miR-503-5p对IL-1β诱导的血管内皮细胞增殖、迁移、凋亡和黏附的影响

目的探讨miR-503-5p对白细胞介素1β（IL-1β）诱导的血管内皮细胞增殖、迁移、凋亡和黏附的影响和分子机制。方法将人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）分为NC组、IL-1β组、IL-1β+anti-miR-con组及IL-1β+anti-miR-503-5p组。分别采用噻唑蓝（MTT）法、黏附实验、流式细胞术、Transwell实验检测HUVECs增殖、黏附、凋亡和迁移能力。Western blotting检测细胞间黏附分子1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子1（VCAM-1）表达水平。结果与NC组比较,IL-1β组HUVECs细胞活力、迁移细胞数显著降低,细胞黏附数、凋亡率、ICAM-1和VCAM-1蛋白表达显著升高（P < 0.01）。与IL-1β+anti-miR-con组比较,IL-1β+anti-miR-503-5p组HUVECs细胞活力、迁移细胞数显著升高,细胞黏附数、凋亡率、ICAM-1和VCAM-1蛋白表达显著降低（P < 0.01）。结论抑制miR-503-5p表达可促进血管内皮细胞增殖和迁移,抑制细胞黏附和凋亡,其机制可能与抑制ICAM-1和VCAM-1表达有关。     

芍药醇对叔丁基过氧化氢损伤的血管内皮细胞的保护作用

目的：探讨芍药醇（PAE）对叔丁基过氧化氢（TBHP）损伤的血管内皮细胞的保护作用及其机制。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）分为对照组（Control组）、造模组（TBHP组）和PAE处理组（各浓度PAE+THBP组）;用CCK8法及乳酸脱氢酶（LDH）检测各组HUVECs细胞增殖抑制情况,Transwell实验检测细胞的迁移能力,流式细胞仪和Cleaved-caspase 3免疫荧光染色检测HUVECs细胞凋亡情况。结果：与Control组比较,TBHP组细胞存活率和细胞迁移数明显降低,细胞凋亡率、LDH释放量和Cleaved-caspase 3蛋白的表达明显升高（均P＜0.05）。与TBHP组比较,PAE处理组细胞的存活率和细胞迁移数均随着给药浓度的增加而逐渐升高,细胞凋亡率、LDH释放量和Cleaved-caspase 3蛋白的表达均随着给药浓度的增加而逐渐下降（均P＜0.05）。结论：PAE通过抑制TBHP诱导的HUVECs细胞存活率降低、LDH释放量升高、细胞凋亡增多、Cleaved-caspase 3蛋白表达的上调,发挥其对TBHP损伤的血管内皮细胞的保护作用,且呈剂量依赖性。     

巨噬细胞移动抑制因子（MIF）对血管内皮细胞增殖、迁移的调控作用

目的明确氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）对血管内皮细胞中巨噬细胞移动抑制因子（MIF）表达的调控作用,检测MIF对血管内皮细胞增殖、迁移的可能调控作用。方法用不同剂量的OX-LDL处理人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）,Western-blot检测MIF蛋白的表达。利用腺病毒介导MIF在HUVECs中的表达,分别通过Trans-well细胞穿膜实验和细胞划痕实验检测MIF对HUVECs迁移的调控作用。分别通过EdU染色、MTr细胞增殖检测和流式细胞术检测细胞周期,分析MIF对HUVECs增殖的影响。用荧光定量PCR检测MIF对HUVECs中MMP2和CXCR4表达的影响。结果Ox-LDL可特异调控HUVECs中MIF的表达。Trans-well细胞穿膜实验和细胞划痕实验表明,利用腺病毒介导MIF高表达可显著抑制I-IUVECs的迁移。EdU染色、M1Tr和细胞周期检测结果显示MIF对HUVECs增殖无明显作用。定量PCR结果显示过表达MIF可显著抑制HUVECs中CXCR4的表达（P〈0．01）。结论MIF通过降低CXCR4表达来抑制血管内皮细胞的迁移,但对血管内皮细胞的增殖没有影响。     

三氧化二砷通过FoxO3a抑制乳腺癌血管生成的体外实验

目的：研究三氧化二砷(As2O3)对乳腺癌肿瘤血管生成的影响,并初步探讨其可能的分子机制。方法：以人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)为实验对象,制备肿瘤条件培养基模拟肿瘤微环境培养细胞。使用不同浓度的As2O3(0、4、8 μmol/L)处理HUVECs细胞后,通过划痕试验检测内皮细胞迁移能力,Matrigel试验检测内皮细胞体外小管形成情况,CCK-8法检测细胞的增殖情况,Annexin V染色检测细胞凋亡,Western blot检测蛋白表达。结果：与对照组相比,As2O3处理组细胞的迁移及小管形成能力明显下降;细胞增殖活性降低,凋亡增加;细胞中FoxO3a蛋白及其下游Fas-L、p27Kip1蛋白的表达增多。结论：As2O3可以通过上调FoxO3a的蛋白表达水平,激活其下游通路,抑制血管内皮细胞的增殖,促进其凋亡,并降低其体外血管形成能力,提示As2O3可能在抑制乳腺癌血管生成中起重要作用。     

氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞增殖及IL18分泌的影响

目的探讨氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增殖及白介素18（IL18）分泌的影响，以阐明其在动脉粥样硬化发生中的作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株，3～6代用于实验。实验分空白对照组和不同浓度ox-LDL组。将不同浓度的ox-LDL（10、20、50、100、200mg／L）与内皮细胞共同孵育12、24、36、48h。采用细胞酶联免疫吸附分析（ELISA）检测培养上清液中IL18含量；采用四唑盐比色法检测各孔的吸光值（0D），以评价增殖效果。结果10mg／L ox-LDL促进内皮细胞增殖，20～200mg／Lox-LDL呈剂量依赖性抑制内皮细胞增殖（P〈0．05，P〈0.01）。正常内皮细胞不分泌IL18。ox-LDL诱导HUVECs分泌IL18，呈浓度依赖性，100mg／L浓度时IL18分泌达高峰。ox-LDL诱导HUVECs分泌IL18亦呈时间依赖性，与12h比较，24、36、48h均有统计学意义（P〈0.05，P〈0.01）。结论ox-LDL诱导HUVECs分泌IL18，抑制HUVECs增殖，这可能与ox-LDL致动脉粥样硬化作用机制有关。     

冠心康对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的保护作用

目的:探讨中药复方冠心康对氧化低密度脂蛋白(oxygenized low density lipoprotei,ox-LDL)损伤的血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)的保护作用。方法:以ox-LDL损伤的人脐静脉内皮细胞作为动脉粥样硬化内皮细胞病理模型,采用冠心康药物血清干预,并与空白血清形成对照。采用MTT法检测VECs存活率,Hoechst染色、FITC/PI双染及流式细胞术检测细胞凋亡,Ki67荧光抗体标记及流式细胞术检测细胞增殖,PI染色及流式细胞术检测细胞周期。结果:与正常VECs比较,ox-LDL损伤后血管内皮细胞存活率、增殖能力及处于S期、G2/M期细胞数均明显下降(P0.05),细胞凋亡率明显升高(P0.05);经冠心康血清干预后,VECs存活率、增殖能力及处于S期、G2/M期细胞数较空白血清组、模型组升高(P0.05),细胞凋亡率降低(P0.05)。结论:中药复方冠心康能抑制ox-LDL损伤的VECs凋亡,促进细胞增殖、分裂,对ox-LDL损伤的VECs具有一定的保护作用。     

阿魏酸通过调控线粒体凋亡抑制宫颈癌HeLa细胞侵袭迁移功能

目的：探讨阿魏酸（FA）对宫颈癌HeLa细胞株凋亡调控作用及其可能机制。方法：体外培养HeLa细胞，将其分为control组和FA处理组（1、2 和4 mmol/L）。细胞计数试剂盒8（CCK-8）和划痕实验检测细胞增殖和迁移能力，Transwell实验检测细胞的侵袭能力。实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测不同浓度FA处理后HeLa细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax及Cleaved-caspase-3的表达，免疫荧光检测HeLa细胞中线粒体的表达数量及状态。结果：RT-qPCR结果显示，与control组相比，随着FA浓度增高，HeLa细胞中Bcl-2基因表达逐渐降低，而Bax和Cleaved-caspase-3 基因表达逐渐增强（P ＜0.05）。免疫荧光示，与control组相比，HeLa细胞中的线粒体含量逐渐减少且功能逐渐减弱（P ＜0.05）。Transwell以及划痕实验结果显示，与control组相比，不同浓度FA可使HeLa细胞的侵袭细胞数以及迁移细胞数减少且呈剂量依赖性（P ＜0.05）。结论：FA通过Bcl-2家族蛋白途径抑制HeLa细胞的增殖、侵袭及迁移，诱导线粒体介导的细胞凋亡。     

MCP-3对人脐静脉内皮细胞表达ICAM-1、VCAM-1、TF/TFPI及其凋亡的影响

目的研究单核细胞趋化因子-3（MCP-3）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）表达ICAM-1、VCAM-1、TF、TFPI 及其凋亡
的影响。方法分离、培养人脐静脉内皮细胞,分别给予0~3.0 ng/ml的MCP-3进行干预,确定MCP-3对HUVECs的最适作用
浓度,以此浓度干预HUVECs,在MCP-3 加药之前1 h 分别给予MCP-3 抗体（20 ng/ml）、PI3K抑制剂LY-294002（5 mmol/ml）
处理细胞,MCP-3 作用24 h 后提取各组总RNA、总蛋白,用RT-PCR、Western blot 分别检测干预后的ICAM-1、VCAM-1、TF、
TFPI 的表达。模拟病理状态,用ox-LDL 干预HUVECs与空白组对照,24 h 后提取各组总RNA、总蛋白,用RT-PCR、Western
Blot 分别检测各组MCP-3 表达情况。最后,用MCP-3 及MCP-3+CCR2 拮抗剂RS102895（6μmol/L）分别干预HUVECs,作用
24、48 h 分别检测HUVECs凋亡率及caspase3 的表达,并与空白对照组比较。结果MCP-3 对HUVECs的最适作用浓度为
0.3 ng/ml（P<0.05）;MCP-3 可诱导HUVECs 细胞中ICAM-1、VCAM-1、TF 表达的增加,同时可抑制TFPI 表达（P<0.05）;
MCP-3 抗体和LY-294002 可分别拮抗、抑制此作用（P<0.05）;ox-LDL 可上调HUVECs表达MCP-3（P<0.05）;作用24、48 h 后
MCP-3 可明显诱导HUVECs凋亡,CCR2 抑制剂可拮抗此作用。结论ox-LDL 可诱导HUVECs表达MCP-3,MCP-3 可诱导
HUVECs凋亡,且可能部分通过PI3K信号通路影响HUVECs功能。
     

DNA甲基化调控p16表达在替格瑞洛改善血管内皮功能中的作用及机制

目的：探讨替格瑞洛对氧化型低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL）诱导内皮损伤的影响及机制。方法：采用ELISA法检测人血清内皮素-1、一氧化氮含量,CCK-8法、EdU法、Transwell法检测细胞活力、增殖及迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡,real-time PCR法、Western blot法检测DNA甲基化转移酶1(DNA Methyltransferase 1,DNMT1)、p16表达,慢病毒过表达载体构建p16的过表达系统,慢病毒敲除载体构建DNMT1和p16的敲除系统,甲基化特异性PCR法测定p16启动子区甲基化水平。结果：替格瑞洛促进ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞（human umbilical endothelial cell,HUVEC）活力、增殖及迁移能力,并显著抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡;替格瑞洛抑制ox-LDL诱导的HUVEC中p16表达,而过表达p16可逆转替格瑞洛对ox-LDL诱导HUVEC损伤的保护作用;DNMT1通过影响p16启动子区的甲基化水平抑制p16表达。结论：替格瑞洛可通过DNM...     

Cu-ATSM保护内皮细胞糖氧剥夺再灌注损伤的机制

目的：探讨铜-二乙酰-2（N4-甲基氨基硫脲）（Cu -ATSM）对糖氧剥夺再灌注（OGD/R）后人脐静脉内皮细胞（HUVECs）凋亡的作用及其潜在机制。方法：将体外培养的HUVECs分为Control组、OGD/R组、OGD/R+Cu-ATSM组;采用流式细胞术检测HUVECs的凋亡情况;采用Mito-tracker染色检测线粒体形态;JC-1染色分析各组线粒体膜电位的变化;采用蛋白质印迹法（Western blot）检测各组自噬相关蛋白如ATG5、Beclin1、LC3I/II的激活情况;采用免疫荧光检测各组细胞LC3II的表达情况。结果：流式细胞术结果显示,与Control组比,OGD/R损伤后HUVECs凋亡数目显著上升,而当Cu-ATSM治疗后,凋亡的HUVECs显著减少（均P ＜0.05）。Mito-tracker及JC-1染色结果显示,与Control组比,OGD/R组损伤后线粒体的形态明显受到损伤,线粒体功能受损,膜电位下降,而OGD/R+Cu-ATSM组治疗后能够改善损伤的线粒体功能,维持线粒体形态和线粒体膜电位（均P ＜0.05）。Western blot结果显示,与Control组比,OGD/R组损伤后自噬相关信号通路如ATG5、Beclin1、LC3II蛋白的表达量增多,而OGD/R+Cu-ATSM组治疗后的自噬相关蛋白表达量较OGD/R组下降（均P ＜0.05）。免疫荧光结果显示,与Control组比,OGD/R组损伤后LC3II的表达显著增多,而OGD/R+Cu-ATSM治疗后的LC3II显著减少。结论：Cu-ATSM能够改善HUVECs OGD/R损伤后的线粒体功能,减少HUVECs凋亡,其机制可能是通过抑制自噬实现的。     

没食子酸抑制人脐静脉血管内皮细胞增殖作用研究

目的 探讨没食子酸对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）增殖的抑制作用.方法 MTT比色法检测没食子酸对HUVECs增殖的抑制作用;用AO/EB荧光双染色法检测细胞凋亡和坏死;激光共聚焦显微镜检测没食子酸对F-actin和细胞核的影响.结果 浓度为40、60、80和100 μg/mL的没食子酸明显抑制了HUVECs细胞增殖,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）;荧光双染色法结果显示没食子酸诱导HUVECs发生凋亡和坏死,且随没食子酸浓度的增加,死亡细胞的比例显著增多;荧光染色显示细胞骨架蛋白F-actin的细丝发生断裂或重排,细胞核发生边集.结论 没食子酸具有显著抑制HUVECs增殖,诱导其凋亡和坏死的作用;此外,没食子酸还能破坏细胞骨架蛋白F-actin,这与抑制细胞迁移密切相关.     

脑胶质瘤细胞外泌体对血管新生的影响及其机制

目的 探讨脑胶质瘤细胞外泌体对血管新生的影响及其机制。方法 差速离心法提取人脑胶质瘤细胞U373和U87以及脑胶质细胞HEB所分泌的外泌体,透射电镜观察外泌体结构,Western blot鉴定外泌体标志蛋白;将0.2 μg/μL的外泌体和等体积PBS分别与人脐静脉内皮细胞HUVECs共孵育,CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移能力,小管形成实验检测体外血管生成,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blot检测凋亡蛋白Bax、Caspase3、Caspase9、VEGF、VEGFR2的表达及AKT的磷酸化水平。结果 提取的外泌体符合其特征;相比于PBS组,与HEB-exo共孵育后,HUVECs增殖、迁移、小管形成、细胞凋亡均无显著变化（P>0.05）;而与U373-exo和U87-exo共孵育后HUVECs增殖、迁移、小管形成能力均显著提高（P<0.05）;细胞凋亡水平显著降低（P<0.001）,Bax、Caspase3、Caspase9表达显著下降（P<0.001）,VEGF、VEGFR2的表达以及AKT的磷酸化水平显著提高（P<0.001）。结论 脑胶质瘤细胞外泌体能够激活调控VEGF/AKT信号通路而促进血管新生。     

白藜芦醇抑制Gly-LDL诱导人脐静脉内皮细胞损伤的作用机制研究

目的 探究白藜芦醇(RSV)对糖化低密度脂蛋白(Gly-LDL)致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响及作用机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,Gly-LDL诱导其损伤,设置为模型组;用不同浓度(5、10、20μmol/L)白藜芦醇干预内皮细胞24 h,分别设置为白藜芦醇低浓度组、白藜芦醇中浓度组和白藜芦醇高浓度组;另设置空白组.通过CCK-8法检测细胞增殖能力,划痕实验观察细胞迁移能力,流式细胞术测定细胞凋亡水平,ELISA法检测内皮细胞中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,Western blot法检测Toll样受体4(TLR4)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、IL-6和TNF-α的蛋白表达,实时荧光定量PCR法检测TLR4、HIF-1α、IL-6和TNF-α的mRNA表达.结果 与空白组比较,模型组细胞增殖和迁移能力下降(P<0.05,P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.01),血清IL-6和TNF-α含量增加(P<0.01),内皮细胞中TLR4、HIF-1α、IL-6和TNF-α的蛋白和mRNA表达均增加(P<0.05,P<0.01).与模型组相比,白藜芦醇干预后,Gly-LDL损伤人脐静脉内皮细胞情况减轻,白藜芦醇中浓度组和白藜芦醇高浓度组的细胞增殖、迁移能力增强(P<0.05),细胞凋亡率下降(P<0.05),血清IL-6和TNF-α含量下降(P<0.05),内皮细胞中TLR4、HIF-1α、IL-6和TNF-α的蛋白表达和mRNA表达均减少(P<0.05).结论 白藜芦醇能有效减轻Gly-LDL对人脐静脉内皮细胞的炎症损伤,增强细胞增殖、迁移能力,抑制细胞凋亡,其机制可能与白藜芦醇下调TLR4/HIF-1α信号通路有关.     

线粒体损伤在脂多糖诱导的血管内皮细胞凋亡中的作用

目的：探讨脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）对血管内皮细胞凋亡的影响及线粒体损伤在其中的作用。方法：LPS刺激体外培养人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）后,采用CCK-8检测血管内皮细胞存活率,Western blot检测HUVECs细胞内Bax、Bcl-2、细胞色素C（cytochrome C,Cyt C）和Cleaved-caspase 3蛋白的表达,用流式细胞计数检测细胞的凋亡情况,用荧光探针Mitotracker、JC-1、Mito SOX染色检测细胞内线粒体形态及其膜电位的变化,以及线粒体来源活性氧（reactive oxygen species,ROS）的产生水平;用MitoTEMPOL+LPS干预细胞,检测Bax、Bcl-2、Cyt C蛋白表达以及凋亡。结果：LPS浓度依赖性降低细胞存活率（F=99.31,P=0.000）。与对照组相比,LPS可以明显诱导HUVECs细胞凋亡（t=17.184,P=0.000）,并呈浓度依赖性增加Cleaved-caspase 3（F=13.52,P=0.001）、Cyt C（F=21.008,P=0.000）和Bax（F=16.325,P=0.000）蛋白表达,并减少Bcl-2（F=17.287,P=0.000）蛋白的表达。LPS刺激后HUVECs细胞内线粒体发生明显的片段化和颗粒状变、线粒体膜电位下降（F=92.286,P=0.000）,线粒体来源的ROS产生明显增加（t=5.324,P=0.006）。采用线粒体ROS清除剂（MitoTEMPOL）处理,可抑制LPS刺激的HUVECs细胞Bax（F=19.854,P=0.002）和Cyt C（F=11.594,P=0.009）蛋白表达,增加Bcl-2（F=8.077,P=0.020）蛋白表达,同时降低Cleaved-caspase 3（F=15.941,P=0.004）蛋白表达和减少细胞凋亡（F=57.482,P=0.000）。结论：LPS可以诱导HUVECs细胞凋亡和线粒体损伤,损伤线粒体所释放的ROS可能在LPS诱导的血管内皮细胞凋亡的过程中发挥了重要的作用。     

川崎病合并冠脉损伤患儿血清抑制HUVECs增殖并诱导其凋亡

目的：观察川崎病（Kawasaki disease, KD）合并冠脉损伤患儿血清对脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）增殖及凋亡的影响,以进一步了解KD患儿血管内皮细胞损伤的机制。方法：HUVECs分为正常血清组（Control组）、发热血清组（F组）、KD无冠脉损伤组（Non-CALs组）和KD合并冠脉损伤组（CALs组）。MTT比色法检测细胞增殖,流式细胞术（flow cytometry, FCM）分析各组HUVECs的凋亡情况。结果：MTT比色结果显示,Non-CALs组和CALs组经血清干预后的细胞活性低于F组和Control组,且CALs组低于Non-CALs组,差异有统计学意义（P<0.01）。此外经KD患儿血清作用后,HUVECs的凋亡率增加,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.01）,且CALs组凋亡率高于Non-CALs组。结论：KD合并冠脉损伤患儿血清具有抑制HUVECs增殖并诱导HUVECs凋亡的作用。     

黄芪含药血清对血管紧张素Ⅱ致内皮细胞凋亡的保护作用

目的：观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的致凋亡效应及黄芪含药血清的保护作用。方法将培养的 ECV-304分为以下3组：（1）空白对照组;（2）AngⅡ诱导组,使培养基中 AngⅡ终浓度为0、1×10－6、1×10－5、1×10－4 mol／L,与细胞共孵育18 h。MTT 法检测 AngⅡ对 HUVECs 生长增殖的影响;流式细胞仪检测 AngⅡ作用后内皮细胞凋亡率的变化;电子显微镜观察 AngⅡ诱导后内皮细胞的超微结构特点;（3）黄芪含药血清干预组,培养基中加入不同浓度黄芪含药血清培养24 h 后,加入 AngⅡ（1×10－4 mol／L）孵育18 h,检测内皮细胞凋亡率的变化。结果不同浓度的 AngⅡ均能抑制内皮细胞生长增殖。不同浓度的 AngⅡ均可显著诱导内皮细胞凋亡。透射电镜下可见 AngⅡ诱导后内皮细胞的凋亡形态。黄芪含药血清抑制 AngⅡ所诱导的内皮细胞凋亡。结论黄芪含药血清具有内皮保护作用。     

hexarelin对ox-LDL引起的大鼠脑微血管内皮损伤的保护作用

目的建立体外培养大鼠脑微血管内皮细胞ox-LDL损伤模型,探讨hexarelin对大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用。方法分离并培养大鼠脑微血管内皮细胞,分成正常对照组（control）、ox-LDL组（ox-LDL）、hexarelin ＋ ox-LDL组（hex＋ox-LDL）3组。其中ox-LDL组在培养液中加入ox-LDL 50mg/L; hex＋ox-LDL组加入ox-LDL 50mg/L和0.1μmol/L hexarelin;正常对照组加入等量PBS。各组细胞无血清培养12h,MTT法检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡情况,Western blot法检测内皮细胞eNOS蛋白表达情况以及蛋白质硝基化情况。结果50mg/L ox-LDL作用12h可明显诱导内皮细胞凋亡,减少eNOS蛋白表达,促进蛋白质的硝基化。而用0.1μmol/L hexarelin和50mg/L ox-LDL共同孵育,可明显减少内皮细胞的凋亡,提高eNOS的表达水平,减少蛋白质的硝基化程度。结论hexarelin能有效抑制由ox-LDL引起的脑微血管内皮细胞损伤,提示hexarelin对脑动脉粥样硬化可能有一定抑制作用。     

新藤黄酸对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨新藤黄酸对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）增殖和凋亡的影响。方法 用不同浓度的新藤黄酸培养细胞24、48 h后,采用MTT法观察新藤黄酸对细胞生长的抑制作用;倒置显微镜下观察HUVECs细胞形态变化;通过DAPI染色后倒置荧光显微镜观察新藤黄酸对细胞形态学的影响;通过Annexin V-FITC/PI双染及流式细胞术检测新藤黄酸对HUVECs细胞凋亡率的影响;Western blot检测新藤黄酸对HUVECs中凋亡相关蛋白Caspase-3的表达变化。结果 MTT检测结果显示新藤黄酸能够明显抑制HUVECs的增殖,并呈时效及量效关系;荧光显微镜观察结果显示,新藤黄酸作用HUVECs后出现大量凋亡细胞;流式细胞术结果显示,与空白对照组相比,随着新藤黄酸浓度的增加,细胞凋亡率明显增加;Western blot检测结果表明Caspase-3蛋白表达水平显著增加。结论 新藤黄酸对HUVECs有明显的抑制作用,其作用机制可能是通过诱导细胞凋亡实现的。     

二氢杨梅素调控自噬抑制氧化低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞损伤的研究

目的观察二氢杨梅素（DMY）对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的影响,并探讨自噬在其中的作用。方法DMY（0.01、0.10、1.00和10.00 μmol/L）预处理HUVECs 2 h,用100.0 mg/L ox-LDL 继续培养细胞24 h。以辛伐他汀作为阳性对照组。采用噻唑蓝法检测细胞活力,Hoechst33258染色观察细胞核形态,透射电镜观察自噬体,Western blot检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）、Beclin-1和p62/SQSTM1的表达,观察自噬抑制剂对DMY作用的影响。结果与对照组比较,ox-LDL组细胞的存活率降低（p <0.05）,细胞核呈集中高强度蓝色荧光,固缩致密浓染或碎块状致密浓染,颜色发白,细胞核较小,形态不规则,自噬体和自噬溶酶体数量增加;Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值上调,而p62的表达下调（p <0.05）。与ox-LDL组比较,0.1、1.0和10.0μmol/L DMY预处理组细胞存活率均升高;细胞核荧光强度降低,核固缩致密浓染和碎块状致密浓染减少,形态较规则;1.0 μmol/L DMY 预处理组的自噬体和自噬溶酶体数量增加;Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值上调,而p62 的表达下调（p <0.05）。自噬抑制剂3-MA 部分抵消DMY 抑制ox-LDL诱导的HUVECs 存活率降低（p <0.05）。结论DMY 能抑制ox-LDL诱导的HUVECs 损伤,其机制与诱导自噬有关。     

沉默FMOD对H322细胞的增殖和迁移的影响及其作用机制探讨

  目的  研究纤调蛋白(fibromodulin,FMOD)对非小细胞肺癌H322细胞增殖、黏附和迁移的影响,并探讨其作用机制。  方法  H322细胞随机分为对照组、小干扰RNA(siRNA) 沉默FMOD（FMOD siRNA）组和对照siRNA（Con siRNA）组。FMOD siRNA和Con siRNA转染H322细胞,CCK-8法检测各组细胞的细胞活性,荧光素双醋酸酯（FDA）荧光染色检测细胞的黏附能力,Transwell法检测细胞的迁移能力;Real time-PCR法检测Con siRNA组和FMOD siRNA组细胞中Cyclin D1、细胞间黏附分子-1（ICAM-1)、钙黏附蛋白-E（E-cadherin）、FMOD、转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad2、Smad3、Smad4及Smad7的mRNA表达,蛋白印迹法检测细胞中Cyclin D1、ICAM-1、E-cadherin、FMOD、TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3、Smad4及Smad7的蛋白表达。  结果  与Con siRNA组相比,FMOD siRNA组细胞的细胞活性降低,细胞黏附及迁移能力减弱,差异均有统计学意义（P<0.01）,对照组和Con siRNA组差异无统计学意义。Real time-PCR和蛋白印迹法检测结果显示:与Con siRNA组相比,FMOD siRNA组细胞Cyclin D1、ICAM-1、TGF-β1、Smad2、Smad3及Smad4的mRNA和蛋白表达水平降低,E-cadherin及Smad7的mRNA和蛋白表达水平升高。  结论  沉默FMOD基因,可抑制H322细胞的增殖、黏附和迁移,其作用可能通过抑制TGF-β/Smad信号通路实现。