EP2受体介导的前列腺素E2影响胆管细胞癌细胞HuCCT1细胞间黏附因子-1表达和侵袭的研究

目的:探讨前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)通过EP2受体影响人胆管细胞癌细胞HuCCT1细胞间黏附因子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的表达及癌细胞的侵袭能力?方法:用PGE2?EP1~4四种受体激动剂(17-phenyltrinor Prostaglandin E2?Butaprost?Sulprostone和Prostaglandin E1 Alcohol)?EP2受体抑制剂AH6809?腺苷酸环化酶(AC)抑制剂SQ22536和蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89处理HuCCT1细胞,通过Western blot?划痕试验等方法检测ICAM-1的蛋白表达水平以及HuCCT1细胞侵袭能力的变化?结果:PGE2明显提高HuCCT1细胞ICAM-1蛋白的表达水平,5 μmol/L PGE2处理HuCCT1细胞24 h后,ICAM-1蛋白表达水平与对照组相比上升了66.17%(P < 0.05),并呈浓度依赖性和时间依赖性;5 μmol/L PGE2处理HuCCT1细胞24 h后,HuCCT1细胞的侵袭能力较对照组增强了43.29%(P < 0.01)?10 μmol/L EP1~4受体激动剂处理HuCCT1细胞24 h后,ICAM-1蛋白的表达水平与对照组相比明显增高,其中EP2受体激动剂上升了257.88%(P < 0.05),10 μmol/L EP2受体激动剂处理HuCCT1细胞24 h后,HuCCT1细胞的侵袭能力较对照组增强了56.99%(P < 0.01);10 μmol/L EP2受体抑制剂AH6809处理后ICAM-1蛋白的表达水平与PGE2组相比下降了49.14%(P < 0.05),细胞侵袭能力下降了52.06%(P < 0.01)?25 μmol/L AC抑制剂SQ22536?10 μmol/L PKA抑制剂H89处理HuCCT1细胞后,ICAM-1蛋白的表达水平较EP2受体激动剂处理组分别下降了72.87%(P < 0.05)和80.78%(P < 0.05)?结论:PGE2可通过EP2受体激活cAMP-PKA信号转导通路上调HuCCT1细胞ICAM-1的表达,从而促进HuCCT1细胞的侵袭转移?     

PGE2通过上调CXCR4表达促进SKOV3细胞侵袭的机制研究

目的:探讨前列腺素E2(PGE2)上调人卵巢癌SKOV3细胞CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)的表达从而促进细胞侵袭能力的机制?方法:用PGE2?EP1受体激动剂或抑制剂?CXCR4抑制剂?蛋白激酶C(PKC)抑制剂和钙离子螯合剂处理SKOV3细胞,通过real-time PCR?Western blot?Transwell实验检测CXCR4 mRNA水平?蛋白水平以及细胞的侵袭能力?结果:5 μmol/L PGE2处理SKOV3细胞后,CXCR4 mRNA及蛋白水平与对照组相比分别上升了60.33%?122.88%(P均 < 0.01),细胞的侵袭能力较对照组增强了112.24%(P < 0.01);而经10 μmol/L CXCR4抑制剂AMD3465处理后,细胞的侵袭水平较PGE2处理组下降了54.00%(P < 0.05);5 μmol/L EP1受体激动剂17-PT-PGE2处理SKOV3细胞后,CXCR4 mRNA及蛋白水平与对照组相比分别上升了47.90%(P < 0.01)?85.56%(P < 0.05),细胞的侵袭能力较对照组增强了108.79%(P < 0.01);而10 μmol/L EP1受体抑制剂sc-51322处理后,CXCR4蛋白表达水平较PGE2处理组下降了54.86%(P < 0.05),细胞的侵袭水平较PGE2处理组下降了65.37%(P < 0.05);5 μmol/L PKC抑制剂BIS-1?10 μmol/L钙离子螯合剂BAPTA-AM处理后,CXCR4 蛋白表达水平较17-PT-PGE2处理组分别下降了57.38%?56.14% (P均 < 0.05),细胞的侵袭水平较17-PT-PGE2处理组下降了52.63%?55.26%(P <均0.05)?结论:PGE2可通过激活EP1受体经Gαq/Ca2+/PKC信号转导通路上调卵巢癌SKOV3细胞CXCR4的表达,从而增强肿瘤细胞的侵袭能力?     

PGE2通过cAMP-PKA信号转导通路促进肝癌细胞VEGF表达

目的:探讨PGE2对人肝癌细胞HuH7VEGF表达的影响及其可能涉及的信号转导通路。方法:用PGE2、EP1-4四种受体激动剂、SQ22536+PGE2、H89+PGE2处理HuH7细胞,Real-time PCR、Western blot、ELISA等检测VEGFmRNA、蛋白表达的变化。结果:10μmol/L PGE2处理HuH7细胞24h后,VEGFmRNA的表达水平上升了264%(P<0.01)、细胞培养上清中VEGF蛋白表达水平上升了24%(P<0.01);10μmol/L PGE2处理HuH7细胞6、12、24h后,胞浆中VEGF蛋白的表达水平分别上升了13.6%、25.7%、39.6%(P<0.01);10μmol/L EP2受体激动剂处理HuH7细胞24h后,胞浆、细胞培养上清中VEGF蛋白表达水平与对照组相比分别上升了32.3%、20.1%(P<0.01),而10μmol/L EP1、EP3、EP4受体激动剂处理HuH7细胞24h后,VEGF的表达水平无明显改变;30μmol/L PKA抑制剂(H89)、500μmol/L腺苷酸环化酶抑制剂(SQ22536)处理HuH7细胞24h后,胞浆VE...     

PGE2通过EP2受体激活cAMP-PKA-CREB信号通路上调SnoN的表达而促进CCLP1细胞的增殖

目的:探讨前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)对人胆管上皮癌细胞CCLP1增殖能力影响的作用机制。方法:用PGE2、EP1～4 4种受体激动剂、AC激动剂Forskolin、PKA抑制剂H89、cAMP拟似物db-cAMP处理CCLP1细胞,通过RT-PCR、Western blot、WST等实验检测SnoN mRNA、SnoN蛋白等表达水平、CREB蛋白磷酸化水平以及CCLP1细胞增殖能力的变化。结果:10μmol/L PGE2处理CCLP1细胞24 h后,SnoN mRNA的表达水平与对照组相比上升了22.5%(P<0.01),SnoN蛋白的表达水平上升了35.6%(P<0.05);10μmol/L EP受体激动剂处理CCLP1细胞24 h后,SnoN蛋白的表达水平与对照组相比明显增高,其中以EP2受体激动剂的作用最明显,上升了64.9%(P<0.05),细胞增殖能力上升了26.5%;10μmol/L AC激动剂Forskolin处理CCLP1细胞24 h后,SnoN蛋白的表达水平及CREB蛋白的磷酸化水平较对照组分别上升了25.1%、71.3%(P<0.05),细胞增殖能力也上升了...     

前列腺素E2对人肝癌细胞β1-integrin表达调控及相关机制的研究

目的:阐明前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)通过EP1受体上调肝癌细胞Huh-7中β1-integrin的表达及其相关的信号转导通路?方法:用PGE2?EP1受体激动剂(17-PT-PGE2)?EP1受体抑制剂SC19220?NF-κB抑制剂PDTC处理Huh-7细胞,通过Western blot?免疫荧光组织化学实验等方法检测β1-integrin蛋白表达水平和NF-κB的活性?结果:5 μmol/L的PGE2处理Huh-7细胞24 h后,β1-integrin的表达水平与对照组相比上升了129.48% (P < 0.01),5 μmol/L EP1受体激动剂17-PT-PGE2处理使细胞β1-integrin的蛋白表达水平升高了216.34%(P < 0.01)?10 μmol/L的EP1受体抑制剂SC19220处理后β1-integrin表达水平与PGE2组相比下降了34.51%(P < 0.05)?免疫荧光组织化学实验显示17-PT-PGE2处理Huh-7细胞120 min后,NF-κB核表达水平明显增加;Western blot实验显示5 μmol/L 17-PT-PGE2处理Huh-7细胞120 min后,磷酸化NF-κB-p65上升了209.27%(P < 0.01)?NF-κB抑制剂PDTC处理Huh-7细胞后β1-integrin蛋白表达水平与EP1受体激动剂组相比降低了63.49%(P < 0.01)?结论:PGE2可通过EP1受体上调Huh-7细胞中β1-integrin的表达,此调节作用可能与NF-κB信号转导通路有关?     

PGE2对HuH7细胞Survivin表达影响的研究

目的:研究前列腺素E2(PGE2)对人肝癌细胞HuH7 Survivin表达的影响及其与PI3K/AKT信号转导通路的相关性.方法:用PGE2、EP受体激动剂、EP受体抑制剂、PI3K抑制剂(LY294002)处理HuH7细胞,用Western blot检测Survivin蛋白表达.结果:5 μmol/L PGE2处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与对照组相比上升了63.59%(P＜0.01);5 μmol/L EP1、5μmol/L EP3、5 μmol/L EP4受体激动剂分别处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与对照组相比分别上升了114.76%(P＜0.01),76.68%(P＜0.01),70.01%(P＜0.01),而5 μmol/L EP2受体激动剂处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与对照组相比无明显改变(P＞0.05);10 μmol/L EP1,10 μmol/L EP4受体抑制剂分别处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与PGE2组相比分别下降了32.95%(P＜0.01),28.36%(P＜0.05),而10 μmol/L EP2受体抑制剂处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与PGE2组相比无明显改变(P＞0.05);10 μmol/L PI3K抑制剂(LY294002)处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与PGE2组相比下降了28.05%(P＜0.01).结论:PGE2可能通过EP1、EP3、EP4这3种受体影响HuH7细胞中Survivin的表达,且这种调节作用可能与PI3K/Akt信号转导通路有关.     

PGE2通过Gαs-cAMP-PKA通路上调子宫内膜癌细胞VEGF的表达

目的:探讨PGE2(prostaglandinE2,PGE2)对子宫内膜癌Ishikawa细胞血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响及其可能涉及的信号转导通路?方法:用PGE2?4种EP受体激动剂(17-phenyltrinor prostaglandin E2?butaprost?sulprostone和prostaglandin E1 alcohol)?EP2受体拮抗剂AH6809?PKA抑制剂H89?腺苷酸环化酶(AC)抑制剂SQ22536处理Ishikawa细胞,通过Western blot实验检测VEGF蛋白表达水平的变化?结果:PGE2明显提高Ishikawa细胞VEGF蛋白的表达水平,10 μmol/L PGE2处理Ishikawa细胞后,VEGF蛋白的表达水平与对照组相比升高31.56%(P < 0.05);10 μmol/L EP1-4受体激动剂处理Ishikawa细胞后,VEGF蛋白的表达水平与对照组相比明显增高,其中EP2受体激动剂处理组上升了87.80%(P < 0.05);10 μmol/L EP2受体拮抗剂AH6809处理Ishikawa细胞后,Ishikawa蛋白的表达水平较PGE2处理组下调了45.66%(P < 0.05)?25 μmol/L AC抑制剂SQ22536?10 ?滋mol/L PKA抑制剂H89处理Ishikawa细胞后,VEGF蛋白的表达水平较EP2受体激动剂处理组分别下降了29.00%(P < 0.05)和57.50%(P < 0.05)?结论:PGE2可通过EP2受体激活cAMP-PKA信号转导通路上调Ishikawa细胞VEGF蛋白的表达?     

前列腺素E2活化EP2受体促进肝癌细胞增殖

目的研究前列腺素E2(PGE2)对肝癌细胞增殖活性的影响,并探讨其作用主要通过何种前列腺素EP受体介导。方法采用RT-PCR检测肝细胞癌Hep3B细胞COX-2和EP1~EP4受体mRNA的表达水平,cell counting kit-8(CCK-8)细胞计数法检测PGE2和EP2受体激动药butaprost及EP3/EP4受体激动药PGE1 alcohol对细胞增殖的影响。结果人肝癌细胞Hep3B高表达COX-2 mRNA,正常肝细胞QSG7701 COX-2 mRNA表达水平远远弱于前者。四种亚型的PGE2受体EP1~EP4的mRNA在人肝细胞癌细胞株Hep3B均有表达,EP2和EP4受体表达水平明显高于EP1和EP3受体。PGE2呈时间和浓度依赖性地促进Hep3B细胞增殖。孵育细胞48h后,10μmol/L的PGE2表现出明显的促细胞增殖的作用,与未加PGE2的阴性对照组相比,细胞的增殖活性上升22.57%(P<0.001)。0.1、1和10μmol/L的PGE2作用Hep3B细胞72 h后,细胞增殖活性分别较对照组上升12.13%(P<0.01)、17.58%(P<0.01)和33.07%(P<0.001)。20μmol/L的butaprost孵育细胞72 h使细胞增殖活性提高了21.96%(P<0.001),而EP3/EP4受体激动剂PGE1alcohol在浓度为2~20μmol/L的范围内对Hep3B细胞增殖活性无显著影响,当浓度达到200μmol/L时则对细胞的增殖产生抑制作用。结论 Hep3B细胞上的EP2受体被选择性激动后可刺激细胞增殖,提示EP2受体介导了PGE2对Hep3B细胞的促增殖作用。     

PGE2上调AREG表达促进胆管癌细胞生长的机制研究

目的:探讨AREG蛋白在前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)促进人胆管上皮癌细胞CCLP1增殖能力中的作用和机制?方法:用PGE2?4种EP受体激动剂(17-phenyltrinor Prostaglandin E2?Butaprost?Sulprostone和Prostaglandin E1 Alcohol)?EP2受体拮抗剂AH6809?PKA抑制剂H89?AC抑制剂SQ22536处理CCLP1细胞,通过Western blot?WST等实验检测AREG蛋白表达水平以及CCLP1细胞增殖能力的变化?结果:10 μmol/L PGE2处理CCLP1细胞后,AREG蛋白的表达水平与对照组相比升高了44.2%(P < 0.05);20 μmol/L AREG中和抗体Mab262和SAB1402118分别处理1 h后的WST实验结果显示,PGE2诱导的CCLP1细胞增殖可被AREG中和抗体抑制,分别下降了18%?20%(P < 0.01)?10 μmol/L 4种EP受体激动剂处理CCLP1细胞的结果表明,EP2受体激动剂具有明显促进AREG蛋白表达的作用(表达水平上调了20.1%,P < 0.05),而EP1?EP3?EP4无明显促进表达作用;10 μmol/L EP2受体拮抗剂AH6809处理CCLP1细胞后,AREG蛋白的表达水平较EP2受体激动剂处理组下调了20%(P < 0.05)?用PKA抑制剂H89处理后,AREG蛋白的表达水平和CREB蛋白的磷酸化水平较PGE2处理组分别下降了54.4%?45%(P < 0.05);用CMV500-DN-CREB质粒转染CCLP1细胞抑制了CREB的表达和磷酸化后,AREG的表达量较对照组明显下降约65%(P < 0.01)?结论:PGE2可通过EP2受体激活cAMP-PKA-CREB信号转导通路上调CCLP1细胞AREG的表达,从而促进CCLP1细胞的增殖?     

肝癌细胞中EP3受体亚型表达及其调控肝癌细胞生长的研究

目的:研究肝癌细胞中EP3受体剪接体亚型的表达类型及其调控肝癌细胞生长的功能。方法:EP3受体激动剂Sulprostone处理肝癌细胞株观察其生长情况;二维电泳和质谱分析研究EP3受体激动与下游信号蛋白之间的关系;Real-TimePCR实验鉴定肝癌细胞株中EP3受体剪接体亚型的表达类型。结果:10μmol/L Sulprostone处理CCLP1细胞24 h后,细胞生长率上调了31.46%(P<0.01);给予CCLP1细胞10μmol/L Sulprostone处理24 h后,二维电泳和质谱实验的结果显示促进细胞增殖侵袭、与细胞代谢正相关的蛋白水平升高,降低细胞代谢速度、减慢细胞生长、抑制细胞侵袭转移的相关蛋白水平下降;Real-Time PCR实验检测肝癌细胞,结果表明肝细胞癌HUH-7、Hep3B、HepG2细胞及胆管细胞癌HuCCT1、CCLP1细胞表达EP3-4、EP3-5、EP3-6和EP3-7 4种剪接体亚型。结论:EP3受体通过上调促细胞生长代谢蛋白,下调抑制细胞生长代谢蛋白而发挥促进肝癌细胞增殖的作用。肝细胞癌HUH-7、Hep3B、HepG2细胞及胆管细胞癌HuCCT1、CCLP1细胞表达EP3-4、EP3-5、EP3-6和EP3-7 4种EP3受体剪接体亚型。     

肝癌细胞前列腺素E2受体表达和分布的研究

目的：基于肝癌细胞（肝细胞癌细胞和胆管上皮癌细胞）对PGE2的不同反应性，研究Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1肝癌细胞株前列腺素E2受体的表达类型和分布定位。方法：体外培养肝细胞癌细胞株（Hep3B，HuH7）和胆管上皮癌细胞株（SG231，HuCCT1）。分别给予不同浓度的外源性PGE2处理，以WST-1细胞增殖实验检测肿瘤细胞增殖率：以RT-PCR实验检测上述细胞4种PGE2受体（EP1、EP2、EP3和EP4）的mRNA表达情况；采用上述肝癌细胞的细胞涂片或细胞爬片进行荧光免疫细胞化学实验．于荧光显微镜和共聚焦显微镜下观察上述4种EP受体蛋白的表达和定位分布。结果：WST-1细胞增殖实验结果显示PGE1可以促进Hep3B和HuH7细胞的生长，但对胆管上皮癌细胞（SG231、HuCCT1细胞）则表现为生长抑制作用；RT-PCR和荧光免疫细胞化学实验结果表明Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1细胞株均有4种EP受体的表达；激光共聚焦结果显示4种EP受体不仅有胞浆，胞膜定位。而且部分在胞核也有表达。其中EP4受体的表达主要定位于细胞核。结论：Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1，4种肝癌细胞株均可以表达EP1、EP2、EP3和EP4受体。且受体的细胞内定位不同。肝癌细胞对前列腺素E2的反应性可能与EP受体的定位以及不同的细胞内信号转导通路激活有关。     

前列腺素E2促骨髓来源内皮前体细胞分化的机制

目的：探讨前列腺素E2在调节小鼠骨髓来源内皮前体细胞分化、增强血管新生潜能中的作用及其相关分子机制。方法：贴壁法获得C57BL/6J小鼠后肢股骨和胫骨骨髓来源的内皮前体细胞（bone marrow derived progenitor cells, BMPCs）, 免疫荧光染色法鉴定BMPCs。用前列腺素E2（prostaglandin E2, PGE2）处理该群细胞,通过定量PCR、Western blot等分子生物学方法检测BMPCs中内皮前体细胞标志物以及内皮细胞标志物的表达情况,体外成血管实验检验BMPCs血管新生调节能力。利用PGE2及其受体亚型2、4（EP2、EP4）阻断剂处理BMPCs,定量PCR和Western blot方法分析Krüppel样转录因子2（Krüppel like factor 2,KLF2）的表达情况。结果：BMPCs表面表达内皮前体细胞标志物c kit以及内皮细胞（endothelial cells,ECs）标志物血管性血友病因子（von Willebrand factor,vWF）、血管内皮钙黏素（vascular endothelial cadherin, VE-cadherin）。1 μmol/L PGE2显著促进BMPCs中与成熟ECs相关的分子标记物血小板内皮细胞黏附分子（platelet endothelial cell adhesion molecule-1 ,PECAM-1/CD31）和内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）的表达,上调倍数2倍,且BMPCs形成新血管的能力也明显增强。在此过程中转录因子KLF2的表达升高至原有水平的2倍以上,利用PGE2受体阻断剂处理BMPCs,发现EP4受体阻断剂处理BMPCs后,KLF2表达下降。结论：PGE2通过EP4受体作用于BMPCs,上调KLF2表达,促进BMPCs向ECs方向分化,从而增强其血管新生潜能。     

健脾理气方对功能性消化不良大鼠十二指肠MLCK和PGE2-cAMP通路的影响

目的 观察健脾理气方对功能性消化不良（functional dyspepsia,FD）模型大鼠十二指肠肌球蛋白轻链激酶（myosin light chain kinase,MLCK）和前列腺素E2（prostaglandin E2,PGE2）-环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）通路的影响。方法 18只SD雄性大鼠采用数字表法随机分为正常组、模型组及中药治疗组（每组6只）,以夹尾应激法建立功能性消化不良动物模型,正常组及模型组大鼠均给予0.9%（质量分数）氯化钠注射液灌胃,中药治疗组给予健脾理气方水煎剂灌胃。取大鼠十二指肠组织进行HE染色,观察组织形态,同时应用定量聚合酶链式反应（quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测MLCK和PGE2受体EP1、EP4 mRNA含量,酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法测定PGE2和cAMP的表达。结果 模型组大鼠十二指肠MLCK表达升高,PGE2、EP4、cAMP表达下降,EP1未见明显异常,健脾理气方治疗后可明显抑制MLCK表达,升高PGE2、EP4和cAMP表达。结论 健脾理气方可以抑制MLCK mRNA表达,同时上调PGE2-EP4-cAMP信号通路表达,这可能是健脾理气方治疗FD的机制之一。     

脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎性反应中前列腺素E2/前列腺素E受体4调控高迁移率族蛋白1的机制

目的：探讨前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠腹腔巨 噬细胞高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)表达的影响及其可能的机制。 方法：运用常规 方法提取、培养小鼠腹腔巨噬细胞;采用LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞构建炎症模型;使用PGE2和前列腺素E受体 (prostaglandin E receptor,EP)激动剂 、RNAi技术下调巨噬细胞EP4受体表达、抑制性表达DN.CREB质粒处理LPS诱导的 小鼠腹腔巨噬细胞,并通过Western印迹测定HMGB1表达水平。结果：与单纯应用LPS处理巨噬细胞比较,PGE2联合 LPS共孵育小鼠腹腔巨噬细胞24 h后,HMGB1蛋白的表达水平明显上升,且EP4受体激动剂联合LPS处理小鼠腹腔巨 噬细胞24 h后HMGB1蛋白的表达亦增加(均P<0.05);与PGE2+LPS联合处理比较,应用RNAi技术可下调小鼠腹腔巨噬 细胞EP4受体表达,再给予外源性PGE2加LPS处理,HMGB1水平下降(P<0.05);使用DN.CREB质粒抑制cAMP结合元 件结合蛋白(cAMP respondse element bound protein,CREB)后再加上EP4受体激动剂联合LPS处理,与EP4受体激动剂+ LPS处理比较,HMGB1水平差异无统计学意义(P>0.05);与单纯应用LPS 比较,EP4受体激动剂联合LPS处理小鼠腹 腔巨噬细胞可上调表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)及蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,亦 称Akt)thr308磷酸化水平(均P<0.05);使用EGFR抑制剂预处理细胞后,Akt thr308磷酸化水平及HMGB1表达均降低(均 P<0.05);采用Akt特异性抑制剂预处理细胞后,HMGB1表达降低(P<0.05)。结论：PGE2可以通过EP4受体上调LPS诱 导的小鼠腹腔巨噬细胞HMGB1的表达,且这一作用与激活EGFR/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt信号通路有关。     

前列腺素E2对大鼠巨噬细胞株NR8383 合成血管内皮生长因子促进人脐静脉血管内皮细胞成管、迁移 的影响

目的探究前列腺素E2（PGE2）对大鼠巨噬细胞株NR8383细胞合成血管内皮生长因子（VEGF）的调控作用以及对人脐静 脉内皮细胞（HUVEC）趋化成管的影响。方法分别采用0.1 nmol/L PGE2、1 nmol/L PGE2、1 nmol/L PGE2+10 nmol/L EP2受体抑 制剂AH6809+10 nmol/L EP4受体抑制剂AH23848 处理的NR8383 细胞作为各实验组,选择未经PGE2以及其特异性受体抑制 剂处理的NR8383 细胞作为对照组,采用Western blot 和qPCR方法检测各组NR8383细胞内VEGF蛋白以及mRNA的表达水 平;收集以上各处理组的细胞培养上清液分别刺激HUVECs,运用TRANSWELL 小室、Matrigel 胶细胞成管实验等实验方法, 观察PGE2调控巨噬细胞对HUVEC 迁移效应和成管能力的影响。结果随着NR8383 细胞培养液中加入PGE2浓度增高,其 VEGF蛋白表达和VEGF mRNA的表达水平显著升高（P<0.05）;0.1 nmol/L、1 nmol/L PGE2处理过的NR8383细胞培养上清液 可以显著增加HUVEC细胞形成的小管面积,形成小管面积随着PGE2处理浓度的增加而增加（P<0.05）;HUVECs的迁移运动也 随着PGE2处理浓度的升高不同程度的增强,HUVECs趋化的数量显著升高（P<0.05）;研究发现PGE2特异性的EP2/EP4 受体拮 抗剂AH6809/AH23848,可以显著抑制PGE2 增强NR8383 细胞内VEGF mRNAs 表达的作用并且也显著抑制PGE2 增强 NR8383细胞促进HUVECs成管和趋化能力的效应（P<0.05）。结论PGE2可以通过作用NR8383细胞表面对应的EP2/EP4受体 调控VEGF的合成,促进HUVEC趋化和成管效应。     

PGE2对LPS诱导小鼠骨髓源性树突细胞成熟及EP4受体表达影响

目的：观察不同浓度前列腺素E2(PGE2)刺激对脂多糖( LPS)诱导小鼠骨髓源性树突细胞( DCs)成熟及EP4受体表达的影响。方法采用重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子( rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素4( rmIL-4)刺激小鼠骨髓源细胞,诱导生成DCs;经LPS(100 ng/ml)诱导成熟后,用不同浓度 PGE2(0．625、1．25、2．5、5、10、20 nmol/L)刺激 DCs 24 h,流式细胞术检测 DCs 表型 CD40、CD83、MHC-Ⅱ的表达和抗原摄取功能,荧光间标法检测小鼠骨髓源DCs细胞膜上EP4的表达,以平均荧光强度表示表达的高低;MTT法检测经PGE2及LPS诱导成熟的DCs对T细胞增殖的作用。结果流式细胞术结果显示 PGE2(2．5、5、10 nmol/L)能明显上调 CD40、CD83、MHC-Ⅱ的表达;PGE2(1．25、2．5、5、10、20 nmol/L)能明显抑制DCs的抗原摄取功能;MTT法检测结果显示PGE2(2．5、5、10 nmol/L)刺激DCs能促进T细胞增殖的作用;荧光间标法检测结果显示PGE2(2．5、5、10 nmol/L)明显升高DCs细胞膜上EP4表达。结论 PGE2可以调节DCs功能,该作用可能与其调节EP4受体表达相关。     

原花青素抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞PGE_2生成的机制

目的：观察原花青素对脂多糖诱导RAW264.7细胞PGE2生成的影响及其作用机制。方法：放射免疫法（RIA）检测原花青素对脂多糖诱导的RAW264.7细胞PGE2生成的影响;LPS诱导RAW264.7细胞9h,再加不同浓度原花青素作用30min,放射免疫（RIA）法检测原花青素对COx-2酶活性的影响;半定量逆转录-聚合酶联反应（RT-PCR）法检测原花青素对COx-2 mRNA表达的影响;提取核蛋白,蛋白免疫印迹（western blot）法检测原花青素对NF-κB/p65蛋白表达的影响;电泳迁移率变动分析（EMSA）法检测原花青素对NF-κB与DNA结合活性的影响。结果：0.8,4和20mg·L-1原花青素抑制LPS诱导RAW264.7细胞PGE2生成;0.8,4和20mg·L-1原花青素不影响LPS诱导RAW264.7细胞COx-2酶活性;0.8,4和20mg·L-1原花青素下调LPS诱导RAW264.7细胞COx-2 mRNA表达;4,20mg·L-1原花青素下调LPS诱导RAW264.7细胞NF-κB/p65蛋白表达;0.8,4和20mg·L-1的原花青素可明显降低LPS诱导下RAW264.7细胞的NF—κB活化。结论：原花青素显著抑制LPS诱导RAW264．7细胞PGE2生成的作用与原花青素抑制COx-2 mRNA表达有关,此作用可能是通过抑制NF—κB／p65蛋白表达和抑制NF-κB的DNA结合活性来实现。