海嘧啶对肿瘤细胞膜钠泵活性的影响

目的 :观察海嘧啶对小白鼠实体型肿瘤 (S180 )和腹水型肿瘤 (EAC、H2 2 )细胞膜钠泵活性的影响。方法 :荷瘤小鼠分为治疗组和对照组 ,分别测定各组瘤细胞膜钠泵活性。结果 :海嘧啶对小鼠S180 、EAC及H2 2 肿瘤细胞膜钠泵活性有明显的抑制作用。结论 :海嘧啶抗肿瘤的药理机制与其能够抑制肿瘤细胞膜钠泵活性有关。     

海嘧啶对肿瘤细胞内[Ca^2＋]i的影响

目的　揭示海嘧啶诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法　采用激光扫描共聚焦技术观察海嘧啶对肿瘤细胞内[Ca2 ]i 的影响及 [Ca2 ]i 变化时 Ca2 的来源 ,采用定磷法测定海嘧啶对肿瘤细胞膜钙泵活性的影响。结果　海嘧啶可显著升高肿瘤细胞内 [Ca2 ]i 的浓度 ,[Ca2 ]i 升高时 ,Ca2 同时来源于细胞外钙内流和细胞内钙释放。海嘧啶可显著降低肿瘤细胞膜钙泵活性。结论　海嘧啶通过升高肿瘤细胞内 [Ca2 ]i 的浓度 ,从而启动肿瘤细胞凋亡机制 ,诱导肿瘤细胞凋亡 ;海嘧啶升高肿瘤细胞内的作用是通过开放肿瘤细胞膜钙通道、引起肿瘤细胞内钙库释放、降低肿瘤细胞钙泵活性 3条途径达到的。     

海嘧啶对SGC—07901人胃癌细胞凋亡的影响

目的 揭示海嘧啶的抗肿瘤作用机制。方法 采用流式细胞仪测定海嘧啶对人胃癌细胞凋亡及细胞周期的影响;采用激光扫描共聚焦技术观察海嘧啶对人胃癌细胞内[Ca^2 ]i的影响及[Ca^2 ]i;变化时Ca^2 的来源。结果 海嘧啶可诱导肿瘤细胞凋亡,可升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i的浓度,[Ca^2 ]i升高时Ca^2 来源于细胞外钙内流和细胞内钙释放。结论 海嘧啶的抗肿瘤机制为诱导肿瘤细胞凋亡,通过开放细胞膜鲺通道和引起细胞内钙释放两条途径升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i,启动细胞凋亡机制,从而诱导肿瘤细胞凋亡。     

灵芝多糖对S180荷瘤小鼠肿瘤细胞核酸及其细胞周期的影响

目的 研究灵芝多糖对S180荷瘤小鼠肿瘤细胞核酸及其细胞周期的影响,探讨其抗肿瘤作用的可能机制.方法 分别给荷S180腹水瘤小鼠灌胃灵芝多糖(400,200,100mg/kg·b.w.)、生理盐水、或皮下注射环磷酰胺(25 mg/kg·b.w.),1次/d,连续9 d.观察腹水瘤细胞RNA、DNA含量,RNA/DNA比值以及细胞周期的改变.激光扫描共聚焦显微镜技术和吖啶橙(AO)荧光染色技术检测肿瘤细胞DNA和RNA荧光强度.流式细胞仪和碘化丙啶荧光染色技术分析肿瘤细胞的细胞周期.结果 与生理盐水组比较,灵芝多糖各剂量组的RNA、DNA含量有不同程度的减少,中剂量组(200mg/kg)具有统计学意义(P=0.000);灵芝多糖各剂量组的RNA/DNA比值均下降(P=0.003,0.000,0.008),说明灵芝多糖减少在体肿瘤细胞RNA的含量比DNA更为明显.环磷酰胺使肿瘤细胞的RNA和DNA含量均下降(P=0.000),但对RNA/DNA比值没有影响.灵芝多糖各剂量组使G0/G1期细胞百分数增加(P=0.003,0.000,0.000),而环磷酰胺作用相反(P=0.000).灵芝多糖对S期细胞的百分率没有影响,而环磷酰胺使S期细胞的百分率减少(P=0.011).灵芝多糖各剂量组使G2/M期细胞百分数下降(P=0.014,0.049,0.016),而环磷酰胺作用相反(P=0.000).结论 灵芝多糖对在体S180肿瘤细胞DNA和RNA含量及细胞周期的影响与环磷酰胺不同;通过动员机体的免疫功能,抑制肿瘤细胞DNA和RNA的复制与合成,从而影响其细胞周期的正常运转,可能是灵芝多糖抑制肿瘤细胞生长的机制之一.     

海嘧啶抗肿瘤作用的实验研究

目的 研究海嘧啶的抗肿瘤作用。方法 采用MTT实验和集落形成实验观察海嘧啶的体外抗肿瘤作用;通过海嘧啶对FC小鼠和S180、H22荷瘤小鼠瘤重和生存时间的研究,观察了海嘧啶的体内抗肿瘤作用。结果 海嘧啶对8种人癌细胞具有一定的杀伤作用,以对BGC-823、Eca-109、HCT-8细胞的抑制作用最强;对BGC-823、Eca-109、HCT-8细胞的集落形成有明显的抑制作用,以对Eca-109细胞集落形成抑制作用最强;可明显抑制FC小鼠和S180小鼠瘤体的生长,明显延长H22荷瘤小鼠的生存时间。结论 海嘧啶由中药复方和5-Fu两部分复合而成,其抗肿瘤作用与二者相比具有明显的协同作用．倬抑瘤率大幅度提高．     

桂枝茯苓丸对荷瘤鼠nm23及P53蛋白表达的影响

目的探讨桂枝茯苓丸对S180荷瘤鼠肿瘤细胞nm23及p53蛋白表达的影响。方法采用免疫组化SABC法检测nm23及p53蛋白的表达。结果桂枝茯苓丸可促进肿瘤细胞中nm23蛋白的表达；降低肿瘤细胞中P53蛋白的表达。结论桂枝茯苓丸具有抑制肿瘤细胞生长及转移的作用，其机制可能与抑制P53蛋白表达，促进nm23蛋白表达密切相关。     

海嘧啶对H22小鼠完整细胞膜脂流动性及人胃腺癌细胞内DNA含量影响的研究

目的 研究海嘧啶对H22荷瘤小鼠红细胞膜的影响以及对人胃腺癌细胞DNA合成的影响。方法 采用荧光分光光度法及激光扫描共聚焦显微镜进行研究。结果 海嘧啶可使荷瘤小鼠红细胞微粘度下降，膜脂流动性升高，体外实验对胃腺癌细胞内DNA荧光强度降低，DNA合成减少。结论 海嘧啶可改善荷瘤机体的血液循环，提高红细胞免疫粘附肿瘤细胞的能力，同时通过影响肿瘤细胞内DNA的合成发挥抗肿瘤作用。     

非小细胞肺癌中S100A2和p53蛋白的表达

目的 研究S100A2蛋白和p53蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,阐明其与肺癌发展及转移的关系.方法 以15例正常肺组织为对照,采用免疫组织化学方法 (SP法)检测32例鳞癌、28例腺癌中S100A2、p53蛋白的表达水平.结果 S100A2蛋白在NSCLC中表达率为70.0%(42/60),在正常组织中表达率为20.0%(3/15).p53蛋白在NSCLC中表达率为63.3%(38/60),在正常组织中表达率为26.6%(4/15).肿瘤与正常组织表达差异有显著性(P＜0.01).S100A2蛋白在肺腺癌和肺鳞癌中的表达率分别为60.7%(17/28)和78.1%(25/32),差异无统计学意义.p53蛋白在鳞癌中表达率为78.1%(25/32),在腺癌中的表达率为46.4%(13/28),差异有统计学意义(P＜0.05).S100A2蛋白和p53蛋白在Ⅰ期患者中表达率分别为43.7%(7/16)和12.5%(2/16),Ⅱ、Ⅲ期患者中的表达率为79.5%(35/44)和81.8%(36/44),差异有统计学意义(P＜0.05).p53蛋白表达率低分化组为79.1%(19/24),中、高分化组为52.7%(19/36),差异有统计学意义(P＜0.05).有淋巴结转移组和无淋巴结转移组的S100A2蛋白阳性表达率分别为82.75%(24/29)、5 8.06%(18/31),有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组,差异有统计学意义(P＜0.01).有淋巴结转移组和无淋巴结转移组的p53蛋白阳性表达率分别为82.76%(24/29)、45.16%(14/31),有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 S100A2蛋白和p53蛋白在有淋巴结转移、TMN分期高的肺癌组织中表达显著增加,p53蛋白在不同分化程度的NSCLC中表达有差异,分化程度低的肿瘤p53蛋白表达增高.提示S100A2和p53蛋白可作为判断肺癌生物学行为的重要参考指标.     

两种肿瘤细胞株对小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮的影响

目的：研究体外两种肿瘤细胞株对巨噬细胞（M）产生一氧化氮（NO）的影响。方法：在培养的各组小鼠腹腔巨噬细胞中．分别加入10％、25％和50％浓度的培养18h的HepA腹水型肝癌，及EAC瘤细胞培养混悬液或其条件培养液（即上清液）．24h后观察M上清液中NO的产生量；同时对50％浓度瘤细胞条件培养液作用24h后的M中的一氧化氮合成酶（NOS）进行组化染色。结果：HepA瘤细胞培养混悬液及其条件培养液均能明显地促进M产生NO（P＜0．01）。EAC瘤细胞条件培养液在10％和25％浓度时，对M产生NO无明显影响（P＞0．05），但在50％浓度时却表现明显的抑制作用（P＜0．05）。EAC瘤细胞培养混悬液在10％和25％浓度时明显促进M产生NO（P＜0．01）；而在50％浓度时，其促进作用不明显．且与其10％和25％浓度组比较，有显著性差异（P＜0．01）。NOS染色结果表明，经50％EAC条件培养液作用的M．其NOS阳性表达弱于对照组；而经50％HePA条件培养液作用之M，其NOS阳性表达强于对照组。结论：不同肿瘤对巨噬细胞产生NO具有不同影响，并与瘤细胞或其分泌因子的浓度有关。     

热疗联合放疗对S180细胞凋亡及血管再生的影响

目的 探讨热疗联合放疗对小鼠S180肿瘤模型细胞凋亡及血管再生的影响.方法 实验用昆明小鼠60只,右后肢股部皮下接种S180肿瘤细胞株,当肿瘤生长至1cm3时分组进行局部热疗、放疗和热放疗.然后用RTPCR检测Bcl-2 mRNA,免疫组化方法检测调亡细胞,血管内皮生长因子(VEGF)蛋白,以微血管密度(MVD)作为定量检测指标.结果 热疗、放疗、热放疗组细胞凋亡指数较对照组增加(P＜0.01),以热放疗组增加最为显著(P＜0.01).热疗、放疗、热放疗组Bcl-2基因表达较对照组减弱(P＜0.01),以热放疗组减弱最为显著(P＜0.01).热疗组VEGF蛋白表达和MVD较对照组降低(P＜0.01),放疗组VEGF蛋白表达和MVD较对照组升高(P＜0.01),热放疗组VEGF蛋白表达和MVD较放疗组降低(P＜0.01).结论 热疗可以下调Bcl-2基因,诱导S180株细胞凋亡,抑制肿瘤细胞VEGF的产生,使MVD下降.与放疗共同作用于肿瘤细胞,可增加肿瘤细胞放射敏感性,对肿瘤有显著的治疗作用.     

涤痰祛瘀汤对小鼠肿瘤的抑制作用及其机制探讨

目的：研究涤痰祛瘀汤对不鼠肿瘤的抑制作用及作用机制,方法：建立小鼠移植性肉瘤（S180）及小鼠艾氏腹水癌（EAC）模型,观察抑率和生命延长率,并用流式细胞仪检测S180瘤细胞周期及细胞凋亡率。结果：涤痰祛瘀汤在5g和10g/kg剂量下灌胃给药,能显著抑制小鼠S180实体的生长,也能延长EAC小鼠的生存时间,还可引起小鼠S180瘤细胞S期及C2－M期细胞减少,G0－G1期细胞及凋亡细胞增加,结论：涤痰祛瘀汤对小鼠移植性肿瘤具有抑制作用,其机制可能与抑制细胞周期中S期DNA合成,干扰细胞的分裂增速度及诱导癌细胞凋亡有关。     

HOXA4调控Wnt/β-cateni n信号通路对裸鼠移植胶质瘤的抑制作用

目的：建立人胶质瘤荷瘤裸鼠模型,探讨HOXA4对胶质瘤U251细胞体内生长的影响以及对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用及其机制。方法：采用慢病毒转染,建立胶质瘤U251细胞稳转同源异型盒基因A4（HOXA4） siRNA细胞系（si-HOXA4）和稳转空载体阴性对照U251细胞系（si-NC）。取对数生长期U251、si-NC和si-HOXA4细胞接种于BALB/c裸鼠颈背部皮下,建立荷瘤裸鼠模型,命名为对照组、si-NC组和si-HOXA4组。观察各组裸鼠成瘤情况并绘制肿瘤生长曲线;培养21 d处死裸鼠后剥离肿瘤组织,测量肿瘤体积和质量;qRT-PCR法检测各组裸鼠肿瘤组织中HOXA4、CTNNB1和Gsk3β mRNA相对表达量;免疫组织化学（IHC）法检测各组裸鼠肿瘤组织中HOXA4、β-catenin、Gsk3β、CyclinD1和P53蛋白表达水平。结果：si-HOXA4组裸鼠肿瘤体积和质量小于si-NC组和对照组（P<0.05）;si-HOXA4组裸鼠肿瘤组织中HOXA4 mRNA相对表达量和HOXA4蛋白表达水平低于其他2组（P<0.05）;与si-NC组和对照组比较,si-HOXA4组裸鼠肿瘤组织中CTNNB1 mRNA相对表达量降低（P<0.05）,β-catenin和CyclinD1蛋白表达水平亦降低（P<0.05）,但Gsk3β和P53蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：抑制人胶质瘤U251细胞HOXA4表达可在体内通过Wnt/β-catenin信号通路调控CyclinD1和P53蛋白的表达,从而抑制荷瘤裸鼠肿瘤的生长。     

抗小鼠TLR-2胞外段B细胞识别表位抗体抑制肉瘤生长的初步研究

OBJECTIVE: To observe the effect of the antibody to a B cell epitope on mouse Toll-like receptor-2 (mTLR-2) extracellular domain on the growth of murine fibrosarcoma. METHODS: An immunogen was prepared by conjugating a 20-mer peptide, synthesized on the basis of prediction for B cell dominant epitope of mTLR-2, to a carrier protein. Rabbit polyclonal antibodies against B cell epitope of mTLR-2 were prepared and purified, and characterized by Western blotting, immunohistochemistry and flow cytometry. Murine fibrosarcoma S180 cells were inoculated into the left hindlimbs of Swiss mice, and in the treatment group, the injected cells were mixed with 100 microg anti-mTLR-2 antibody TSP-1, with the same dose of irrelevant rabbit IgG in the IgG control group and with buffer solution only in the blank control group. The mice in each group were anesthetized and sacrificed on days 10, 14, and 18 following the injections, respectively, and the weight of the tumors was measured and the inhibition rate calculated. RESULTS: A distinct band for the antibody TSP-1 was shown at the relative molecular mass of 95 000 by Western blotting. The antibody TSP-1 could also react with native mTLR-2 expressed on J774A.1 cells, as identified by immunohistochemistry and flow cytometry. The growth of the fibrosarcoma S180 was obviously inhibited by injections with the antibody TSP-1 mixture, and the weight of tumor in mice treated with TSP-1 was significantly lower than that in the two control groups (P<0.05), with an inhibition rate of 77% on day 10, 51% on day 14 and 53% on day 18. CONCLUSION: Local application of the antibody against B cell epitope on mTLR-2 extracellular domain can inhibit the growth of murine fibrosarcoma, especially in the early stage of tumor proliferation.     

蜂王浆冻干粉对小鼠肿瘤的抑制作用

目的研究蜂王浆冻干粉对小鼠肿瘤的抑制作用.方法按每公斤体重0g、0.25g、0.50g、0.75g设对照及低、中、高3个剂量组,经口给予蜂王浆冻干粉30d后,接种小鼠肉瘤180(S180)和艾氏癌腹水型(EAC)两个瘤种.结果在两次重复的小鼠S180和EAC抑瘤试验中发现中剂量组瘤重明显低于阴性对照组(P<0.05),抑制率可达34%;中剂量组荷瘤小鼠平均生存时间均明显高于对照组(P<0.05).结论蜂王浆冻干粉具有抑制肿瘤的作用.     

骨原发性恶性淋巴瘤临床病理及P53蛋白表达的研究

目的 :复习文献对 7例骨原发性恶性淋巴瘤 (PrimaryLymphomaofBone ,PLB)进行临床病理分析 ,并检测其P5 3的表达情况。方法 :对瘤组织采用常规石蜡切片、HE染色及ABC法免疫组化染色 ,光镜观察。结果 :患者年龄 16～ 68岁 ,平均 3 7岁 ,以男性多见 ( 6 7例 ) ,好发于扁骨 (骼骨 2例 ,胸骨 1例 ,3 7例 )。多数为B细胞性淋巴瘤 ( 5 7例 ) ,T细胞性淋巴瘤 ( 1 7例 )和组织细胞性淋巴瘤少见 ( 1 7例 )。 7例PLB中 3例 ( 4 2 .8% )表达P5 3阳性 ,2 1例慢性骨髓炎对照组中仅 1( 5 % )例表达P5 3弱阳性 ,两组间有显著差异 (P <0 .0 5 )。结论 :PLB以B细胞性多见 ,其发生可能与骨髓内的B细胞恶变有关     

乙肝核酸疫苗对荷瘤小鼠免疫保护作用的实验研究

目的 观察乙肝病毒(hepatitis B virus, HBV)核酸疫苗pCMV-S2S免疫小鼠后的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答, 及对表达HBV preS2S抗原的SP2/0-S2S肿瘤细胞攻击的保护作用.方法 将BALB/c小鼠随机分为3组, 于0、4及8周分别接种pCMV-S2S(实验组)、乙肝表面抗原蛋白疫苗(HBsAg,对照组1)、空载质粒( pCMV,对照组2 )各3次.末次免疫后4周,每组各取3只小鼠,以乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测特异性CTL活性.各组其它小鼠均用于肿瘤细胞攻击实验:分别于一侧胁部皮下种植SP2/0-S2S细胞,同时于另一侧种植不表达HBV preS2S抗原的SP2/0-CMV 细胞作阴性对照.种植肿瘤细胞(荷瘤)后观察成瘤时间、肿瘤大小和荷瘤后小鼠的生存时间及生存率.结果 pCMV-S2S组CTL活性为(34.21±1.38)%,高于HBsAg组[(19.64±1.50)%]和pCMV组[(3.45±1.89)%](P＜0.05).荷瘤后10 d,pCMV-S2S组小鼠SP2/0-S2S细胞的成瘤率为58.3%,低于SP2/0-CMV细胞的成瘤率(91.7%)(P＜0.05);两对照组SP2/0-S2S细胞与SP2/0-CMV细胞的的成瘤率无明显差异.荷瘤后pCMV-S2S组初次出现死亡小鼠的时间为24 d,较两对照组均延迟了13 d,平均生存时间为(31±1) d,较两对照组延长(P＜0.05);4周生存率(75%)高于两对照组(P＜0.05), 两对照组之间生存时间及生存率差异无统计学意义.结论 HBV核酸疫苗pCMV-S2S能在小鼠体内诱生较强的特异性CTL活性,对荷瘤小鼠具有特异性免疫保护作用,可望用于HBV感染的免疫保护.     

肾细胞癌组织中S100蛋白表达及与P53的关系

目的:探讨肾细胞癌组织中S100蛋白的表达情况、临床意义及与P53的关系。 方法:采用免疫组织化学染色法检测36例肾细胞癌及14例正常肾组织中S100A1蛋白、S100B蛋白和突变型P53的表达,观察并分析S100蛋白与肾细胞癌临床分期、病理类型、及与突变型P53表达的关系。 结果:肾细胞癌组织S100A1表达阳性率72.2%,高于正常肾组织的21.4%（P<0.01）。随肾癌分期和恶性程度的增加,S100A1的表达阳性率增加。肾细胞癌组织中突变型P53表达阳性率30.6%,正常肾组织中的阳性率则为0（P<0.05）;P53表达与肾癌分期和癌细胞恶性程度无关（P>0.05）。肾细胞癌组织S100B表达阳性率36.1%,正常肾组织表达阳性率为64.3%（P>0.05）。S100A1,S100B在肾癌中的表达与突变型P53无显著相关性（P>0.05）。 结论:S100A1蛋白在肾癌组织中表达增高,且随肾癌分期以及肾细胞癌恶性程度的增加,其表达阳性率均增加。S100A1蛋白可能成为判断肾细胞癌侵袭性和恶性程度一项新的、有意义的指标。     

检测Dukes''B期结直肠癌微转移及P53的临床意义

目的　Dukes’B期结直肠癌患者手术后 5年生存率为 5 3.9%～ 84 .9% ,有部分患者 5年内出现局部复发或 /和远处转移。该研究旨在探讨淋巴结微小转移灶 (lymphnodemicrometastasisLMM)及原发灶P5 3的表达对评估经手术切除原发肿瘤及肠周淋巴结的Dukes’B期结直肠癌患者预后的重要性。方法　收集 5 2例Dukes’B期结直肠癌患者手术切除的淋巴结及原发灶石蜡标本 ,同时获得这些病例的临床资料及随访资料 ;实验方法 :以细胞角蛋白单抗AE1/AE3 为探针 ,采用免疫组化SAP(streptavidin -alkalinephosphatase)法检测淋巴结中的LMM。以P5 3单抗为探针 ,采用免疫组化S -P(streptavidin -peroxidase)法检测原发灶P5 3蛋白的表达。结果　检测 5 2例Dukes’B期结直肠癌患者的 5年生存率为 73%。淋巴结中LMM 组 5年生存率 4 5 .5 % ,LMM -组 78.9%。原发灶中P5 3 组 5年生存率 6 2 .5 % ,P5 3-组 87.5 %。同时检测LMM P5 3 组33% ,LMM -P5 3-组 84 %。χ2 检验均P <0 .0 5 ,生存分析log-rank检验P <0 .0 5。结论　用免疫组化法检测Dukes’B期结直肠癌患者经手术切除后肠周淋巴结中的微小转移灶及原发灶P5 3蛋白对判断患者预后及指导术后治疗均有临床意义。     

生物素标记的6种cDNA探针检测S180及其克隆细胞株mRNA的表达

目的检测S180及其克隆细胞株S1B11及S2D9mRNA的表达,对这些细胞株进行识别和质量控制.方法用生物素标记的6种cDNA探针,细胞玻片原位杂交的方法检测细胞中mRNA的表达.结果北京市肿瘤研究所(肿瘤所)保存的S180与生物素标记的P16、c-fos、c-myc及c-jun探针杂交阳性,克隆细胞株S1B11与c-fos及c-jun探针杂交阳性,克隆细胞株S2D9与c-fos、c-myc及c-jun探针杂交阳性.结论肿瘤所S180及其2株克隆细胞中mRNA的表达不同,c-myc基因的表达与否可以把S1B11及S2D9克隆细胞区别开;细胞株致瘤性与癌基因表达有关.