RAPD技术在中药狼毒鉴别中的应用

目的：为提高鉴别中药狼毒及同科植物和瑞香狼毒的准确性和可操作性，有必要建立一种科学的方法。方法：用分子生物学技术随机扩增多态性DNA(RAPD)对5个不同品种狼毒进行分析。结果与结论：提供了5种狼毒鉴别的RAPD扩增指纹图谱，具有鉴别意义。     

石斛属植物的RAPD指纹图谱聚类分析

目的建立石斛属植物RAPD指纹图谱,探讨RAPD分子标记技术在石斛属种类鉴别上的应用。方法用RAPD方法构建石斛属内7种石斛及一种石仙桃植物RAPD指纹图谱,对其扩增条带进行分析。结果共扩增出53条带,分布在0.25～1.3kb之间,其中39个条带有遗传多样性,约占总数的73.6℅。经聚类分析不同石斛间的遗传距离分布在0.04762～0.68421,平均遗传距离为0.44380,而石仙桃与石斛属植物的平均遗传距离为0.71734。结论石斛属植物的遗传多态性丰富,与种外植物遗传距离较大,RAPD技术可作为石斛属植物鉴别的有效方法。     

瑞香狼毒显微特征鉴别研究

目的:对瑞香狼毒药材显微鉴别特征进行研究。方法:显微鉴别法观察瑞香狼毒的根横切面和粉末显微特征。结果:瑞香狼毒的老根中央,有栓化细胞带形成。结论:该显微特征可以用于瑞香狼毒组织鉴别。     

人参RAPD指纹鉴定的毛细管PCR方法

本实验建立并优化了用毛细管PCR扩增人参RAPD指纹的反应体系，讨论了用毛细管PCR方法扩增RAPD指纹在中药材鉴别上的应用前景。     

甘肃产秦艽的DNA指纹图谱鉴别

目的 对产于我国甘肃省的中药秦艽的3种基源植物秦艽、麻花秦艽与小秦艽进行RAPD分析,建立具有鉴别意义的DNA指纹图谱.方法 采用RAPD分子标记对秦艽的基因组DNA进行PCR扩增,利用NTSYSpc 2.1和Popgene 3.2软件分析3种秦艽间的亲缘关系,构建树系图.结果 从80条RAPD引物中筛选出4条具有鉴别意义的多态性引物,在3种秦艽中共得到39个DNA条带,其中共有条带2条,多态条带37条.据此获得了能有效区别3种秦艽的多态性RAPD指纹谱.结论 甘肃产秦艽的3种基源植物遗传分化明显,RAPD方法能有效地将它们区分鉴别.     

金钗石斛及其相似种RAPD优化和DNA多态性分析

目的:以金钗石斛为材料,建立石斛的RAPD优化条件,应用于石斛相似种的DNA多态性分析.方法:分别设置模板DNA,Mg2 ,Taq DNA聚合酶,dNTPs,引物的浓度梯度,优化RAPD反应体系.结果:在25 μl总反应体系中,以上反应物的用量分别为100 ng,3.0 mmol/L,1.0 U,0.2 mmol/L,0.4 μmol/L时所获得的石斛属DNA指纹图谱谱带型清晰、重复性好.其中用S48 扩增的DNA指纹图谱具有更大的相似性,适合于石斛真伪鉴别;而S90 扩增的片段具有明显的多态性,适合于石斛遗传分化研究.结论:优化后的RAPD方法可作为研究石斛属植物的遗传多样性及真伪鉴别的有效方法.     

长爪沙鼠与实验大小鼠RAPD图谱比较研究

目的比较长爪沙鼠与实验大、小鼠的RAPD图谱，为实验室日常鉴别动物品种品系提供一种分子生物学方法。方法提取基因组DNA（封闭群沙鼠、近交系小鼠BALB／c和C57BL／6、封闭群小鼠KM、近交系大鼠F344和BN以及封闭群大鼠SD），用6条随机引物对其进行PCR扩增。结果在6条随机引物中，p1、p2、p3、p4和p6这5条引物扩增的条带差异较为明显，表现为不同的RAPD图谱。结论RAPD方法可用于鉴定长爪沙鼠与实验大小鼠的差异。     

RAPD扩增分枝杆菌DNA优化条件及菌型分型的诊断应用

目的探讨随机扩增多态性DNA（Randomly amplified polymorphic DNA，RAPD）技术在分枝杆菌分型诊断中优化条件及其应用价值。方法优化RAPD技术扩增分枝杆菌DNA的奈件，并分别扩增深圳市临床病人分离株DNA，对比RAPD电泳条带特征。结果以条带稳定、丰富、清晰为标准，确定引物1 RAPD最佳反应条件为：50出反应体系中，含100ng模板DNA，2．5mmol／L MgCl2，2U DNA聚合酶，引物0．5μmol／L，dATP、dGTP、dCTP和dTTP各250μmol／L，反应40个循环，每个循环为：94℃1min，36℃1min，72℃2min。所扩增结核杆菌临床分离株的DNA条带丰富、清晰，各条带差异较明显。结论RAPD技术能较好地鉴别MTB和NTM。     

RAPD法鉴定射干类中药

目的：用RAPD技术对射干类药材射干Belamcanda chinensis及混淆品鸢尾属鸢尾Iris tectorum、野鸢尾I．dichotoma、蝴蝶花I．japonica、德国鸢尾I．germanica等5种药用植物进行分子水平的鉴定。方法：CTAB法和DNeasy^TM Plant Mini Kit法提取射干类药材5种原植物总DNA,以随机引物进行随机扩增。结果：用OPD－08（5’-gtgtgcccca-3‘）等作随机扩增引物进行随机扩增时,可得到识别这些物种基因组DNA的多态片段。结论：RAPD法能有效的鉴别射干类药材,把射干和鸢尾、野鸢尾、蝴蝶花、德国鸢尾等药用植物区分开。     

绞股蓝RAPD标记及序列分析

目的 利用绞股蓝RAPD标记有效鉴别绞股蓝及其伪品。方法 用19条引物对17个绞股蓝样品和一个乌蔹莓样品进行RAPD-PCR扩增,并对绞股蓝DNA特异条带克隆测序及序列分析。结果 获得一个绞股蓝RAPD标记。经克隆测序,8个序列高度保守,片段长度在766～770 bp,相似性均在97%以上。结论 获得的RAPD标记可以作为合成探针的基础,用于鉴别绞股蓝及其伪品。     

BALB/c小鼠遗传质量检测的新方法

目的比较随即扩增多态性方法（RAPD）、微卫星方法（STR）与生化标记方法对近交系小鼠遗传质量检测的差异,为近交系动物遗传质量控制提供一种分子生物学方法。方法提取近交系小鼠BALB/c基因组DNA,用6条RAPD引物和20对STR引物对其进行PCR扩增,用生化标记法检测13个位点。结果在6条RAPD引物中,引物2（p2）、引物3（p3）、引物5（p5）和引物6（p6）这四条引物扩增的条带出现差异,表现为不同的RAPD图谱;在20对STR引物中,引物2、4、10和11,这四对引物扩增的条带出现差异,表现为不同的STR图谱;13个生化标记位点中,过氧化氢酶-2（Ce-2）等6个生化位点发现杂合基因。结论RAPD和STR可用于验证生化标记方法的实验结果,并用于保证近交系动物的遗传质量。     

狼毒大戟的生药学研究

目的:通过对狼毒大戟的生药学鉴定研究,为该药的开发利用及质量标准的制定提供依据.方法:应用药材性状鉴别,显微鉴别及薄层色谱鉴别法.结果;狼毒大戟根的横切面可见多轮同心内函韧皮部异常构造,薄层色谱鉴别地上和地下部分所含化学成分有异同性,结论:其断面异常构造及薄层方法均可为该药鉴定提供依据.     

白色念珠菌的耐药性和随机扩增DNA多态性分型研究

采用Etest药敏试验方法检测 30株临床分离白色念珠菌对 5种抗真菌药物的敏感性 ,并用随机扩增DNA多态性 (RAPD)分型方法对这些菌株进行基因分型。结果发现有两株对氟康唑耐药 ,且它们的RAPD带型有着高度相似性 ,提示RAPD带型可能与耐氟康唑基因有关。     

柴胡栽培种的RAPD和AFLP遗传关系研究

目的 应用不同的分子标记进行柴胡药材干根遗传多样性分析,为柴胡栽培种鉴别和药材鉴别奠定基础。方法 以柴胡栽培种干根为材料,采用RAPD和AFLP两种分析方法。结果 以筛选到的3条随机引物对9个柴胡栽培种进行RAPD分析,共扩增出28条DNA带,平均每条引物组合扩增9.33条带,其中多态性带为6.67条,多态性比率为71.43%;而在AFLP分析中,筛选出4对特异性引物,共获得107条DNA带,平均每对引物扩增26.75条带,其中多态性带为23.25条,多态性比率为86.92%。经统计分析,9个柴胡栽培种RAPD和AFLP分析的Jaccard遗传相似系数分别介于0.61～0.93和0.39～0.86。UPGMA聚类分析,两种标记方法均可将9个柴胡栽培种聚为3大类群,聚类结果相似但不完全相同。结论 以柴胡药材干根为材料,RAPD和AFLP两种分子标记均可用于植物种间及种下遗传关系分析,且AFLP条带较多,多样性丰富,更有利于柴胡属植物多样性的分析。     

白色念珠菌的耐药性和随机扩增DNA多态性分型研究

采用Etest药敏试验方法检测30株临床分离白色念珠菌对5种抗真菌药物的敏感性,并用随机扩增DNA多态性(RAPD)分型方法对这些菌株进行基因分型。结果发现有两株对氟康唑耐药,且它们的RAPD带型有着高度相似性,提示RAPD带型可能与耐氟康唑基因有关。     

川木通的随机扩增多态性DNA与序列特征性扩增区域标记研究

目的采用随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA,RAPD）法建立川木通的分子鉴定方法,为川木通的快速鉴定奠定基础。方法从100对随机引物中筛选出5对多态性丰富的RAPD引物进行川木通10个种的扩增分析,最终得到C13为阳性序列特征性扩增区域（sequence characterized amplified regions,SCAR）标记。结果阳性SCAR标记均可以进行川木通原植物与药材的分子鉴定引物,C13可以鉴定上述2种药典品种和商品主流品种（粗齿铁线莲、钝萼铁线莲）。结论RAPD法简便易行,为亲缘关系较近的多基原药材的鉴定提供了一种新方法。     

ISSR标记不同产地的大戟科狼毒种质资源多样性分析

目的 :利用ISSR分子标记技术对不同产地的大戟科狼毒进行了遗传多样性分析。方法 :从100条引物中挑选出12条合适的引物对不同产地的大戟科狼毒进行遗传多样性分析。结果 :12条引物一共扩增出353条带,用SPSS16.0软件分析,建立了Jaccard相关系数矩阵,构建了遗传树状图,从该图中可知各产地大戟科狼毒的相似系数在0.258~0.845;大戟科狼毒遗传变异与地理分布呈现较明显的相关性。结论 :ISSR标记适合于大戟科狼毒基因组DNA多样性分析;ISSR分子标记技术对于大戟科狼毒种质资源划分上有十分重要的影响。     

珍稀中草药金线莲的RAPD研究

为了鉴别金线莲的品种,探索同属植物之间的亲缘关系及同种植物不同产地的遗传变异,并制定正品金线莲的DNA指纹图谱,采用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对兰科开唇兰属植物花叶开唇兰Anoectochilus roxburghii(Wall．)．Lindl．、台湾开唇兰A.formosanus Hay．进行了鉴定,结果选择的7个引物对3个品种共扩增出98个位点,其中3个引物为高特异性引物。结论 RAPD技术不仅能鉴别种间差异,而且能揭示同种不同产地植物的遗传变异。     

金黄色葡萄球菌随机扩增DNA多态性分型研究

目的:建立金黄色葡萄球菌随机扩增DNA多态性(RAPD)分型技术,以应用于临床菌种鉴定及流行病学调查。方法:对临床分离的15株金黄色葡萄球菌,酚氯仿法提取其DNA后行RAPD分型,同时进行噬菌体分型。结果:15株临床分离株大多数产生独特而稳定的RAPD带型,可分成5个噬菌体型和14个RAPD谱型。采用同一反应体系,产肠毒素金黄色葡萄球菌未出现RAPD谱型。结论:RAPD基因分型技术不需己知核酸序列,分型率高,分辩力强,简便快捷,可为金黄色葡萄球菌临床分离株提供分型标志,是分子流行病学研究的有效方法。     

玉竹及其掺伪品的RAPD鉴定

目的探索鉴别玉竹及其掺伪品热河黄精、黄精等药用植物的方法。方法采用显微鉴定和RAPD技术进行药材鉴别。结果通过所选引物进行PCR扩增,可以获得特异性的谱带,将玉竹及其主要掺伪品热河黄精、黄精区分开。结论建立的该分析方法可用作区分玉竹及其掺伪品的依据。