硫芥对大鼠脾脏淋巴细胞线粒体的损伤作用

目的观察硫芥对大鼠脾脏淋巴细胞线粒体的损伤作用.方法用密度梯度离心法分离大鼠脾淋巴细胞,与硫芥共同进行体外培养.用琼脂糖DNA凝胶电泳观察细胞凋亡的发生;用Western blot观察Cyt-c释放.用MTT法检测线粒体功能状态,以罗丹明123标记的荧光探针检测线粒体跨膜电位.结果 100 μmol/L硫芥作用4 h线粒体功能就有降低,线粒体跨膜电位降低,二者间呈直线相关.硫芥中毒早期即可引起淋巴细胞线粒体细胞色素C释放和细胞凋亡(DNA ladder).结论硫芥可引起大鼠脾淋巴细胞线粒体明显损伤,线粒体参与了硫芥的细胞毒性作用过程.     

低剂量硫芥诱导大鼠脾脏氧化应激状态的改变

目的探讨低剂量硫芥诱导大鼠脾脏氧化应激状态的改变及其意义.方法皮下注射硫芥,梯度离心法分离大鼠脾线粒体.用紫外分光光度法检测ROS、SOD、MDA及细胞色素含量;荧光分光法检测细胞内GSH含量;HE染色法观察脾脏病理损伤.结果低剂量硫芥作用下,脾脏出现水肿;组织和线粒体内ROS、SOD、MDA、GSH、GSSG含量出现不同程度的改变;线粒体电子传递链成分(细胞色素)含量出现不同程度的丢失.结论氧化应激状态的改变是低剂量硫芥诱导机体免疫器官(脾)损伤的毒作用机制之一.     

硫芥对大鼠淋巴细胞谷胱甘肽含量的影响

目的探讨硫芥中毒后淋巴细胞谷胱甘肽含量变化.方法用密度梯度离心法分离大鼠脾淋巴细胞,与硫芥共同进行体外培养.用MTT法测定细胞活力.以荧光分光光度计法测定细胞还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、氧化型谷胱甘肽(oxidizedglutathione,GSSG)含量变化,结果淋巴细胞活力在硫芥中毒后降低水平与细胞内GSH含量呈直线相关关系.硫芥中毒8 hGSH含量开始下降,8～12 h维持在低水平,24～48hGSH进一步下降;GSSG含量24～48h显著低于对照水平;GSH/GSSG比值在8 h后显著降低.结论硫芥中毒淋巴细胞活力与谷胱甘肽含量的变化存在显著相关性.     

硫芥对大鼠淋巴细胞DNA及白细胞介素的影响

目的　探讨硫芥中毒动物淋巴细胞的损伤特点及中毒早期白细胞介素的浓度变化作为硫芥毒性损伤诊断的可能性 .方法　分离大鼠脾淋巴细胞培养 ,经 10～ 10 0 0 μmol·L- 1 芥子气染毒 30 min,以单细胞凝胶电泳法 (SCG )检测DNA损伤 ;同时测定硫芥中毒大鼠血液 IL- 2和 IL- 6浓度 .结果　中毒后淋巴细胞 DNA迁移率和受损细胞百分率呈时间和剂量依赖关系 (r=0 .6 3,P<0 .0 1) ;培养液中 IL- 2和IL- 6浓度明显降低 ,IL- 6含量为 (46 8± 16 ) μg· L- 1 ,4 h开始下降 ,72 h降至 (177± 16 )μg· L- 1 (P<0 .0 1) ,12 0 h有所回升 ,但仍然明显低与对照 (P<0 .0 1) .其中 IL- 2几乎难以检出 .结论　硫芥中毒早期机体免疫系统受到明显抑制 ,SCG检测 DNA损伤用作评价硫芥细胞毒性指标在诊断方面具有一定价值     

硫芥对中国仓鼠肺成纤维细胞DNA的损伤及还原型谷胱甘肽的保护作用

目的 研究硫芥对中国仓鼠肺成纤维细胞（Chinese hamster fibroblast cell line，CHL）DNA的损伤作用及还原型谷胱甘肽（reduced glutathione，GSH）的保护作用。方法 将CHL分为2组，均以10、100、1000μmol／L硫芥染毒，其中1组以10mmol/L的GSH加以保护，分别在不同时间点（即刻，6、24、48、72 h）收集细胞进行单细胞凝胶电泳（single cell gel electrophoresis assay，SCG）检测。结果 硫芥染毒组CHL的DNA迁移率和迁移度在染毒后6、24、48、72h均显著高于相应时刻的生理盐水组和溶剂对照组（P〈0．01）。GSH保护组DNA迁移率和迁移度亦显著增高（P〈0．01），但较之单纯硫芥染毒组DNA迁移率下降了13．0％-52．5％，迁移度亦显著下降。结论 硫芥对CHL的DNA有损伤作用，呈时间、剂量关系。GSH对DNA的损伤有一定保护作用。     

硫芥淋巴细胞毒性作用与caspase-3表达

目的 探讨硫芥对淋巴细胞的毒性作用方式和分子机制。方法 利用硫芥诱导的体外培养淋巴细胞，采用荧光分光光度法检测DNA的损伤，运用逆转录．聚合酶链式反应(RBPCR)和Western blot方法检测胱氨酸蛋白酶caspase-3的基因和蛋白表达及活化。结果 硫芥可导致淋巴细胞DNA损伤，Caspase-3在基因水平和蛋白水平上表达增加，同时发生活化作用，具有时间依赖效应。结论 硫芥通过caspase依赖途径诱导淋巴细胞毒作用，Caspase-3的表达与活化参与该过程，影响着淋巴细胞的毒性作用。     

还原型谷胱甘肽合用粉防己碱对帕金森病大鼠脑线粒体酶复合体I及活性氧的影响

目的 观察还原型谷胱甘肽(GSH)合用粉防己碱(Tet)对帕金森病(PD)大鼠氧化应激水平的影响并探讨其作用机制.方法 应用6-羟基多巴立体定向注射制作PD大鼠模型,将成功大鼠模型随机分为模型组、GSH组、GSH Tet组、左旋多巴组,另设正常对照组,给药50d后测定鼠脑黑质线粒体酶复合体I活性及纹状体活性氧(ROS)含量.结果 GSH Tet对PD大鼠黑质线粒体酶复合体I有保护作用,GSH Tet能明显降低PD大鼠纹状体活性氧(ROS)水平.结论 GSH Tet能减轻PD大鼠黑质及纹状体氧化应激损伤,并对线粒体呼吸链有一定保护作用.     

硫芥中毒犬外周血IL-2、IL-6含量变化和淋巴细胞DNA损伤

目的 研究硫芥中毒犬外周血IL-2、IL-6变化和淋巴细胞DNA损伤的规律。方法 重庆家犬硫芥中毒(16mg/kg，sc)。中毒后不同时相点取血，分离血清和淋巴细胞。采用放射免疫方法测定血清中IL-2、IL-6含量，以单细胞凝胶电泳技术测淋巴细胞DNA损伤程度。结果 中毒后4h血清IL-2、IL-6含量开始下降，72h达最低值，120h开始恢复。单细胞电泳检测结果提示，硫芥导致明显的淋巴细胞彗星现象。受损细胞率、淋巴细胞DNA片段迁徙度于中毒4h即开始升高，24～72h持续升高。结论 硫芥中毒导致发生早且持续时间较长的犬外周血IL-2、IL-6含量下降和淋巴细胞DNA损伤。     

黄素单核苷酸对羟自由基损伤的大鼠肝线粒体复合物Ⅰ的保护作用

目的:观察黄素单核苷酸(FMN) 对羟自由基(OH·) 损伤线粒体酶复合物1(complex Ⅰ) 的作用,分析FMN与complex Ⅰ的相互作用机制.方法:差速离心法分离大鼠肝线粒体,OH·体外损伤线粒体,氧电极法测定线粒体耗氧速率,比色法检测线粒体complex Ⅰ动力学参数及线粒体内MDA、GSH 含量及SOD活性.结果:OH·损伤后,线粒体3态、4态(state3,state4) 耗氧速率、complex Ⅰ最大反应速度(Vm) 降低(P<0.05) ,但呼吸控制率(respiratory control ratio,RCR) 、磷氧比(P/O) 及complex Ⅰ米氏常数(Km) 不变,线粒体中GSH含量下降(P<0.05) ,SOD活性降低(P<0.05) ,MDA含量升高.损伤线粒体补充FMN 165 ng/ml 可部分恢复complex Ⅰ呼吸途径state3耗氧速率(P<0.05) ,补充FMN 82.5～165 ng/mg可显著提高OH·损伤的线粒体复合物Ⅰ的Vm(P<0.05) .损伤线粒体补充较低剂量的FMN(FMN<82.5 ng FMN/ml),线粒体中GSH、SOD、MDA含量不发生变化,在补充较高剂量FMN(>165 ng FMN/ml)时 ,SOD活性升高(P<0.05) ,但线粒体MDA含量升高(P<0.05) 、GSH含量下降(P<0.05) .结论:FMN能够提高氧化损伤线粒体复合物Ⅰ活性,促进complex Ⅰ呼吸途径的state3耗氧速率.FMN不能直接清除OH·及自由基,可能通过保护complex Ⅰ中的酶结合/活性位点免受OH·等自由基攻击从而维持酶活性.     

CLA对2型糖尿病大鼠肝脏线粒体呼吸链酶活性及氧化应激的影响

目的:观察共轭亚油酸(CLA)对2型糖尿病(DM2)大鼠肝脏线粒体呼吸链酶活性及肝内氧化应激(OS)的影响.方法:将60只SD大鼠随机分为阴性对照组,DM组和CLA治疗组.高糖、高脂及高胆固醇饲料诱导胰岛抵抗联合ip链脲佐菌素建立大鼠DM2模型.血糖仪检测血糖浓度,放免法检测血清胰岛素水平,生化法测定肝组织丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性,Clark氧电极法观察大鼠肝脏线粒体呼吸链酶活性.结果:成功诱导大鼠DM2模型,与对照组比,DM组大鼠血糖浓度、血清胰岛素水平、肝脏MDA含量明显升高(P＜0.05),同时肝脏线粒体呼吸链酶活性以及抗氧化酶活性(SOD,CAT)及GSH显著降低(P＜0.05),与DM组相比,CLA治疗组大鼠以上各项指标均有改善,并存在一定的剂量效应关系.结论:CLA通过抑制氧化应激增强大鼠肝脏线粒体呼吸链酶活性改善了DM大鼠肝脏的能量代谢障碍,对DM引起的氧化损伤有保护作用.