Akt信号通路在邻苯二甲酸二丁酯诱导雄性胎鼠发生尿道下裂中的表达研究

目的:邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)孕晚期暴露诱导子代Spraque-Dawley大鼠发生尿道下裂,探讨Akt信号通路及其下游关键蛋白核转录因子κB(nuclear factor-κ-gene binding,NF-κB)在胎鼠生殖结节中的差异表达,研究该通路在DBP致大鼠生殖系统发育异常过程中的作用机制?方法:孕SD大鼠20只,随机分为染毒组和对照组,在妊娠时间(gestation day,GD)14~18 d,每天通过灌胃分别给予DBP 800 mg/kg和大豆油,在 GD19时提取染毒组发生尿道下裂胎鼠与对照组胎鼠的生殖结节组织,用Western blot检测磷酸化Akt(p-Akt)?Akt和NF-κB的表达情况,同时用免疫组化分析p-Akt的表达情况?结果:尿道下裂组与对照组中p-Akt?Akt和NF-κB相对表达量的比值分别为3.057 ± 0.026?2.624 ± 0.073和3.524 ± 0.035(n = 10,P < 0.05),且尿道下裂组中p-Akt蛋白相对量在总蛋白中所占的比例较对照组高?p-Akt定位于生殖结节上皮细胞,尿道下裂组p-Akt染色明显强于对照组? 结论:DBP干预大鼠生殖结节中Akt信号通路及其下游NF-κB的正常表达,进而影响了上皮细胞增殖?凋亡及尿生殖褶的融合,这可能是尿道下裂发生的机制之一?     

Lamin B1在邻苯二甲酸二丁酯致大鼠尿道下裂发生中的表达变化

目的:利用邻苯二甲酸二丁酯(di-n-butyl phthalate,DBP)胚胎晚期暴露导致SD胎鼠尿道下裂发生的动物模型,验证Lamin B1在尿道下裂与正常胎鼠阴茎中的差异表达,以进一步探讨尿道下裂的发生机制?方法:妊娠14~18天 SD雌鼠20只,随机分为2组,实验组和对照组分别给予DBP 800 mg/(kg·d)和大豆油2 ml/d灌胃,孕期第19天剖宫产后记录雄性胎鼠肛门和生殖器之间的距离(AGD)?出生体重(BW)及尿道下裂发生数,取雄性胎鼠阴茎,运用免疫印迹法和免疫组织化学方法分析Lamin B1的表达情况?结果:实验组AGD/BW与对照组相比有显著性差异(P < 0.05);尿道下裂发生率为40%;Lamin B1在对照组的相对表达量为0.923±0.013(n=10),实验组为0.593±0.014(n=10),差异有统计学意义(P < 0.05);Lamin B1主要定位于尿道上皮细胞,对照组染色强度明显强于实验组?结论:DBP灌胃期间改变了尿道组织中Lamin B1的表达,影响了细胞迁移和尿生殖褶的融合,这可能是尿道下裂发生的原因之一?     

邻苯二甲酸二丁酯干预Fgfs信号通路致雄性仔鼠尿道下裂发生的分子机制研究

目的:通过验证邻苯二甲酸二丁酯(DBP)孕期染毒所致尿道下裂雄性仔鼠生殖结节内成纤维细胞生长因子(Fgfs)及其受体(Fgfr)信号通路中关键基因的表达异常,探讨其在DBP生殖毒性过程中的作用机制.方法:孕鼠20只,随机分2组,在怀孕(GD)14～18天期间,每天分别灌胃给予大豆油、DBP 750 mg/kg,出生后第1天(PND1),统计仔鼠出生数、尿道下裂发生率,称量雄性仔鼠体重,肛门至生殖器距离(AGD);PND7,取尿道下裂雄性仔鼠生殖结节,用实时定量(real-time quantitative)RT-PCR方法检测生殖结节中Fgf8、Fgf10、Fgfr2的mRNA表达水平.结果:DBP染毒后导致新生仔鼠与正常组相比数量明显减少,雄性仔鼠体重明显下降、AGD明显缩短,雄性仔鼠尿道下裂的发生率为48.83%.同时,与对照组相比,DBP致尿道下裂雄性仔鼠生殖结节中Fgf8、Fgf10、Fgfr2的mRNA的表达水平明显下降.结论:DBP对母体有着明显的毒性作用,DBP干预了Fgfs信号通路中关键基因的表达,这可能是DBP导致生殖结节发育异常,引起尿道下裂的重要原因.     

对尿道下裂大鼠生殖结节中lncRNA表达的初步研究

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)在邻苯二甲酸二丁酯(DBP)诱导的尿道下裂大鼠生殖结节中的表达 方法 在孕鼠孕13-18天时按体重800mg/kg DBP溶于1ml玉米油灌胃,对照组每天给予1ml玉米油。于孕19天时取出胎鼠,分别取下灌药组发生尿道下裂和对照组雄性胎鼠的生殖结节,提取RNA,构建RNA测序文库测序。对测序结果的lncRNA进行筛选、差异分析和功能预测,再随机筛选4条lncRNA用qRT-PCR验证其表达量。结果 与对照组相比,尿道下裂组生殖结节中有195个差异lncRNA,136个差异mRNA,qRT-PCR结果与测序结果一致。差异lncRNA功能最多分布在生长激素释放激素受体的结合;分布最多的的信号通路为金葡菌感染通路 结论 邻苯二甲酸二丁酯诱导的尿道下裂雄性大鼠与正常雄性大鼠相比,其生殖结节中lncRNA和mRNA显著改变,lncRNA可能通过与mRNA相互作用参与到尿道下裂形成过程中生殖结节的发育。     

雄性大鼠生殖结节中相关lncRNA和mRNA可能参与邻苯二甲酸二丁酯诱导的尿道下裂形成过程

目的：探讨雄性大鼠生殖结节中长链非编码RNA（long non?coding RNA,lncRNA）和mRNA在邻苯二甲酸二丁酯（di?n?butyl phthalate,DBP）诱导雄性大鼠尿道下裂形成中的可能作用。方法：在孕鼠孕13~18 d时每天按体重800 mg/kg DBP溶于1 mL玉米油灌胃,对照组每天给予1 mL玉米油。于孕19 d时取出胎鼠,分别取下灌药组发生尿道下裂胎鼠和对照组雄性胎鼠的生殖结节,提取RNA,构建RNA测序文库测序。对测序结果的lncRNA进行筛选、差异分析和功能预测,再随机筛选8条lncRNA用qRT?PCR验证其表达量。结果：与对照组相比,尿道下裂组生殖结节中有598个差异mRNA,427个差异lncRNA,qRT?PCR结果与测序结果一致。在生物过程、细胞组成、分子功能方面,差异表达mRNA富集程度最高的分别是红细胞生长、血红蛋白合成、结合珠蛋白结合。分布最多的的信号通路为病毒性心肌炎通路。差异lncRNA功能最多分布在生长激素释放激素受体的结合;分布最多的信号通路为金葡菌感染通路。结论：邻苯二甲酸二丁酯诱导的尿道下裂雄性大鼠与正常雄性大鼠相比,其生殖结节中lncRNA和mRNA的差异表达显著,lncRNA可能通过与mRNA相互作用参与尿道下裂的形成过程。     

邻苯二甲酸二乙酯诱导的大鼠尿道下裂与Mafb的表达相关:基于转录组测序结果

目的通过转录组测序筛选大鼠尿道发育过程中相关差异基因,并进行验证;探究邻苯二甲酸二乙酯（DEHP）诱导SD大鼠 尿道下裂的发生机制。方法40只成年SD孕鼠随机分成4组（n=10）,前两组予以空白对照处理,分别于妊娠期16 d（GD16组） 和GD19 d（GD19组）剖宫产取出雄性胎鼠,将收集好的胎鼠阴茎组织进行转录组测序,lllumina HiSeq 2000筛选出差异表达基 因（DEGs）,然后对DEGs进行差异基因功能（GO）和pathway显著富集性分析;选取其中的DEG（Mafb）进行免疫荧光验证。后 两组分别予以玉米油（对照组）和DEHP [750 mg/(kg·d)]（DEHP暴露组）于GD12 d至GD19 d每日灌胃处理,GD19 d剖宫产取 出雄性胎鼠,并判断有无尿道下裂的发生。扫描电镜和HE染色观察阴茎组织形态学改变,免疫荧光和Western blot检验阴茎组 织中Mafb、β-catenin的表达水平。结果GD19组胎鼠阴茎组织与GD16组胎鼠阴茎组织转录组测序结果示1360个DEGs（其中 上调797个,下调563个）,差异基因主要富集于细胞粘着斑信号通路、轴突导向信号通路、细胞外基质受体作用信号通路等,选 取DEG（Mafb）进行免疫荧光验证,发现Mafb的表达随发育显著增加,与测序结果相符。而DEHP暴露组胎鼠阴茎组织与对照 组胎鼠阴茎组织相比,Mafb、β-catenin表达水平显著下调（P<0.01）。结论随着大鼠阴茎组织的正常发育,Mafb的表达逐渐增 加;而DEHP暴露组较对照组Mafb、β-catenin表达显著下调,提示β-catenin信号通路影响Mafb表达可能与DEHP诱导大鼠尿道 下裂发生相关。     

Wnt/β-catenin信号通路在双酚A暴露对子鼠雄性生殖细胞表达

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路蛋白在出生前后双酚A（BPA）暴露对子鼠雄性生殖表达。方法 ICR孕鼠饮水染毒,自受孕0天随机分为：溶剂对照组、100 nmol/LBPA组、300 nmol/LBPA组;雄性仔鼠出生后6周处死,取睾丸组织,免疫组化检测β-catenin、DKK1蛋白的表达。结果免疫组化结果显示,与溶剂对照组比较,BPA暴露组β-catenin、DKK1蛋白表达明显增加,多分布在精原细胞和睾丸间质细胞中,且间质细胞强阳性。结论 Wnt/β-catenin信号通路蛋白可能参与了BPA暴露对子鼠雄性生殖细胞表达影响。     

GSK-3介导的信号通路在类风湿关节炎中的作用的研究进展

类风湿关节炎(RA)作为一种炎症性疾病,可导致多系统损伤,其中以关节损伤最为常见。RA的发病机制尚未明确,有研究表明,糖原合成酶激酶3(GSK-3)与RA的发展密切相关。GSK-3作为一种混杂的蛋白激酶,其不同底物的磷酸化对许多生理和病理产生重大影响,并在多种疾病中失调。GSK-3参与许多信号通路的调控,并通过不同的方式作用于RA。研究发现,GSK-3主要通过Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)、磷酸酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)、核因子-κB(NF-κB)3条信号通路在RA中发挥作用。该文就GSK-3与上述3条信号通路在RA中的发生、发展及作用做一综述。     

Wnt及整合素信号通路在大肠侧向发育型肿瘤中的表达及与其内镜形态学之间的关系

目的 探究Wnt信号通路及整合素信号通路在大肠侧向发育型肿瘤(LST)中的表达及与其内镜形态学之间的关系,以期对LST特殊生长方式的发生机制有一定的认识.方法 随机选取中南大学湘雅二医院2010年1月1日～2015年6月10日期间确诊的LST 52例,按内镜形态学分,结节混合型37例,颗粒均一型6例,扁平隆起型5例,假凹陷型4例;应用免疫组织化学方法测定Wnt信号通路中的β-catenin、磷酸化GSK-3β,及整合素信号通路中的Paxillin、ILK在此52例LST及对照组15例突起性腺瘤(PA)中的表达;应用统计学方法分析β-catenin、磷酸化GSK-3β、Paxillin、ILK在LST中的表达与其内镜形态学之间的关系.结果 β-catenin在LST中的表达较PA中的表达升高(P＜0.05);β-catenin、磷酸化GSK-3β、Paxillin、ILK在LST的假凹陷型中的表达较PA中的表达均升高(P＜0.05);β-catenin、磷酸化GSK-3β、ILK,在LST中的表达存在一定的相关性(P＜0.05),在PA中的表达不具有相关性(P＞0.05).结论 LST的假凹陷型,可能具有不同于其他内镜分型的特殊发生机制;LST中,ILK对Wnt信号通路的表达上调可能发挥一定的作用.     

阿尔茨海默病小鼠Wnt信号通路相关蛋白表达水平及意义*

目的 分析阿尔茨海默病（AD）小鼠Wnt信号通路相关蛋白表达水平及意义。方法 96只C57小鼠随机分为实验组和对照组,每组48只。实验组为APP/PS1双转基因小鼠,分为1、3、5及12月龄4组（对应月龄处死）,每组12只;对照组为正常C57小鼠,也分为1、3、5及12月龄4组,每组12只。通过Morris水迷宫实验进行学习能力和记忆训练测试。处死小鼠获取脑组织海马标本,观察海马区病理变化。Western blotting检测Wnt信号通路相关蛋白β-连环蛋白（β-catenin）、糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）及海马区突触前蛋白（Synapsin1）、海马区突触后蛋白95（PSD-95）表达水平。结果 实验组1、3、5及12月龄小鼠逃避潜伏期、首次跨越原平台时间逐渐延长（P?<0.05）;且实验组均较对照组同月龄延长（P?<0.05）。实验组小鼠随着月龄增加,其细胞数量减少、体积缩小、间隙扩大现象越明显,颗粒细胞及锥体细胞破坏现象越严重,锥体细胞树突均变短。实验组1、3、5及12月龄小鼠β-catenin、GSK-3β蛋白表达水平依次降低,Synapsin1及PSD-95表达水平亦依次降低（P?<0.05）。实验组均较对照组同月龄小鼠β-catenin、GSK-3β、Synapsin1及PSD-95蛋白表达水平降低（P?<0.05）。结论 AD小鼠Wnt信号通路β-catenin、GSK-3β蛋白表达水平下降,可能与其海马区病理变化及突触前后蛋白表达水平下降相关,Wnt信号通路的失活可能加快AD病理过程。     

糖尿病足创面中Wnt/β-catenin通路变化与细胞因子、凋亡基因的相关性研究

目的:研究糖尿病足(DF)创面中Wnt/β-catenin通路变化与细胞因子、凋亡基因的相关性。方法:选择我院收治的DF患者作为DF组,同期因外伤收治的非糖尿病患者作为对照组。收集DF组的创面组织和对照组的正常皮肤组织,测定Wnt/β-catenin通路分子、凋亡基因的mRNA表达量以及细胞因子的含量。结果:DF组创面中Wnt1、β-连环蛋白(β-catenin)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的mRNA表达量以及血管内皮生长因子(VEGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的含量明显低于对照组,糖原合酶激酶-3(GSK-3β)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)的mRNA表达量以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的含量明显高于对照组;Wnt1、β-catenin与VEGF、IGF-1、bFGF、Bcl-2呈正相关,与TNF-α、IL-6、Bax、Caspase-3呈负相关;GSK-3β与VEGF、IGF-1、bFGF、Bcl-2呈负相关,与TNF-α、IL-6、Bax、Caspase-3呈正相关。结论:糖尿病足创面中Wnt/β-catenin通路受到抑制且与细胞因子分泌、凋亡基因表达的改变有关。     

Wnt3a/β-catenin信号通路诱导人关节软骨间充质祖细胞增殖能力和向软骨分化的能力

目的研究Wnt3a/β-catenin信号通路对人关节软骨间充质祖细胞(mesenchymal progenitor cells,MPCs)老化的影响。方法 RT-PCR和Western blot检测正常人(对照组)和原发性骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者(OA组)MPCs中Wnt3a/β-catenin的表达。Western blot检测β-catenin在Wnt3a/β-catenin信号激活与阻断后细胞中的积累,MTT检测细胞的增殖情况,RT-PCR检测细胞向软骨细胞诱导后的分化情况。结果 OA组MPCs中Wnt3a和β-catenin蛋白表达明显高于对照组;在Wnt3a/β-catenin信号通路激活的对照组MPCs中β-catenin积累增加,阻断后β-catenin积累降低;Wnt3a/β-catenin信号通路激活的对照组MPCs增殖能力降低,阻断后增殖能力提高;Wnt3a/β-catenin信号通路激活的对照组MPCs向软骨细胞诱导分化后较对照组MPCs中Ⅱ型胶原、aggrecan、SOX9表达降低(P<0.01);Wnt3a/β-catenin信号通路激活的同时加入阻断剂,Ⅱ型胶原、aggrecan、SOX9表达有明显恢复(P<0.05);Wnt3a/β-catenin信号通路阻断组细胞与对照组MPCs组相比没有差异。结论 Wnt3a/β-catenin信号通路激活促进了MPCs老化,Wnt3a/β-catenin信号通路阻断能够抑制MPCs老化,Wnt3a/β-catenin在OA中可能发挥了重要作用。     

Kindlin-2 RNA干扰经Wnt信号通路抑制血管平滑肌细胞增殖

目的：观察Kindlin-2 RNA干扰（RNA interference,RNAi）对大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC）增殖的影响并探讨相关的作用机制。方法：构建并制备Kindlin-2 siRNA慢病毒载体并感染大鼠VSMC,CCK-8和BrdU技术检测重组Wnt3a蛋白诱导的VSMC增殖情况,实时定量PCR测定VSMC中Kindlin-2、c-Myc和cyclin D1 mRNA的表达水平,免疫共沉淀了解Kindlin-2和β-catenin的关系,Western blot检测VSMC中Kindlin-2、β-catenin、磷酸化β-catenin（Ser675）、GSK-3β和磷酸化GSK-3β（Ser9）蛋白的表达。结果：Kindlin-2 siRNA慢病毒载体能有效感染大鼠VSMC。CCK-8和BrdU结果表明Kindlin-2 RNAi能够显著抑制Wnt3a诱导的VSMC增殖（1.12±0.14 vs. 2.25±0.15,P=0.000;0.162±0.017 vs. 0.288±0.019,P=0.000）。与阴性对照组相比,Kindlin-2 RNAi组和Kindlin-2 RNAi+Wnt3a组中Kindlin-2、c-Myc和cyclin D1 mRNA表达水平均明显下降（0.964±0.014 vs. 0.530±0.029,P=0.000;0.980±0.025 vs. 0.572±0.022,P=0.000;0.979±0.009 vs. 0.590±0.035,P=0.002和0.964±0.014 vs. 0.569±0.027,P=0.000;0.980±0.025 vs. 0.741±0.026,P=0.001;0.979±0.009 vs. 0.769±0.017,P=0.023）。免疫共沉淀证实VSMC中Kindlin-2可以与β-catenin结合,而且Kindlin-2 RNAi+Wnt3a组中Kindlin-2、磷酸化β-catenin（Ser675）和磷酸化GSK-3β（Ser9）蛋白的表达水平较阴性对照+Wnt3a组明显降低（0.468±0.029 vs. 0.725±0.033,P=0.001;1.058±0.109 vs. 1.478±0.045,P=0.001;0.624±0.048 vs. 0.809±0.067,P=0.020）。但各组中总β-catenin和总GSK-3β蛋白水平没有明显变化（F=0.638,P=0.647;F=0.781,P=0.563）。结论：Kindlin-2 RNAi可以通过Wnt信号通路发挥作用并抑制VSMC增殖。     

小鼠胚胎干细胞向肝细胞定向分化过程中NF-κB表达

目的了解小鼠胚胎肝脏发育的过程和体外干细胞向肝细胞定向分化与NF-κB表达的关系,探讨干细胞向肝细胞定向分化的分子机制。方法分离培养扩增小鼠原始生殖嵴细胞,向培养液中分别加入20μg/L的β-神经细胞生长因子(β-NGF)、0.5g/L新生鼠肝脏提取液和胎肝细胞上清液,体外诱导小鼠生殖嵴来源的胚胎干细胞(PGCs)向肝样细胞定向分化。观察细胞的形态学变化;免疫细胞荧光法检测肝样分化细胞内α1-抗胰蛋白酶(AAT)及NF-κB的表达,Real-Time PCR方法检测诱导分化过程中NF-κB mRNA的表达。免疫组化法检测胚胎发育11.5、14.5、18.5d的肝脏组织中NF-κB的表达。结果 PGCs培养液中加入β-NGF、新生鼠肝脏提取液和胎肝细胞上清液可见部分细胞变为圆形或卵圆形;诱导12d后,圆形或卵圆形细胞呈ATT阳性表达;在诱导分化过程中NF-κB的表达逐渐增强,伴随肝细胞的成熟而呈阳性表达并由胞质转入胞核。Real-Time PCR方法检测结果显示,在诱导分化过程中NF-κB的表达升高(t=50.229~75.344,P<0.01)。在胎肝发育过程中随肝原细胞向肝成熟细胞转化,肝细胞胞质中NF-κB的表达逐渐增强,并向细胞核内转移。结论 NF-κB在PGCs体外向肝细胞分化和体内肝发生过程中变化一致。     

正常人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路激活后对MMP-2、MMP-7和MMP-9的调控作用

目的观察人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路激活后对其下游基因MMP-2、MMP-7和MMP-9的影响。方法采用GSK-3β选择性抑制剂SB-216763作用于正常人滑膜细胞,提取胞核蛋白β-catenin,采用Western blotting检测胞核蛋白β-catenin的表达变化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测人滑膜细胞上清液中MMP-2、MMP-7和MMP-9的表达变化。结果 Western blotting结果显示,GSK-3β选择性抑制剂SB-216763作用于人滑膜细胞后,β-catenin在胞核蛋白中的表达水平明显升高,并随着GSK-3β选择性抑制剂作用时间的延长,β-catenin的表达逐渐增强,呈时间依赖性,而在其干预的第48小时,胞核蛋白β-catenin的表达变化最明显,是正常组滑膜细胞的5.8696倍,具有统计学意义(P<0.05);酶联免疫吸附法(ELISA)结果显示,与正常组滑膜细胞比较,SB-216763干预的滑膜细胞上清液中MMP-2、MMP-7和MMP-9的表达分别是正常滑膜细胞的4.6188、3.2443和2.9979倍,具有统计学意义(P<0.05)。结论①SB-216763成功激活人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路;②MMP-2、7、9在人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路激活后其表达显著升高,证明激活Wnt/β-catenin信号通路对MMP-2、MMP-7和MMP-9的表达有一定的调控作用。③Wnt/β-catenin信号通路在骨性关节炎患者中是激活的,而其对MMP-2、MMP-7和MMP-9的调控可能是导致关节软骨降解,促进骨关节炎形成的作用机制之一。该实验结果有助于从单一通路阐释Wnt/β-catenin信号通路对膝骨关节炎的作用机制。     

Wnt/β-catenin信号通路在肾纤维化中的作用研究进展

<正>肾纤维化是炎症、损伤等因素刺激致肾脏胶原蛋白合成增多、降解减少、细胞外基质 (ECM) 大量积聚而导致肾间质纤维化、肾小球硬化、肾小管坏死的病理过程[1].肾纤维化过程中涉及了多种信号通路,如Wnt、JAK/STAT、TGF-β、NF-κB信号通路等.对Wnt信号通路,特别是经典Wnt信号通路的研究报道较多见,该信号通路通过调节转录协同激活因子β-catenin的数量发挥作用,其中β-catenin控制着关键的发育基因表达程序.     

进展期胃癌NF-κB蛋白的表达与α-及β-catenin在转移淋巴结癌细胞中再表达的关系及其临床意义

目的探讨进展期胃癌核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)蛋白的表达与α-catenin及β-catenin在转移淋巴结内癌细胞中的再表达情况及其与临床病理因素的关系。方法用免疫组织化学染色的方法分别检测了NF-κB在原发灶和α-及β-catenin在86例进展期胃癌原发灶及其相应转移淋巴结内癌细胞的表达情况。结果胃癌原发灶中81.40%(70/86)出现NF-κB阳性表达,43.02%(37/86)转移淋巴结内癌细胞中出现α-及β-catenin的再表达阳性,NF-κB与肿瘤的分化程度、病理类型密切相关(P<0.05),α-及β-catenin在转移淋巴结内的再表达与肿瘤的分化程度密切相关(P<0.05),α-catenin在转移淋巴结内的再表达与肿瘤的病理类型密切相关(P<0.05),β-catenin在转移淋巴结内的再表达与肿瘤的病理类型无关(P>0.05),NF-κB的表达与α-及β-catenin在转移淋巴结内癌细胞中的再表达情况与肿瘤的大小及浸润程度无关(P>0.05)。α-及β-catenin在转移淋巴结内再表达存在相关关系(P<0.05),NF-κB在肿瘤原发灶的表达与α-及β-catenin在转移淋巴结内的再表达无相关关系(P>0.05)。结论NF-κB的表达与进展期胃癌的发展过程密切相关,α-及β-catenin在转移淋巴结中的再表达是进展期胃癌发生的重要事件,二者协同发挥作用,并对癌细胞在转移灶中的聚集生长起重要作用,联合评价其功能具有更重要临床意义。     

Wnt/β-catenin信号通路活化对人表皮细胞表型变化的影响

目的 探讨Wnt/β-catenin信号通路活化对人表皮细胞表型变化的影响.方法 差速贴壁法分离人成熟表皮细胞.并将细胞分为对照组和诱导组,诱导组义分为氯化锂(LiCI,20 mmol/L)诱导组和GSK-3β抑制子(15μmol/L)诱导组,诱导6d后观察细胞的形态变化,并采用Western blot检测衷皮细胞内β-catenin的表达水平,免疫组织化学法检测表皮细胞表面标志性蛋白CK10、CK14、CK19和B1整合素的表达变化.结果 人表皮细胞内β-catenin的表达在被Licl(2.15±0.54)和GSK-3β(2.58±0.65)抑制子诱导后分别比对照组(0.71±0.23)增加了2倍和2.5倍(P<0.01).而且诱导后细胞体积变小变圆,细胞核、细胞质比例变大.免疫组织化学检测结果表明,诱导前表皮细胞高表达CK10,部分细胞表达CK14,CK19和β1整合素表达阴性;诱导后已无CK10阳性细胞存在,有部分CK14阳性细胞,而且CK19和β1整合素的表达呈强阳性.结论 Wnt/β-catenin通路活化可引起人成熟表皮细胞的去分化,即Wnt/β-catenin通路可能是调控人表皮细胞去分化的关键环节.     

进展期胃癌E-cadherin及β-catenin在转移淋巴结癌细胞中再表达与NF-κB蛋白表达的临床意义

目的探讨进展期胃癌核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)蛋白的表达,上皮钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)及β-catenin在转移淋巴结内癌细胞中的再表达情况及其与临床病理因素的关系。方法用免疫组织化学染色法检测NF-κB在原发灶和E-cad及β-catenin在86例进展期胃癌原发灶及其相应转移淋巴结内癌细胞的表达情况。结果胃癌原发灶中81.40%(70/86)出现NF-κB阳性,46.51%(40/86)转移淋巴结内癌细胞中出现E-cad及β-catenin再表达阳性,NF-κB与肿瘤的分化程度、病理类型密切相关(P<0.05),E-cad及β-catenin在转移淋巴结内的再表达阳性与肿瘤的分化程度密切相关(P<0.05),E-cad在转移淋巴结内的再表达与肿瘤的病理类型密切相关(P<0.05),β-catenin在转移淋巴结内的再表达与肿瘤的病理类型无关(P>0.05),NF-κB的表达与E-cad及β-catenin在转移淋巴结内癌细胞中的再表达情况与肿瘤的大小及浸润程度无关(P>0.05)。E-cad及β-catenin在转移淋巴结内再表达存在相关关系(P<0.05),NF-κB在肿瘤原发灶的表达与E-cad及β-catenin在转移淋巴结内的再表达无相关关系(P>0.05)。结论NF-κB的表达与进展期胃癌的发展过程密切相关,E-cad及β-catenin在转移淋巴结中的再表达是进展期胃癌发生的重要事件,二者协同发挥作用,并对癌细胞在转移灶中的聚集生长起重要作用,联合评价其功能具有更重要的临床意义。     

PI3K/Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经元保护的实验研究

【目的】 探讨PI3K/Akt信号通路在大鼠脑缺血再灌注损伤中对Wnt/β-catenin信号通路的影响。 【方法】 健康雄性SD大鼠96只,采用longa法建立局灶性脑缺血再灌注模型,随机分为4组:假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(I组)、脑缺血再灌注+bFGF后处理组(bFGF组)、脑缺血再灌注+bFGF后处理+LY294002(LY组),各组24只大鼠。各组依据缺血后再灌注时间点12、24、48、72 h再分4个亚组。应用H-E染色、TUNEL法检测皮质组织形态变化及细胞凋亡情况。采用免疫组织化学法、原位杂交法、蛋白质印迹法分别检测在各组皮质不同再灌注时间点P-Akt、GSK-3β mRNA、β-catenin的表达变化。 【结果】 免疫组织化学法检测P-Akt蛋白水平, I组和LY组每一灌注时间点都高于S组表达水平,24 h达高峰。bFGF组各亚组皮质P-Akt表达均较I组和LY组各亚组表达增多(P<0.05)。应用原位杂交和蛋白质印迹技术分别检测GSK-3β mRNA和β-catenin在缺血再灌注皮质的表达。I组和LY组各亚组缺血皮质GSK-3β mRNA和β-catenin表达高于S组,分别在48 h和72 h达高峰。与I组和LY组比较,bFGF组各亚组缺血皮质GSK-3β mRNA表达明显降低,而β-catenin蛋白表达却显著增高(P<0.05)。说明bFGF在缺血再灌注皮质通过激活Akt,抑制GSK-3β的活性,拮抗由GSK-3β、axin和结肠多发性息肉样蛋白(APC)组成的复合物,使β-catenin不能被磷酸化,游离的β-catenin在细胞浆内蓄积,继而进入胞核,促进Wnt靶基因转录,抑制细胞凋亡。从两条通路主要成员激活的时间上,Akt在皮质缺血再灌注后24 h达高峰,而β-catenin是缺血再灌注后持续增高,一直到72 h达高峰。提示β-catenin参与了脑缺血再灌注PI3K/Akt激活后的信号传导路径,Akt对β-catenin的调控作用同样在缺血性脑损伤中发挥作用,即Akt-GSK-3β-β-catenin。 【结论】 脑缺血再灌注损伤中PI3K/Akt信号通路通过GSK-3β可以调控Wnt信号通路主要成员β-catenin,这为深入研究β-catenin在缺血性脑损伤中的作用机制提供重要线索。