LPIN 1基因的最新研究进展

磷脂酸磷酸水解酶（Lipid phosphate phosphohydrolase）基因，也称为脂素基因（LPIN），是新近发现的一个可以双向调控机体脂肪代谢的一个基因家族。这个基因家族包括LPIN 1、LPIN 2、LPIN 3（哺乳动物），其中LPIN 1基因是调控脂肪组织形成与分化的关键基因，LPIN 1基因表达具有影响脂肪沉积的效应，LPIN 1基因的不表达、正常表达、过量表达均能引起脂肪沉积的剧烈变化。本文主要从LPIN 1基因的结构和功能等方面对LPIN 1基因的最新研究进展进行了简要综述。     

Sox基因对神经干细胞发育及神经损伤后修复的研究进展

<正>Sox基因的研究开展于20世纪90年代,人们在研究哺乳动物性别决定基因的相关片段时;发现了决定性别的SRY基因~([1])。研究者在研究SRY基因时发现了一些DNA片段,即HMG-box区(大约由80个核苷酸保守序列组成),学术界将与其相关的一类相似基因统称为Sox基因~([2])。随着科学技术水平的提高以及研究的深入,研究者发现Sox基因拥有很多亚族。至2015年已发现7个亚族,它们各司其职对生物体有着     

人源化BPVL1-GFP融合基因的构建以及在哺乳动物细胞中的瞬时表达

目的：构建牛乳头瘤病毒晚期基因L1-GFP融合基因真核表达质粒，自细胞水平探讨优化密码对晚期基因L1蛋白瞬时表达的影响。方法：用PCR方法扩增获得优化密码人源化BPVL1(hL1)基因。TA克隆后，酶切释放hL1基因，定向插入质粒pET30a／NM-GFP的BamHⅠ、SacⅡ位点，获得正确框架的hL1-GFP融合基因。再用BamHⅠ、NotⅠ酶切释放hL1-GFP融合基因，与pcDNA3载体定向重组构建真核表达质粒pcDNA3／hL1-GFP。同法克隆获得含野生型BPVL1-GFP融合基因的表达质粒pcDNA3／wL1-GFP。用质粒DNA分别在体外转染哺乳动物细胞COS-1细胞和Wish细胞，荧光显微镜下观察L1-GFP融合蛋白的瞬时表达情况。结果：酶切鉴定表明成功构建了含wL1-GFP、hL1-GFP的真核表达栽体，与pcDNA3／wL1-GFP相比，pcDNA3／kL1-GFP在COS-1细胞、WISH细胞中获得有效表达。结论：优化密码能提高乳头瘤病毒L1基因在哺乳动物细胞内的蛋白表达。     

应用人SRY基因探针对2例性分化异常患者的分子细胞遗传学研究

应用人ＳＲＹ基因探针对２例性分化异常患者的分子细胞遗传学研究上海市儿童医院，上海医学遗传研究所黄英，任兆瑞，曾溢滔哺乳动物Ｙ染色体短臂上性别决定的主宰基因ＳＲＹ（ＳｅｘｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｒｅｇｉｓｎｏｆｔｈｅＹ）［１～３］是一个高度保守的，能编码...     

SRY基因阴性男性性反转综合征1例

目的 探讨SRY基因阴性46,XX男性性反转综合征的临床表现、诊治要点及可能的发生机制。方法 分析1例46,XX男性性反转综合征患者的临床表现、激素水平、核型分析结果,采用聚合酶链反应（PCR）对 其Y染色体上的性别决定区（SRY）基因进行检测。结果 患者核型为46,XX,通过PCR扩增检测发现患者SRY 基因阴性。结论 除SRY基因外,SOX9、SOX10、DAX1等基因可能在性别决定中起着重要的作用,它们的突 变可导致不同类型的性反转。     

有多少基因参与哺乳动物的性别决定

哺乳动物性别决定的遗传机制到目前为止仍然没有弄清楚。人类和小鼠的y连锁及x连锁锌指基因(Zincfingergenes)已经克隆出来,且被确认。最初认为y连锁锌指基因是睾丸决定因子(testisdetermingfactor),但目前看来,这个基因似乎不是启动一系列导致性别决定反应的主管基因(mastergene)。人类睾丸决定基因定位在y染色体短臂的非同源区,很接近标志人伪常染色体区(Pseudoautosomalregion)边端的Alu重复序列。近来发现这个区有一个新的基因,有可能是雄性决定因子。在人类、实验小鼠及田鼠中,性别决定出现的异常情况表明,睾丸发育依赖于睾丸决定基因及其与x连锁基因、常染色体基因的共同作用。卵巢发育可能依赖于睾丸决定因子的缺失,也可能还依赖于参与性别决定的常染色体基因及x连锁基因转录物的选择性拼接(alternativesplicing)。     

转导Caspase-1基因对人胃癌细胞药物敏感性的影响

许多研究表明.化学药物对敏感肿瘤细胞有促凋亡作用[1,2]胃癌的发生发展与肿瘤细胞凋亡受抑有关,而且胃癌细胞对化疗药物的敏感性差.Caspase-1基因是哺乳动物细胞促凋亡基因.转染该基因可使肿瘤细胞的增殖受抑,但对化疗药物的敏感性如何尚未见报道.为全面了解转导Caspase-1基因后肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,本实验观察了4种化疗药物对转染Caspase-1基因的胃癌细胞的杀伤作用.     

CYP1A1基因 Msp1多态性与广西壮族食管癌的易感性

目的:探讨CYP1A1基因 Msp1多态性与广西壮族食管癌易感性之间的相关性.方法:采用PCR-RFLP技术检测98例食管癌患者(广西壮族)和100例健康人CYP 1A1基因 Msp1多态性的分布频率,分析其与广西壮族食管癌易感性之间的相关性,以及CYP1A1基因 Msp1多态性与吸烟、饮酒在食管癌易感性中的交互作用.结果:CYP 1A1 Msp1 3种基因型(野生型基因 m1/m1型、突变杂合型基因 m1/m2型、突变纯合型基因 m2/m2型)分布频率在食管癌组和正常对照组分别为38.8%、41.8%、19.4%及40.0%、43.0%、17.0%,两组间的频率分布在性别、年龄、吸烟、饮酒情况调整后差异无统计学意义(P>0.05).携带CYP1A1 Msp1 m2基因型的个体较携带野生型基因 m1/m1型的个体患食管癌的风险增加(ORa=1.420),但差异无统计学意义(Pa=0.387).按照吸烟、饮酒因素分层后,这种差异仍无统计学意义(均Pa>0.05).结论:单一基因CYP1A1 Msp1位点多态未表明与广西壮族食管癌易感性相关.     

抑制素的研究进展

一、PHB基因 抑制素（prohibitin，PHB），1989年由MeClung等首先克隆出哺乳动物的PHB基因。PHB基因广泛存在于哺乳动物、植物、果蝇、酵母、原虫及细菌等各种生物中。基于与酵母抑制素序列的相似性，人抑制素被划分为两个家族，即PHB1和PHB2。     

CYPIA1,GSTT1,GSTM1基因多态性与宁夏回族食管癌易感性的研究

目的研究探讨CYP1A1,GSTT1,GSTM1基因多态性与宁夏回族食管癌易感性的关系。方法收集40例经术后病理确诊为食管癌的回族住院病例的石蜡组织切片和80例健康回族查体者外周血标本,树脂型DNA提取试剂盒提取DNA、PCR扩增特异性片段,酶切、电泳。结果食管癌组与对照组间年龄、性别、吸烟、饮酒差异无统计学意义(P>0.05);CYP1A1基因型的Msp1位点的3种基因型在食管癌组及对照组的分布差异无统计学意义(P>0.05);GSTT1(-)基因型(P<0.05)在食管癌组及对照组间差异有统计学意义。GSTM1(-)基因型(P>0.05)在食管癌组与对照组中的分布无统计学意义。T1(-)M1(+)、T1(+)M1(+)在食管癌组及对照组中的分布差异有统计学意义(P<0.05)。CYP1A1,GSTT1及GSTM1联合基因型在食管癌组及对照组中分布无统计学意义,但T1(-)M1(-)tc/cc联合基因在食管癌组呈现增高倾向(OR=2.212)。结论 CYP1A1的Msp1位点多态性不能单独导致回族食管癌的发生,GSTT1(-)基因型是宁夏回族食管癌发生的危险因素。GSTT1(+)GSTM1(+)在回族食管癌组及回族正常对照组中分布有明显差异,食管癌的发生可能与GSTT1及GSTM1基因型缺失有关。     

体外扩增人类性别决定基因作产前性别测定的初步研究

根据位于人类Ｙ染色体短臂的性别决定区ＳＲＹ基因的序列，人工合成一对引物。以正常男、女性白细胞ＤＮＡ为对照，以ＰＣＲ技术体外扩增了１６例绒毛ＤＮＡ样本，结果有９例出现Ｙ特异性扩增带，余为阴性，说明这９例为男性胎儿，另７例为女性胎儿。用扩增性别决定基因的方法作产前性别测定，在临床上可用于Ｘ连锁遗传病的辅助诊断和性异常的研究。     

Analysis of SRY Gene in 8 Cases of Sex Abnormality

In order to investigate the relationship between sex dysplasia and sex-determining region Y (SRY) gene, 8 patients with sexual abnormality were analyzed by cytogenetic and molecular genetic methods. Fluorescence in situ hybridization (FISH) using PY3.4, X alpha satellite, and SRY probes was performed in each case to analyze the sex chromosome translocation and gene translocation. SRY gene was amplified by polymerase chain reaction (PCR) and its mutation was detected by direct sequencing. The results showed that among 8 patients, 5 were positive for SRY and the remaining negative for SRY. In the patients positive for SRY genes, 3 presented testes and the left 2 streak ovaries. In the patients negative for SRY, only one case presented testes, while 2 ovaries. Direct sequencing demonstrated that all SRY genes were normal in the patients positive for SRY genes. FISH technique demonstrated that SRY genes translocated from Ypter to Xpter in 2 46,XX phenotypic males positive for SRY genes. It was concluded that SRY gene is strongly in volved inmale sex determination, while a sequence of other genes may be taken into account in sexual development.     

利用CRISPR/Cas9系统建立叉头框G1基因敲除的人胚胎干细胞系

目的 采用成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9（CRISPR/Cas9）基因编辑技术构建叉头框G1（FOXG1）基因敲除的人胚胎干细胞系,研究FOXG1基因在人胚胎干细胞早期神经诱导过程中的作用。方法 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,通过转染2个向导RNA（gRNA）诱导人胚胎干细胞FOXG1基因的大片段敲除,经单克隆筛选、测序分析和蛋白质印迹分析验证获得FOXG1基因敲除的人胚胎干细胞;通过细胞免疫荧光染色、qRT-PCR检测FOXG1基因敲除前后细胞在早期神经诱导过程中关键标志物配对框基因6（PAX6）、性别决定区Y框蛋白2（SOX2）和正小齿同源物2（OTX2）的表达。结果 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功获得FOXG1基因大片段缺失的人胚胎干细胞,细胞免疫荧光染色、qRT-PCR结果均显示人胚胎干细胞早期神经诱导过程中的关键标志物PAX6、SOX2和OTX2的表达并未受FOXG1缺失的影响。结论 通过2个gRNA共转染可以快捷地诱导人胚胎干细胞FOXG1基因的大片段敲除。FOXG1基因缺失并不影响人胚胎干细胞的早期神经诱导。     

人Tim-3基因克隆及其转基因细胞的构建

目的克隆人Tim-3基因,并构建含有该目的基因的重组真核表达载体,获得稳定表达人Tim-3分子的L929基因转染细胞。方法采用RT-PCR方法从人外周血T淋巴细胞中克隆出Tim-3基因,通过双酶切（XhoI,Sa-lI）装入真核表达载体pIRES2-EGFP中,脂质体法转染L929细胞,72 h后加入G418进行筛选,挑选出能稳定表达Tim-3蛋白的L929细胞株。结果构建了用于表达的含Tim-3基因的重组真核表达载体,经脂质体转染L929细胞,继而经RT-PCR和流式细胞术表型检测,筛选出稳定表达人Tim-3蛋白的L929转基因细胞。结论构建了含人Tim-3基因重组真核表达载体和稳定表达人Tim-3蛋白的细胞株,为该基因功能的后续研究和单克隆抗体的研制奠定了基础。     

胃癌组织中TGFBR1的基因突变研究

目的揭示胃癌组织的转化生长因子-β受体1（TGFBR1）的突变位点,探索其在胃癌发生发展过程中的作用。方法将20例胃癌组织标本进行DNA提取,PCR扩增,应用Sanger双脱氧测序法进行TGFBR1全部外显子的基因测序,再对序列进行分析,找到TGFBR1的基因突变位点。结果在6例标本中得到了TGFBR1外显子9的7个基因突变位点（ c.1470 G〉A;c.1491 G〉A;c.1493 G〉A;c.1543 G〉A;c.1624 G〉A;c.1675 G〉A;c.1684 G〉A）,均是第一次发现和报道。 TGFBR1的基因突变与胃癌患者的年龄、性别、分化程度、淋巴结转移及分期均无关（P〉0.05）。结论本实验发现7个未报道的TGFBR1基因突变位点,其中3个错义突变（c.1470G〉A;c.1491 G〉A;c.1493 G〉A）可能是胃癌患者的致病原因之一,对揭示TGFBR1与胃癌的确切关系有重要意义。     

人DC-SIGN基因克隆及其转基因细胞的构建

目的克隆人DC-SIGN基因,并构建含有该目的基因的重组逆转录病毒载体,获得稳定表达DC-SIGN分子的L929基因转染细胞。方法利用RT-PCR的方法从人外周血单核细胞来源的树突状细胞（DC）总RNA中克隆出人DC-SIGN基因,通过双酶切（EcoRI,BamHI）装入逆转录病毒载体pGEZ-Term中,脂质体法共转染包装细胞293T,用含有完整病毒颗粒的293T细胞的培养上清感染L929细胞,72h后,加入Zeocin进行筛选,挑选出能稳定表达DC-SIGN蛋白的L929细胞株。结果构建了用于表达的含DC-SIGN基因的重组逆转录病毒载体,经转染包装细胞293T后,获得具有感染能力的重组DC-SIGN逆转录病毒和转染L929细胞,继而经RT-PCR、流式细胞仪表型检测,筛选出了稳定表达人DC-SIGN蛋白的L929转基因细胞。结论构建了含人DC-SIGN基因重组逆转录病毒载体和稳定表达人DC-SIGN蛋白的细胞株,为该基因功能的后续研究和单克隆抗体的研制奠定了基础。     

胃癌多药耐药基因1表达及其与生物学行为的关系

目的了解胃癌多药耐药基因1(mdr1)的表达及其与生物学行为的关系。方法应用现代信息技术,收集有关文献进行综合分析。结果正常和病理胃均可表达mdr1,胃癌的mdr1表达水平最高。胃癌的mdr1表达和胃癌对抗肿瘤药物敏感性及病人的生存期、生存率呈负相关,和组织分化、肿瘤浸润、分期及转移的关系不肯定,和肿瘤发生部位、大小、组织类型、患者年龄、性别之间无相关性。结论胃癌mdr1基因表达和生物学行为相关。     

PAX4基因A1168C多态性与中国汉族人1型糖尿病的相关性

目的 探讨中国汉族人群PAX4基因A1168C多态性与1型糖尿病的相关性。方法 随机选取无亲缘关系的中国汉族人360例,其中1型糖尿病患者109例,无糖尿病及糖尿病家族史且空腹葡萄糖〈5．60mmol/L的对照组251名。采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性技术（PCR—RFLP）检测A1168C多态性,SPSS软件分析A1168C多态性的基因型频率和等位基因频率及其组间差异。结果 对照组和1型糖尿病组基因型频率分布均符合Hardy—Weinberg平衡定律。1型糖尿病患者基因型频率及等位基因频率与对照组相比差异均无显著性（P〉0．05）。将1型糖尿病组按性别和发病年龄分层,各组基因型频率和等位基因频率与对照组相比差异仍无显著性（P〉0．05）。结论 PAX4基因A1168C多态性可能与中国汉族1型糖尿病的发生无关。     

性反转综合征患者SRY基因检测及病因分析

目的 研究性反转综合征的发生与性别决定基因SRY（sex-determining region on the Ychromosome）之间的关系。方法 应用聚合酶链反应（polymerase-chain reaction，PCR）对2例46，XX男性性反转及1例46，XY女性性反转患者进行SRY扩增，并将扩增产物在ABI-377测序仪上测序。结果 2例46，XX男性性反转患者SRY检测1例阳性，1例阴性。46，XY女性性反转患者SRY阳性，2个SRY阳性病例DNA序列分析均未检测到突变。结论 SRY是性别决定和分化的重要基因，SRY阴性XX男性性反转及SRY阳性但无突变的XY女性性反转的发生，可能与其它性别分化相关基因的异常有关。     

Musashi-1基因启动子区域-2297T〉C多态与人群食管癌的易感性

目的：研究Musashi-1基因（MSI-1）启动子区-2297T〉C（rs3742038）多态与我国人群食管癌发病的关联。方法：应用病例对照研究方法,采用Taqman技术检测300对食管癌病例的基因与正常对照-2297T〉C多态位点的基因型,并用SAS9．13软件分析该位点变异与食管癌易感性的关联。结果：以-2297TT基因型携带者为参照,携带C变异基因型（-2297CT／CC）个体发生食管癌的风险将显著增加（adjusted OR=2．27;95％CI=1．29-4．02）,且随着变异等位基因个数增加,食管癌发病风险呈剂量-效应关系地增加（Ptrend=0．0088）。结论：MSI-1基因启动子区-2297T〉C基因变异型能显著增加我国人群发生食管癌的风险性,将为食管癌高危人群的筛选提供重要的遗传标志。