miR-143通过负向调控Bcl-2抑制食管癌细胞的增殖

目的探讨miR-143通过负向调控B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)抑制食管癌细胞的增殖。方法 RTPCR法检测食管癌细胞TE-1、EC109、EC9706、KYSE150、KYSE510、SEG-1及人正常食管上皮细胞HEEC中miR-143表达,使用脂质体Lipofectamine~(TM) 2000将miR-143 mimics和miR-143 NC转入EC9706细胞中,48 h后,RT-PCR法检测miR-143表达,CCK-8法检测细胞活力,Ed U染色检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,RT-PCR及Western blot检测Bcl-2蛋白及mRNA的表达。结果 miR-143在食管癌细胞TE-1,EC109,EC9706,KYSE150,KYSE510及SEG-1中的表达量[(1.36±0.13),(1.08±0.10),(0.89±0.09),(0.95±0.09),(1.32±0.14),(0.96±0.11)]显著低于miR-143在人正常食管上皮细胞HEEC(2.38±0.15)中的表达量(P0.01)。与miR-143 NC组比较,miR-143 mimics组miR-143表达量显著升高(P0.01),细胞活力下降(P0.01),细胞增殖能力降低(P0.01),细胞周期阻滞在G1期(P0.01),同时Bcl-2蛋白及mRNA表达量显著降低(P0.01)。结论miR-143过表达能通过下调Bcl-2表达抑制EC9706细胞增殖。     

Rab3D对食管鳞状细胞癌细胞系增殖及细胞周期素D1表达的影响

目的探讨Rab3D对人食管鳞状细胞癌细胞系增殖及细胞周期素D1(Cyclin D1)表达的影响。方法采用Western blot法从8株人食管鳞状细胞癌细胞系KYSE410、KYSE450、TE-1、TE-7、KYSE510、KYSE150、EC9706、EC109中筛选出Rab3D表达较低的2株食管鳞状细胞癌细胞株KYSE410、KYSE450及Rab3D表达较高的2株食管鳞状细胞癌细胞株EC109、EC9706,将KYSE410、KYSE450细胞株分别分为转染Rab3D质粒的Rab3D组和转染空载体的对照组,将EC109、EC9706细胞株分别分为转染Rab3D小干扰RNA(siRNA)的Rab3D siRNA组和转染阴性对照的阴性对照组,MTT法检测Rab3D对食管鳞状细胞癌细胞的增殖及Cyclin D1表达的影响,Western blot检测Cyclin D1蛋白的表达。结果 KYSE410、KYSE450食管鳞状细胞癌细胞株转染Rab3D组细胞的吸光度与本细胞株对照组比较,在转染后12 h差异无统计学意义(P>0.05),转染后24、48、72 h均高于本细胞株对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。EC109、EC9706食管鳞状细胞癌细胞株转染siRNA组细胞的吸光度在转染后12、24 h与本细胞株阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),转染后48、72 h均低于本细胞株阴性对照组(P<0.05)。KYSE410、KYSE450细胞转染Rab3D组Cyclin D1蛋白表达水平较本细胞株对照组增高(P<0.05);EC109、EC9706细胞转染siRNA组的Cyclin D1蛋白表达水平较本细胞株阴性对照组降低(P<0.05)。结论 Rab3D促进食管鳞状细胞癌细胞的增殖,机制可能与促进Cyclin D1的表达有关。     

SPIB对食管癌增殖及上皮间质转化的影响

目的 通过调控食管癌细胞内转录因子SPIB蛋白表达,研究SPIB对食管癌细胞增殖、迁移及侵袭的作用及机制.方法 采用Western blot和qRT-PCR方法检测食管癌细胞系中SPIB mRNA和蛋白表达.通过siRNA下调食管癌细胞系KYSE150细胞内SPIB表达,采用CCK-8和流式细胞术检测细胞增殖和细胞周期...     

沉默USP39对食管癌细胞增殖的影响

目的 探索食管癌细胞EC9706及人正常食管上皮细胞HEEC中USP39分子的表达差异及沉默USP39对食管癌细胞EC9706增殖的影响。方法 利用qRT-PCR及Western blot法检测细胞中USP39表达情况;设计并合成USP39的siRNA （USP39-siRNA）及对照（USP39-NC）转染食管癌EC9706细胞,利用qRT-PCR、Western blot法检测EC9706细胞中USP39的表达变化;MTT、平板克隆实验检测EC9706细胞的增殖。结果 USP39在EC9706细胞中的表达高于人正常食管上皮细胞HEEC的表达,USP39-siRNA下调了EC9706细胞中USP39基因水平与蛋白水平的表达,并抑制了细胞的增殖能力。结论 USP39-siRNA能够下调USP39的表达,并有效抑制食管癌EC9706细胞的增殖,为以USP39为靶点的食管癌基因治疗奠定基础。     

过表达KLF7对食管鳞状癌细胞的增殖和迁移的影响

目的 探索Kruppel-like factor 7(KLF7)对食管鳞癌细胞Eca109细胞增殖、迁移和周期的影响。方法 利用生物信息学方法研究KLF7在食管鳞癌组织中的表达模式及其与患者预后、病理分级的关系。利用Real-time PCR、Western blot与细胞免疫荧光技术研究食管鳞癌细胞中KLF7的表达模式与亚细胞定位。利用KLF7过表达质粒(pcDNA-3.10-KLF7)细胞转染实现KLF7在Eca109食管鳞癌细胞中过表达。采用平板克隆计数和CCK-8检测研究细胞增殖能力,利用Transwell研究细胞迁移能力,利用流式细胞术检测细胞周期。结果 KLF7在食管癌组织和细胞中均有表达,其表达水平与患者病理分级显著相关(P<0.05),与患者生存率无显著相关性。食管癌细胞系(Eca109和EC9706)中KLF7的表达水平显著高于正常食管上皮细胞(Het-1A,P<0.05),并且Het-1A细胞中KLF7高表达于细胞质和细胞核,而2种食管癌细胞Eca109和EC9706中KLF7仅高表达于细胞核,在Eca109细胞中过表达KLF7后改变细胞周期、促进细胞的...     

YB-1蛋白对食管癌细胞恶性表型的影响

目的 探究YB-1蛋白对食管癌细胞恶性表型的影响。方法 利用Western blot法检测10株食管癌细胞系中YB-1蛋白的表达情况。将YB-1高表达质粒和siRNAs瞬时转染至KYSE450和YES2细胞系中,分别检测其mRNA及蛋白的变化量;利用Transwell检测YB-1蛋白对食管癌细胞侵袭迁移的影响;利用克隆形成及xCELLigence Real-time Cell Analyzer （RTCA）-MP系统检测YB-1蛋白对细胞克隆形成及细胞增殖的影响。结果 选取KYSE450和YES2作为实验对象,结果表明高表达YB-1可促进食管癌细胞的增殖,增强克隆形成能力,促进食管癌细胞的侵袭和迁移;敲降YB-1则结果相反。结论 YB-1蛋白影响食管癌细胞的恶性表型,具有促癌的作用。     

PTPN14对食管癌的抑制作用及其机制研究

目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶14（PTPN14）对食管癌的抑癌作用及其机制。方法通过转染PTPN14质粒过表达食管癌细胞EC9706 中PTPN14 的表达,实时荧光定量聚合酶链反应及Western blot检测其过表达效果;四甲基偶氮唑盐比色法检测过表达PTPN14对EC9706细胞增殖的影响;流式细胞术检测过表达PTPN14对EC9706 细胞周期的影响;Western blot检测过表达PTPN14 对YAP 蛋白表达的影响。结果转染PTPN14质粒可上调食管癌细胞系EC9706 中PTPN14 的表达;过表达EC9706 细胞中PTPN14 可以抑制食管癌细胞的增殖,使细胞周期阻滞在G1期;过表达EC9706 中PTPN14 可以下调细胞中YAP的表达水平。结论PTPN14可通过下调YAP,阻滞食管癌细胞周期,抑制细胞增殖。     

HER4基因抑制对食管癌细胞Eca-109迁移和侵袭能力的影响

 目的 探讨HER4在食管癌细胞侵袭和转移过程中的作用。方法 应用RNA干扰技术抑制HER4在食管癌细胞系Eca-109中的表达，Western blot 方法观察细胞MMP-9、VEGF蛋白表达水平的变化，细胞划痕实验和Transwell侵袭实验观察细胞迁移、侵袭能力的变化。结果 酶切鉴定和DNA测序分析显示HER4靶向RNA干扰重组载体构建成功；荧光实时定量PCR和Western Blot检测筛选得到最佳干扰效果质粒；该质粒转染细胞后，MMP-9、VEGF蛋白表达水平出现明显降低，细胞迁移、侵袭能力显著下降。结论 HER4与食管癌的侵袭转移潜能相关，敲减HER4的表达可明显抑制食管癌细胞系Eca-109的运动和侵袭能力。     

MC1R在食管鳞癌细胞和组织中高表达

目的 通过分析MC1R在食管鳞癌细胞和组织中的表达水平及其与相关临床病理参数的相关性,探讨MC1R在食管鳞癌中的临床意义。方法 通过生物信息学分析MC1R在食管癌中的表达情况;以RT-PCR和Western blotting方法比较分析人食管上皮细胞BAr-T、人食管鳞癌细胞ECA109、KYSE30、KYSE150、KYSE510、TE-1、TE-13、EC9706、人胃癌细胞SGC7901及19对食管鳞癌组织和对应癌旁组织中 MC1R的表达水平;以IHC方法比较分析32对食管鳞癌组织切片和对应癌旁组织切片中MC1R的表达水平;使用t检验进行组间MC1R表达量的差异比较,使用Fisher 's精确检验分析MC1R表达水平与临床病理特征之间的关系。结果 生物信息学分析显示MC1R在食管癌组织中显著高表达（P<0.05）;食管鳞癌细胞ECA109、KYSE30、KYSE510、TE-13、EC9706和胃癌细胞系SGC7901中MC1R表达量高于食管上皮细胞（P<0.05）;食管鳞癌组织切片中MC1R相对表达量显著高于癌旁组织（P<0.05）。MC1R高表达现象主要存在于老年、胸中段和中分化食管鳞癌患者中,其与肿瘤T分期有关（P<0.05）,与年龄、细胞分化程度、肿瘤原发部位、TNM分期等临床病理参数无关（P>0.05）。结论 MC1R在食管鳞癌细胞系和组织中表达量显著升高,可能作为食管鳞癌诊断的辅助分子标志物。     

EC9706、Eca109细胞系中S100A4及基质金属蛋白酶-2的表达

目的:检测食管鳞状细胞癌EC9706、Eca109细胞系中S100A4及基质金属蛋白酶-2(MMP-2,的表达.方法:采用免疫细胞化学法和Western blotting法检测EC9706、Eca109中S100A4蛋白及MMP-2蛋白的表达,采用RT-PCR法检测EC9706和Eca109细胞中S100A4与MMP-2的mRNA表达.结果:EC9706、Eca109细胞系中均存在S100A4与MMP-2蛋白及mRNA的表达,S100A4蛋白及MMP-2蛋白的阳性表达主要定位于胞浆中,Eca109细胞系中偶见胞核着色.Eca109细胞系中S100A4与MMP-2蛋白和S100A4 mRNA的表达量高于EC9706(P<0.05).结论:在EC9706、Eca109细胞系中均有S100A4、MMP-2的表达,提示S100A4可能在食管鳞状细胞癌的发生、发展中起重要作用.     

MACC1表达与胸中段食管鳞癌侵袭､转移的关系

目的:研究结肠癌转移相关基因(MACC1)在食管鳞癌中的表达及其与淋巴结转移的关系?方法:采用Western blot方法检测食管鳞癌细胞株和40例胸中段食管鳞癌组织及配对癌旁组织中MACC1蛋白的表达情况?结果:KYSE510? EC109 两种食管鳞癌细胞株中MACC1蛋白相对表达量分别为0.413 ± 0.175?0.876 ± 0.202,差异有统计学意义(P < 0.05)?40例配对胸中段食管鳞癌组织中,MACC1蛋白表达水平癌组织为0.513 ± 0.228,癌旁组织为0.248 ± 0.179,癌组织和配对癌旁组织表达差异有统计学意义,且在伴有淋巴结转移的癌组织中表达量明显较高(P < 0.05)?结论:MACC1与食管鳞癌的发生?发展及转移密切相关?     

RIP1增强顺铂诱导食管癌细胞的凋亡

目的：探讨受体相互作用蛋白1( RIP1)增强顺铂( DDP)诱导食管癌细胞凋亡的敏感性。方法单溶液细胞增殖分析( MTS )法检测不同浓度 DDP 对食管癌细胞株KYSE510、KYSE410的增殖抑制作用;Annexin V/PI 双染流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测RIP1、半胱天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、PARP的蛋白表达。结果 DDP诱导食管癌细胞凋亡具有剂量和时间相关性。凋亡率随剂量增加和时间延长升高, RIP1蛋白的表达升高, DDP 联合RIP1特异性抑制剂处理食管癌细胞后,较敏感的KYSE510凋亡率明显减少。结论 RIP1可能参与了DDP诱导食管癌细胞凋亡的作用。     

食管鳞状细胞癌survivin表达与其CpG岛甲基化的研究

目的探讨食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)肿瘤组织survivin基因的表达与其CpG岛甲基化状态的关系。方法采用RT-PCR的方法检测ESCC细胞株、ESCC肿瘤组织及对应的远癌组织中的sur-vivin基因mRNA的表达;采用亚硫酸氢钠修饰后测序法(BSP)检测survivin基因CpG岛甲基化状态。结果ESCC肿瘤组织survivin mRNA表达阳性率为65.5%,而绝大部分远癌组织表达阴性;20例survivin表达阳性的肿瘤组织、survivin表达阴性的远癌组织及5株ESCC细胞所扩增片段中的CpG位点均呈非甲基化状态。结论ESCC组织中survivin的表达与否与其CpG岛的甲基化状态无关,提示该区域的甲基化修饰未参与调控survivin基因的转录。     

Aspirin inhibits the proliferation of tobacco-related esophageal squamous carcinomas cell lines through cyclooxygenase 2 pathway

Background  Cigarette smoking has been verified as the risk factor of esophageal squamous cell carcinoma (ESCC). Overexpression of cyclooxygenase 2 (COX-2) is shown in ESCC. The objective of this study was to investigate the effects of cigarette smoking ethanol extract (EE) on the proliferation of the human ESCC cell lines, and to explore the correlation between the proliferation rate of human ESCC cell lines and the expression pattern of COX-2. Whether aspirin can inhibit the proliferation of the ESCC cell lines pretreated with EE, and regulate the mRNA expression levels of COX-2 are also examined.
Methods  Two human ESCC cell lines were selected. EC109 was poorly differentiated and EC9706 was highly differentiated. EC109 and EC9706 were treated with EE and aspirin for different time course. The cell growth of ESCC was measured by MTT reduction assay and the expression of COX-2 was measured by RT-PCR and Western blot analysis.
Results  EE promoted the proliferation of EC109 and EC9706 in dose- and time-dependent manners. In the concentration range (10−100 µg/ml for EE) and in the time range (24−72 hours) after addition of EE, the cell proliferation was prominent in an up-scaled manner respectively. Aspirin could inhibit the proliferation of cell lines EC109 and EC9706, pretreated with EE for 5 hours, in a dose-dependent manner. In the concentration range (0.5−8.0 mmol/L for aspirin), the cell growth inhibition was prominent in an up-scaled manner accordingly (P<0.05). The effect of EE on cell proliferation was correlated with the up-regulation of COX-2 gene. However, the cell growth inhibition of aspirin was correlated with the down-regulation of COX-2 gene.
Conclusions  EE can stimulate the proliferation of human ESCC cell lines EC109 and EC9706, most likely through up-regulating the expression of COX-2. Aspirin can inhibit the proliferation of ESCC cell lines induced by EE, which suggests it may be advantageous in the chemoprevention and therapy of human tobacco-related ESCC. And its effect is likely to be related with modulating COX-2 activity.

     

人食管鳞癌细胞株中RIZ1基因启动子区甲基化状态的研究

目的:探讨6种人食管鳞癌细胞株KYSE150,KYSE510,TE13,EC9706,CaEs17和EC109中RIZ1基因启动子区的甲基化状态;观察特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR对存在甲基化的细胞株RIZ1基因的转录调控作用及其对该细胞生长增殖的影响。方法:甲基化特异PCR(MSP)法检测6种人食管鳞癌细胞株中RIZ1基因启动子区的甲基化状态;实时定量PCR法检测5-Aza-CdR处理前后RIZ1基因启动子区CpG岛高度甲基化的人食管鳞癌细胞株TE13中RIZ1 mRNA表达量的变化;MTT法检测5-Aza-CdR对TE13细胞生长增殖的影响。结果:(1)6种人食管鳞癌细胞株中TE13,CaEs17,EC109三株细胞RIZ1基因启动子区存在甲基化;(2)5-Aza-CdR处理细胞株TE13后,RIZ1 mRNA表达量上调;(3)5-Aza-CdR能抑制TE13的生长增殖,并随时间的延长和浓度的增加抑制作用变明显。结论:启动子区CpG岛高度甲基化是人食管鳞癌细胞株TE13 RIZ1基因表达沉默的重要原因;5-Aza-CdR能使TE13 RIZ1 mRNA表达上调;并能抑制TE13细胞的生长增殖,并呈时间和浓度依赖性。     

成束蛋白、细胞角蛋白14在食管鳞癌中的表达

目的 检测和分析食管鳞癌组织、癌旁正常鳞状上皮及食管鳞癌细胞系中成束蛋白（fascin）和细胞角蛋白14（CK14）的表达情况,探讨这两种细胞骨架蛋白及相关蛋白在食管鳞癌发生发展中可能的作用及在食管鳞癌诊断中的应用前景。方法 收集116例食管鳞癌组织标本,构建组织芯片。用免疫组化方法检测鳞癌组织与癌旁正常鳞状上皮中成束蛋白、CK14的表达情况,并分析它们与临床病理特征、预后的关系及两种蛋白之间的相关关系。用Western印迹方法检测12种食管鳞癌细胞系中成束蛋白、CK14的表达情况,并分析它们与生长和侵袭特点的关系。结果成束蛋白和CK14在食管正常鳞状上皮阴性（基底细胞除外）,在食管鳞癌组织明显上调,阳性率分别为79．3％和67．0％,两者联合阳性率高达86,2％。成束蛋白和CK14在高、中分化鳞癌中表达更高（成束蛋白在高、中、低分化鳞癌阳性率为87．1％、83．9％、62．1％,P=0．054;CK14在高、中、低分化鳞癌阳性率为87．1％、76．4％、27．6％,P〈0．01）。两种蛋白表达与预后无明显关系（P=0．8980和P=0,2610）。两种蛋白表达呈正相关（r=0．487,P〈0．01）。成束蛋白在绝大多数细胞系高表达,仅在生长和侵袭能力弱的TE12细胞系中无表达,而CK14仅在KYSE180细胞系中表达。结论 成束蛋白、CK14在食管鳞癌普遍表达上调,可能在食管鳞癌发生发展中起重要作用。联合应用还有望成为食管鳞癌诊断的有效标志物。     

烟草提取物与环氧化酶-2对食管鳞癌细胞株增生作用的研究

目的通过研究烟草提取物对食管鳞癌细胞系EC109和EC9706的促增生作用,探索烟草致癌的机制。方法将人食管鳞癌细胞株EC109和EC9706与烟草提取物孵育后,用噻唑蓝法定量检测细胞增生情况,用反转录聚合酶链反应法检测其环氧化酶-2(COX-2)的mRNA表达情况。结果细胞培养结果表明,2种烟草提取物对EC109和EC9706细胞株的促增生作用均具有时间依赖性的特点,但剂量依赖性不明显。组间差异有统计学意义(P<0.01)。烟草乙醇提取物(EE)的促增生作用与COX-2基因表达增强相关。结论烟草提取物对食管鳞癌细胞存在促增生作用,且这种促增生作用可能与COX-2的表达增强有关。