金钗石斛及其相似种RAPD优化和DNA多态性分析

目的:以金钗石斛为材料,建立石斛的RAPD优化条件,应用于石斛相似种的DNA多态性分析.方法:分别设置模板DNA,Mg2 ,Taq DNA聚合酶,dNTPs,引物的浓度梯度,优化RAPD反应体系.结果:在25 μl总反应体系中,以上反应物的用量分别为100 ng,3.0 mmol/L,1.0 U,0.2 mmol/L,0.4 μmol/L时所获得的石斛属DNA指纹图谱谱带型清晰、重复性好.其中用S48 扩增的DNA指纹图谱具有更大的相似性,适合于石斛真伪鉴别;而S90 扩增的片段具有明显的多态性,适合于石斛遗传分化研究.结论:优化后的RAPD方法可作为研究石斛属植物的遗传多样性及真伪鉴别的有效方法.     

甘肃产秦艽的DNA指纹图谱鉴别

目的 对产于我国甘肃省的中药秦艽的3种基源植物秦艽、麻花秦艽与小秦艽进行RAPD分析,建立具有鉴别意义的DNA指纹图谱.方法 采用RAPD分子标记对秦艽的基因组DNA进行PCR扩增,利用NTSYSpc 2.1和Popgene 3.2软件分析3种秦艽间的亲缘关系,构建树系图.结果 从80条RAPD引物中筛选出4条具有鉴别意义的多态性引物,在3种秦艽中共得到39个DNA条带,其中共有条带2条,多态条带37条.据此获得了能有效区别3种秦艽的多态性RAPD指纹谱.结论 甘肃产秦艽的3种基源植物遗传分化明显,RAPD方法能有效地将它们区分鉴别.     

利用RAPD分析13种石斛属植物的遗传多样性和亲缘关系

目的通过对13种石斛属植物进行遗传多样性和亲缘关系分析,为更好地开发利用石斛资源奠定基础。方法随机扩增多态性DNA(RAPD)技术分析遗传多样性,U PGM A类平均法进行聚类分析。结果利用筛选出的10个随机引物对供试材料DNA进行随机扩增,共得到188条带,其中多态性带有180条,多态性百分率为95.74%。采用U PGM A类平均法对扩增出的谱带进行遗传聚类分析,得出反映各种间亲缘关系的树状图。在遗传距离(D)=0.63处,可将供试材料分为3类,RAPD对基因组的分析结果与传统分类学的结果差异不大。结论该标记技术对石斛属植物的遗传多样性和分类研究是可行的。     

石斛属4种植物的AFLP分析

目的 研究石斛属植物DNA指纹图谱，初步探讨AFLP分子标记技术在石斛地道性鉴别上的应用。方法采用扩增片段长度多态性(AFLP)技术对石斛属内石斛组4个种和一个外类群种进行基因组DNA多态性分析。结果从64对引物组合中选出5对引物组合构建了5个种的DNA指纹图谱。通过聚类分析，石斛属4种植物聚成一个大类，彼此关系得到了很好的分辨，并获得bootstrap校验的有力支持。结论AFLP技术可用于药用石斛DNA指纹图谱研究。     

石斛属几种植物遗传关系的SRAP和RAPD 比较分析

目的 利用 SRAP 和 RAPD 两种分子标记技术对9份石斛种质进行遗传多样性研究。方法 用 40 对 SRAP 引物组合和 36 个 RAPD 引物分别对供试石斛的基因组 DNA 进行扩增。结果 SRAP 引物组合共扩增条带 1 977 条,多态性比率为 90.2%,遗传相似系数 GS 值变化范围为 0.330 2～0.789 2。RAPD 引物共扩增出 281 条带,多态性比率为 87.1%,GS 值变化范围为 0.494 2～0.773 1。利用两种标记得到的聚类结果存在一定的差异,SRAP 聚类结果与传统的基于形态特征建立的分类结果比较一致,较好地体现了供试品种的亲缘关系、地域特性。在 9 个石斛供试种间,SRAP 的标记指数 MI 值 (16.46) 是 RAPD 标记 MI 值 (3.67) 的 4.5 倍,表明 SRAP 具有更大的标记效率。结论 两种标记皆可有效应用于该属植物种质资源的遗传多样性分析。而 SRAP 标记在石斛的遗传多样性与亲缘关系的研究中,则表现出了极大的优越性。     

RAPD技术在中药狼毒鉴别中的应用

目的 :为提高鉴别中药狼毒及同科植物和瑞香狼毒的准确性和可操作性 ,有必要建立一种科学的方法。方法 :用分子生物学技术随机扩增多态性DNA(RAPD)对 5个不同品种狼毒进行分析。结果与结论 :提供了 5种狼毒鉴别的RAPD扩增指纹图谱 ,具有鉴别意义     

铁皮石斛人工栽培居群的遗传多样性研究

目的 了解铁皮石斛人工栽培居群的遗传多样性,为种质资源的保护与新品种的选育提供基础。方法 利用RAPD分子标记对浙江义乌、天台、建德、武义,云南麻栗坡、勐海的14个居群的铁皮石斛和1个居群的紫皮石斛进行遗传多样性分析。结果 从225个RAPD引物中筛选出15个引物,对105个铁皮石斛和3个紫皮石斛样本进行PCR扩增,共扩增出138条带,其中133条为多态性条带,多态性条带比率（PPB）为96.38%;14个铁皮石斛居群的多态位点（PPL）在10.79%～76.26%,平均为45.32%。结论 全国主产区人工栽培的铁皮石斛遗传多样性丰富,铁皮石斛种质的亲缘关系远近与其地理种源具有显著的相关性,与栽培地点无关。     

柴胡栽培种的RAPD和AFLP遗传关系研究

目的 应用不同的分子标记进行柴胡药材干根遗传多样性分析,为柴胡栽培种鉴别和药材鉴别奠定基础。方法 以柴胡栽培种干根为材料,采用RAPD和AFLP两种分析方法。结果 以筛选到的3条随机引物对9个柴胡栽培种进行RAPD分析,共扩增出28条DNA带,平均每条引物组合扩增9.33条带,其中多态性带为6.67条,多态性比率为71.43%;而在AFLP分析中,筛选出4对特异性引物,共获得107条DNA带,平均每对引物扩增26.75条带,其中多态性带为23.25条,多态性比率为86.92%。经统计分析,9个柴胡栽培种RAPD和AFLP分析的Jaccard遗传相似系数分别介于0.61～0.93和0.39～0.86。UPGMA聚类分析,两种标记方法均可将9个柴胡栽培种聚为3大类群,聚类结果相似但不完全相同。结论 以柴胡药材干根为材料,RAPD和AFLP两种分子标记均可用于植物种间及种下遗传关系分析,且AFLP条带较多,多样性丰富,更有利于柴胡属植物多样性的分析。     

ISSR-PCR在石斛种间鉴别中的应用

目的 采用ISSR-PCR方法对石斛属9种植物进行鉴别,探讨不同种石斛在DNA分子水平上的差异。方法 选取10条由SSR组成的引物,对9种石斛进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳分析。结果 10条引物中有7条扩增出多态性条带。每条引物可检测的多态性位点最少7个,最多14个,扩增片段大小为220-1260 bp。其中,引物UBC-807和UBC-864具有较高的多态性条带比率,均可以独立将所有被测种区分开来。结论ISSR-PCR作为一种简便、可靠的分子标记鉴定技术,可以作为石斛属种间鉴别的方法之一。     

珍稀中草药金线莲的RAPD研究

为了鉴别金线莲的品种,探索同属植物之间的亲缘关系及同种植物不同产地的遗传变异,并制定正品金线莲的DNA指纹图谱,采用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对兰科开唇兰属植物花叶开唇兰Anoectochilus roxburghii(Wall．)．Lindl．、台湾开唇兰A.formosanus Hay．进行了鉴定,结果选择的7个引物对3个品种共扩增出98个位点,其中3个引物为高特异性引物。结论 RAPD技术不仅能鉴别种间差异,而且能揭示同种不同产地植物的遗传变异。     

丽江山慈菇RAPD遗传变异初探

目的研究丽江山慈菇Iphigenia indica遗传变异及遗传结构。方法采用RAPD技术，对产自云南的3个居群进行DNA指纹检测。结果筛选出20个随机引物，对3居群扩增共产生120条DNA片段，在0．2～3kb，其中71条谱带具有遗传多态性，约占59．17％，平均每个引物扩增的DNA带数是3．55。Shannon index在丽江玉龙雪山居群(Ca)为0.1994，大理宾川鸡足山居群(Cb)为0．2007，丽江永胜片角镇居群(Cc)为0.2548；居群平均水平为0．2183，物种水平为0．2886。Nei’sgeneticidentity在Ca和Cb居群间为0．9309；在Ca和Cc居群间为0．9327；在Cb和Cc居群间为0，9466。居群间基因分化系数Gst为0．2044。结论RAPD分析可为丽江山慈菇保护对策和措施的制定，遗传育种和GAP种植方法及标准的制定，提供理论依据和基础资料。     

配对肝癌组织与非癌肝组织基因组差异的随机扩增多态性DNA分析

目的：研究同一肝癌患者配对肝癌组织与非癌肝组织基因组之差异。方法：应用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析技术。结果：６例配对标本作基因组差异分析显示，与各自配对的非癌肝组织相比，所有肝癌组织基因组ＤＮＡ的ＲＡＰＤ指纹图谱均存在差异，其中３例配对肝癌基因组中均存在一相同的０．９ｋｂ的随机扩增片段。结论：ＲＡＰＤ技术为差异基因分析提供了一有效方法。     

明党参栽培过程中遗传变异的RAPD分析

目的：从DNA水平上分析野生型明党参和栽培得到的明党参植株之间的遗传变异。方法：通过RAPD分子标记方法,筛选了80个随机引物,其中有52条随机引物能够扩增出条带,从中选取7个多态性强、重复性好的引物进行扩增。结果：实验共检测到31个位点,13个多态性位点,多态位点比率为41.9%,平均每个引物扩增4~5个条带,多态性条带2个。聚类分析显示野生明党参和栽培明党参之间遗传间距达0.277。结论：研究结果表明RAPD分子标记方法可以鉴定野生和栽培明党参,结果也表明明党参在栽培过程中出现了较强的遗传变异。     

RAPD技术分析嗜人按蚊种型方法的建立

目的：建立用RAPD－PCR技术鉴别中国不同纬度地区嗜人按蚊，特别是海南岛嗜人按蚊与大陆嗜人按蚊间有无种型差异的新方法。方法：收集海南，四川，江苏三地嗜人按蚊标本并传代培养，优化蚊基因组的DNA的提取纯化及RAPD－PCR扩增和产物检测的条件，筛选5条RAPD引物，结果：筛选出1条适合三地嗜人按蚊的引物并制定出了稳定的RAPD图谱，建立了RAPD－PCR分析嗜人按蚊种型的方法。结论：不同纬度三地嗜人按蚊大部分谱带是相同的，但它们的谱带数不一定相同，且少数谱带是完全不同的，初步表明我国嗜人按蚊存在一定的种型差异，从而为解释海南嗜人按蚊在生态习性和传疟作用方面为何与大陆嗜人按蚊不同从分子水平提供了一定的科学依据。     

非小细胞肺癌的随机扩增多态DNA分析

目的：用ＲＡＰＤ技术检测非小细胞肺癌组织的遗传改变。方法：选用４０条含１０个碱基的随机引物对１６例非小细胞肺癌进行ＲＡＰＤ扩增,扩增产物在含溴化乙锭的１．５％琼脂糖凝胶中电泳,紫外透视仪上观察照相。结果：４０条引物都能扩增出清晰的条带,其中２２条引物产生的条带在肿瘤与其相应正常组织间无差异,表现为单态性;１８条引物扩增出的ＤＮＡ序列在肿瘤与其相应正常组间存在差异,表现为带的缺失、增加、移动和带强弱     

粘质沙雷氏菌和红曲霉跨界原生质体融合子的分子鉴定

目的 应用分子生物学方法鉴定粘质沙雷氏菌和红曲霉原生质体跨界融合子.方法 采用随机扩增多态性分析和功能基因PCR扩增的方法对9个融合子进行分子鉴定.结果 筛选出的6条随机引物对2个亲本和9个融合子的DNA均能扩增出清晰的条带,除第5号融合子和粘质沙雷氏菌的相似指数略低,其余8个融合子和2个亲本的相似指数均大于2个亲本之...     

正杂交西蜂——松丹一号与反杂交西蜂——松丹二号DNA基因组的多态性研究

目的：区别松丹一号与松丹二号的DNA基因组的多态性。方法：采用随机引物－聚合酶链反应。结果：松丹一号保留了它母本平湖、老美意西蜂在994bp和695bp之间的1条区带，而松丹二号则丢失了此条区带；松丹一号保留了它母本平湖、老美意西蜂在377bp入237bp之间的1条区带，而松丹二号此条区带并不清楚，松丹二号只保留母本墨环西蜂的237bp以下的1条带。结论：松丹一号与松丹二号的基因组发生了明显的变异。