红花栝楼鲨烯合酶基因的克隆及其序列分析

目的克隆红花栝楼鲨烯合酶(squalene synthase,SS)的基因并进行序列分析,为进一步研究葫芦科植物三萜合成通路关键酶SS的正选择位点与功能的关联性分析奠定基础。方法根据绞股蓝与罗汉果SS基因c DNA比对分析的结果,设计SS的5’端简并引物,采用3’RACE扩增红花栝楼SS全长c DNA基因。结果获得红花栝楼SS c DNA全长共1 466个核苷酸,其中包括一个含有1 254个核苷酸的开放读码框,编码417个氨基酸残基。通过NCBI的Blast比对,发现红花栝楼SS基因编码的氨基酸序列与已知植物SS基因编码的氨基酸序列同源性为78%~94%,核苷酸的同源性为74%~93%。结论成功克隆了红花栝楼SS的全长c DNA,为进一步研究红花栝楼SS基因结构、基因表达、基因突变提供了基础,并为葫芦科植物三萜合成通路关键酶SS的正选择位点与功能的关联性分析提供了数据支持。     

外来人口结核病控制模式实施性研究

目的：研究外来人口结核病控制模式。方法：外来人口纳入地区结核病防治规划，与本地居民结核病一样实行DOTS管理。结果：登记外来人涂阳肺结核5771例，治愈率96．8％，深圳疫情明显下降，外来人口结核病得到有效管理。结论：将外来人口结核病纳入区域结核病控制是必要的和可行的。     

绞股蓝叶片分化与植株再生

目的 建立高效稳定的绞股蓝受体系统,为绞股蓝基因转化研究奠定基础.方法 以五叶绞股蓝Gynostemma pentaphyllum叶片作为外植体,采用不同配比激素的MS培养基进行诱导培养获得丛生芽,进而生根获得再生植株.结果 采用MS 6-BA 1.0 mg/L培养基时,绞股蓝叶片分化频率最高(40%),MS 6-BA1.0 mg/L适合绞股蓝丛生芽继代增殖,1/2 MS适宜诱导生根获得健全再生植株.结论 为利用根癌农杆菌介导法进行绞股蓝基因转化建立了稳定的直接分化再生系统.     

RAPD在绞股蓝种类鉴别应用上的条件摸索

目的 为采用随机扩增多态性技术鉴别绞股蓝及其易混品乌蔹莓,进行RAPD条件摸索.方法 运用改进CTAB法提取七叶绞股蓝、五叶绞股蓝、乌蔹莓以及烟草基因组DNA,摸索影响RAPD的条件.结果 用改进CTAB法提取所得的DNA质量较好,均能用于RAPD扩增,并摸索出了最优RAPD扩增条件.结论 改进的CTAB法适合于这4种植物的DNA提取,摸索得到的RAPD扩增条件可用于绞股蓝种类鉴别及与其易混品乌蔹莓的区别.     

绞股蓝RAPD标记及序列分析

目的 利用绞股蓝RAPD标记有效鉴别绞股蓝及其伪品。方法 用19条引物对17个绞股蓝样品和一个乌蔹莓样品进行RAPD-PCR扩增,并对绞股蓝DNA特异条带克隆测序及序列分析。结果 获得一个绞股蓝RAPD标记。经克隆测序,8个序列高度保守,片段长度在766～770 bp,相似性均在97%以上。结论 获得的RAPD标记可以作为合成探针的基础,用于鉴别绞股蓝及其伪品。     

两种提取白桂木基因组DNA方法的比较研究

[目的]寻找适合白桂木基因组DNA的提取方法。[方法]采用改良的CTAB法及试剂盒法提取白桂木基因组DNA。用紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法检测白桂木DNA纯度、浓度,比较两种方法的适用性。[结果]试剂盒法能够较好去除多糖及其他次生代谢产物。[结论]试剂盒法更适合从白桂木中提取高质量的DNA。     

3种广西钩藤属药用植物的RAPD多态性分析

目的运用随机扩增多态性技术探索广西钩藤属药用植物的遗传多态性,为其种质鉴定提供依据。方法采用优化的试剂盒提取法提取大叶钩藤、白钩藤、毛钩藤3种植物的总DNA。用经过筛选的18条10个碱基的随机引物进行PCR扩增。结果优化后的试剂盒提取法可有效获取3种钩藤属植物的基因组DNA,18条随机引物扩增得到条带共260条,其中多态性条带231条,多态率达到88.9%,扩增效果好。按UPGMA法进行聚类分析,计算其遗传相似系数,结果显示,5份钩藤供试材料聚为3类。结论 3种广西钩藤属药用植物的聚类结果与其种和地理区域远近一致,与形态学观察可能存在差异。所得RAPD标记可用于钩藤属药用植物的多态性研究,并为今后开发遗传鉴定的分子标记奠定基础。     

绞股蓝的RAPD指纹图谱鉴定及其特异DNA片段克隆、序列分析

目的:在DNA分子水平上鉴定绞股蓝及其伪品乌蔹莓.方法:用筛选出的两条随机引物(WGS001,WGS004)对不同采集地绞股蓝及乌蔹莓基因组DNA进行PCR扩增,将引物WGS004扩增7份绞股蓝样品中的具有相同迁移率的1条500 bp左右的DNA片段进行克隆、测序、一致性分析,并在NCBI上作Blastn比对检索.结果:以上两条引物能分别扩增得到绞股蓝与乌蔹莓样品基因组的差异性DNA片段,这些片段可以明确区别绞股蓝与乌蔹莓.经克隆获得的7条绞股蓝DNA序列间的一致性在45.7%～94.5%之间,在NCBI上检索后未见相似序列的报道,为新序列.结论:RAPD技术可有效地鉴别绞股蓝和乌蔹莓,本研究克隆得到一段绞股蓝DNA序列,为绞股蓝的品种鉴定、辅助选择育种等研究奠定了基础.