以ECHO克隆系统构建人生长激素的哺乳动物表达载体

目的：构建ECHO克隆系统构建人生长激素的哺乳动物表达载体，以克服原核生物表达系统生产人生长激素存在的缺陷。 方法：实验于2002．08在解放军广州军区广州总医院医学实验科进行。①先把人生长激素基因片段克隆到ECHO系统的供载体中，构建供载体pUni／Lox-HGH。②让该供载体与具Lox位点的受载体在Cre重组酶的作用下融合，构建出人生长激素的哺乳动物表达载体pcDNA4．1／pUni-HGH，使人生长激素基因处于CMV启动子的调控下，EcoRl单酶切及BarnHI／EcoRI双酶切鉴定重组质粒。 结果：由琼脂糖凝胶电泳和序列测定证实，用ECHO克隆系统构建的融合质粒中，确实含有人生长激素带内含子的基因序列。 结论：用ECHO克隆系统可以构建人生长激素的哺乳动物表达载体，且方便、快捷，为取代原核生物表达系统生产人生长激素，提供了依据。     

血管内皮生长因子及其受体与肿瘤

血管内皮生长因子 (VEGF)及其受体 (VEGFR)在肿瘤的生长和转移中起着重要的调节作用 ,已越来越成为人们研究的热点。本文就VEGF和VEGFR家族成员、它们与肿瘤生长转移的关系以及VEGF和VEGFR与肿瘤治疗作一综述     

以ECHO克隆系统构建人生长激素的哺乳动物表达载体

目的:构建ECHO克隆系统构建人生长激素的哺乳动物表达载体,以克服原核生物表达系统生产人生长激素存在的缺陷。方法:实验于2002-08在解放军广州军区广州总医院医学实验科进行。①先把人生长激素基因片段克隆到ECHO系统的供载体中,构建供载体pUni/Lox-HGH。②让该供载体与具Lox位点的受载体在Cre重组酶的作用下融合,构建出人生长激素的哺乳动物表达载体pcDNA4.1/pUni-HGH,使人生长激素基因处于CMV启动子的调控下,EcoRI单酶切及BamHI/EcoRI双酶切鉴定重组质粒。结果:由琼脂糖凝胶电泳和序列测定证实,用ECHO克隆系统构建的融合质粒中,确实含有人生长激素带内含子的基因序列。结论:用ECHO克隆系统可以构建人生长激素的哺乳动物表达载体,且方便、快捷,为取代原核生物表达系统生产人生长激素,提供了依据。     

半边旗提取物5F诱导肝癌细胞株HepG2发生凋亡的机制

半边旗（Pteris Semipinnata L）是凤尾蕨属植物,生长于我国南方。民间常用于治疗疗疮、毒蛇咬伤、跌打损伤、疟疾等。广东医学院梁念慈教授在九十年代初筛选二十多种中草药的抗癌作用时,发现半边旗的水提液或醇提液显示对多种培养的癌细胞均有较强细胞毒作用。其中,从半边旗中分离出的具有抗癌活性的二萜类化合物5F（ent-1lct-hydroxy-15-oxo—ent-kaur-16-en-19-oic-acid）可抑制多种培养的癌细胞的增殖。本研究通过酶联免疫技术、流式细胞技术、免疫双染技术等多途径显示出5F可通过诱导肝癌细胞株HepG2发生凋亡来抑制肿瘤细胞的生长,分析了该凋亡与p53、NFKB、IKB、HIF、VEGF、Bax、cyto-c及AIF等细胞因子表达变化的关系,并检测了癌细胞内活性氧浓度的变化与5F及凋亡的相关性。     

半边旗二萜类化合物5F下调BEL-7402细胞中PIK3CA和AKT的表达

目的：研究半边旗二萜化合物5F（简称PsL5F）对人肝癌细胞株BEL-7402中PIK3CA（Phosphoinositide-3-kinase,catalytic,alphapolypeptide）和AKT（V-akt murine thymoma viral oncogene homolog）表达的影响,探讨其抗肿瘤的可能作用机制。方法：应用肿瘤基因芯片、荧光定量实时PCR和Western blot法检测PsL5F对PIK3CA和AKT表达的影响。结果：PsL5F能明显下调肝癌细胞中PIK3CA和AKT的表达。结论：PsL5F抗肿瘤作用与PIK3CA、AKT低表达有关。     

凤尾蕨属6种药用植物抗肿瘤有效部位筛选

目的 对凤尾蕨属6种药用植物抗肿瘤有效部位进行筛选.方法 采用MTT法对凤尾蕨属6种药用植物不同溶剂萃取物进行体外抗肿瘤活性测试.结果 半边旗的醋酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物;刺齿半边旗的石油醚萃取物、醋酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物;井栏边草的醋酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物;剑叶凤尾蕨的醋酸乙酯萃取物;线羽凤尾蕨的正丁醇萃取物对人肺癌细胞A549增殖均有明显的抑制作用.结论 上述凤尾蕨属几种药用植物的萃取物具有较好的体外抗肿瘤活性,是其抗肿瘤作用的有效部位.     

半边旗中二萜类化合物5F对乳腺癌生长和转移的体内抑制作用

为研究半边旗中二萜类化合物5F在体内对乳腺癌生长和转移的影响及其作用机制,以MDA-MB-231乳腺癌原位移植模型观察5F抗乳腺癌的效应。在治疗的同时,观察5F对裸鼠的不良反应。以RT-PCR、Western blot法检测5F对乳腺肿瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)、激酶嵌入结构域受体(KDR)mRNA和蛋白表达的影响。结果显示,5F通过减少原发肿瘤体积和肺转移结节数目,显著抑制MDA-MB-231乳腺癌移植瘤的生长和肺转移。这种抑制转移的作用不依赖于其对原发肿瘤的生长抑制作用。5F对裸鼠的肝肾功能无明显的影响。5F抗MDA-MB-231乳腺癌作用机制与5F下调肿瘤组织VEGF、KDR mRNA和蛋白表达水平有关。     

5F对人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞PTEN、MMP-9表达的影响

目的研究Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(以下简称5F)对人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞毒性、侵袭能力及PTEN、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法 MTT法检测5F对PGCL3细胞增殖抑制的影响;用Transwell小室法检测5F对PGCL3细胞侵袭能力和趋化性运动能力的影响;RT-PCR和Western blot方法检测5F对PGCL3细胞侵袭转移相关基因PTEN、MMP-9表达水平的影响。结果 5F对PGCL3细胞的增殖、侵袭及运动能力均有明显的抑制作用(均P<0.05)。5F作用于人PGCL3细胞24h,能明显上调PTEN mRNA和蛋白的表达,下调MMP-9mRNA和蛋白的表达。结论 5F能抑制PGCL3细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其机制可能是通过上调PTEN和下调MMP-9表达水平而实现的。     

脂酶的医学研究进展

脂酶是由 44 9个氨基酸残基组成的单链糖蛋白 ,分子量为 46 0 0 0 5 6 0 0 0D。脂酶存在于胰、小肠和多种其它组织中。胰腺组织中的脂酶浓度是血清中的 5 0 0 80 0倍。脂酶的最适合pH在 7.410 .0之间 ,等电点 pI由于酶的形式不同有5 .80 ,5 .85几种。电泳分析证实正常血清中脂酶分为两个同工酶带 ,胰腺炎时则可分为四个同工酶带。脂酶的测定可采用光电比色、比浊、免疫和荧光测定等多种测定方法 ,目前各种测定方法的灵敏度都较高 ,而特异性的变化则较大。目前脂酶已广泛应用于急性胰腺炎的诊断 ,而脂酶的升高亦据报道与癌症、非胰岛素依赖性糖尿病和肥胖等疾病相关     

蛋白激酶CK2α’相互作用蛋白NADH脱氢酶4的筛选

目的研究新的男性不育候选基因蛋白激酶CK2α’在精子发生中的作用机制。方法以人蛋白激酶CK2α’为诱饵蛋白,用酵母双杂交实验从构建于pACT2质粒的人睾丸eDNA文库中筛选CK2α’亚基的相互作用蛋白。结果核酸序列分析及同源性检索表明,其中一种与NADH脱氢酶4（NADH dehydrogenase4）有99．0％同源性。结论NADH脱氢酶是线粒体内参与三羧酸循环的重要酶,也可调节细胞凋亡,深入研究GK2α’与NADH脱氢酶4之间的关系,对了解C池在精子发生过程中的作用有重要意义。