circRNA-ITCH通过TET1基因抑制Wnt/β-catenin 信号通路对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 观察环状RNA(circRNA)-ITCH在鼻咽癌组织和细胞系中的表达,探讨circRNA-ITCH对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法 qPCR分别检测circRNA-ITCH在49例鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞系中的表达。选取circRNA-ITCH表达最低的细胞系,分别转染阴性质粒或过表达circRNA-ITCH的质粒,定义为对照组和实验组。CCK-8法和Transwell侵袭实验分别检测过表达circRNA-ITCH对细胞增殖和侵袭能力的影响。qPCR和Western blot法分别检测过表达circRNA-ITCH对10-11转位酶1(ten-eleven translocation1,TET1)基因和Wnt/β-catenin信号通路表达的影响。结果 circRNA-ITCH在鼻咽癌组织中表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01)。circRNA-ITCH在鼻咽癌细胞系中表达水平明显低于人永生化鼻咽上皮细胞(P<0.05),在CNE-2Z细胞中的表达水平最低(P<0.01)。与对照组比较,实验组CNE-2Z细胞的增殖能力明显降低(P<0.05),细胞侵袭能力明显降低(P<0.01)。与对照组比较,实验组CNE-2Z细胞中TET1在mRNA和蛋白水平的表达明显增加(P<0.01),Wnt1、PLC、PKC和β-catenin蛋白表达明显降低,Wnt/β-catenin信号通路被抑制。结论 circRNA-ITCH在鼻咽癌组织及细胞系中表达降低,过表达circRNA-ITCH可明显抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖和侵袭能力,其分子机制可能是促进TET1基因的表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路。     

长链非编码RNA BCYRN1对SKOV3细胞恶性生物学行为的影响

  目的  探讨长链非编码RNA brain cytoplasmic RNA 1在卵巢癌组织中的表达及对SKOV3细胞恶性生物学行为的影响。  方法  选取温州市中心医院2017年3月—2019年3月收治的32例卵巢癌患者癌组织及其相应的癌旁组织标本,正常卵巢上皮细胞系IOSE和卵巢癌细胞系(SKOV3、HO8910、A2780)购自美国ATCC; 癌组织和癌细胞中BCYRN1的水平采用实时荧光定量法(qRT-PCR)检测; 采用BCYRN1高表达质粒和低表达质粒及其相应的对照物转染SKOV3细胞,分别构建BCYRN1高表达和低表达的细胞系; 采用BrdU法检测细胞的增殖; 采用划痕愈合实验检测细胞的迁移; 采用Transwell法检测细胞的侵袭。  结果  BCYRN1在卵巢癌组织中的表达(5.64±1.02)高于在癌旁组织中的表达(2.12±0.65);BCYRN1在卵巢癌细胞中的水平为SKOV3(2.25±0.78)、HO8910(2.85±0.78)、A27809(3.12±1.01),显著高于IOSE(1.01±0.12);BCYRN1高表达能够促进SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭。  结论  BCYRN1在卵巢癌中表达上调,其作为促癌基因促进卵巢癌的进展。      

微小RNA-495-3p在卵巢癌组织的表达及对卵巢癌细胞凋亡和增殖的影响

目的 观察微小RNA-495-3p(miR-495-3p)在卵巢癌组织和细胞株的表达,并探讨 miR-495-3p对卵巢癌BGC823细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用荧光实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测10例卵巢癌组织和癌旁组织miR-495-3p表达,并检测miR-495-3p在4种卵巢癌细胞株(A2780、SKOV-3、HO-8910、OC3)及正常卵巢上皮细胞IOSE80的表达。选取miR-495-3p表达水平最低的卵巢癌细胞瞬时转染miR-495-3p或miR-NC。qPCR法检测miR-495-3p表达。流式细胞仪检测细胞凋亡率。细胞计数试剂盒(CCK-8)法和平板克隆实验分别检测细胞活力和增殖能力。生物信息学软件microrna.org预测miR-495-3p的靶基因。qPCR和Western blot法检测miR-495-3p靶基因表达。采用荧光素酶报告基因实验验证miR-495-3p对靶基因核因子蛋白(NF90)的靶向作用。结果 卵巢癌组织miR-495-3p相对表达水平较癌旁组织显著降低(P<0.01)。卵巢癌细胞株中miR-495-3p表达水平明显低于正常卵巢上皮细胞(P<0.05),SKOV-3细胞表达最低。与miR-NC组比较,转染 miR-495-3p能够明显诱导SKOV-3细胞凋亡(P<0.01),抑制SKOV-3细胞的活力和增殖能力(P<0.01),且NF90表达明显下调(P<0.01),miR-495-3p可与NF90-3′-非编码区(UTR)特异性结合,降低荧光值(P<0.01)。结论miR-495-3p在卵巢癌组织和细胞株呈低表达,上调miR-495-3p表达能够通过干扰NF90基因的表达诱导卵巢癌BGC-803细胞的凋亡和抑制细胞的增殖。     

lncRNA SOX2OT在卵巢癌细胞系中的表达及其对卵巢癌生物学行为的影响

目的 探讨lncRNA SOX2OT在卵巢癌细胞系中相对表达情况,评估其对卵巢癌生物学行为的影响。 方法 将2017年4月—2019年4月宁波市鄞州人民医院治疗的112例卵巢癌患者纳入研究,分析卵巢癌及卵巢癌旁组织、卵巢癌细胞系lncRNA SOX2OT表达情况,并测试其影响增殖及周期、迁移状况。 结果 卵巢癌组织内SOX2OT mRNA表达(3.50±0.13)高于癌旁组织(1.59±0.21,t=81.045,P<0.01);HO-8910PM细胞株内lncRNA SOX2OT表达(5.78±0.04)高于HO-8910细胞株(1.05±0.11,t=405.918,P<0.05)。空白对照组克隆细胞数、迁移细胞数、侵袭细胞数高于siSOX2OT-1组、siSOX2OT-2组;阴性对照组克隆细胞数、迁移细胞数、侵袭细胞数高于siSOX2OT-1、siSOX2OT-2组(均P<0.01)。子宫内膜样癌、浆液性卵巢癌、黏液性卵巢癌lncRNA SOX2OT表达分别为4.12±0.25、3.68±0.42、3.44±0.31,组间差异无统计学意义(均P>0.05)。 结论 lncRNA SOX2OT在卵巢癌细胞系中呈异常高表达,敲低lncRNA SOX2OT表达可对卵巢癌细胞的增殖及迁移、侵袭进行抑制,加快卵巢癌细胞凋亡。      

卵巢癌中抑癌因子SUFU的表达变化及意义

目的：探讨卵巢癌中抑癌因子SUFU（suppressor of Fused）表达变化及其意义。方法：通过免疫组化检测人卵巢癌和癌旁组织样本中SUFU的表达量，并在数据库大样本和细胞水平上进行验证。同时在人正常卵巢上皮细胞系IOSE80和卵巢癌细胞系SKOV3分别抑制和过表达SUFU后，运用MTT、EdU、流式细胞术、Western blot、Transwell、平板克隆形成实验等方法分别检测细胞的增殖、凋亡、上皮间充质转化（epithelial?mesenchymal transition，EMT）、迁移与侵袭的情况，并随后用Western blot和实时定量PCR（quantitative real?time PCR，qPCR）检测Sonic Hedgehog（SHH）信号通路的下游靶基因GLI1蛋白和mRNA水平。结果：在3例卵巢癌组织样本中，相比于癌旁组织，癌组织中SUFU蛋白表达有一定下调，而这个结果在TCGA数据库大样本中也得到验证；此外在细胞水平上，人正常卵巢上皮细胞IOSE80中SUFU蛋白和mRNA表达水平明显高于卵巢癌细胞SKOV3。进一步在SKOV3细胞中过表达SUFU能够有效抑制其增殖、EMT、克隆形成、迁移和侵袭，促进凋亡；相反，在IOSE80细胞中下调SUFU则能够促进细胞EMT、迁移和侵袭能力。同时，相比正常卵巢上皮细胞，卵巢癌细胞中GLI1 mRNA和蛋白水平明显上升；当在卵巢癌细胞中上调SUFU时，SHH信号通路的下游靶基因GLI1的表达则明显下调。结论：SUFU能够抑制卵巢癌的发生发展，其作用机制与SHH信号通路相关。     

miR-3614-5p在卵巢癌细胞中的表达及对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响

目的 分析微小RNA(microRNA)-3614-5p在卵巢癌细胞中的表达,探讨其对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响及分子机制。方法 OncoLnc在线数据库分析miR-3614-5p表达水平与卵巢癌患者生存期的关系。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-3614-5p在卵巢癌细胞系(SKOV-3、OVCAR-3、A2780、HO-8910、OC3)和正常卵巢上皮细胞系(IOSE80)中的表达。以miR-3614-5p表达最低的细胞系为转染对象,分别转染化学合成的miR-3614-5p模拟物(miR-3614-5p组)和miR-NC(对照组)。分别采用CCK-8法和Transwell迁移实验检测高表达miR-3614-5p对细胞增殖和迁移能力的影响。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因法预测并验证miR-3614-5p的靶基因。qRT-PCR和Western blot法检测miR-3614-5p对靶基因表达的影响。结果 miR-3074-5p表达水平较高的卵巢癌患者生存期长于miR-3074-5p表达水平较低的患者(P<0.05)。与IOSE80细胞比较,miR-3614-5p在卵巢癌细胞系中的表达显著减少(P<0.01),其在OVCAR-3细胞中表达最少(P<0.01)。与对照组比较,miR-3614-5p组OVCAR-3细胞增殖能力显著降低(P<0.05)、细胞迁移能力显著降低(P<0.01)。miR-3614-5p与G蛋白α抑制剂2(G protein alpha inhibiting activity polypeptide 2,GNAI2)mRNA的3′非翻译区存在结合位点(P<0.01)。高表达miR-3614-5p可显著干扰GNAI2基因的表达(P<0.01)。结论 miR-3614-5p在卵巢癌细胞系中的表达降低,其可通过干扰靶基因GNAI2的表达,抑制卵巢癌细胞的增殖和迁移过程,miR-3614-5p可能是治疗卵巢癌的新靶点。     

上调lncRNA CTA-246H3.12通过调节miR-515-5p 抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA) CTA-246H3.12在鼻咽癌组织和细胞系中的表达,研究上调CTA-246H3.12影响鼻咽癌细胞增殖和侵袭的分子机制。方法 qPCR分别检测CTA-246H3.12在鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞系中的表达。选取CTA-246H3.12表达量最低的细胞系,分别转染阴性质粒或表达CTA-246H3.12的质粒,定义为阴性对照组和CTA-246H3.12组。MTT法和Transwell侵袭实验分别检测上调CTA-246H3.12对细胞增殖和侵袭能力的影响。生物信息学方法预测CTA-246H3.12的靶基因。qPCR和Western blot法分别检测上调CTA-246H3.12对靶基因表达的影响。结果 与慢性鼻咽炎组织比较,CTA-246H3.12在鼻咽癌组织表达下调(P<0.01)。与人永生化鼻咽上皮细胞比较,CTA-246H3.12在鼻咽癌细胞系表达下调(P<0.05),CTA-246H3.12在C666-1细胞中的表达量最低(P<0.01)。与阴性对照组比较,CTA-246H3.12组C666-1细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),细胞侵袭能力显著降低(P<0.01)。CTA-246H3.12的靶基因可能是miR-515-5p,miR-515-5p的靶基因可能是尾侧型同源盒转录因子1(CDX1)。与阴性对照组比较,CTA-246H3.12组C666-1细胞中miR-515-5p表达显著降低(P<0.01),CDX1在mRNA和蛋白水平的表达显著增加。结论 CTA-246H3.12在鼻咽癌组织及细胞系中表达下调,上调CTA-246H3.12可明显抑制鼻咽癌C666-1细胞的增殖和侵袭能力,其分子机制可能是通过抑制miR-515-5p的表达,间接促进CDX1基因的表达。     

MUC4､MUC16在卵巢上皮癌细胞系SKOV-3､OVCAR-3､CAOV-3和组织中的表达及临床意义

目的 :研究MUC4、MUC16在卵巢上皮癌细胞系SKOV-3、OVAR-3、CAOV-3和卵巢上皮癌组织的表达及与临床病理特征关系。方法:1培养卵巢癌SKOV-3、OVAR-3、CAOV-3细胞系,行免疫细胞化学SABC法和Western blot观察MUC4、MUC16蛋白表达;2对临床卵巢癌组织采用免疫组织化学SP两步法检测正常卵巢组织和肿瘤组织中MUC4、MUC16表达与临床病理特征关系。结果:1经免疫细胞化学和Western blot研究发现MUC4在人卵巢癌SKOV-3和OVCAR-3细胞中不表达,而在CAOV-3细胞中有表达;MUC16在人卵巢癌OVCAR-3细胞中表达量最高,其次是CAOV-3细胞,在SKOV-3细胞表达量最低;2在正常卵巢组织和卵巢良性肿瘤中,MUC4和MUC16表达量均较低。但在卵巢交界性肿瘤和卵巢癌中,MUC4和MUC16表达非常明显;3 MUC4在卵巢浆液性和黏液性上皮癌中表达无差异(86.36%vs 75.00%),而MUC16在浆液性卵巢癌中阳性表达率(81.81%)明显高于黏液性卵巢癌(25.00%)(P<0.05)。MUC4在早期卵巢癌表达偏高,达91.67%,而MUC16在晚期卵巢癌表达(85.70%)明显高于早期(50.00%)。结论:不同卵巢癌细胞MUC4和MUC16表达不同;联合MUC4和MUC16的检测有助于卵巢癌的病理分型、临床诊断及预后的判断。     

ASH2L在上皮性卵巢癌中的表达及其对SKOV-3细胞系增殖的影响

目的 探讨混合谱系白血病(MLL)甲基转移酶的核心亚单位ASH2L对人上皮性卵巢癌细胞系SKOV-3增殖的影响.方法 免疫组化方法检测上皮性卵巢癌组织标本中ASH2L蛋白表达的定位.Western blot法检测卵巢癌组织标本和正常卵巢组织标本中ASH2L的表达水平,以及卵巢癌细胞系SKOV-3中ASH2L的表达水平.采用ployplus试剂介导ASH2L质粒转染,通过Western blot法验证ASH2L的转染效率,并利用CCK-8法检测转染后SKOV-3细胞的增殖情况.结果 ASH2L蛋白表达定位于卵巢癌组织细胞核内.与正常人的卵巢组织相比,上皮性卵巢癌组织中ASH2L蛋白表达水平上调(P＜0.01),与293T细胞系相比,SKOV-3细胞系中ASH2L蛋白表达水平上调(P＜0.05).SKOV-3细胞系在转染ASH2L质粒后,细胞中ASH2L蛋白的表达升高,与空载质粒转染的SKOV-3细胞相比,ASH2L质粒转染的SKOV-3细胞增殖增加(P＜0.01).结论 ASH2L在上皮性卵巢癌中表达升高.高表达的ASH2L可促进卵巢上皮性肿瘤细胞SKOV-3的增殖.     

lncRNA FAM27L对喉癌TU212细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA) FAM27L对喉癌TU212细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法qPCR检测FAM27L在喉癌组织、相应癌旁组织、喉癌细胞系及人支气管上皮细胞系中的表达。选取FAM27L表达最低的细胞系,构建FAM27L过表达细胞系(FAM27L组)和阴性对照细胞系(阴性对照组)。MTT法和Transwell实验分别检测过表达FAM27L对细胞增殖能力和侵袭能力的影响。采用生物信息学网站LncBase Predicted V.2预测可互补结合FAM27L的miRNA,采用网站miRWalk2.0预测可互补结合miRNA的基因。qPCR检测miRNA和靶基因mRNA的表达。Western blot法检测靶基因蛋白和MAPK信号通路蛋白的表达。结果 在喉癌组织中FAM27L的表达水平低于癌旁组织(P<0.01)。FAM27L在5种喉癌细胞系中的表达明显低于人支气管上皮细胞(P均<0.05),且以TU212细胞中表达最低(P<0.01)。过表达FAM27L后,与阴性对照组比较,FAM27L组TU212细胞的增殖能力和侵袭能力明显降低(P均<0.05)。LncBase Predicted V.2和miRWalk2.0网站预测显示,FAM27L可与miR-744-3p互补结合,miR-744-3p与核糖体蛋白L41(ribosomal protein L41,RPL41)存在靶向结合位点。与阴性对照组比较,FAM27L组miR-744-3p表达显著降低(P<0.01),RPL41及MAPK信号通路蛋白的表达显著降低(P均<0.05)。结论 FAM27L在喉癌组织和细胞系中低表达,高表达FAM27L可通过下调miR-744-3p的表达促进RPL41基因的表达,干扰MAPK信号通路转导,从而抑制喉癌TU212细胞恶性生物学行为的进展。     

微卡（VACCAE）联合2H3R3Z3E3/4H3R3方案治疗初治涂阳肺结核的临床效果

目的应用微卡(VACCAE)联合常规抗结核药物2H3R3Z3E3/4H3R3治疗初治涂阳肺结核的临床疗效。方法选取100例初始涂阳肺结核患者,随机分为对照组50例和观察组50例,两组均采用"世界银行贷款+中国结核病控制项目"的2H3R3Z3E3/4H3R3方案治疗,观察组在上述常规化疗药基础上联用微卡22.50μg深部肌肉注射;观察两组的痰菌阴转率、病灶吸收率、空洞闭合率、临床症状改善情况、不良反应发生率。结果治疗1个月后,观察组临床症状完全消失率显著高于对照组(P<0.05)。观察组的痰菌转阴率、病灶吸收率、空洞闭合率均优于对照组(P<0.05)。微卡注射后无严重不良反应。结论微卡联合常规抗结核药物2H3R3Z3E3/4H3R3方案治疗初治涂阳肺结核能够快速缓解临床症状,且疗效显著不良反应小,具有临床应用价值。     

稳定表达神经营养素-3的NIH3T3细胞建立及鉴定

目的：建立稳定表达NT3的NIH3T3细胞株，通过体外共培养实验观察其对耳蜗螺旋神经节细胞生长的影响．方法：以阳离子脂质体作为载体，将携带有外源性基因NT3的重组真核表达载体pIRES2-EGFP-NT3转染小鼠成纤维细胞，进行RT-PCR，Western-blot分析及免疫组化鉴定，并与耳蜗螺旋神经节细胞进行共培养实验．结果：得到抗G-418的阳性细胞克隆；RT-PCR的产物约为744 bp；Western-blot可见一清晰的蛋白条带，与NT3的蛋白分子量相符合．NT3免疫组化染色结果显示转染NT3-cDNA的NIH3T3细胞胞质呈棕黄色着色．NT3转染组细胞与耳蜗螺旋神经节细胞共培养2wk后，与对照组相比，耳蜗螺旋神经节细胞无明显减少．结论：成功建立了稳定表达NT3的NIH3T3细胞株；该细胞对耳蜗螺旋神经节细胞有很好的营养支持作用．     

胱天蛋白酶3介导BAG3蛋白剪切的研究

  目的 解析胱天蛋白酶（caspase）3介导BCL2结合抗凋亡基因3（BAG3）酶切的具体作用靶点,明确caspase 3裂解对BAG3抗凋亡作用的影响。方法 采用生物信息学方法筛选BAG3蛋白序列中潜在胱天蛋白酶caspase酶切位点;采用定点突变法构建潜在胱天蛋白酶caspase酶切位点突变体;体外翻译野生型和突变体BAG3蛋白;利用重组胱天蛋白酶caspase对野生型或突变型重组BAG3蛋白进行体外剪切实验;构建BAG3裂解片段的真核表达载体,突变型或片段BAG3表达载体转染SW1990细胞;利用Western blot检测各组细胞中BAG3蛋白的裂解情况;利用流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率。结果 在BAG3蛋白序列中存在K344EVD347和L515EAD518 2个潜在胱天蛋白酶caspase酶切位点;胱天蛋白酶caspase3可有效剪切D518A突变型BAG3,而不能剪切D347A突变型BAG3;D518A突变型和野生型BAG3同等程度抑制MG132诱导的细胞凋亡,D347A突变型BAG3对细胞凋亡的保护作用高于D518A突变型或野生型BAG3,而N末端和C末端剪切片段BAG3对MG132诱导的细胞凋亡无作用。结论 胱天蛋白酶caspase3主要在D347位点裂解BAG3蛋白;BAG3在D347位点的剪切使其丧失了原有的抗凋亡作用。     

改进的"一锅煮"法合成3-氨基-3-芳基丙酸

目的:改进3-氨基-3-芳基丙酸的合成方法,提高化学产率.方法:以甲醇为反应溶剂,芳香醛和3当量醋酸铵反应生成希夫碱,再加入丙二酸,反应混合物剧烈回流16 h得目标产物.将产物用核磁共振仪进行光谱学鉴定.结果:合成出10种3-氨基-3-芳基丙酸,其中5种为新的β-氨基酸,产率为25%～79%,比文献报道产率提高约10%.结论:该合成法简单、易行,降低了反应成本,有很好的工业应用价值.     

APA-3T3细胞微囊的深低温保存

目的:通过优选冻存液的成份和浓度,建立低温保存APA微囊化小鼠成纤维细胞(3T3细胞)的方法。方法:用海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微囊(APA)包裹3T3细胞制成APA-3T3细胞微囊。以高糖DMEM培养液为基础冻存液,分别加入不同浓度的二甲基亚砜(DMSO)或牛血清白蛋白(BSA)。分别将不同的冻存液加入APA-3T3中。按程序控制降温梯度,置于液氮中保存。快速复温后,光镜下观察APA-3T3的形态、细胞活率及膜通透性。结果:①10%DMSO组的微囊内细胞活率降低最少,细胞活率达(75.68±1.54)%,P<0.01。微囊完好率达到(94.48±0.90)%,P<0.01。②与其它组相比,4%BSA组的微囊内细胞活率降低程度最小,活率达(73±1.26)%,P<0.01。微囊完好率最高,为(85.1±0.82)%,P<0.01。③加入不同成份和浓度的冻存液对微囊的通透性没有明显影响。结论:在冻存液中加入10%DMSO和4%BSA,可在低温保存的过程中较好地保护细胞的存活及微囊的完整性。     

3α—雄烷二醇对性腺发育不良小鼠附性腺生长的影响

目的：本文观察了给预(3α－diol)后,性腺功能低下（hpg)小鼠的前列腺,附睾和精囊腺生长变化,方法：用硅胶囊皮下埋植缓释给药,连续5周,设缓释给药hpg小鼠实验组（n=7),不给药hpg小鼠组（n=7)和正常腺功能小鼠对照组（n=10),给药结束后测定各附性的重量及前列腺腺管末梢的数目,结果：与hpg小鼠对照组相比,hpg小鼠给药实验组各附性腺的重量均明为增加（P＜0．001）,前列腺腺管形态发育趋于正常,但各附性腺的重量及前列腺腺管末梢榉数目仍于正常性腺功能小鼠对照组（P＜0．001）,结论：3α－diol能明显刺激hpg小鼠附性腺生长,发育。     

用远端功能化技术合成制备地塞米松的中间体3a,17a—二羟基—16a—甲基—5a—孕甾—9（11）—烯—20—酮

一般来说 ,用薯蓣皂素和替柯吉宁这样的原料合成地塞米松等高效皮质激素 ,至少有两部分的结构改造要用到微生物发酵反应 ,一是甾体Ａ环中Δ1,4 双烯的引入 ,另一是Ｃ环中 9,11位的改造。我们前一阶段对由替柯吉宁合成地塞米松的方法[1] 进行了改进 ,采用化学合成法高收率地引入了Δ1,4 双烯[2 ] 。而我们报道了在地塞米松 ( 6)合成中 ,用远端功能化技术[3～ 6] ,利用 3位引入的模板 ,高收率地引入 9( 11) 双键 ,使地塞米松的合成可以摆脱制约产量的微生物发酵法来进行(图 1)。该技术目前在国际上尚无完全相同的报道 ,例如 ,用远端功能化…     

血小板生长因子在NIH3T3成纤维细胞和MT3转化细胞应答中的作用

血小板生长因子(PDGF)通过促进细胞外Ca~(2 )内流,增加细胞内Ca~(2 )浓度,但在亲代NIH3T3成纤维细胞和转化的MT3细胞中,却表现出不同的作用。在亲代NIH3T3成纤维细胞中,PDGF能够抑制舒缓激肤介导的细胞内Ca~(2 )浓度增加,未能见到细胞内Ca~(2 )波动现象;而在转化的MT3细胞中,PDGF丧失了对舒缓激肽介导的细胞内Ca~(2 )浓度增加的抑制作用,常常引起细胞内Ca~(2 )波动现象。对于DNA的合成,PDGF在两种细胞中,也表现出有时程的差异。     

稳定表达NT-3的NIH3T3细胞对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞生长的影响

目的通过体外共培养观察NT-3对耳蜗螺旋神经节细胞生长的影响.方法建立能够稳定表达、分泌NT-3蛋白的NIH3T3细胞系;选择出生2～4 d的BALA/CA小鼠,进行耳蜗螺旋神经节细胞原代培养并分为3组,其中Ⅰ组与稳定分泌NT-3的NIH3T3细胞共培养,Ⅱ组与传染空载体NIH3T3细胞共培养,Ⅲ组与NIH3T3细胞共培养,共培养2周后,观察各组螺旋神经节细胞的数量及轴突长度的变化.结果共培养2周后,与对照组相比,NIH3T3-NT-3共培养组SGC的数量以及突起的长度均显著高于对照组.结论NT-3可显著减轻耳蜗螺旋神经节神经的退行性改变.     

14—3—3蛋白

14-3-3是一个在真核生物中广泛表达的酸性蛋白家族，主要以同源／异源二聚体形式存在，通过磷酸化丝／苏氨酸作用与靶蛋白或靶蛋白的两个结构域结合。七种不同亚型的高度保守的14-3-3蛋白与人类细胞中多种不同的信号通路有着密切的关系。14-3-3通过调节靶蛋白间的相互作用在MAPK级联放大效应等信号转导途径中发挥调控作用。