系膜细胞增殖及NF-кBp65核转位的影响

目的:探讨高糖对大鼠肾系膜细胞增殖及NF-кBp65核转位的影响.方法:大鼠HBZY-1肾系膜细胞进行体外培养,用5.6nunol/L葡萄糖(正常对照组)、10、20、30mmo1/L高糖分别作用12、24、48小时,用噻唑蓝(MTT)法测各组肾系膜细胞增殖,western-blot法测各组肾系膜细胞NF-кBp65总蛋白的表达;双染免疫荧光激光共聚焦显微镜测各组肾系膜细胞NF-кBp65核转位.结果:48h内,各高糖组大鼠肾系膜细胞的增殖无统计学差异(P>0.05);各高糖组NF-кBp65总蛋白的表达无统计学差异(P>0.05);高糖组NF-кBp65核转位增加(P<0.01),呈时间浓度依赖性.结论:在48h内,高糖直接促进肾系膜细胞NF-кBp65核转位导致NF-кB信号通路激活,并不促进大鼠肾系膜细胞的增殖及NF-кBp65总蛋白的表达增加.     

丙泊酚对高糖诱导的肾小球系膜细胞转化生长因子－β和核转录因子－κB 表达的影响

目的：观察丙泊酚对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子－β（TGF －β）和核转录因－κB （NF －κB）表达的影响。方法在体外培养的系膜细胞上进行研究。设立正常葡萄糖对照组（糖浓度为5．6 mmol／L）、高糖组（30 mmol ／L）以及 PDTC 干预组（100μmol／L）和分别含丙泊酚12．5、50、100μmol／L 的干预组。用 ELISA法检测培养细胞上清中 TGF －β蛋白,以实时荧光定量 PCR 检测 TGF －βmRNA 的表达,Western blot 方法检测系膜细胞内磷酸化 NF －κBp65（p －NF －κBp65）蛋白的表达。结果高糖诱导系膜细胞24 h 后,TGF －β蛋白分泌明显增强（P ＜0．01）,丙泊酚（12．5、50、100μmol ／L）对高糖诱导的系膜细胞分泌的 TGF －β的抑制作用随浓度的变化而变化;系膜细胞在低浓度葡萄糖水平下可低水平表达 TGF －βmRNA,高糖作用24 h 后,TGF －βmRNA 表达明显增强（P ＜0．01）,丙泊酚可明显下调高糖诱导的 TGF －βmRNA 的表达（P ＜0．01）;在高糖作用1 h 后,系膜细胞内的 p －NF －κBp65蛋白表达增强（P ＜0．05）,丙泊酚能够部分抑制高糖诱导的系膜细胞 p －NF －κBp65蛋白增多（P ＜0．05）。结论在体外含高糖培养条件下,丙泊酚可以抑制 TGF －βmRNA 及蛋白在系膜细胞的表达,部分逆转高糖诱导的系膜细胞 NF －κB 的活化,提示丙泊酚对糖尿病肾病可能有抗炎、抗纤维化作用。     

氯化锂对A549肺癌细胞增殖及核因子-κ Bp65表达的影响

目的使用糖原合成酶激酶-3抑制剂氯化锂作用肺癌A549细胞后,观察对细胞增殖和核因子-κBp65（NF-κBp65）表达的影响。方法不同浓度氯化锂作用A549细胞48h后,以噻唑蓝（MTT）比色试验为指标观察氯化锂对人肺腺癌A549细胞增殖的影响;免疫细胞化学实验检测核因子-κBp65表达情况。结果不同浓度的氯化锂对A549细胞均具有抑制增殖的作用,并且这种增殖抑制作用呈剂量依赖关系;NF-κBp65表达随氯化锂浓度增加而减弱。结论氯化锂可抑制A549人肺腺癌细胞增殖,这种作用可能是通过作用NF-κB信号系统完成的。     

普伐他汀对高糖培养肾小球系膜细胞NF-κB信号传导通路的影响

目的探讨普伐他汀（PV）对高糖（HG）培养。肾小球系膜细胞（RMC）NF-κB信号传导通路的影响。方法将RMC分别培养于正常葡萄糖浓度（5.5mmol·L^-1,NC组）、HG浓度（25mmol·L^-1,HG组）和葡萄糖25mmol·L^-1＋PV100μmol·L^-1（HG＋PV组）中,采用CCK-8细胞计数法测定各组RMC增殖水平,同时采用RT-PCR法检测NF-κB mRNA表达。以及Phospho-ELISA法分别检测胞质和胞核内总NF-κB p65、活性NF-κB p65（NLS-NF-κB）、磷酸化NF-κB p65（Ser276-NF-κB）的表达。结果HG组RMC增殖水平较NC组显著增高（P〈0.01）,且RMC胞核内的NLS-NF-κB、Ser276-NF-κB表达水平均较NC组显著增高（均P〈0.01）;HG＋PV组的RMC增殖水平均较NC组和HG组显著降低（均P〈0.01）,且胞核内的NLS-NF-κB、Ser276-NF-κB表达水平均较NC组和HG组降低（均P〈0.05）;各组总NF-κB p65蛋白分泌水平、RMC胞质内NLS-NF-κB和Ser276-NF-κB表达水平及NF-κB mRNA表达水平的差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论PV可显著下调HG培养的RMC胞核内NF-κB信号传导通路的活化,并可能为其抑制RMC增殖的作用机制之一。     

二甲双胍对大鼠肾小球系膜细胞NF-κB,ICAM-1表达的影响

目的:观察二甲双胍对大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cells, MCs)核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)?细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)表达的影响,探讨其肾脏保护机制?方法:体外培养MCs,随机分为正常糖组(NG)?高糖组(HG)及高糖 + 不同浓度二甲双胍组(M1:0.5 mmol/L;M2:1.0 mmol/L;M3:2.0 mmol/L)?培养48 h后收集各组细胞,采用荧光实时定量聚合酶链式反应法(real time-PCR)检测细胞NF-κB mRNA及ICAM-1 mRNA含量,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞NF-κBp65和ICAM-1蛋白表达水平?结果:①MCs可表达NF-κB?ICAM-1;②与NG组比较,HG组MCs NF-κB?ICAM-1mRNA和蛋白表达增强(P < 0.05);③与HG组比较,M3组 MCs NF-κB?ICAM-1mRNA相对表达量明显降低,差异有统计学意义(P < 0.05);④与HG组比较,M1组?M2组和M3组MCs NF-κBp65?ICAM-1蛋白表达量明显降低,差异有统计学意义(P < 0.01)?结论:二甲双胍可抑制肾小球系膜细胞NF-κB?ICAM-1 mRNA和蛋白表达,并具有一定的浓度依赖性,该作用可能是其肾脏保护机制之一?     

核因子-κBp65与大鼠糖尿病肾病的相关性研究

目的 探讨糖尿病大鼠肾组织核因子-κBp65（nuclear factor-κB,NF-κB p65）的表达和肾功能损害的关系.方法 实验动物随机分为2组：正常对照组和模型组,用链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）制造大鼠糖尿病模型,在模型成功后分别于4、8、12周处死大鼠,留取肾标本和血液标本.用化学比色法测定血清中的肌酐、尿素氮含量.用免疫组化染色法检测各组肾组织NF-κB p65表达水平,并分析其与尿蛋白及肾功能的关系.结果 模型组血糖、肌酐、尿素氮、NF-κBp65表达均显著高于NC组.结论 NF-κBp65可能在糖尿病肾病发生中有重要作用.肾组织中NF-κBp65的表达可作为反映进行性肾损害的指标.     

小白菊内酯对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖及核因子-κB、单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的探讨小白菊内酯（PTL）对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞（MC）增殖、核因子-κB（NF-κB）活性和单核细胞趋化蛋
白-1（MCP-1）表达的影响。方法采用正常葡萄糖组（糖浓度为5.6 mmol/L）和高糖组（糖浓度为30 mmol/L）、高糖+PTL组,分
别体外培养大鼠肾小球MC,MTT法检测MC的增殖,ELISA法检测培养液上清中MCP-1的浓度,Western Blot法检测IκBα反
映NF-κB的活性,EMSA法检测NF-κB的活性。结果高糖诱导后MC增殖、MCP-1表达和NF-κB活性明显增强,NF-κB结合蛋
白IκBα明显降解;应用PTL干预后,MC增殖、MCP-1表达和NF-κB活性均明显降低,IκBα降解被抑制。结论PTL能抑制高糖
诱导的肾小球MC NF-κB活化及MCP-1的表达,从而为PTL用于临床防治糖尿病肾病提供了一定的理论依据。
     

人核因子κBp65核定位信号缺失突变对A549细胞恶性表型的影响

目的鉴定人核因子κB(NF-κB)p65核定位信号(NLS)缺失突变质粒即pc DNA3.1(+)-NF-κBp65ΔNLS(简称NF-κBp65ΔNLS)的表达功能,以及其对低表达NF-κBp65的A549细胞株即A549/NF-κBp65 shRNA细胞增殖、迁移和粘附能力的影响。方法培养人A549/NF-κBp65 shRNA细胞株,分为对照组、转染pc DNA3.1(+)组、转染NF-κBp65ΔNLS组。应用间接免疫荧光、实时荧光定量-PCR和Western blot技术检测NF-κBp65的细胞内定位及mRNA、蛋白表达水平的变化;应用MTT、Transwell和细胞粘附实验分析转染NF-κBp65ΔNLS质粒对A549/NF-κBp65 shRNA细胞增殖、迁移、粘附能力的影响。结果成功构建人NF-κBp65ΔNLS真核表达质粒。转染NF-κBp65ΔNLS质粒的A549/NF-κBp65 shRNA细胞与对照组及转染pc DNA3.1(+)组比较,NF-κBp65 mRNA表达水平明显上调(10.63±0.84比1.04±0.21和1.23±0.22,P0.01),NF-κBp65蛋白表达水平明显升高(1.07±0.06比0.53±0.02和0.59±0.04,P0.01),且NF-κBp65蛋白主要位于细胞浆内,在肿瘤坏死因子α刺激后NF-κBp65蛋白并未明显进入细胞核。与对照组及转染pc DNA3.1(+)组比较,转染NF-κBp65ΔNLS质粒的A549/NF-κBp65 shRNA细胞的增殖、迁移和粘附能力均有不同程度增强。结论通过基因突变技术构建无NLS的NF-κBp65真核表达质粒,可明显增强A549/NF-κBp65shRNA细胞株内NF-κBp65 mRNA和蛋白的表达水平,并使NF-κBp65蛋白定位于细胞浆内;同时,细胞浆内过表达NF-κBp65ΔNLS蛋白可明显增强A549/NF-κBp65 shRNA细胞的增殖、迁移和粘附能力,提示滞留于细胞浆内的NF-κBp65仍可通过影响NF-κB信号通路相关蛋白参与调节肺癌细胞的生物学行为。     

MiRNA-146a通过NF-κB依赖的途径促进血管平滑肌细胞增殖

摘要：目的观察miRNA-146a对血管平滑肌细胞增殖的作用并研究其机制。方法原代培养大鼠血管平滑肌细胞,分成抑制
组、对照组和正常组,采用脂质体2000分别转染miRNA-146a抑制剂（50 nmol/L）、错义链（50 nmol/L）、PBS,使用real time PCR
方法测定转染后miRNA-146a水平,CCK8法检测转染后血管平滑肌细胞增殖,transwell法检测转染后血管平滑肌细胞迁移程
度,western blot检测转染后血管平滑肌细胞核因子κBp65（NF-κBp65）与增殖细胞核抗原蛋白（PCNA）水平。结果转染48 h
后,抑制组血管平滑肌细胞的miRNA-146a水平明显低于对照组和正常组（P<0.01）;其增殖和迁移比例显著低于对照组和正常
组组（P<0.01）;其NF-κBp65、PCNA蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论miRNA-146a可以促进血管平滑肌细胞的增殖和迁移,
其机制与增加NF-κBp65表达相关。
     

SMYD2介导高糖诱导小鼠肾成纤维细胞活化的机制研究

目的 探讨组蛋白赖氨酸甲基转移酶2(SMYD2)介导体外高糖环境下小鼠肾成纤维细胞（NRK-49F）活化的可能机制。方法 复制糖尿病（DM）小鼠模型,经全自动生化分析仪检测各组小鼠血糖（BG）、血肌酐（Scr）水平,经苏木精-伊红、Masson染色观察小鼠肾组织病理改变,经Western blotting检测各组小鼠肾组织纤维连接蛋白（Fibronectin）、Ⅰ型胶原蛋白（CollagenⅠ）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、组蛋白H3赖氨酸4三甲基化（H3K4me3）、SMYD2、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)及磷酸化NF-κB p65(NF-κB p-p65)蛋白表达,经免疫荧光检测各组小鼠肾组织α-SMA及SMYD2表达。复制体外DM细胞模型,使用正常糖（含5.5mmol/L葡萄糖）或高糖（含30.0 mmol/L葡萄糖）处理NRK-49F细胞,经Western blotting检测SMYD2、α-SMA及细胞外基质（ECM）成分蛋白表达;经CCK-8法检测SMYD2特异性抑制剂AZ505的细胞毒性;在AZ505处理/不处理的条件下,经Western blot...     

白屈莱红碱对高糖培养的乳鼠心肌细胞形态和功能的影响

目的探讨蛋白激酶C（PKC）抑制剂白屈菜红碱对高糖培养的乳鼠心肌细胞形态和功能的影响,以及PKC-α、β2,NF-κB,C-fos的表达水平及活性的变化。方法建立乳鼠心肌细胞培养模型,随机分成低糖（5mmol／L）、高糖（25.5mmol／L）和高糖（25.5mmol／L）＋不同浓度（1、8μmol／L）白屈菜红碱组,分别观察比较各组乳鼠心肌细胞搏动情况,测定心肌细胞直径：应用Western blot法检测并比较各组乳鼠心肌细胞PKC-α、PKC-β2、p-PKC-α、p-PKC-β2、NF-κB和C-fos的表达水平。结果高糖组心肌细胞搏动频率、细胞直径以及PKC-α、PKC-β2、p-PKC-α、p-PKC-β2、NF-κB和C-fos的表达水平均明显高于低糖培养组（均p〈0.05）;加入不同浓度的白屈菜红碱后,高糖组乳鼠心肌细胞搏动频率、细胞直径以及PKC-α、PKC-β2、p-PKC-α、p-PKC-β2、NF-κB和C-fos的表达水平均明显降低（P〈0.05）,并呈现浓度依赖性特征。结论白屈菜红碱能够抑制高糖诱导的乳鼠心肌细胞形态和功能的改变,并能抑制PKC-α、PKC-β2、NF-κB和C-fos的表达和活性,对高糖环境中的心肌细胞具有保护作用,其机制可能与PKC／NF-κB／c-fos途径有关。     

黄芩苷下调NF-κB表达抑制高糖环境下肾小球系膜细胞增殖的作用

目的研究黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞（GMC）增殖的抑制作用及对NF-κB表达的影响。方法将体外培养的大鼠GMC分为六组：低糖组,高糖组,黄芩苷低、中、高剂量组、氯沙坦组,培养24、48、72 h。实验结束后根据MTT法检测结果,收集细胞并提取核蛋白,用Western blot方法检测各组NF-κB表达情况。结果高糖组在24、48、72 h时间段的吸光值均较低糖组增高,且随培养时间延长而增高明显（P〈0.05）;黄芩苷低、中、高剂量组,氯沙坦组在24 h时间段吸光值均较高糖组高,48、72 h时间段较高糖组低（P〈0.05）。Western blot结果显示,高糖组NF-κB表达量较低糖组增加。而用黄芩苷干预后,GMC中NF-κB表达量较高糖组减少,且随着浓度增加,表达量逐渐减少。结论高糖环境下体外培养的GMC存在异常增殖现象,黄芩苷能抑制高糖诱导的GMC异常增殖,且呈时间、剂量依赖关系,其机制可能与黄芩苷下调NF-κB表达有关。     

葛根素对IL-1β损伤大鼠关节软骨细胞核因子-κB的影响

目的：观察葛根素（Pue）对IL-1β损伤大鼠关节软骨细胞核因子-κB（NF-κB）的影响。方法取10日龄大鼠关节软骨作体外细胞培养,培养后软骨细胞随机分为正常组、IL-1β组、地塞米松组、Pue50组、Pue100组、Pue200组等6组。后5组分别给药后24h,用实时定量PCR法检测各组NF-κBp65的表达。结果 IL-1β损伤软骨细胞核内NF-κBp65的表达明显增强,后4组与IL-1β组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,且随着剂量上升（50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L）使其NF-κB的表达量逐步下降。结论葛根素具有一定的抑制NF-κBp65活化的作用,为防治骨性关节炎提供新的途径。     

寻常型银屑病患者皮损中HBD-2、IL-1β和NF-κBp65表达的研究

目的：探讨HBD-2、IL-1β和NF-κBp65在寻常型银屑病皮损中的表达及其在银屑病中的作用机制。方法：采用SP免疫组化法检测45例银屑病患者皮损区、非皮损区及15例正常人皮肤中HBD-2、IL-1β和NF-κBp65的表达,对其在皮损中的表达进行相关性分析,并将结果与PASI评分进行相关性分析。结果：银屑病患者皮损区HBD-2、IL-1β、NF-κBp65的表达比非皮损区、正常人皮肤明显上调,非皮损区HBD-2、IL-1β的表达也高于正常人皮肤,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。银屑病患者皮损中HBD-2、IL-1β和NF-κBp65的表达水平与PASI评分之间均存在正相关（r=0．867、0．865、0．821,均P〈0．05）。银屑病患者皮损中HBD-2与IL-1β、HBD-2与NF-κBp65、IL-1β与NF-κBp65表达水平之间均存在正相关（r=0．869、0．740、0．814,均P〈0．05）。结论：HBD-2、IL-1β、NF-κBp65在寻常型银屑病皮损中的表达均升高．可能共同参与银屑病的发病过程。     

糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注对NF-κBp65表达的影响

目的：探讨阻断泛素蛋白酶体途径（ubiquitin proteasome pathway,UPP）对糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。方法：将Sprague-Dawley大鼠随机分成正常对照组（A组）、假手术组（B组）、非糖尿病组（C组）、糖尿病组（D组）、糖尿病治疗组（E组）及糖尿病治疗对照组（F组）,链脲佐菌素腹腔注射制作糖尿病模型,线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血2h再灌注模型;用clasto-lactacystin β-lactone阻断UPP,免疫组织化学方法观察再灌注24h后NF-κBp65的表达。结果：脑缺血再灌注24h后,NF-κBp65表达在D组较C组增加,在E组较D组和F组减少（P〈0.05）。结论：糖尿病局灶性脑缺血NF-κBp65表达增多,阻断UPP可通过抑制NF-κBp65的活化而产生神经保护作用。     

NF-κBp65/IL-1β在心肌梗死大鼠心室重塑中的表达及罗格列酮对其的影响

目的观察罗格列酮对心肌梗死后大鼠心室重塑过程中NF-κBp65（nuclear factor-κBp65）,IL-1β（interleukinh-1β）表达的影响。方法45只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组（B组,n=15）和心肌梗死组（n=30）,通过结扎左冠状动脉前降支（LAD）制作急性心肌梗死模型。模型制作成功24h后,心肌梗死组再随机分为心肌梗死对照组（A组,n=15）和罗格列酮干预组（C组,n=15）。罗格列酮干预组每日给以罗格列酮灌胃4mg/（kg.d）,假手术组和心肌梗死对照组每日给以等量生理盐水灌胃,持续8周。利用RealtimePCR法检测非梗死区IL-1β的表达,免疫组化法检测非梗死NF-κBp65的含量。结果给药8周后,A组非梗死区心肌中NF-κBp65,IL-1βmRNA的表达,左心重量指数与B、C组相比显著升高,差异有统计学意义（P〈0.05）;C组与B组相比,非梗死区心肌中NF-κBp65,IL-1β的表达,左心室重量指数显著升高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论罗格列酮可能通过抑制NF-κBp65,IL-1β的表达来改善大鼠心肌梗死后心室重塑。     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞凋亡和核因子-κB活化的影响

目的:观察同型半胱氨酸(Hcy)对人脐静脉内皮细胞株ECV-304细胞凋亡及核因子-κB (NF-κB)活化的影响,以探讨Hcy致动脉粥样硬化的可能机制。方法:将不同浓度的Hcy与ECV-304细胞体外共培养不同时间,PI单染法检测细胞凋亡,免疫组织化学染色法检测细胞内Bcl-2的表达及NF-κB的细胞内定位,流式细胞术检测细胞核NF-κB的表达。结果:Hcy可诱导细胞凋亡,凋亡指数随Hcy浓度增大和作用时间的延长而逐渐升高;10.0 mmol/L Hcy作用24 h后Bcl-2表达阳性细胞的均数显著低于1.0、5.0 mmol/L组和对照组(P < 0.01);随Hcy浓度的升高,NF-κB由细胞质转位至细胞核,5 mmol/L Hcy作用0.5、1、2 h,NF-κB的核内表达率分别为(16.76±2.55)%、(12.91±1.38)%、(14.15±1.74)%。结论:Hcy可下调抗凋亡基因Bcl-2的表达而诱导细胞凋亡,且存在剂量效应关系。Hcy可活化NF-κB,且呈现剂量依赖性。     

高浓度葡萄糖条件下肾小球系膜细胞内源性烟酰胺磷酸核糖转移酶对波形蛋白表达的调控作用

目的：探讨高浓度葡萄糖条件下肾小球系膜细胞过度表达的内源性烟酰胺磷酸核糖转移酶（Nampt）对波形蛋白（Vimentin）表达的调控作用,阐明糖尿病并发肾脏炎症纤维化的形成机制。方法：取患严重自发性糖尿病的C57/BL6小鼠肾脏,以野生型C57/L86小鼠作为对照组,行病理切片和组织荧光染色,应用免疫共聚焦方法检测肾小球系膜细胞中内源性Nampt和Vimentin表达及定位;肾小球膜HBZY-1细胞随机分为4组,即0.56 mmol·L^-1低浓度葡萄糖（LG）对照组、200 mmol·L^-1高浓度葡萄糖（HG）处理组、HG+FK866组和HG+NMN组;高浓度葡萄糖干预5 d后,分别施加FK866（10 μmol·L^-1）和NMN（1 mmol·L^-1）作用24 h后,通过免疫荧光和免疫印迹法检测细胞内源性Nampt、Vimentin、核因子κB p65（NF-κBp65）和依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）的组蛋白去乙酰化酶1（Sirt1）表达水平;应用RT-PCR和免疫印迹等方法检测细胞Nampt和Vimentin表达水平。结果：与野生型C57/BL6小鼠组比较,严重糖尿病组小鼠肾小球明显萎缩,肾小球细胞内Vimentin表达水平随内源性Nampt表达水平升高而增加（P < 0.01）;与0.56 mmol·L^-1低浓度葡萄糖对照组比较,高浓度葡萄糖冲击细胞Nampt、NF-κBp65和Vimentin表达水平明显升高（P < 0.01）,Sirt1表达水平明显降低（P < 0.01）。HG+FK866和HG+NMN组肾小球系膜细胞中Nampt、Vimentin和NF-κBp65表达水平均较对照组明显降低（P < 0.01）。结论：高浓度葡萄糖冲击条件下肾小球系膜细胞过度表达的内源性Nampt能够通过NF-κBp65和Sirt1信号通路促进Vimentin表达。