降低,细胞增殖受抑制,凋亡增加,与HPC2基因沉默后的效应相似.结论 HPC2可能在siha细胞中参与了增殖、凋亡的调控,其表达可能与E7基因密切相关.     

circPUM1靶向调控miR-144-3p对宫颈癌细胞放射抵抗的影响

目的：探讨环状RNA?pumilio?RNA结合家族成员（circPUM）1对宫颈癌细胞放射抵抗的影响及其可能的作用机制。方法：收集2019年8月至2020年2月郑州大学第二附属医院收治的47例宫颈癌患者的癌组织及其相应癌旁组织（距离癌组织5?cm处正常组织）标本。定量反转录聚合酶链反应法检测宫颈癌组织与癌旁组织中circPUM1、miR-144-3p的表达量;Pearson法分析宫颈癌组织中circPUM1与miR-144-3p表达量的相关性。将circPUM1慢病毒短发夹RNA（sh-circPUM1）及其阴性对照（sh-NC）、miR-144-3p寡核苷酸模拟物（miR-144-3p?mimic）及其阴性对照（miR-NC）、sh-circPUM1与miR-144-3p抑制物（anti-miR）、sh-circPUM1与anti-miR阴性对照（anti-miR-NC）分别转染至人宫颈癌细胞SiHa,并通过0、4?Gy照射剂量照射,采用细胞计数试剂盒（CCK-8法）、平板克隆形成实验、流式细胞术、Transwell实验分别检测细胞增殖、集落形成、凋亡、迁移及侵袭能力;蛋白质印迹法检测活化的胱天蛋白酶3（cleaved-caspase3）蛋白表达量;Starbase平台分析及细胞实验检测circPUM1与miR-144-3p的靶向关系。结果：与癌旁组织比较,宫颈癌组织中circPUM1的表达量增加（P<0.05）,miR-144-3p的表达量减少（P<0.05）;circPUM1与miR-144-3p呈负相关（r=–0.9282,P<0.01）;转染sh-circPUM1或miR-144-3p?mimic后,细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和cleaved-caspase3蛋白表达水平升高（均P<0.05）,集落形成数、迁移及侵袭细胞数减少（均P<0.05）;circPUM1可靶向结合miR-144-3p;共转染sh-circPUM1与anti-miR后,细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和cleaved-caspase3蛋白表达水平降低（均P<0.05）,集落形成数、迁移及侵袭细胞数增多（均P<0.05）。结论：沉默circPUM1可通过靶向调控miR-144-3p表达而抑制宫颈癌细胞增殖、集落形成、迁移、侵袭能力及诱导细胞凋亡,从而减弱细胞放射抵抗性。     

人乳头瘤病毒16型E5对人宫颈癌SiHa细胞恶性潜能的影响及其机制探讨

目的 通过构建和筛选持续表达HPV16E5的细胞SiHa/16E5,探讨HPV16E5对宫颈癌SiHa细胞的作用及机理.方法 利用pEGFP-C1构建HPV16型E5的正义全长真核表达载体并稳定转染SiHa细胞;利用RT-PCR和Western印迹技术检测转染前后E5和P21基因的mRNA和GFP+E5和P21蛋白的变化;利用MTT法检测SiHa细胞稳定转染后的增殖活性;利用软琼脂克隆形成和裸鼠成瘤实验分别在体内外验证了SiHa/16E5细胞的致瘤情况.结果 稳定转染携带.HPV16全长E5基因的质粒后,SiHa细胞中E5基因的mRNA和相应蛋白表达明显升高,而P21的表达则明显下调;MTT结果 显示稳定转染后细胞的增殖活性与转染空载体细胞和未转染细胞比较明显增高(P<0.05);软琼脂克隆形成结果 示:SiHa/16ES细胞组的可隆形成数为33.4±1.6,与空质粒对照组细胞(15.1±3.1)及未转染组细胞(16.3±2.5)比较差异有统计学意义(P<0.05);裸鼠成瘤实验结果 显示,4个实验组在共20 d的观察中,SiHa/16E5组裸鼠成瘤明显快于其他3个对照组(P<0.05).结论 HPV16 E5可降低宫颈癌SiHa细胞中P21的表达,加强宫颈癌SiHa细胞增殖和成瘤效应.