吲哚胺-2,3-双加氧酶抑制剂联合铝佐剂对甲型肝炎减毒活疫苗诱导小鼠体液免疫应答的效应分析

目的 探讨吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂INCB024360类似物与铝佐剂联合对甲型肝炎减毒活疫苗(HepA-1)诱导小鼠体液免疫应答的影响,以评价其复合佐剂效应.方法 分别将三种不同剂量的INCB024360类似物(150 μg,100 μg,50 μg)与Al(OH)3(300 μg)复合后与HepA-1共同免疫ICR小鼠分别作为复合佐剂1组,2组,3组,同时设空白对照组、单纯疫苗组、铝佐剂对照组和单一INCB024360类似物(100 μg)组,共免疫一次,于免疫后4周、8周、12周、16周进行尾静脉采血,采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清抗甲型肝炎病毒(HAV) IgG抗体水平.结果 除空白对照组外,各组小鼠免疫后4周、8周、12周、16周,均产生抗HAV IgG抗体,抗体水平随免疫时间的延长逐渐升高,于12周达到峰值.复合佐剂2组[HepA-118 EU+Al(OH)3 300 μg+INCB024360类似物100 μg]产生的抗体水平最高且持续时间较长,在8周和12周时,其对HepA-1的免疫增强效应显著高于单一佐剂组以及铝佐剂对照组(P＜0.05,t值分别为3.169、2.439).4周、8周、12周、16周,单一佐剂组与单纯疫苗组差异均不具有统计学意义(P＞0.05).结论 IDO抑制剂INCB024360类似物与铝佐剂复合后具有较强的复合佐剂效应,免疫增强效应优于铝佐剂对照组;但是单一的INCB024360类似物不具有显著佐剂效应.     

壬二酸佐剂对甲型肝炎减毒活疫苗诱导小鼠体液免疫应答效应分析

目的探讨壬二酸作为佐剂对甲型肝炎减毒活疫苗(HepA-1)诱导小鼠体液免疫应答的影响,以评价其佐剂效应。方法分别将四种不同剂量的壬二酸(0.5 mg,1 mg,2 mg,3 mg)与HepA-1共同免疫ICR小鼠分别作为佐剂组1、佐剂组2、佐剂组3、佐剂组4,同时设空白对照组、单纯抗原组、铝佐剂组,共免疫1次,于免疫后4周、8周、12周、16周进行尾静脉采血,采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清抗甲型肝炎病毒(HAV)IgG抗体水平。结果除空白对照组外,各组小鼠免疫后4周、8周、12周、16周,均产生抗HAVIgG抗体,抗体水平随免疫时间的延长逐渐升高,于8、12周达到峰值。免疫后4周,佐剂组4(壬二酸3 mg)产生的抗甲型肝炎病毒(HAV)IgG抗体水平与铝佐剂组相比较差异有统计学意义(P0.05,t=2.640)。同时,佐剂组4在免疫后4周、8周和12周产生的抗甲型肝炎病毒(HAV)IgG抗体水平较高,显著高于单纯抗原组(P0.05,t值分别为3.134、2.751、2.743)。结论适当剂量的壬二酸可快速、显著提高HepA-1诱导小鼠的体液免疫应答,有望成为一种新型的人用疫苗佐剂。     

4-苯基咪唑+氢氧化铝复合佐剂对甲型肝炎减毒活疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响

目的 研究4-苯基咪唑(4-PI)+氢氧化铝[Al(OH)3]复合佐剂对甲型肝炎减毒活疫苗(HepA-l)诱导的小鼠体液免疫应答的影响.方法 实验设置7个分组,分别是:阴性对照组(1 × PBS),铝佐剂组[HepA-l+Al(OH)3],疫苗组(HepA-l),M1[HepA-l+Al(OH)3+4-PI500 μg]组,M2[HepA-l+Al(OH)3+4-PI 1 rmg]组,M3[HepA-l+Al(OH)3+4-PI 1.5 mg]组和M4(HepA-l+4-PI 1 mg)组,200 μL HepA-l,24 μLAl(OH)3,随机分配小鼠,7只/组,分别皮下注射300 μL,接种一次.用间接酶联免疫吸附法测试抗-甲型肝炎病毒(HAV) IgG抗体滴度,检测时间为免疫后4周、8周、12周、16周.实验过程中,观察和记录小鼠的健康情况.结果 除阴性对照组,其余各组4个时间点均检测到抗-HAVIgG抗体,12周达到峰值.M2组在整个检测阶段抗体水平最高,显著高于疫苗组(t=4.449、3.633、2.565、6.809,P＜0.05)和M4组(t=6.256、4.796、4.153、4.113,P＜0.05),且第4周高于铝佐组(t=2.877,P＜0.05);M4组在4个时间点检测到的抗体水平与疫苗组相当.4-PI最佳剂量组是1mg/只.实验全程观察到小鼠每项生理指标均正常.结论 4-PI+氢氧化铝复合佐剂能增强HepA-1诱导的小鼠体液免疫应答,有望开发成HepA-1新型复合佐剂.     

硒化卡拉胶对甲型肝炎减毒活疫苗诱导的小鼠体液免疫应答的影响

目的研究硒化卡拉胶(KSC)对甲型肝炎减毒活疫苗(HepA-1)诱导的小鼠体液免疫应答的影响。方法随机分成7个组,每组7只ICR小鼠。分组:阴性对照组(生理盐水)、单纯抗原组(18EU HepA-1)、铝佐剂组[Al(OH)_3 0.3 mg+18EU HepA-1]、KSC实验组(KSC 1 mg+18EU HepA-1、KSC 0.5 mg+18EU Hep A-1、KSC 0.25 mg+18EU HepA-1、KSC 0.1 mg+18EU HepA-1),皮下多点免疫注射,注射总体积300μL,免疫1次。免疫注射后及其后4周、8周、12周、16周尾静脉采血,取血清用间接酶联免疫吸附法测定抗-甲型肝炎病毒(HAV)IgG抗体滴度。在实验期间,观察小鼠的健康状况,并于免疫后16周,取KSC最佳剂量组及阴性对照组小鼠肾脏、脾脏、肝脏、肺脏、心脏组织,制备病理切片,进行对比观察。结果除阴性对照组外,其余各组在各个检测时间点均检测到抗HAVIgG抗体,且存在先升高后降低的趋势,铝佐剂组在12周达到峰值,其余各组在8周达到峰值。KSC0.5 mg组在8周、12周抗体水平高于单纯抗原组(t=3.103,t=2.573,P0.05),KSC 0.25 mg组在12周抗体水平高于单纯抗原组(t=2.602,P0.05)。本次实验的最佳剂量为KSC0.5mg。试验期内,观察小鼠各项生理指标未见异常,KSC0.5mg组小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织均未观察到病变。结论 KSC能够作为佐剂增强HepA-1诱导的小鼠体液免疫反应。     

枸杞多糖作为甲型肝炎疫苗佐剂免疫效果的实验研究

目的：探讨枸杞多糖（LBPS）作为甲型肝炎（HAV）疫苗佐剂的效果.方法：设HAV含铝佐剂疫苗阳性对照组、HAV不含任何佐剂的抗原阴性对照组、生理盐水空白对照组、LBPS（20mg、10mmg、5mg）3个剂量分别与HAV含铝佐剂疫苗联合、分别与HAV不含任何佐剂的抗原联合成6个实验组免疫小鼠,于免疫后4周、8周、12周、16周、20周尾静脉采血,ELISA法检测小鼠血清抗-HAVIg水平.结果：LBPS 10mg剂量作为HAV疫苗佐剂免疫效果最佳,与阳性、阴性对照组比较差异均有显著性意义.结论：LBPS与铝佐剂有相似的疫苗佐剂效果,且与铝佐剂合用有佐剂协同作用.     

低分子量肝素钠佐剂对甲型肝炎病毒疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响

目的探讨低分子量肝素钠(low molecular weight heparin sodium,LMWH-Na)佐剂对甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将ICR小鼠随机分成8组,6只/组,分别为甲型肝炎减毒活疫苗Hep A-l(18 EU)与5种不同剂量(100μL,20μL,10μL,1μL,0.1μL)的低分子量肝素钠混合免疫小鼠作为实验组,并取生理盐水作为阴性对照组(Blank)、Hep A-l(18 EU)作为阳性对照组、Hep A-l混合Al(OH)3(300μg)作为铝佐剂对照组,共免疫一次,于免疫后第4、8、12、16周进行尾静脉采血,采用ELISA法检测小鼠血清中抗HAV抗原特异性Ig G抗体水平。在试验期间,对小鼠的健康状况进行观察,并于免疫16周后,取低分子量肝素钠最大剂量组100μL组及生理盐水组小鼠肾脏、脾脏、肝脏、肺脏、心脏各主要器官制作病理切片进行对比观察。结果除阴性对照组外,各组小鼠免疫后第4周后均产生抗-HAV Ig G,并随时间的延长抗体水平逐渐升高,于第8周达到最高值,此后逐渐下降。同一时间不同组的抗体水平不同。其中,第4周,第8周,铝佐剂对照组,低分子量肝素钠100μL组,低分子量肝素钠20μL组,低分子量肝素钠10μL组的抗体水平高于阳性对照组且差异具有统计学意义(P0.05),第12周,铝佐剂对照组,低分子量肝素钠20μL组和低分子量肝素钠10μL组的抗体水平高于阳性对照组(P0.05),第16周,铝佐剂对照组和低分子量肝素钠10μL组的抗体水平高于阳性对照组(P0.05),但在整个实验期间,低分子量肝素钠各组的抗体水平都低于铝佐剂对照组的抗体水平。表明低分子量肝素钠可增强HAV抗原特异性体液免疫应答,具有佐剂效应,最佳剂量为10μL/组,但其佐剂效应低于铝佐剂效应。试验期间,各组小鼠均未出现异常。低分子量肝素钠100μL组小鼠肾、脾、肝、肺、心组织均未观察到病变。结论低分子量肝素钠可明显增强HAV抗原诱导小鼠的体液免疫应答,具有成为新型疫苗佐剂的研发价值。     

CpG 2006佐剂对呼吸道合胞病毒重组疫苗诱导体液免疫应答的作用

目的研究CpG 2006佐剂对呼吸道合胞病毒(RSV)重组蛋白疫苗诱导的体液免疫应答的作用。方法重组RSV疫苗G1F/M2与CpG佐剂混合,鼻腔或腹腔注射免疫BALB/c小鼠3次,最后一次免疫2周后取血,分离血清,用间接ELISA检测特异性抗体IgG、IgG1和IgG2a水平。结果鼻腔免疫途径:CpG佐剂组诱导的IgG1均显著低于无佐剂组(t=3.365,P0.05),而IgG2a显著高于无佐剂组(t=2.675,P0.05),佐剂组IgG1/IgG2a的比值(1.05)明显低于无佐剂组(1.25)。腹腔免疫途径:CpG佐剂组的IgG1明显低于无佐剂组(t=6.869,P0.05),而IgG2a显著高于无佐剂组(t=2.893,P0.05),且前者IgG1/IgG2a的比值(0.97)明显低于后者(1.30)。结论CpG 2006作为G1F/M2的佐剂,对体液免疫应答无增强作用,但可以调节免疫应答的类型,使Th1型应答升高,Th2型应答降低。     

树鼩肝癌形成过程中红细胞免疫黏附肿瘤细胞功能的动态变化

目的:探讨树鼩肝癌形成过程中红细胞免疫黏附肿瘤细胞功能的变化.方法:将实验树鼩随机分为4组:黄曲霉毒素(AFB1)组(A组)、乙型肝炎病毒(HBV) AFB1组(B组)、HBV组(C组),空白对照组(D组).实验过程中所有动物定期抽血,用自然肿瘤红细胞花环试验(NTERT)检测树鼩的红细胞免疫黏附功能.结果:在实验过程中的不同阶段,各实验组的红细胞免疫黏附肿瘤细胞功能与对照组比较均明显不同.结论:在树鼩肝癌形成过程中,NTERT所反映的红细胞免疫功能,可灵敏地反映该过程不同时期的变化.     

幽门螺杆菌疫苗构建与其免疫产蛋鸡效果评价分析

目的：构建幽门螺杆菌疫苗,并通过肌肉、皮下多点注射免疫产蛋鸡,观察其产生体液免疫应答水平,评价幽门螺杆菌疫苗对产蛋鸡的免疫功能影响,筛选高效、新型幽门螺杆菌疫苗。方法：幽门螺杆菌国际标准菌株与临床分离的幽门螺杆菌传代扩增,获得混合菌体,分别辅以0.7 mg氢氧化铝佐剂和70μg CpG,或用pcDNA3.1（＋）/ureI重组载体转染HeLa细胞等方法制备多种疫苗抗原,通过分析疫苗免疫产蛋鸡产生抗Hp特异卵黄抗体水平,评价疫苗免疫效果。结果：CpG＋灭活菌体组与pcDNA3.1（＋）/ureI核酸疫苗组免疫产蛋鸡产生抗体的效果好。结论：卵黄中特异性抗体水平受抗原浓度、佐剂、免疫途径、免疫周期等多种因素影响,通过免疫产蛋鸡效果评价,为其高产制备提供实验依据。     

树鼩CD4蛋白多克隆抗体的制备及检测

目的 原核表达、纯化树鼩CD4蛋白并制备多克隆抗体,检测树鼩体内的CD4蛋白.方法 克隆树鼩CD4基因并连接到表达载体,构建重组质粒pET30a(+)-CD4和pGEX-5X-1-CD4,表达并纯化重组蛋白His-CD4和GST-CD4,用不同佐剂[弗氏佐剂、MF59和A1(OH)3]制备多抗,用Western blot法检测血清抗体特异性.结果 蛋白表达产物His-CD4和GST-CD4的相对分子质量分别约为53.5×103和70.0×103,纯化后蛋白浓度分别为600 μg/mL和1 mg/mL;三组佐剂均能诱导产生抗体,抗体几何平均滴度(Geometric Mean Titer,GMT)的比较结果为:弗氏佐剂组(GMT:97 420)＞Al(OH)3佐剂组(GMT:67 202)＞MF59佐剂组(GMT:55 128);其中弗氏佐剂组显著高于原蛋白组(P＜0.001);Al(OH)3组显著高于原蛋白组(P＜0.01);而MF59组显著高于原蛋白组(P＜0.05).结论 制备了特异性良好的小鼠抗血清,能够特异性地结合树鼩的CD4蛋白.为下一步本实验室制备CD4单克隆抗体、CD4蛋白分子的功能研究以及树鼩的病毒感染模型等免疫相关实验的进行提供了基础.     

供乙肝疫苗质检用的新动物模型——乙肝疫苗预防树鼩感染HBV的研究

接种乙肝疫苗的10只树鼩,9只血清出现抗-HBs。注射含HBV的人血清后,其中只有1只血清出现短暂的HBsAg,保护率为88.88％;其血清抗-HBc始终阴性。未接种乙肝疫苗的10只对照树鼩注射HBV人血清后,5只血清HBsAg阳性;8只抗-HBc阳性。接种疫苗组HBV感染率显著低于对照组(p<0.01)。实验前所有树鼩血清HBsAg、抗-HBs及抗-HBc均阴性。实验结果表明:1)乙肝疫苗能阻断树鼩感染HBV,进一步确证树鼩能感染HBV,是用于研究HBV的有用的动物模型;2)树鼩可能代替黑猩猩进行乙肝疫苗安全性和免疫保护效果鉴定之用。     

乙肝DNA疫苗pVAX-PS对树(鼠句)的免疫保护作用

目的:以树(鼠句)为实验对象研究乙肝DNA疫苗接种后所产生的免疫应答及对乙肝病毒攻击的保护作用.方法:以PCR法从adr亚型乙肝患者血清的病毒基因组中扩增含乙肝病毒的PreS2+S基因,插入pVAX1载体构建乙肝DNA疫苗pVAX-PS,并以此为候选疫苗,从股四头肌接种免疫树(鼠句).免疫接种方式为肌注2次,间隔2周.用ELISA法分析DNA免疫诱导的抗体水平及阳转率.DNA免疫后部分树(鼠句)用乙肝患者(HBsA+,HBeAg+,HBcAb+)血清进行病毒攻击实验,通过检测乙肝感染的各种血清学指标及肝组织病理的变化来评价DNA疫苗的免疫保护作用.结果:DNA疫苗免疫2周后开始检出HBsAb,6周后达到峰值,8周后所有免疫接种树(鼠句)抗体阳转;与阴性对照组相比,DNA疫苗免疫使乙肝病毒攻击所致的各项血清学指标阳转率明显降低,肝脏病理性损伤明显减轻.结论:乙肝DNA疫苗pVAX-PS免疫树(鼠句)后诱发明显的体液免疫应答,并对乙肝病毒感染提供有效的保护作用.     

基因乙肝疫苗接种母鸡的体液免疫应答

目的：探讨基因乙肝疫苗对母鸡免疫效果的影响。方法：用基因乙肝疫苗辅以佐剂皮下注射母鸡，随后加强免疫4次，用ELISA方法检测血清中抗－HBs。结果：在初次免疫母鸡血清中检出低滴度抗体，加强免疫后，抗体水平显著上升，滴度高达1：640，并维持较长时间，其抗体水平及抗体应答持久性与注射次数与注射途径有关。此外，用乙肝疫苗加佐剂比单用乙肝疫苗免疫效果明显要好。结论：应用基因乙肝疫苗能够诱导母鸡产生针对HBsAg的特异性体液免疫应答。     

儿童甲肝、风疹减毒活疫苗同时免疫效果观察

目的了解甲肝与风疹减毒活疫苗同时免疫的效果。方法对荆州市妇幼保健院预防接种门诊的356名1岁3个月至2岁的儿童进行免疫监测,并按同时免疫组与单独免疫组进行效果分析。结果同时免疫与单独免疫应答率差异无统计学意义(P>0.05),但同时免疫组两种疫苗的抗体几何平均滴度(GMT)明显高于单独组。结论采用同时免疫方法可增加疫苗的抗体几何平均滴度。     

乙型肝炎疫苗预防效果研究

乙型肝炎是我国重大传染病,乙肝疫苗是预防和控制乙肝病毒感染的流行和传播最有效措施."九五"期间"乙肝疫苗预防效果研究"证实我国低剂量单纯乙肝血源疫苗的长期预防效果(新生儿免疫后15年内)持续为90%,新生儿完成全程免疫后无需加强免疫可有效预防乙肝病毒慢性感染而终生受益;乙肝疫苗明显具有免疫选择表面抗原基因变异株的作用;表面抗原基因变异株在未免疫携带者中主要是弱势准种;中国乙肝病毒基因型和血清型的分布有明显的地区性;我国乙肝基因工程疫苗(酵母、CHO)大面积推广使用安全、有效和可行;乙肝基因苗表面抗体阳转率和近期保护效果与相当剂量的血源疫苗效果相似;乙肝基因工程疫苗与50IU乙肝免疫球蛋白联合应用,可将母婴阻断效果提高到90%;我国目前推广乙肝疫苗的成本效益至少为135.     

肺癌治疗性疫苗的临床应用进展

肿瘤疫苗即是利用肿瘤细胞或肿瘤抗原物质诱导机体的特异性细胞免疫和体液免疫反应,以调节机体免疫功能,达到治疗肿瘤的目的。治疗性肿瘤疫苗可通过主动免疫诱导全身特异性抗肿瘤效应。根据其制备方法不同,疫苗主要分为:细胞疫苗、多肽疫苗和蛋白质疫苗、核酸疫苗、抗独特型抗体疫苗等。本文对目前肺癌相关疫苗的类型、研究进展和临床应用情况进行综述,从而为进一步的研究提供一定的借鉴和参考。     

Intranasal Immunization Using CTA1-DD as a Mucosal Adjuvant for an Inactivated Influenza Vaccine

Objective To evaluate the effect of intranasal immunization with CTA1-DD as mucosal adjuvant combined with H3N2 split vaccine. Methods Mice were immunized intranasally with PBS(negative control), or H3N2 split vaccine(3 μg/mouse) alone, or CTA1-DD(5 μg/mouse) alone, or H3N2 split vaccine(3 μg/mouse) plus CTA1-DD(5 μg/mouse). Positive control mice were immunized intramuscularly with H3N2 split vaccine(3 μg/mouse) and alum adjuvant. All the mice were immunized twice, two weeks apart. Then sera and mucosal lavages were collected. The specific HI titers, IgM, IgG, IgA, and IgG subtypes were examined by ELISA. IFN-γ and IL-4 were test by ELISpot. In addition, two weeks after the last immunization, surivival after H3N2 virus lethal challenge was measured. Results H3N2 split vaccine formulated with CTA1-DD could elicit higher Ig M, Ig G and hemagglutination inhibition titers in sera. Furthermore, using CTA1-DD as adjuvant significantly improved mucosal secretory Ig A titers in bronchoalveolar lavages and vaginal lavages. Meanwhile this mucosal adjuvant could enhance Th-1-type responses and induce protective hemagglutination inhibition titers. Notably, the addition of CTA1-DD to split vaccine provided 100% protection against lethal infection by the H3N2 virus. Conclusion CTA1-DD could promote mucosal, humoral and cell-mediated immune responses, which supports the further development of CTA1-DD as a mucosal adjuvant for mucosal vaccines.     

青海省2009年1～6岁健康儿童接种乙肝疫苗免疫抗体水平调查分析

目的调查青海省1～6岁健康儿童接种乙肝疫苗抗体水平,抽样评价预防接种质量。方法在全省六州一地区一市各选择1个县对1～6岁健康儿童进行接种乙肝疫苗抗体检测。结果乙肝疫苗(抗-HBs≥10mIU/mL)[1]阳性率为63.62%,其中最高为海东地区76.67%,最低为果洛州48.57%。不同地区的抗-HBs阳性率高低分布不均,乙肝疫苗抗体阳性率仍有差别,其中果洛州监测人群抗-HBs阳性率相对较低仅为48.57%。不同性别、民族及年龄抗-HBs阳性率为抗体阳性率差异无统计学意义。结论我省乙肝疫苗接种与免疫成功率≥85%的指标还有较大差距,应进一步提高乙肝疫苗疫苗接种率。