代综方对3T3-L1脂肪细胞分化及相关基因表达的影响

目的：研究代综方（Dai Zong Fang,DZF）对3T3-L1脂肪细胞分化及分化过程中相关基因表达的影响。方法：体外培养3T3-L1前脂肪细胞,鸡尾酒式诱导脂肪细胞分化,给予不同浓度DZF干预6 d。BODIPY493/503与DAPI双荧光染色观察脂肪细胞分化情况;甘油磷酸氧化酶-过氧化物酶法测定细胞内甘油三酯（triglyceride,TG）含量;RT-PCR检测CCAAT增强子结合蛋白-α（CCAAT enhancer binding protein-α,C/EBP-α）、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（peroxisome proliferator activated re－ceptor-γ,PPAR-γ）、乙酰辅酶A 羧化酶（acetyl-CoA carboxylase,ACC）、脂肪酸合成酶（fatty acid synthetase,FAS）的mRNA表达;Western blot法检测PPAR-γ、C/EBP-α的蛋白表达。结果：DZF抑制脂肪细胞分化,降低细胞内TG含量,并呈剂量依赖效应;与对照组比较,DZF大剂量组明显下调ACC的mRNA表达（P<0.05）,DZF小中大剂量均明显下调FAS的mRNA表达（P<0.01）;与对照组比较,DZF中、大剂量组明显下调C/EBPα、PPAR-γ的mRNA表达（P<0.01）,Western蛋白表达结果与mRNA结果一致。结论：DZF能够明显抑制3T3-L1脂肪细胞的分化程度,其机制可能与下调C/EBPα、PPAR-γ、ACC、FAS基因的表达有关。     

中链脂肪酸对高脂饲料喂养的C57BL/6J小鼠高密度脂蛋白的影响

目的 观察中链脂肪酸(MCFA)对高脂饲料喂养的C57BL/6J小鼠血清、肝脏和小肠高密度脂蛋白(HDL)水平的影响.方法 36只高脂饲料喂饲小鼠,按照体质量随机分为2mg/kgMCFA组、4mg/kgMCFA组和4mg/kg长链脂肪酸(LCFA)组3组,灌胃给予以上脂肪酸2周后处死小鼠,称量体质量、体脂肪重和肝脏重,测定血清脂代谢指标,ELISA法检测血清、肝脏和小肠HDL、载脂蛋白A1(ApoA1)水平,实时定量RT-PCR法检测肝脏和小肠HDL及ApoAl mRNA表达水平.结果 低剂量MCFA组(2mg/kg)小鼠肝脏重显著低于LCFA组(4mg/kg),血清HDL-C/LDL-C比值、血清和肝脏HDL水平以及肝脏和小肠中HDL、ApoA1的mRNA表达均显著高于LCFA组(P＜0.05).高剂量MCFA组(4mg/kg)小鼠血清HDL-C和HDL水平、肝脏和小肠HDL mRNA表达显著高于LCFA组(P＜0.05).低剂量和高剂量MCFA组之间仅肝脏和小肠中的HDL、ApoA1mRNA表达有统计学差异(P＜0.05).结论 MCFA可升高高脂饲料喂养的C57BL/6J小鼠血清、肝脏和小肠HDL水平,上调其mRNA表达,对调节ApoAl的作用不明显.     

红景天苷对3T3-L1脂肪细胞糖代谢及细胞分化的影响

目的:观察红景天苷对脂肪细胞糖代谢和细胞分化的影响,分析其改善糖代谢的可能机制.方法:检测红景天苷干预的脂肪细胞对 3H-葡萄糖的摄取,对红景天苷干预分化的细胞进行油红O染色后通过比色法分析脂肪细胞分化程度.逆转录多聚酶联反应(RT-PCR)检测脂肪细胞分化相关基因过氧化物体增殖剂活化受体-γ(PPAR-γ)、CAAT/增强子结合蛋白-α(C/EBP-α) mRNA的表达. 结果:红景天苷组葡萄糖摄取率为110.4%,明显高于正常对照组 (P<0.01);红景天苷明显抑制细胞分化及PPAR-γ、C/EBP-α mRNA表达,与对照组比较,P<0.01.结论:红景天苷促进3H-葡萄糖摄取,可抑制脂肪细胞分化,下调分化相关基因的表达.     

2型糖尿病患者脂肪间充质干细胞成脂肪分化能力的实验研究

目的 探讨2型糖尿病(T2DM)患者与健康者脂肪间充质干细胞(ADSCs)成脂肪分化能力.方法 取T2DM患者与健康者脂肪组织,分离培养出ADSCs.取第3代细胞接种,比较两组细胞细胞表型及生长速度的差异.加入成脂肪诱导液,观察两组细胞成脂肪分化情况,于第14天加入油红O对细胞进行染色并观察,用异丙醇对油红O进行萃取并比较两组细胞吸光度值,通过实时荧光定量(PCR)法比较两组细胞成脂肪分化14 d时PPAR-γ、C/EBP-α和C/EBP-β的表达水平.结果 T2DM患者和健康者ADSCs在细胞表型及生长速度方面比较差异无统计学意义(P＞0.05),成脂肪诱导分化14 d时T2DM患者ADSCs油红O吸光度值明显高于健康者ADSCs,T2DM患者ADSCs PPAR-γ、C/EBP-a、C/EBP-β表达水平明显高于健康者ADSCs.结论 T2DM患者ADSCs成脂肪分化能力明显高于健康者,其可能是T2DM患者容易并发肥胖的原因之一.     

趋化因子CXCL1在肥胖小鼠脂肪组织中的表达及意义

目的探讨趋化因子CXCL1在肥胖小鼠脂肪组织中的表达及意义。方法将20只小鼠随机分为高脂饲料喂养组和普通饲料喂养组,每组10只,分别给予高脂饲料和普通饲料喂养。提取2组小鼠附睾脂肪组织总RNA,应用实时荧光定量聚合酶链反应检测小鼠附睾脂肪组织中CXCL1 mRNA表达水平;成脂诱导脂肪间充质干细胞,酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清液中CXCL1的表达。结果与普通饲料喂养组小鼠比较,高脂饲料喂养组小鼠附睾脂肪组织中CXCL1 mRNA表达显著增加(P=0.001);CXCL1蛋白表达水平随脂肪细胞分化时间延长而逐渐增加。结论小鼠肥胖状态下CXCL1表达明显增加,推测CXCL1在肥胖的发生发展过程中发挥重要作用。     

白藜芦醇增加脂肪细胞3T3-L1中脂联素表达的作用机制探讨

目的 探讨白藜芦醇增加脂肪细胞3T3-L1中脂联素表达的作用机制.方法 设立空白对照组、白藜芦醇组、肿瘤坏死因子(TNF-α)组及白藜芦醇+TNF-α组.用白藜芦醇、TNF-α或者二者联合处理3T3-L1脂肪细胞.用酶联免疫吸附法测定脂联素水平;实时定量PCR测定脂联素和过氧化物酶体增生物激活受体(PPAR-γ)mRNA水平;用PPAR-γ转录因子试剂盒测定PPAR-γ活性.结果 与空白对照组比较,白藜芦醇组中PPAR-γ及脂联素mRNA在3T3-L1脂肪细胞中的表达增加(P＜0.05);TNF-α组中脂联素mRNA表达及释放减少(P＜0.05).与TNF-α组比较,白藜芦醇+TNF-α组中脂联素mRNA的表达及分泌增加(P＜0.05);白藜芦醇拮抗TNF-α对分化3T3-L1脂肪细胞中PPAR-γ mRNA表达及活性抑制(P＜0.05).结论 白藜芦醇能够通过调节PPAR-γ的转录活性继而拮抗TNF-α诱导下调3T3-L1脂肪细胞中脂联素的表达及分泌.     

PSGL-1敲除小鼠血中MIP-1γ和TNF-α的表达研究

目的 研究PSGL-1缺失对遗传基因工程小鼠外周血血常规的影响,并检测以及外周血中炎症因子IGFBP-6, TNF-α和MIP-1γmRNA表达的水平。 方法 用血常规检测方法检测正常C57/BL/6小鼠（简称C57 小鼠）和PSGL-1基因缺失的基因工程小鼠（PSGL-1-/-小鼠）的外周血中血常规的差异;其次,提取两种鼠的血液的mRNA,逆转录为cDNA,采用Real-time PCR方法,检测C57小鼠与PSGL-1-/-小鼠外周血中炎症因子 TNF-α和MIP-1γmRNA的差异。结果 与对照组C57小鼠相比,PSGL-1-/-基因工程小鼠在12周龄时外周血中中性粒细胞（*P<0.05）、淋巴细胞(**P<0.01)和白细胞细胞（***P<0.001）总数显著增加和炎症因子TNF-α以及MIP-1γ表达增加(P<0.05)。结论 PSGL-1的缺失改变了小鼠细胞因子影响了外周血的血细胞组成,MIP-1γ和TNF-α炎症因子上调,有可能影响了小鼠的免疫功能。     

ACE2/Ang(1-7)对小鼠脂肪组织脂肪合成的影响

目的 探讨血管紧张素转化酶2（angiotensin-converting enzyme 2,ACE2）-血管紧张素（1-7）[angiotensin（1-7）,Ang（1-7）]对小鼠脂肪组织脂肪合成的影响。方法 选取雄性ACE2基因敲除模型小鼠及野生C57BL/6（wild-type,WT）对照小鼠,测体质量,计算体脂率,测定血清三酰甘油（triglycerides,TG）及总胆固醇（total cholesterol,TC）浓度,HE染色观察附睾脂肪细胞形态学变化,蛋白印记（Western blotting）法检测附睾脂肪组织脂肪合成因子乙酰辅酶A羧化酶α（acetyl-CoA carboxylase ɑ,ACCα）、脂肪酸合成酶（fatty acid synthetase,FAS）及脂肪型脂肪酸结合蛋白（adipocyte fatty acid binding protein,aP2）的表达。将雄性db/db小鼠采用数字表法随机分为3组,分别给予0.9%（质量分数）氯化钠注射液,Ang（1-7）,Ang（1-7）+A779[Ang（1-7）的拮抗剂]皮下泵入干预4周。测体质量,Western blotting法检测小鼠附睾脂肪组织脂肪合成因子蛋白的表达。结果 ACE2基因敲除小鼠体脂率及血TG浓度明显高于野生对照小鼠。Western blotting法检测结果表明ACE2基因敲除小鼠附睾脂肪组织脂肪合成因子ACCα及FAS蛋白表达明显高于野生对照组。应用Ang（1-7）干预2型糖尿病db/db小鼠显著抑制其附睾脂肪组织脂肪合成因子ACCα及FAS蛋白表达,而应用Ang（1-7）拮抗剂A779拮抗了这一作用。结论 ACE2/Ang（1-7）抑制白色脂肪合成,其机制可能是通过抑制脂肪合成相关因子的表达发挥作用。6     

噻唑烷二酮类药物对急性脑损伤后IL-1β、TNF-α表达的影响

目的 探讨过氧化物酶增值物激活受体-γ（PPAR-γ）激活剂噻唑烷二酮类药物对创伤性脑损伤（TBI）大鼠模型脑组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素（IL-1β）表达的影响。方法 采用改进的Feeney自由落体脑损伤装置制作TBI大鼠模型,分别给予生理盐水或pioglitazone,并与假手术组大鼠比较,7d后收集脑组织,采用RT-PCR或Western Blotting法检测各组PPAR-γmRNA、TNF-α及IL-1β的mRNA及蛋白表达差异。结果 创伤性脑损伤大鼠脑组织与对照组及假手术组相比, PPAR-γmRNA表达显著增强（P<0.05）,同时TNF-α、IL-1β蛋白及mRNA表达也显著上调（P<0.05）,而应用pioglitazone治疗进一步增加了大鼠脑组织PPAR-γ的表达,并有效抑制TNF-α及IL-1β的上调表达（P<0.05）。结论 PPAR-γ激动剂吡格列酮对减轻创伤性脑损伤后持续存在的炎症反应具有一定的保护作用,其机制可能与降低脑组织中TNF-α及IL-1β等炎性细胞因子的含量有关。     

肥胖大鼠白色脂肪组织中PPARγ、UCP2基因与血清1α,25-(OH)2-D3的相关性研究

目的:探讨高脂饮食诱导下肥胖大鼠白色脂肪组织(whiteadiposetissue,WAT)中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisomeproliferator-activatedreceptor-γ,PPARγ)、解偶联蛋白2(uncouplingprotein2,UCP2)基因与血清1α,25-(OH)2-D3的相关性。方法:①36只SD大鼠,标准饲料平衡1周后,随机分成2组,肥胖组和标准对照组,分组后分别用高脂饲料和标准饲料继续饲养6周;②采用ELISA方法测定血清1α,25-(OH)2-D3;③RT-PCR技术分析WAT中PPARγ和UCP2基因mRNA的表达水平。结果:①肥胖组大鼠的体重增值高于标准对照组(P<0.05),提示肥胖模型制备成功。②肥胖大鼠血清1α,25-(OH)2-D3低于标准对照组(P<0.05)。③WAT中PPARγ和UCP2mRNA表达均高于标准对照组(P<0.05)。结论:肥胖大鼠WAT中PPARγ诱导UCP2高表达,1α,25-(OH)2-D3与UCP2mRNA表达趋势相反。     

PPAR-γ2在体质量正常的非酒精性脂肪肝患者腹部皮下和网膜组织中的定量表达

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ2（PPAR-γ2）基因在体质量正常的非酒精性脂肪肝（NAFLD）患者皮下（SC）和网膜（OM）脂肪组织中的表达及其与胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）的关系。方法应用SYBRGreenⅠ实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测26例体质量正常的非酒精性单纯性脂肪肝患者（NAFLD）和26例体质量正常非NAFLD患者对照组腹部皮下（SC）和网膜（OM）脂肪组织PPAR-γ2mRNA的表达水平。结果（1）NAFLD组OM脂肪组织的PPAR-γ2mRNA相对表达量低于SC脂肪组织（t=-1．0,P=0．0002）;对照组两者间表达差异无统计学意义（t=0．30,P=0．77）。（2）NAFLD患者OM脂肪组织PPAR-γ2mRNA表达量低于对照组（t=-3．36,P=0．002）,而SC脂肪组织PPAR-γ2 mRNA表达量则高于对照组,但差异无统计学意义（t=1．80,P=0．08）。（3）相关分析表明NAFLD组HOMA-IR与OM脂肪组织PPAR-γ2mRNA表达呈负相关（r=-0．75,P〈0．01）,与SC脂肪组织PPAR-γ2mRNA表达（r=-0．57,P〈0．01）呈正相关。结论NAFLD患者OM和SC脂肪组织PPAR-γ2mRNA表达异常,且与IR有关。     

高脂膳食对雄性肥胖大鼠肾周脂肪水通道蛋白7表达的影响

目的：观察高脂膳食诱导肥胖模型大鼠肾周脂肪水通道蛋白7mRNA的表达情况,探讨其在肥胖发生中的作用。方法：将48只雄性SD大鼠随机分为对照组和造模组,分别喂基础饲料和高脂饲料。8周末造模组按体重筛选出高脂膳食诱导肥胖模型大鼠（DIO组）继续高脂喂养至20周。于第8周和第20周分别处死一批大鼠,计算Lee’s指数、肝/体比和脂/体比,检测血脂水平,实时定量聚合酶链反应测定肾周脂肪水通道蛋白7 mRNA表达水平。结果：8周末,DIO组大鼠体重、Lee’s指数、肝/体比、脂/体比和血清TG含量明显高于对照组（P〈0.01或P〈0.05）,喂养至20周,上述指标均进一步明显增高（P〈0.01）,血清TC和LDL-C水平也升高（P〈0.01或P〈0.05）。DIO组肾周脂肪组织水通道蛋白7 mRNA表达水平于8周明显上调（P〈0.01）,20周下调（P〈0.05）。结论：肾周脂肪组织水通道蛋白7可能在不同程度肥胖中发挥不同作用。     

中介素1-53对肺缺血再灌注损伤大鼠肺组织PPAR—γ表达的影响

目的观察中介素1—53对大鼠肺缺血再灌注损伤（LIRI）肺组织过氧化物酶增殖物激活受体γ（PPAR-1）的影响。方法将健康Wistar大鼠54只随机分为手术对照组（C组）、缺血再灌注组（IR组）、中介素干预组（D组）。每组分别在缺血45min、再灌注60min、120min3个时点处死6只大鼠,观察肺组织病理形态变化,观察各组肺湿干质量比值（W／D）、CINC-1含量、PPAR-γ mRNA、PPAR-γ蛋白的改变。结果与IR组比较,中介素1—53预处理能够明显升高PPAR-γmRNA（P〈0．05）,减轻肺水肿,并降低CINC-γ蛋白含量（P〈0．05）。结论中介素1—53能上调PPAR-γ的表达,可能通过PPAR-γ的抗炎作用对LIRI起保护作用。     

甘草甜素对体外诱导的酒精性脂肪肝细胞的影响及机制研究

目的 探讨甘草甜素对体外诱导的酒精性脂肪肝(AFL)肝细胞模型的影响及其可能的作用机制.方法 将体外诱导的AFL肝细胞分为对照组、脱离乙醇组、甘草甜素组和继续诱导组,检测细胞内三酰甘油(TG)水平,丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)的泄漏量、细胞周期变化,以及核受体超家族转录因子γ(PPARγ)、含有“碱性螺旋-环-螺旋-亮氨酸拉链”结构的核转录因子1 (SREBP-1)、固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)的mRNA与蛋白表达.结果 甘草甜素可以明显减少细胞凋亡的发生;与对照组相比,甘草甜素组细胞内TG水平及ALT、AST的泄漏量、PPAR-γ、SREBP-1和SCAP蛋白及mR-NA表达均明显降低(P＜0.05).结论 甘草甜素可能通过下调PPAR-γ、SREBP-1、SCAP的表达从而减轻体外诱导AFL肝细胞脂肪改变.     

PPAR-α激动剂增加脂肪酸氧化改善高脂诱导的胰岛素抵抗

目的研究过氧化物酶增殖体激活受体α(peroxisome proliferation activated receptor-α,PPAR-α)激动剂对脂肪酸氧化的影响及其改善高脂诱导的胰岛素抵抗(IR)的机制.方法雄性SD大鼠随机分为三组(每组各10只),A组为饱和脂肪酸(1ard)组,B组为不饱和脂肪酸(soy)组,C组为正常对照组.大鼠饲养四周后将高脂饮食组各分为两组,高脂未干预组和苯扎贝特干预组.包头两周后检测空腹血糖、胰岛素和甘油三酯水平,并取出肝脏、肌肉和脂肪组织,检测组织肉碱脂酰转移酶-1(CPT-1)和PPAR-αmR-NA的表达,mRNA表达采用RT-PCR的方法,以β-actin作为内参照.结果肌肉和脂肪CPT-1mRNA表达在高脂未干预组明显低于苯扎贝物干预组和正常对照组,而未干预组间无显著差异.PPAR-αmRNA表达在各组间均无显著性差异.结论高脂饮食可使肌肉和脂肪组织CPT-1mRNA表达减少,而PPAR-αmR-NA激动剂苯扎贝特则可使CPT-1mRNA表达明显增加,肝脏PPAR-αmRNA表达在各组均无明显改变.这说明高脂饮食可能通过抑制脂肪酸β氧化导致组织细胞内脂质蓄积,最终造成IR,而用PPAR-α基因的抑制或促进作用,而是作为配体与PPAR-α受体结合对脂肪酸的氧化起调节作用.     

白藜芦醇增加3T3-L1脂肪细胞3T3-L1中脂联素表达的作用机制的探讨

 目的探讨白藜芦醇增加3T3-L1脂肪细胞3T3-L1中脂联素表达的作用机制。方法设立空白对照组、白藜芦醇组、肿瘤坏死因子（TNF-α）组及白藜芦醇+TNF-α组。用空白对照、白藜芦醇、肿瘤坏死因子（TNF-α）、或者二者联合处理3T3-L1脂肪细胞。用酶联免疫吸附法测定脂联素水平;实时定量PCR测定脂联素和过氧化物酶体增生物激活受体（PPARPPAR-γ-γ）mRNA水平;免疫蛋白电泳测定脂联素蛋白水平;用PPARPPAR-γ转录因子测定试剂盒测定PPARPPAR-γ活性。结果?与空白对照组相比较,白藜芦醇组中增加PPARPPAR-γ及脂联素mRNA在3T3-L1脂肪细胞中的表达增加（P<0.05）;TNF-α抑制组中脂联素mRNA在分化的3T3-L1脂肪细胞中的表达及释放减少（P<0.05）;。与TNF-α组相比较,白藜芦醇+修复TNF-α组抑制的分化3T3-L1脂肪细胞中脂联素mRNA的表达及分泌有所增加（P<0.05）;白藜芦醇拮抗阻止TNF-α对分化3T3-L1脂肪细胞中PPARPPAR-γmRNA表达及活性的抑制（P<0.05）。结论?白藜芦醇能够通过调节PPARPPAR-γ的转录活性继而拮抗修复TNF-α诱导下调3T3-L1脂肪细胞中脂联素的表达及分泌。     

脂肪组织TLR-4/NF-κB信号通路与高脂饮食诱导小鼠胰岛素抵抗的关系

目的采用高脂饮食诱导小鼠胰岛素抵抗,了解脂肪组织Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR-4）、神经因子κB（nuclear factorκappa B,NF-κB）信号通路与胰岛素抵抗的关系。方法 C57BL/6雄性小鼠80只,随机分为2组,分别给予普通饮食和高脂饮食喂养,每组随机抽样分为4亚组,各5只小鼠,分别于喂养12周后监测体质量、空腹血糖、血清胰岛素水平;处死后取脂肪组织,经苏木精-伊红（Hematoxylin-Eosin,HE）染色观察脂肪组织形态变化;Western blot法检测小鼠脂肪组织TLR-4、NF-κB蛋白表达。免疫组化法检测肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factorαlpha,TNF-α）及白细胞介素6（interleukin 6,IL-6）表达。结果高脂喂养小鼠胰岛素抵抗模型建立成功;高脂组发生胰岛素抵抗,对照组未发生胰岛素抵抗;高脂组小鼠的体质量、空腹血糖、胰岛素水平较对照组明显升高（P〈0.05）,脂肪组织HE染色显示脂肪细胞逐渐增大;脂肪组织TLR-4/NF-κB蛋白从第3天开始出现高表达,到第5天开始达到高峰,并且一直持续在较高水平,同时脂肪细胞也出现TNF-α、IL-6的明显表达。结论高脂饮食可激活脂肪细胞TLR-4/NF-κB信号通路,并与胰岛素抵抗之间具有关联性。     

PPAR-γ配体对特发性血小板减少性紫癜模型小鼠NO生成诱导时间效应的影响

目的探讨ITP模型小鼠体内,过氧化物酶体增生物激活受体γ（PPAR-γ）对一氧化氮（NO）生成的影响及意义。方法90例ITP模型小鼠随机分成罗格列酮试验组、正常对照组和磷酸盐缓冲液（PBS）对照组,每组30例。罗格列酮试验组用20μmol／L的罗格列酮进行灌胃。硝酸还原酶法检测小鼠血液NO含量,RT-PCR法检测血液淋巴细胞PPAR-γmRNA表达情况。结果血清中NO在第6h,12h,18h,24h和30h的含量罗格列酮试验组高于正常对照组及PBS对照组（均P〈0．05）。在罗格列酮试验组中,NO含量及PPAR-γmRNA的表达随着用药时间的延长而增加（均P〈0．05）,NO表达量与PPAR-γ的表达呈正相关（r=0．89,P〈0．05）。结论在ITP小鼠模型内,PPAR-γ活化剂能够以时间依赖的形式增加NO的生成,PPAR-γ可能通过NO途径来发挥相应的生理功能。