异常黑胆质成熟剂乙酸乙酯萃取物对HepG2细胞生长和凋亡及相关基因调控的研究

目的：观察异常黑胆质成熟剂乙酸乙酯萃取物（ASMq-EtOAc）对人肝癌细胞株（HepG2）生长和凋亡及相关基因调控的作用。探讨其抗癌的物质基础和作用机理。方法：采用四氮甲基唑蓝法（MTT）观察了ASMq-EtOAc对HepG2细胞体外生长的抑制作用；采用琼脂糖凝胶电泳技术和流式细胞术观察ASMq-EtOAc对HepG2细胞凋亡的影响；采用逆转录-多聚酶链式反应技术（RT-PCR）观察ASMq-EtOAc对HepG2细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响。结果：ASMq-EtOAc明显抑制HepG2细胞体外生长、诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期、明显提高抑癌基因p53、p21基因mRNA的表迭。对Bcl-2、Bax基因mRNA表达不产生明显的影响。结论：ASMq-EtOAc可能是异常黑胆质成熟剂抗癌作用的主要活性部位之一，其抗癌作用可能通过诱导癌细胞凋亡、改变癌细胞周期和促进抑癌基因p53及p21表达来实现。     

蒜氨酸+蒜酶诱导人胃腺癌细胞凋亡及其分子机制的研究

目的：观察蒜氨酸 蒜酶诱导人胃腺癌细胞(MGC-803)的凋亡作用，并进一步研究Bcl-2、Bax和p21基因在此过程中的作用。方法：将不同浓度的蒜氨酸 蒜酶作用于MGC-803细胞，观察其时间和剂量效应;利用光镜和荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化；利用琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯状带形成;利用RT—PCR法观察蒜氨酸 蒜酶作用过程中Bcl-2、Bax和p21基因的mRNA表达变化。结果：蒜氨酸 蒜酶可抑制MGC-803细胞的生长，存在时间和剂量关系;蒜氨酸 蒜酶可诱导MGC-803细胞凋亡;出现Bcl-2基因mRNA表达下调，Bax和p21基因mRNA个别剂量点的表达。结论：蒜氨酸 蒜酶诱导人胃腺癌细胞MGC-803的凋亡，其机理可能在于Bcl-2基因mRNA表达下调。     

莱菔硫烷对人肝癌HepG-2细胞Bcl-2与Bax基因转录及蛋白表达的影响

目的：研究莱菔硫烷（Sulforaphane,SFN）在体外对HepG-2细胞Bcl-2、Bax基因转录和蛋白表达的影响,探讨SFN诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的机制。方法：不同浓度SFN处理体外培养的HepG-2细胞株48 h,采用SRB法测定SFN对HepG-2细胞增殖的影响;激光共聚焦显微镜观察凋亡细胞形态;流式细胞仪检测SFN作用后的细胞凋亡率;Western blot法和RT-PCR法检测SFN在蛋白和mRNA水平上对Bcl-2和Bax表达的影响。结果：SFN对HepG-2细胞的GI50为9.40μmol/L,TGI为26.68μmol/L;10、20、40μmol/L的SFN作用于HepG-2细胞48 h后,激光共聚焦显微镜下呈现典型的凋亡细胞形态,细胞凋亡率分别为（27.42±0.43）%、（46.53±0.35）%和（58.92±0.48）%（P〈0.01）;细胞内Bcl-2蛋白和mRNA表达水平均显著降低（P〈0.01）,而20、40μmol/L的SFN作用后细胞内Bax蛋白和mRNA的表达水平均显著升高（P〈0.01）,Bcl-2/Bax和Bcl-2 mRNA/Bax mRNA均随SFN剂量的增加显著降低（P〈0.01）,且变化趋势均呈一定的剂量依赖关系。结论：SFN能抑制HepG-2细胞的增殖,诱导HepG-2细胞凋亡,可在翻译和转录水平下调Bcl-2、上调Bax的表达,这可能是SFN诱导HepG-2细胞凋亡的主要机制之一。     

二烯丙基二硫诱导人鼻咽癌CNE1细胞凋亡

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)诱导人鼻咽癌CNEl细胞凋亡的生物学效应.方法 通过MTT法检测DADS对CNE1细胞生长的影响;用光学显微镜、流式细胞仪研究DADS诱导细胞凋亡的作用.免疫组织化学法检测细胞内Bcl-2、Bax蛋白的表达,Western blot法检测细胞内Caspase-3蛋白的表达.结果 DADS能抑制CNE1细胞的生长.DADS处理CNE1细胞后,细胞呈凋亡特征性改变.流式细胞分析显示DADS呈浓度依赖性诱导CNE1细胞凋亡.免疫组织化学结果表明DADS处理细胞后,Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降.随药物浓度的增加Caspase-3蛋白表达增强.结论 DADS具有诱导CNE1细胞凋亡的作用,其机制可能与Bcl-2/Bax下降,促进Caspase-3活化有关.     

罗格列酮体外抗结肠癌作用的实验研究

目的探讨罗格列酮（Rosiglitazone,ROZ）体外抑制结肠癌生长的作用。方法体外培养人结肠癌细胞HT-29,不同浓度ROZ（10、20、40、80μmol／L）干预。MTT法测定细胞增殖,透射电镜、TUNEL法及流式细胞术观察细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测各组细胞中Bax及Bcl-2的表达。结果MTT法显示ROZ抑制HT-29细胞生长,且具有时间和浓度依赖性,透射电镜、TUNEL法及流式细胞术可观察到ROZ具有诱导结肠癌细胞凋亡的作用,免疫组化法显示经ROZ处理后的结肠癌细胞Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减弱。结论ROZ体外具有抑制结肠癌细胞生长的作用,与其诱导细胞凋亡有关,可能通过增强Bax的表达及减弱Bcl-2的表达实现。     

5-杂氮-2′-脱氧胞苷抑制人鼻咽癌CNE细胞生长的机制

目的探讨5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)抑制人鼻咽癌CNE细胞系生长增殖的机制,寻找鼻咽癌治疗的新靶点。方法用5-Aza-CdR处理人鼻咽癌CNE细胞,应用MTT试验观察不同浓度的5-Aza-CdR对癌细胞生长增殖的影响。用甲基化特异性PCR(MSP)分析死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因甲基化状态;逆转录聚合酶链反应、免疫细胞化学、流式细胞仪检测用药前后DAPK mRNA、蛋白的表达情况及细胞凋亡和细胞周期的变化。结果从CNE细胞生长曲线知各浓度的5-Aza-CdR对细胞生长均有抑制作用。未经5-Aza-CdR处理的CNE细胞中DAPK基因CpG岛过甲基化,且DAPK mRNA不表达。经5-Aza-CdR处理后,甲基化的DAPK基因部分去甲基化,用药组的细胞中均有DAPK mRNA表达,且表达随药物浓度增高而增强。免疫细胞化学结果显示,经药物处理后的CNE细胞中DAPK蛋白表达呈阳性,而对照组不表达。流式细胞分析结果显示,药物处理后细胞凋亡率明显增加,且G0/G1期细胞增加,G2/M期减少。结论5-Aza-CdR对体外培养的鼻咽癌细胞生长增殖的抑制作用,可能是由于其能使因甲基化而失活的DAPK基因再转录,诱导该基因重新表达的结果。     

5-杂氮-2''-脱氧胞苷抑制人鼻咽癌CNE细胞生长的机制

目的 探讨5-杂氮-2‘-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)抑制人鼻咽癌CNE细胞系生长增殖的机制,寻找鼻咽癌治疗的新靶点.方法 用5-Aza-CdR处理人鼻咽癌CNE细胞,应用MTT试验观察不同浓度的5-Aza-CdR对癌细胞生长增殖的影响.用甲基化特异性PCR(MSP)分析死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因甲基化状态;逆转录聚合酶链反应、免疫细胞化学、流式细胞仪检测用药前后DAPK mRNA、蛋白的表达情况及细胞凋亡和细胞周期的变化.结果 从CNE细胞生长曲线知各浓度的5-Aza-CdR对细胞生长均有抑制作用.未经5-Aza-CdR处理的CNE细胞中DAPK基因CpG岛过甲基化,且DAPK mRNA不表达.经5-Aza-CdR处理后,甲基化的DAPK基因部分去甲基化,用药组的细胞中均有DAPK mRNA表达,且表达随药物浓度增高而增强.免疫细胞化学结果显示,经药物处理后的CNE细胞中DAPK蛋白表达呈阳性,而对照组不表达.流式细胞分析结果显示,药物处理后细胞凋亡率明显增加,且G0/G1期细胞增加,G2/M期减少.结论 5-Aza-CdR对体外培养的鼻咽癌细胞生长增殖的抑制作用,可能是由于其能使因甲基化而失活的DAPK基因再转录,诱导该基因重新表达的结果.     

茉莉酸甲酯诱导人肝癌细胞HepG2凋亡作用机制的实验研究

目的探讨茉莉酸甲酯诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡的作用机制.方法琼脂糖凝胶电泳检测HepG2细胞凋亡,RT-PCR检测HepG2细胞中Bcl-2、BaxmRNA表达,免疫细胞化学检测HepG2细胞Bcl-2、Bax蛋白表达.结果MeJA作用HepG2细胞48h后：DNA琼脂糖凝胶电泳可见明显典型＂梯＂状条带;细胞Bcl-2mRNA表达水平明显下降（P〈0.05）而BaxmRNA表达水平明显增高（P〈0.05）;Bcl-2蛋白在胞浆中表达水平明显降低（P〈0.01）而Bax蛋白表达水平显著增加（P〈0.01）.结论茉莉酸甲酯通过降低抑凋亡相关基因Bcl-2mRNA及蛋白的表达,上调促凋亡相关基因BaxmRNA及蛋白的表达,从而诱导HepG2细胞凋亡的发生.     

汉防己甲素对兔视网膜色素上皮细胞Bax、Bcl-2表达的影响

目的：评价汉防己甲素（Tet）对兔视网膜色素上皮（RPE）细胞增殖的抑制作用及对凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达的影响。方法：MTT法检测Tet对体外培养兔RPE细胞增生的影响,流式细胞仪检测Tet对兔RPE细胞增殖周期、凋亡率及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。结果：Tet对兔RPE细胞的抑制率均随作用时间的延长而增高,各时间点之间差异均有统计学意义（P〈0.05）;抑制率均随药物质量浓度的增高而增高,除Tet10μg/ml、15μg/ml外,各质量浓度之间差异有统计学意义（P〈0.05）;Tet10μg/ml作用72 h后,出现G0/G1期细胞明显增多,S期与G2/M期细胞降低,Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达下降,Bcl-2/Bax比值下降,以上与对照组相比均有显著性差异（P〈0.05）。结论：Tet可能通过干预RPE细胞Bax与Bcl-2蛋白的表达而对其增殖产生抑制作用。     

邻苯二甲酸二乙基己酯体外对大鼠卵巢颗粒细胞Bax和Bcl-2基因表达的影响

【目的】通过对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞进行邻苯二甲酸二乙基己酯（di-2-ethylhexylphthalate,DEHP）染毒,探讨DEHP体外对大鼠卵巢颗粒细胞Bax和Bcl-2基因表达及细胞凋亡的影响。【方法】体外分离和原代培养未成熟大鼠卵巢颗粒细胞,用不同浓度的DEHP（10、50、nnmol／L）染毒24h。荧光定量PCR法检测Bax和Bcl-2基因mRNA表达水平,Weas[ernblot检测Bax和Bcl-2蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率。【结果】与对照组比较,大鼠卵巢颗粒细胞Bcl-2基因mRNA和蛋白表达下降（P〈0．05）,Bax基因mRNA和蛋F1表达增加（P〈0．05）,同时细胞凋亡率增加（P〈0．05）,呈浓度依赖关系。【结论】DEHP可通过下调Bcl-2基因表达和上调Bax基因表达而诱导大鼠卵巢颗粒细胞凋亡,进而影响卵巢功能。     

粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖与凋亡的影响

目的：通过观察粉防己碱（Tetrandrine）对人肝癌7402细胞株增殖与凋亡的影响，初步探讨粉防己碱对肝癌的体外抗肿瘤效应。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、集落形成实验观察粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖的抑制效应，利用细胞DNA琼脂糖凝胶电泳、细胞凋亡荧光染色法及流式细胞术检测粉防己碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用，以免疫细胞化学法检测粉防己碱对Bcl-2和Bax蛋白表达水平的影响。结果：MTT比色法、集落形成实验显示，粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖有抑制作用，其抑制效应具有剂量依赖的特点，细胞凋亡荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术表明，粉防己碱可诱导7402细胞凋亡，免疫细胞化学法显示，粉防己碱上调Bax蛋白表达，下调Bcl-2蛋白表达。结论：粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖的抑制效应具有剂量依赖性，并可诱导细胞凋亡，其抗肿瘤效应可能与凋亡相关基因表达的调控有关。     

粉防己碱逆转膀胱癌BIU-87/ADM的凋亡抗性及可能机制的研究

目的 探讨粉防己碱(Tet)逆转人膀胱癌耐阿霉素细胞株BIU-87/ADM的凋亡抗性及其可能机制.方法 将膀胱癌耐药株和敏感株分为对照组、粉防己碱组、阿霉素组和阿霉素联合粉防己碱组(n=6),其中阿霉素药物作用浓度为1.5 μg/ml,粉防己碱为1 μg/ml.应用AO/EB染色结合荧光显微镜技术检测细胞凋亡,JC-1...     

Effects of apigenin on cell proliferation of human pancreatic carcinoma cell line BxPC-3 in vitro

Objective： To observe the effects of apigenin on cell proliferation of human pancreatic carcinoma cell line BxPC-3 in vitro. Methods：The inhibitive effects of apigenin at different concentrations （0 μmol/L, 100 μmol/L, 200 μmoL/L, and 400 μmol/L） on human pancreatic carcinoma cell line BxPC-3 were detected by MTT assays, transmission electron microscope, agarose gel electrophoresis and flow cytometry. The immunohistochemistry was used to detect the expression of Bcl-2 and Bax gene. Results： Apigenin at different concentrations could inhibit the proliferation of human pancreatic carcinoma cell lines BxPC-3, and the inhibitive effect was dose-dependent. The cell cycle of pancreatic carcinoma cells was arrested at G2/M phase. The results of immunohistochemistry showed that the density of apigenin increased, and the expression of Bcl-2 gene was reduced gradually, At the same time the expression of Bax gene was enhanced. Conclusion ：Apigenin could inhibit the proliferation of human pancreatic carcinoma cell lines BxPC-3 in vitro. The effect of apoptosis was accompanied with the expression of Bcl-2 decrease and Bax increase.     

醋酸铅对小鼠胸腺细胞凋亡及Bax和Bcl-2基因表达的影响

目的探讨醋酸铅诱导小鼠胸腺细胞凋亡及对Bax和Bc l-2基因表达的影响。方法以3种不同浓度的醋酸铅灌胃饲养小鼠46 d后,取胸腺组织,用琼脂糖凝胶电泳法检测胸腺细胞凋亡情况,Western blot法检测胸腺组织中Bax和Bc l-2的表达情况。结果铅处理组小鼠胸腺细胞有被降解的凋亡带,并且降解条带的量随着染铅剂量的增加而增加;小鼠胸腺细胞Bax表达量均高于对照组,并且表达量随着染铅剂量增加而升高(P<0.05);而Bc l-2表达量均低于对照组,且表达量随着染铅剂量的增加而递减(P<0.05),Bc l-2/Bax表达比明显降低(P<0.01)。结论醋酸铅可诱发小鼠胸腺细胞凋亡,,促进胸腺细胞中Bax基因的表达,抑制Bc l-2基因的表达,降低Bc l-2/Bax表达比。     

Cx43沉默抑制机械应力诱导的小鼠软骨细胞凋亡

目的：探讨缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)沉默对机械应力诱导的软骨细胞凋亡的影响。方法：将小鼠软骨细胞ATDC5分为空白组、机械应力组、Cx43 siRNA转染组、scramble siRNA转染组、机械应力+scramble组、机械应力+siCx43组。用Flexcell FX-5000系统对体外培养的ATDC5细胞加载机械应力;用定量RT-PCR(quantitative RT-PCR,RT-qPCR)和Western印迹分别检测细胞Cx43 mRNA和蛋白表达水平;用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞活性;用流式细胞术检测细胞凋亡情况;用比色法检测caspase-3活性;用Western印迹检测Bcl-2,Bax,p-JNK和JNK的蛋白表达。结果：经机械应力诱导后,ATDC5细胞Cx43 mRNA和蛋白的表达显著升高(均P<0.05)。转染Cx43 siRNA显著降低细胞Cx43 mRNA和蛋白水平(均P<0.05)。在机械应力刺激下,ATDC5细胞活性显著降低,凋亡增多,caspase-3活性和Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax降低(均P<0.05)。而Cx43沉默显著增加机械应力下ATDC5细胞活性,减少凋亡,降低caspase-3活性和Bax蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax(均P<0.05)。此外,Cx43 siRNA显著抑制机械应力诱导的p-JNK蛋白的表达(P<0.05)。结论：Cx43沉默可能通过调节JNK信号通路,抑制机械应力作用下小鼠软骨细胞凋亡。     

双氢青蒿素对前列腺癌裸鼠种植瘤Bcl-2和Bax表达的调控

目的研究双氢青蒿素(DHA)诱导前列腺癌细胞凋亡作用及其机制。方法采用人前列腺癌PC-3细胞株建立裸鼠种植瘤模型,将20只模型鼠随机平均分为对照组、溶剂(DMSO)组、DHA200μmol/kg体质量组和DHA100μmol/kg体质量组,经13d干预后,电镜观察肿瘤组织形态学表现;免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达水平;TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡。结果与对照组及DMSO组比较,DHA治疗组电镜观察肿瘤组织中散在凋亡细胞及凋亡小体;免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2表达减弱、Bax表达增强,差异均有统计学意义(P<0.05);TUNEL检测结果显示肿瘤组织细胞凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论DHA具有较强的诱导前列腺癌细胞凋亡作用,这种作用可能是通过下调Bcl-2和上调Bax表达实现的。     

Inhibitory Effect of Tetramethylpyrazine Preconditioning on Overload Training-Induced Myocardial Apoptosis in Rats

Objective: To investigate the inhibitory effect of tetramethylpyrazine (Tet) preconditioning on overload training-induced myocardial apoptosis in rats, and to explore cardioprotective mechanisms of Tet preconditioning. Methods: A total of 25 male Sprague-Dawley rats were randomly divided into three groups, including the control group (n=5), the overload training group (overload training for 8 weeks, n=10), and the Tet preconditioning group (Tet preconditioning for 8 weeks before overload training, n=10). After 8 weeks, cardiac structure and myocardial apoptosis were analyzed by histology, transmission electron microscopy, and terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay staining. The expressions of Bcl-2, Bax, Caspase-3, and Caspase-9 in myocardium were evaluated by immunohistochemical staining. Results: Overload training caused swelling, disorder, partial rupture, and necrosis of myocardial focal necrotic fibers, as well as mitochondrial vacuolization, cristae rupturing, and blurring. In contrast, Tet preconditioning attenuated the swelling of myocardial fibers, decreased the amount of ruptured fibers, and inhibited mitochondrial vacuolization, resulting in clear cristae. Overload training significantly increased Bax expression and decreased Bcl-2/Bax ratio when compared with the control group (P<0.01). Conversely, Tet preconditioning significantly increased Bcl-2 expression and the Bcl-2/Bax ratio as compared with the overload training group (P<0.05). Overload training dramatically increased the expressions of Caspase-3 and Caspase-9 when compared with the control group (P<0.05). Following Tet preconditioning, the expression of Caspase-3 was significantly reduced compared with the overload training group (P<0.05), while Caspase-9 expression showed a slight decline (P>0.05). Conclusion: Tet preconditioning increased the expression of Bcl-2 and reduced the expression of Caspase-3, thereby attenuating overload training-induced myocardial apoptosis, protecting against overload training-induced myocardial injury, and reducing damage to the myocardium due to overload training.     

鬼臼毒衍生物诱导人肺腺癌A549细胞凋亡

目的: 研究鬼臼素衍生物CN-2对人肺腺癌细胞A549的凋亡诱导作用,并对其分子机制进行初步探讨. 方法: 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、电子显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳和细胞周期分析法检测A549细胞凋亡;采用流式细胞术(FCM)测定细胞Bcl-2, Fas及caspase3蛋白表达水平. 结果: CN-2对A549细胞增殖具有明显的剂量和时间依赖的抑制作用,24, 48, 72 h IC50分别为108.20, 41.28, 20.67 mg/L,电镜观察呈现典型的凋亡形态改变;DNA电泳可见明显的梯状条带;细胞周期分析显示S期细胞数明显增多,出现S/G2期阻滞;CN-2能显著降低Bcl-2蛋白表达(P＜0.05);Fas蛋白表达水平未见明显变化. 结论: CN-2通过诱导A549细胞发生S/G2期阻滞而抑制其增殖,其机制可能与下调Bcl-2表达及阻滞细胞周期有关.     

散结抗瘤方体内和体外抑瘤作用的实验研究

目的 探讨散结抗瘤方体内和体外抗肿瘤的可能机制。方法体内实验：对荷瘤小鼠（SRS-82瘤株）用散结抗瘤方煎剂灌胃，计算抑瘤率，电镜下观察肿瘤细胞形态，并提取肿瘤细胞DNA做琼脂糖凝胶电泳。体外实验：传代培养SRS-82细胞，用散结抗瘤方含药血清干预细胞后，检测活细胞数、细胞凋亡率、Bcl-2蛋白MMP-2mRNA的表达强度。结果与空白对照组比较，散结抗瘤方组瘤重显著减轻，电镜下可见肿瘤细胞出现凋亡特征性改变；细胞活力明显降低．细胞凋亡率明显升高，细胞Bcl-2蛋白的表达强度降低。结论散结抗瘤方在体内有明显的抑瘤作用。在体外对肿瘤细胞也有明显的抑制增殖作用。该方抑瘤作用可能与其诱导肿瘤细胞凋亡密切相关，机制可能与下调抑制凋亡基因Bcl-2的表达有关。散结抗瘤方对肿瘤细胞MMP-2的表达没有影响。