RNA诱导沉默复合体(RISC)功能研究进展

小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)和微RNA(microRNA,miRNA)是RNA干扰(RNAinterference,RNAi)途径中的2种重要的小RNA(small RNA)。在发挥转录后基因沉默效应之前,siRNA和miRNA需进入相应的RNA诱导沉默复合体(RNA-induced silencing complex,RISC)siRISC和miRISC中。RISC     

近视相关非编码RNA的研究进展

非编码RNA是一类无法借由翻译形成蛋白质的RNA,包括微RNA(microRNA,miRNA)、长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)和环状RNA(circular RNA,circRNA)等,曾被认为是"转录噪音".研究发现非编码RNA参与许多人类疾病病理生理过程,包括细胞的增殖、分...     

RNAi在肿瘤中的研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发的基因沉默(genesilencing)。在此过程中,与双链RNA有同源序列的信使RNA(mRNA)被降解,从而抑制了该基因的表达。因RNAi所致的基因沉默发生在转录后水平,所以被称为转录后基因沉默(post transcrip     

siRNA技术诱导基因沉默在骨科疾病中的研究进展

<正>自从1998年Fire等[1]证实Guo等[2]发现的正义RNA抑制同源基因表达的现象为RNA干扰(RNA interference,RNAi)以来,RNAi技术经历了一个迅速发展的过程。RNAi技术是利用双链RNA(double-stranded RNA,ds RNA)降解细胞内同源信使RNA(messenger RNA,m RNA),从而阻断特定基因表     

RNA干扰技术在肿瘤基因治疗中的研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,也称为基因沉寂疗法(Gene Silencing),是利用双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)诱发对宿主细胞特异性RNA转录的抑制,从而抑制特异目的基因表达的方法.也即双链RNA在细胞内RNA酶Ⅲ的作用下,被裂解成21～23个核苷酸(nucleotide,nt)的小干扰性RNA(small interference RNA,siRNA),进而启动细胞内RNAi反应,特异性地阻断靶基因表达的过程.     

RNA干扰技术研究新进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA介导的序列特异的基因沉默现象,它在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因的表达,具有高效性和高特异性的特点.小干扰RNA(small interfering RNA 或 short interfering RNA,siRNA)是RNAi作用中的效应分子,作为引导序列,按照碱基互补原则识别靶基因转录出的信使RNA(mRNA),并引导沉默复合物(RNA-induced silencing complex,RISC)复合体结合mRNA.     

RNA依赖的RNA聚合酶(RdRP)与非编码RNA(ncRNA)调控的研究进展

 RNA依赖的RNA聚合酶(RNA dependent RNA polymerase,RdRP)是一类以单链RNA为模板合成互补RNA链的聚合酶。根据其来源可分为病毒RdRP和细胞RdRP,病毒RdRP对病毒基因组复制及病毒引起的宿主免疫反应有重要作用,宿主细胞RdRP主要参与RNA干扰(RNA interference,RNAi)现象。越来越多研究证明RdRP的功能与非编码RNA (non-coding RNA,ncRNA)密不可分,本文对病毒RdRP、细胞RdRP与ncRNA调控之间的关系作了较详细的阐述,同时对丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)诱发的肝癌机制提出新的观点。     

JEV和EV71感染SH-SY5Y细胞内吞途径的初步研究

目的初步探讨乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)和肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染人神经细胞的内吞途径机制。方法通过蛋白酶K实验检测JEV和EV71感染人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的入侵速率。采用MTT法检测针对不同内吞途径关键分子的小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)以及化学抑制剂对SH-SY5Y细胞的细胞毒性。用JEV和EV71感染si RNA或化学抑制剂预处理的SH-SY5Y细胞,荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)检测不同处理对两种病毒m RNA和靶蛋白表达的影响。结果确定针对网格蛋白重链的si RNA(si CHC)最高工作浓度为50 nmol/L,针对小窝蛋白1的si RNA(si CAV1)的最高工作浓度为100 nmol/L。q RT-PCR结果显示,si CHC转染神经细胞能抑制EV71 m RNA的表达(t=17.153,P0.01),但不能抑制JEV m RNA的表达(P0.05);而si CAV1转染神经细胞能抑制JEV m RNA的表达(t=11.406,P0.01),但不能抑制EV71 m RNA的表达(P0.05)。针对网格蛋白途径的化学抑制剂氯丙嗪(Chlorpromazine)可抑制EV71 m RNA的表达(t=4.114,P0.05),且呈剂量依赖性,而氯丙嗪并不影响JEV m RNA的表达(P0.05);针对小窝途径的化学抑制剂非律平(Filipin)可抑制JEV m RNA的表达(t=4.064,P0.05),且呈剂量依赖性,而非律平并不影响EV71 m RNA的表达(P0.05),与si RNA结果相一致。结论初步推测JEV入侵人神经细胞是通过小窝蛋白1依赖性的内吞作用入胞,而EV71感染人神经细胞则是通过网格蛋白依赖型的内吞途径。     

RNA恒温扩增法在肺炎支原体检测中的应用

目的 探讨RNA恒温扩增法检测肺炎支原体的可行性及其应用价值.方法 采集2016年5~7月在我院住院治疗的200例患急性呼吸道感染儿童咽拭子,分别用RNA恒温扩增法和PCR荧光探针法进行肺炎支原体检测,分别计算两种检测方法的检出率,根据公式计算灵敏度和特异性,并进行统计学分析.结果 RNA恒温扩增法检出肺炎支原体17例,检出率为8.5%,PCR荧光探针法检出肺炎支原体18例,检出率为9.0%,两种方法的检出率比较差异无统计学意义(P>0.05);RNA恒温扩增法与PCR荧光探针法相比灵敏度为88.9%、特异度为99.5%.结论 RNA恒温扩增法与PCR荧光探针法检出率相当,具有较高的灵敏度和特异度,可以作为一种新的方法用于肺炎支原体临床检测.     

一种从总RNA制备非放射性cDNA探针的方法

目的介绍一种从总ＲＮＡ制备ＤＩＧ标记的非放射性ｃＤＮＡ探针的方法。方法以总ＲＮＡ的反转录产物为模板,用随机引物延伸法掺入ＤＩＧ－１１－ｄＵＴＰ来制备ｃＤＮＡ探针。结果该方法标记的探针灵敏度较高,可达０．０１ｇｐ。结论这种ｃＤＮＡ探针可用于差异筛选的反向杂交及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交。     

利用寡核苷酸膜芯片检测SARS病毒

目的：建立寡核苷酸膜芯片技术检测SARS病毒。方法：以SARS冠状病毒RNA聚合酶基因(P基因)作为目的基因．参考WHO公布的特异性引物序列，将SARSRNA进行P基因克隆。以地高辛标记的引物，扩增质粒DNA，在P基因上设计11条寡核苷酸探针，点于尼龙膜，制备膜芯片，与地高辛标记的PCR产物杂交显色。结果：以此特异性引物成功地扩增出了440bp的基因片段；以T载体成功的克隆了此基因；克隆的P基因为靶序列，与膜芯片杂交显示，能与probe1，probe2，probe4，probe6，probe8，probe96条正义链特异性探针稳定杂交，其中Drobe1，probe4，probe9杂交效果最好，作为最后选择的探针。结论：膜芯片技术能快速敏感地鉴定出标本中的SARS病毒RNA。     

人淋巴细胞免疫反应性生长激素mRNA的扩增与鉴定

用正常人淋巴细胞，总ＲＮＡ与人垂体生长激素特异性探针进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交，得到一条弱的杂交带，其位置与人垂体生长激素分泌瘤总ＲＮＡ的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交带近乎一致。根据人垂体生长激素ｃＤＮＡ顺序设计合成寡核苷酸引物，用逆转录。聚合酶链反应相结合的方法，从正常人外周血淋巴细胞．总ＲＮＡ中扩增出的ｃＤ－ＮＡ与人垂体生长激素ｃＤＮＡ大小相似，证实正常人淋巴细胞有免疫反应性生长激素ｍＲＮＡ的表达。     

应用直接酪胺信号放大方法显示Y染色体荧光原位杂交信号

目的用直接酪胺信号放大(tyramine signal amplification,TSA)方法显示Y染色体荧光原位杂交信号,以提高检测脑组织切片Y染色体荧光原位杂交信号的灵敏度。方法以小鼠Y染色体重复序列pY353/B cDNA为模板标记RNA探针,以雌性小鼠为对照,用原位杂交方法杂交Y染色体特异性基因区域,分别用直接TSA方法和"三步抗体法"显示荧光原位杂交信号。通过计数Y染色体阳性细胞核占所有细胞核的百分率来计算TSA法和"三步抗体法"检测脑组织切片Y染色体荧光原位杂交信号的灵敏度,比较分析两种方法灵敏度的差异。结果"三步抗体法"在脑切片检测Y染色体阳性信号的灵敏度和特异度分别为85.67%和100%;直接TSA法在脑切片检测Y染色体阳性信号的灵敏度和特异度分别为92.82%和100%。结论TSA方法检测脑组织切片Y染色体荧光原位杂交信号的灵敏度比"三步抗体"法有显著的提高,可以用于脑内追踪和分析骨髓干细胞的迁移规律。     

急性白血病细胞p53基因表达

目的：检测急性白血病细胞内ｐ５３基因表达情况。方法：３Ｈ－ｄＡＴＰ标记基因探针的斑点杂交。结果：急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）表达ｐ５３ＲＮＡ水平与正常对照类似，急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）中５９．４％表达低水平ｐ５３或表达缺失，ｐ５３表达缺失在Ｍ４、Ｍ５中多见。结论：急性白血病细胞中存在ｐ５３ＲＮＡ表达异常。     

鼻咽癌p16、p130/Rb2、nm23-H1基因mRNA表达研究

目的检测鼻咽癌组织中抑癌基因p16、p130/Rb2、nm23-H1基因在mRNA水平上的表达,探讨其与鼻咽癌诊断及其生物学行为的关系。方法p16基因mRNA检测采用生物素标记RNA探针的原位杂交技术;p130/Rb2、nm23-H1基因先提取鼻咽癌及鼻咽慢性炎症患者鼻咽部活检组织的总RNA,采用实时荧光定量RT-PCR技术检测鼻咽癌组织中p130和nm23基因mRNA含量。结果30例NPC标本原位杂交阳性13例,p16mRNA阳性表达为43.3%,3个高发家系的NPC标本无阳性表达,20例对照(鼻咽炎患者的标本)全部有p16mRNA阳性表达。鼻咽癌组p130和nm23-H1基因mRNA含量显著地低于对照组,经秩和检验P值<0.05,p130和nm23-H1基因mRNA在癌组织中表达与慢性咽炎组织比较均有显著性差异;鼻咽癌有无转移者其表达也有显著性差异。结论表明p16、p130/Rb2、nm23-H1mRNA在鼻咽癌组织中均呈低表达,提示p16、p130/Rb2、nm23-H1基因的突变或缺失可能对鼻咽癌的发生发展及恶性行为有重要意义。     

鼻咽癌p16、p130/Rb2、nm23-H1基因mRNA表达研究

目的检测鼻咽癌组织中抑癌基因p16、p130/Rb2、nm23-H1基因在mRNA水平上的表达,探讨其与鼻咽癌诊断及其生物学行为的关系。方法p16基因mRNA检测采用生物素标记RNA探针的原位杂交技术;p130/Rb2、nm23-H1基因先提取鼻咽癌及鼻咽慢性炎症患者鼻咽部活检组织的总RNA,采用实时荧光定量RT-PCR技术检测鼻咽癌组织中p130和nm23基因mRNA含量。结果30例NPC标本原位杂交阳性13例,p16mRNA阳性表达为43.3%,3个高发家系的NPC标本无阳性表达,20例对照(鼻咽炎患者的标本)全部有p16mRNA阳性表达。鼻咽癌组p130和nm23-H1基因mRNA含量显著地低于对照组,经秩和检验P值<0.05,p130和nm23-H1基因mRNA在癌组织中表达与慢性咽炎组织比较均有显著性差异;鼻咽癌有无转移者其表达也有显著性差异。结论表明p16、p130/Rb2、nm23-H1mRNA在鼻咽癌组织中均呈低表达,提示p16、p130/Rb2、nm23-H1基因的突变或缺失可能对鼻咽癌的发生发展及恶性行为有重要意义。     

人端粒酶RNA的cDNA探针制备及其对胃粘膜细胞端粒酶RNA表达的检测

目的 建立人端粒酶RNA表达的检测方法。方法 制备人端粒酶RNA，(human telomeraseRNA，hTR)的cDNA探针，分别应用RNA斑点杂交与端粒重复序列扩增法(TRAP)分析检测不同胃粘膜的端粒酶RNA的表达与端粒酶活性。结果 人端粒酶RNA的cDNA探针制备成功。18例活检胃癌组织及45例手术胃癌组织RNA斑点杂交检测的阳性率均为l00％，相应TRAP分析的阳性率分别为88．89％、86．67％，低于RNA斑点杂交(P＜0．05)。同时RNA斑点杂交结果提示在非癌胃组织中随着肠化程度增高人端粒酶RNA表达也增强。结论 RNA斑点杂交检测人端粒酶RNA，具有高度的敏感性和特异性，弥补了TRAP分析敏感性不足的缺点。     

用PAGE电泳法检测腹泻婴幼儿粪便中轮状病毒RNA

目的　探讨婴幼儿轮状病毒感染诊断方法。方法　用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)检测轮状病毒RNA。结果　 41份腹泻婴幼儿粪便标本中有 16份为RNA阳性 ,阳性率为 39%。结论　用PAGE电泳方法检测轮状病毒RNA准确可靠 ,不易出现假阳性