异基因造血干细胞移植后合并慢性移植物抗宿主病患者T细胞免疫状态的研究

目的 研究异基因造血干细胞移植后合并慢性移植物抗宿主病（cGVHD）时的T细胞免疫状态。方法 应用RT-PCR扩增14例白血病异基因造血干细胞移植后合并cGVHD患者及5名正常供者的外周血T细胞受体（TCR）BV24个家族的基因序列，并通过基因扫描的方法判断TCRBV家族的克隆表达情况、CDR3克隆性质，并计算BV家族的利用率。结果 在移植后6～19个月，所有患者TCRBV家族的利用仍处于不均一状态，检测到部分BV家族缺失，部分家族出现寡克隆、单克隆T细胞增殖。在24个BV家族的表达为6／24～15／24，并且均出现1～5个单克隆家族表达。单克隆及双克隆表达分布在不同的BV家族，未发现共用的BV家族。结论 异基因造血干细胞移植后合并cGVHD患者的T细胞免疫存在缺陷。在不同的TCRBV家族出现与cGVHD相关的克隆增殖的T细胞克隆。     

外周造血干细胞移植后及出现GVHD时T细胞β链CDR3谱型分析

目的 初步探讨外周造血干细胞(PBSC)移植后以及出现移植物抗宿主疾病(GVHD)时,外周血T细胞a链的CDR3谱型变化和特征.方法 采用免疫扫描谱型分析技术,监测1例重型β-地中海贫血移植前、移植后23 d、GVHD时(移植后28 d)患者外周血单核细胞(PBMC)及供者PBSC标本T细胞a链的CDR3谱型变化,基因扫描(GeneScan)和测序分析克隆性增生T细胞TCR分子特征.结果 患者移植前PBMC的24个TCR BV家族CDR3谱型均呈高斯分布,部分家族在移植后23 d、和GVHD时呈现为寡峰和单峰,同时部分家族消失,单克隆增生T细胞TCR beta链的测序结果 显示不同的CDR3区组成,设计特异的CDR3引物进一步分析提示其可能来源于干细胞移植后的分化.结论 PBSC移植后23 d,PBMC中的多数24TCRBV家族CDR3谱型表现为多克隆,GVHD时,部分家族出现明显的单、寡克隆增生,这些特异T细胞可能在GVHD中发挥重要作用.对移植前后TCRCDR3谱型和特异TCR分子特征的分析将有助于PBSC移植后免疫重建的评估和出现排斥反应时的特异性治疗.     

利用T细胞受体重排删除环和TCRBV克隆谱型研究异基因造血干细胞移植后T细胞免疫重建

目的通过T细胞受体重排删除环（TREC）和T细胞受体（TCRBV）克隆谱型研究异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）后T细胞免疫重建。方法应用实时PCR的方法定量检测43例3组不同类型allo—HSCT后及70名正常供者TREC水平;应用RT—PCR扩增其中24例3组不同类型allo—HSCT后及5名正常供者的外周血的TCRBV24个家族的基因序列,利用基因扫描的方法判断TCRBV家族的克隆表达、互补决定区3（CDR3）克隆性质及计算BV家族的利用率。结果移植前患者TREC定量检测结果为（335．1±782．5）拷贝／10^5细胞,明显低于正常人。3组在移植后3个月TREC含量均明显下降,同胞相合骨髓移植（MSD—BMT）组TREC恢复快于其他两组,且在移植后24个月基本恢复到移植前水平。单倍型骨髓移植（HID—BMT）组的TREC恢复延迟。在移植后3—19个月内TCRBVCDR3克隆谱型仍处于不均一状态,在6～16个BV家族中有表达。多克隆表达率在33％～48％,其余为单克隆或寡克隆增生,且分布在24个不同的BV家族,未见共用的BV家族。结论通过TREC和TCRBV克隆谱型分析,移植后3～24个月,胸腺输出初始T细胞数量低水平及TCRBV家族克隆性利用。单倍型骨髓移植后T细胞免疫缺陷更严重,与临床经过一致。     

自然杀伤细胞对小鼠异基因骨髓移植中移植物抗宿主病效应的影响

目的:研究自然杀伤细胞(NK)在异基因骨髓移植中对移植物抗宿主病(GVHD)的影响.方法:以近交系小鼠C57BL/6(H-2b)为供鼠、BALB/c(H-2d)为受鼠,在移植物中增加供者的外周T细胞和(或)NK细胞进行异基因骨髓移植,根据临床表现和病理检查,比较不同移植组的存活率和GVHD发生情况.结果:增加1×106供鼠NK细胞的移植组中40%小鼠出现GVHD,增加2×106供鼠NK细胞的移植组中仅30%出现GVHD;与单纯异基因骨髓移植细(80%急性GVHD、20%慢性GVHD)和骨髓 T细胞组(100%急性GVHD)比较,GVHD发生率显著下降(P＜0.01),30、60和120 d存活率显著增高(P＜0.01).结论:在小鼠异基因骨髓移植中,同种异基因反应性NK细胞可抑制GVHD效应,延长存活期.     

CD8+T细胞依赖的急性移植物抗宿主病小鼠模型的建立

目的建CD8^＋T细胞依赖的急性移植物抗宿主病（GVHD）小鼠模型。方法分别以主要组织相容性抗原（MHC）相同，而次要组织相容性抗原（miHAs）不同的8～12周龄C3H.SW（H-2D^b，CD45．2^＋）和B6／SJL（H-2D^b，CD45．1^＋）雌性小鼠为供受体，从供体骨髓分离去除T细胞的骨髓细胞（T—BM），与其脾脏和淋巴结来源的CD8^＋T细胞混合，经尾静脉输注给受致死剂量^137γ照射的受体鼠。观察移植后受体的体重、毛色、皮肤和生存率的变化，并用流式细胞术（FACS）和组织病理学进一步分析受鼠靶器官细胞浸润和损伤状况。结果移植后受体鼠出现体重明显减轻、毛发脱落、皮肤溃疡等表现，并在28d后出现死亡；FACS证实浸润受鼠骨髓、脾脏和肝脏的细胞主要为CD45．2^＋的供鼠细胞，实验组中还有大量CD45．2^＋CD8^＋T细胞浸润；组织病理学发现肝脏中大量淋巴细胞浸润，皮肤结构破坏，组织坏死。结论成功建立了miHAs不匹配的异基因骨髓移植诱导的CD8^＋T细胞依赖的GVHD动物模型，该模型模拟了目前临床病人采用的同种异基因骨髓移植配型方式，可为异基因骨髓移植GVHD发病机理及该病的防治研究提供良好的实验平台和工具。     

同种记忆性CD8+T细胞与移植物抗宿主病相关性的研究

目的用同种异基因骨髓移植诱导小鼠急性移植物抗宿主病(GVHD)模型,研究GVHD与同种记忆性CD8~ T细胞的关系。方法供鼠C3H.SW(H-2D~b,CD45.2~ )和受鼠B6/SJL(H-2D~b,CD45.1~ ),两者MHC抗原均为H-2D~b,但供受鼠之间miHAs有差异。小鼠致死剂量辐照后移植供鼠T~-BM CD8~ T细胞,构建CD8~ T细胞依赖的GVHD模型。观察受鼠体重和生存率变化;流式细胞仪检测受鼠肝脏和脾脏中供鼠来源CD8~ T细胞的浸润数、分泌INF-γ的效应CD8~ T细胞数和与凋亡相关的annexin V分子在CD8~ T细胞的表达情况。结果建立的CD8~ T细胞依赖的致死性急性GVHD小鼠模型,移植后小鼠体重显著下降并有大幅波动,其变化与分泌INF-γ的CD8~ T细胞数量成反比。移植后28d小鼠逐渐出现死亡,70d时死亡率达58%(7/12)。随着GVHD病程的进展,供鼠CD8~ T细胞表现出典型的记忆性T细胞应答的过程,即扩增、凋亡紧缩和残存T细胞的再扩增;分泌INF-γ的效应性CD8~ T细胞也表现出同样的变化;细胞表面凋亡相关分子的表达显示CD8~ T细胞的减少与凋亡的发生有关。结论在模拟目前临床病人采用的同种异基因骨髓移植配型方式的同种异基因骨髓移植小鼠模型中,供者来源的效应性记忆性CD8~ T细胞数量的波动与记忆性T细胞产生过程中数量的变化关系极为密切、受鼠的体重变化与效应性CD8~ T细胞浸润数量的波动成反比的现象说明,在GVHD发生过程中有抗原特异性记忆性CD8~ T细胞形成。     

剔除CCR5基因供者小鼠细胞加重急性移植物抗宿主疾病

目的评价供者CCR5在经过强化预处理的骨髓移植动物模型受者体内的作用,为异基因造血干细胞移植的临床应用提供科学依据。方法经过致死剂量照射的BALB/C小鼠接受异基因C57BL/6小鼠骨髓移植。根据回输的细胞不同分为4组:1)B6 CCR5 KO组,受者接受C57BL/6 CCR5-/-小鼠骨髓和脾脏细胞;2)B6 WT组,受者接受野生型C57BL/6小鼠骨髓和脾脏细胞;3)B6 CCR5 KO BMC组,受者只接受C57BL/6 CCR5-/-小鼠骨髓细胞;4)B6 WT BMC组,受者只接受野生型C57BL/6小鼠骨髓细胞。结果与B6 WT组比较,B6 CCR5 KO组小鼠以更快的速度死于急性移植物抗宿主疾病(GVHD);其受者体内的CD8+T细胞大量增生;T细胞恢复后产生更多的干扰素-γ(INF-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α),T细胞有丝分裂原刀豆素水平处于较高水平,进一步促进T细胞增生。组织学检测提示移植剔除CCR5基因受者细胞的小鼠肾脏出现病理损伤,肝脏存在更为严重的病理变化。结论剔除CCR5基因的异基因骨髓移植使GVHD发病率增加,供者CD8+T细胞在受者体内增生加重肝肾损害。提示CCR5在异基因骨髓移植中起着重要作用。     

骨髓间质干细胞对大鼠移植物抗宿主效应和脾脏结构的影响

【目的】探讨骨髓间质干细胞（MSC）对同种大鼠骨髓移植后移植物抗宿主反应（GVHD）的影响，尤其是MSC对脾脏结构重建的作用。【方法】建立Fischer344（RT-1A1）大鼠至Wistar（RT-1Au）大鼠的同种异体骨髓移植模型，观察移植后大鼠的基本生活情况，病理学分析靶器官皮肤、肝脏、肠道和脾脏的组织学改变，尤其注意MSC对同种骨髓移植后脾脏结构重建的影响。【结果】①在移植后30d的观察期内，共移植组显示较高的生存率。②组织学分析显示：在共移植组，靶器官皮肤、肝脏、肠道的损伤相对较轻。③脾脏组织学分析显示：在骨髓与MSC共移植组，受体脾脏结构接近正常；在单纯骨髓移植组，受体脾脏白髓萎缩，动脉周围淋巴鞘只有少量T细胞，无典型脾小结形成。【结论】MSC与骨髓共移植对GVHD有抑制作用，并显著促进脾脏结构重建。     

大小鼠之间造血干细胞嵌合体抗异种移植物抗宿主病

目的探讨克服异种骨髓移植间强烈的移植物抗宿主病(GVHD)的措施。方法(1)将12只SD大鼠经5.0 Gy亚致死剂量全身照射后,4 h内每只经尾静脉输入28只正常BALB/c小鼠骨髓细胞8×107个。2 d后从腹腔注射环磷酰胺(Cy)100 mg/kg·b.w.,诱导形成对BALB/c小鼠产生特异性免疫耐受的嵌合体大鼠10只。(2)24只BALB/c小鼠接受9.0 Gy致死剂量全身照射后随机均分为3组,照射后4 h内经尾静脉注射骨髓细胞进行移植。A组输注正常SD大鼠的骨髓细胞4×107个;B组输注正常SD大鼠的骨髓细胞4×107个和脾细胞2×107个;C组输注嵌合体SD大鼠的骨髓细胞4×107个和脾细胞2×107个;观察GVHD的发生情况。结果A组有2只小鼠死于感染和放射损伤,所有对象均未观察到明显GVHD表现。B组平均累积存活时间为10 d[95%可信区间为(8,12)],死前均出现不同程度的典型GVHD表现。而C组除2只小鼠分别于移植后18、31 d死亡外,其余的均存活超过150 d。三组间比较有统计差异(P<0.002)。结论对有受者嵌合体的供者进行异种骨髓移植,有助于克服异种移植物抗宿主病。     

移植物与受体T细胞的平衡对移植物抗宿主病影响的实验研究

目的　建立大鼠异基因骨髓移植模型,受体大鼠按不同的移植物与受体T细胞比例回输供体大鼠骨髓细胞。研究该比例对移植物抗宿主病(GVHD) 的发生及其程度的影响。方法　Wistar大鼠为供鼠,SD大鼠为受鼠,受鼠经全身照射(TBI)+环磷酰胺(CTX)预处理后,分别按不同的移植物与受体T细胞比例(1∶1、2∶1、4∶1)回输供体大鼠骨髓细胞。观察移植后各组受体大鼠生存期及GVHD反应。结果　受体大鼠按4∶1的移植物与受体T细胞比例回输供体大鼠骨髓细胞时,GVHD较严重,而当该比例控制在1∶1 和2∶1时,GVHD程度明显减轻(P<0.05)。结论　移植时将移植物与受体T细胞比例控制在一定范围内,使移植物与受体T细胞保持平衡,既有利于移植物的植入,又可减轻GVHD及其他移植相关并发症的发生。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

87株幽门螺旋杆菌VacA等位基因的分析

目的以研究方法LiPA（Line Probe Assay）分析VacA等位基因的表达,了解幽门螺旋杆菌致病机理的理解。方法从三个不同城市87位进行胃镜检查患者的胃粘膜中培养出幽门螺旋杆菌,提取DNA,用LiPA方法分析VacA等位基因。结果（1）87位患者以sic（88．5％）和m2a（63．2％）分布为主,未发现s1b和s2;（2）混合菌株感染率为41．4％,远远高于西方国家,其中上海的混合感染率最高（62．5％）,与北京（41．0％）和南宁（20．8％）相比具有显著性差异,P〈0．01;（3）北京、海、南京三个不同城市s1、m等位基因亚型分布率存在差异;（4）溃疡病和非溃疡病患者m1和m2的分布率没有显著性差异。结论我国幽门螺旋杆菌多重菌株感染率较高,不同的m基因型与消化性溃疡的发生无显著性相关。     

降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值

目的 探讨降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值.方法 选取住院治疗的细菌性肺炎患者72例,根据治疗效果分为治疗有效组(有效组)47例和治疗无效组(无效组)25例,对治疗有效组和无效组中的降钙素酶原变化及影响肺炎治疗效果的危险因素进行分析.结果 有效组治疗后3天及治疗后7天的降钙素酶原显著低于无效组的患者(P＜0.05);年龄＞65岁、心功能≥3级、COPD、糖尿病、肺部双侧受累(X线示)、菌血症、感染性休克和3天内降钙素酶原变化率＜30％是影响细菌性肺炎治疗效果的危险因素;感染性休克、肺部双侧受累、3天内降钙素酶原变化率＜30％及心功能≥3级是影响细菌性肺炎治疗效果的独立危险因素.结论 测定降钙素原变化率对细菌性肺炎的疗效评估具有重要临床意义,可在临床推广应用.     

十二指肠损伤的治疗体会

目的：提高十二指肠损伤的诊治水平，方法：回顾总结该院1999年－2001年间收治的十二指肠损伤7例临床经验。结果：合并其他腹部脏器损伤86％（6／7），单纯十二指肠损伤14％（1／7）。损伤部位以十二指肠降部为多占71％（5／7），水平部和球部各占14％（1／7），术后并发症发生率28％（2／7）、病死率14％（1／7）。结论：掌握十二指肠损伤的特点，早诊断、早手术、术中认真探查，掌握好检查指征，选择合理恰当术式，加强术后管理，可提高治愈率。     

断指再植的护理体会

随着医疗水平的提高,显微手外科技术在各基层医院已得到广泛开展,所收治的此类患者在逐年增加.随机统计了近两年我院20份34指的病例,通过观察认为手术的成功与否不但取决于损伤的局部条件、术中的操作和术后的治疗,同时与术前、术后的护理也密不可分.对离断指及伤口的妥善处理,积极的术前准备和术后的精心护理,特别是术后对血运的密切观察,同时通过术前术后的健康教育使患者对该疾病的知识有了一定的掌握,认识了康复训练的重要性从而使功能达到最大限度的恢复.