格列卫与六亚甲基二乙酰胺对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究格列卫和六亚甲基二乙酰胺(HMBA)对K562细胞增殖、凋亡、细胞周期及周期蛋白表达的影响．方法：MTT法观察细胞生长指数和细胞存活率，流式细胞仪、电镜检测细胞周期和凋亡，半定量RT-PCR检测bcr-abl基因的表达，Western blotting检测蛋白表达．结果：联合应用两种药物后细胞存活率明显下降，凋亡比例略下降，细胞周期阻滞于G0／G1期，cyclinD1、cyclinE、cyclinA、CDK4、c-myc蛋白表达下调．结论：两种药物应用后出现细胞存活率下降、细胞周期阻滞、周期蛋白表达下调、凋亡比例下降，联合作用对细胞的增殖抑制具有协同作用，进入凋亡途径细胞减少。     

F10基因过表达及沉默对绒癌细胞系JAR侵袭相关蛋白酶表达的影响

目的 F10基因是本研究前期发现在葡萄胎中高表达的新基因,本文为明确F10过表达和沉默对绒癌细胞系JAR侵袭性的影响,探讨F10基因与部分侵袭相关蛋白的关系。方法通过细胞转染技术及RNA干扰技术,分别建立和筛选出F10基因稳定过表达及沉默的绒癌细胞系JAR。取SPF级裸鼠30只,随机均分为F10过表达组、未处理组、F10沉默组,每组10只,依次接种F10基因过表达的JAR细胞、未处理的JAR细胞和F10基因沉默的JAR细胞株,于接种5周后处死裸鼠收获皮下肿瘤,采用免疫组织化学及Western blot检测方法,比较不同组瘤体组织中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)及金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1),血浆纤溶酶原激活物抑制因子(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)等侵袭相关蛋白酶的表达差异。结果免疫组化法检测结果显示:F10、MMP-2、8、11、16、19在F10过表达组、未处理组、F10沉默组中间的表达依次递减,差异有统计学意义(P<0.05),TIMP-1、PAI-1在F10过表达组中分别为0.118±0.029、0.174±0.005,在未处理组中分别为0.214±0.028、0.289±0.009,在F10沉默组中分别为0.430±0.017、0.517±0.074,3组间的表达差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,F10、MMP-2、8、11、16、19蛋白在F10沉默组、未处理组、F10过表达组依次递增(P<0.001),而TIMP-1及PAI-1蛋白表达水平依次递减(P<0.001)。结论 F10通过上调MMP-2、8、11、16、19的表达,下调TIMP-1、PAI-1表达,参与调节绒癌细胞的增殖,从而可能参与调节绒癌的侵袭和转移。     

二甲基阿米洛利对人肺癌细胞增殖及细胞周期相关蛋白的影响

目的 研究二甲基阿米洛利(dimethyl amiloride,DMA)对人高转移巨细胞肺癌细胞PGCL3增殖的作用及对细胞周期相关蛋白的影响.方法 不同浓度的DMA作用于PGCL3细胞,用MTT法检测对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测DMA对PGCL3细胞周期的影响;Western blot检测DMA对细胞p21、cyclinA、细胞周期依赖激酶2(cell cycle depend on kinase 2,CDK2)、cyclinB1和细胞分裂周期基因25B(cell dividecycle 25B,Cdc25B)蛋白表达以及CDK2和Cdc25B蛋白活性的影响.结果 DMA可抑制PGCL3细胞的增殖,并呈时间和浓度依赖性.DMA阻滞细胞于G2/M期和S期,上调p21蛋白表达,下调cyclinB1蛋白表达,降低CDK2和Cdc25B蛋白活性,但对cyclinA、CDK2和Cdc25B蛋白表达水平无影响.结论 DMA可抑制人肺癌细胞增殖,并改变某些细胞周期相关蛋白的袁达和活性,这可能是其抑制肿瘤的机制之一.     

乳腺癌术后患者CyclinA1、A2、D1、E1表达及其临床意义

目的:探讨细胞周期蛋白cyclinA1?cyclinA2? cyclinD1及cyclinE1在乳腺癌术后复发患者中的表达及其临床意义?方法:选择81例乳腺癌术后患者,研究组为41例术后5年随访期内出现复发者,对照组为40例5年未复发仍存活者?取患者标本石蜡切片,应用实时定量RT-PCR芯片技术平行检测细胞周期蛋白cyclinA1?cyclinA2? cyclinD1及cyclinE1的表达情况,进行单因素Cox回归分析?结果:cyclinA1?cyclinA2? cyclinD1及cyclinE1中cyclinA2? cyclinD1在乳腺癌术后复发患者中呈现高表达,两组间比较有显著性差异(P < 0.05),其OR值?95%CI分别为3.600(2.337~5.574)?2.604(1.726~3.927),cyclinA2?cyclinD1为乳腺癌术后复发的危险性因素?cyclinA1?cyclinE1表达两组间无显著性差异(P > 0.05)?结论:细胞周期蛋白cyclinA2?cyclinD1在乳腺癌术后复发患者中呈现高表达,可作为判断乳腺癌术后复发及预后的重要参考指标?     

铜绿假单胞菌制剂抑制鼻咽癌细胞体外增殖

目的观察铜绿假单胞菌(PA-MSHA)注射液对人鼻咽癌细胞株5-8F及6-10B的生长抑制作用,初步探讨其作用机制。方法 MTT法检测鼻咽癌细胞体外增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,Westem blotting检测细胞周期及凋亡相关蛋白。结果MTT结果表明,与未加药组相比,加药组5-8F及6-10B细胞的增殖能力明显降低(P<0.05),呈剂量和时间依赖性。细胞周期检测发现药物处理后的肿瘤细胞发生G1/S期阻滞(P<0.05)。Westerm blotting检测发现药物处理后的两组细胞周期相关蛋白cyclinD1、CDK4、CDK6及凋亡促进蛋白Bax表达上调,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达下调。结论 PA-MSHA能够抑制鼻咽癌5-8F及6-10B细胞株增殖,其机制可能是通过影响细胞周期调节并促进细胞凋亡。     

AMPK激动剂AICAR通过阻滞细胞周期于G0/G1期抑制肺动脉平滑肌细胞增殖

目的 建立PDGF-BB诱导的原代大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary vascular smooth muscle cells,PASMCs)的增殖细胞模型,通过AMPK激动剂AICAR干预,探讨AICAR对PASMCs细胞周期和增殖的影响及其机制,为肺血管重构防治寻找靶点。方法 通过20ng/ml PDGF-BB刺激诱导PASMCs增殖建立细胞模型,采用AICAR(0.5mmol/L)干预PDGF-BB诱导的PASMCs增殖,Western blot法检测总的和磷酸化的AMPK, CCK-8检测PASMCs增殖,流式细胞仪分析细胞周期,实时定量PCR(RT-PCR)检测cyclinD1、cyclinE、CDK2/4/6 mRNA的表达。结果 Western blot法检测表明AICAR可以活化AMPK,CCK-8检测结果表明AICAR能够抑制PDGF-BB诱导的PASMCs增殖;流式细胞仪检测结果表明AICAR能够抑制细胞周期于G₀/G₁期,RT-PCR结果表明AICAR可以抑制cyclinD1、cyclinE、CDK2、CDK4和CDK6的mRNA的表达。结论 AICAR通过抑制cyclinD1、cyclinE、CDK2/4/6 的mRNA表达阻滞细胞周期于G₀/G₁~S期,抑制PASMCs增殖。     

靶向抑制Fbxw8对前列腺癌细胞增殖能力的影响

目的 探讨Fbxw8对人前列腺癌DU145细胞增殖及对增殖相关基因cyclinA、cyclinB、CDK1、p21和p27表达的影响.方法 RT-PCR和Western blot法验证Fbxw8 siRNAs的干扰效率;利用CCK-8检测法检测细胞的增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期分布情况;Western blot法检测细胞增殖相关蛋白CDK1、CDK2、cyclinA、cyclinB、P21、P27的表达.结果 Fbxw8 siRNAs显著下调DU145细胞中Fbxw8mRNA及蛋白水平的表达(P＜0.01);Fbxw8 siRNAs显著抑制DU145细胞增殖活力,其中72 h抑制最明显(P＜0.05);流式细胞术分析显示,Fbxw8 siRNAs可阻滞细胞于G2/M期,G2/M期细胞百分数由15.32％ (control siRNA)增加到29.03％(Fbxw8 siRNA 1)和28.39％(Fbxw8 siRNA 2);Western blot结果显示,Fbxw8 siRNAs可促进周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21、p27的表达,同时下调G2/M期调控蛋白CDK1、CDK2、cyclin A及cyclin B1的表达.结论 靶向抑制DU145细胞中Fbxw8的表达可显著抑制细胞的增殖,使阻滞细胞于G2/M期,并且可能是通过下调CDK1、CDK2、cyclin A及cyclin B1的表达,上调P21、P27的表达实现的.     

三羟异黄酮对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖和细胞周期的影响

目的:研究三羟异黄酮(genistein,Gen)对乳腺癌细胞株MCF鄄7细胞增殖和细胞周期的影响。方法:采用MTT比色法观察Gen对MCF鄄7细胞增殖的影响,流式细胞仪分析细胞周期分布,Westernblot分别检测周期素B(cyclinB)、周期素E(cyclinE)蛋白表达情况。结果:Gen(≥10μmol/L)对MCF鄄7细胞生长有显著抑制作用,细胞生长阻滞于G2/M期,cyclinB蛋白表达增加,且呈剂量-效应关系;但对cyclinE蛋白表达无影响。结论:Gen抑制MCF鄄7细胞增殖、诱导G2/M期阻滞与其导致cyclinB蛋白积累有关,与cyclinE蛋白表达无明显关系。     

木脂素对MGC-803胃癌细胞的抗增殖作用及其与细胞周期相关蛋白的相关性

[目的]研究木脂素对MGC-803胃癌细胞的抗增殖作用及其与细胞周期相关蛋白之间的相关性．[方法]采用MTT方法检测对照组和实验组各时间段的细胞生存率,利用流式细胞技术检测木脂素对细胞周期的影响,采用免疫细胞化学染色方法检测p53,CDK2,cyclinE及cyclinD1蛋白的表达．[结果]MTT方法检测结果见,药物浓度为25μmol／L时实验组在24,48,72h的生存率分别为82．6％±2．7％,69．1％±4．5％,50．5％±1．7％,与对照组相比较差异均具有统计学意义（P〈0．01）,并具有浓度依赖性．利用流式细胞仪检测细胞周期结果见,G1期细胞增多,S期及G2期细胞减少．免疫细胞化学染色结果见,在24,48,72h时实验组胃癌细胞突变型p53,cyclinD1,cyclinE和CDK2蛋白的阳性表达率与对照组相比较明显降低,各组间差异均具有统计学意义（P〈0．01）．[结论]木脂素对MGC-803胃癌细胞具有明显的抗增殖作用,其机制之一与下调突变型p53,cyclinD1,cyclinE和CDK2蛋白的表达,阻止胃癌细胞从细胞周期G1期进入S期,从而抑制胃癌细胞DNA合成有关．     

三氧化二砷诱导人肝癌细胞凋亡及相关分子机制研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导人肝癌细胞凋亡时,细胞周期及细胞周期调节蛋白的变化,探讨As2O3抗肝癌作用的分子机制.方法:体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,用2μmol/L As2O3处理72h,流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡率;透射电镜观察细胞形态变化及细胞凋亡情况;免疫细胞化学检测cyclinD1、cyclinA、p21蛋白的表达.结果:As2O3使SMMC-7721细胞周期阻滞在G0/G1、S期,与对照组比较,Aa2O3在诱导SMMC-7721细胞发生凋亡的同时,p21蛋白的表达水平显著增高(对照组1.128;As2O3组:3.794),cyclinD1、cyclinA蛋白的表达水平明显下降(对照组:3.647,2.833;As2O3组:1.133,1.179).结论:As2O3能干扰细胞周期的进程,诱导SMMC-7721细胞凋亡.其作用机制与上调p21蛋白及下调cyclinD1、cyclinA蛋白的表达有关.     

Vitamin C Inhibits Benzo[a]pyrene-lnduced Cell Cycle Changes Partly via Cyclin D1/ E2F Pathway in Human Embryo Lung Fibroblasts

Objective To study the molecular mechanism of the inhibitory effects of vitamin C on benzo[a]pyrene （B[a]P）-induced changes of cell cycle in human embryo lung fibroblast （HELF） cells. Methods The stable transfectants, HELF transfected with antisense cyclin D1 and antisense CDK4, were established. Cells were cultured and pretreated with vitamin C before stimulation with B[a]P for 24 h. The expression levels of cyclin DI, CDK4, E2FI, and E2F4 were determined by Western blot. Flow cytometric analysis was employed to detect the distributions of cell cycle. Results B[a]P significantly elevated the expression levels of cyclin D 1, E2F1, and E2F4 in HELF cells. Vitamin C decreased the expression levels of cyclin D 1, E2F1, and E2F4 in B [a]P-stimulated HELF cells. Dose-dependent relationships were not found between the different concentrations of vitamin C （10, 100, 500, 1000, and 5000 lamol/L） and the expression levels of cyclin D 1, E2F1, and E2F4 in HELF cells. The expression levels of cyclin D1, E2FI, and E2F4 in B[a]P-treated transfectants were lower than those in B[a]P-treated HELF cells. The expression levels of cyclin DI and E2F4 treated with vitamin C and antisense cyclin D1 were decreased compared with those treated with antisense cyclin DI alone. The effects of vitamin C combined with antisense CDK4 on the expression levels of cyclin DI and E2FI/E2F4 were similar to those of antisense CDK4 alone. B[a]P progressed HELF cells from GI to S phase. Both vitamin C and antisense cyclin DI suppressed the changes of cell cycle progressed by B[a]P. However, antisense CDK4 did not attenuate the above changes. Vitamin C combined with antisense CDK4 markedly suppressed B[a]P-induced changes of cell cycle as compared with antisense CDK4. But the inhibitory effects of vitamin C combined with antisense cyclin DI on B[a]P-induced changes of cell cycle were similar to those of vitamin C alone or antisense cyclin DI alone. Conclusions B[a]P progressed HELF cells from G1 to S phase via intracellular signaling pathway of cyclin D I/E2F. Vitamin C may modulate this signaling pathway to protect cells from injury caused by B[a]P.     

Different patterns of cyclin D1/CDK4-E2F-1/4 pathways in human embryo lung fibroblasts treated by benzo[a]pyrene at different doses

Objective To investigate the roles of the cyclin D1/CDK4 and E2F-1/4 pathways and compare their work patterns in cell cycle changes induced by different doses of B[a]E Methods Human embryo lung fibroblasts （HELFs） were treated with 2 μmol/L or 100 μmol/L B[a]P which were provided with some characteristics of transformed cells （T-HELFs）. Cyclin D l, CDK4 and E2F-1/4 expressions were determined by Western blotting. Flow cytometry was used to detect the distribution of cell cycle. Results After B[a]P treatment, the proportion of the first gap （G 1） phase cells decreased. CDK4 and E2F-4 expression did not change significantly. In 2 μmol/L treated cells, a marked overexpression of cyclin D1 and E2F-1 was observed. However, in T-HELFs overexpression was limited to cyclin D1 only, and no overexpression of E2F-1 was observed. The decreases of G1 phase in response to B[a]P treatment were blocked in antisense cyclin D1 and antisense CDK4 transfected HELFs （A-D1 and A-K4） and T-HELFs （T-A-D1 and T-A-K4）. After 2 μmol/L B[a]P treatment, overexpression of E2F-1 was attenuated in A-D1, and E2F-4 expression was decreased significantly in A-K4. In T-A-D1 and T-A-K4, E2F-4 expression was increased significantly, compared with T-HELFs. The E2F-1 expression remained unchanged in T-A-D1 and T-A-K4. Condusions Cyclin DI/CDK4-E2F-1/4 pathways work in different patterns in response to low dose and high dose B[a]P treatment. In HELFs treated with 2 μmol/L B[a]P, cyclin D1 positively regulates the E2F-1 expression while CDK4 negatively regulates the E2F-4 expression; however, in HELFs treated with 100 μmol/L B[a]P, both cyclin D1 and CDK4 negatively regulate the E2F-4 expression.     

CBL通过泛素化降解NCK2抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭

目的 阐明Casitas B系淋巴瘤（CBL）蛋白对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响并探讨其作用机制。方法 乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF7常规培养,实验分为NC组、过表达CBL组和siNC组、siCBL组,采用克隆形成法和细胞计数试剂盒-8（CCK-8）、伤口愈合实验、Transwell实验检测过表达（沉默）CBL对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;流式细胞术和Western blot验证CBL对乳腺癌细胞周期进程、细胞周期标志物和上皮-间充质转化（EMT）的影响;罗丹明标记的鬼笔环肽染色细胞骨架观察CBL对细胞丝状伪足数量的影响。采用IP-质谱法筛选CBL的相互作用蛋白并确定NCK2为研究对象。实验分为CBL组、NCK2组、CBL+NCK2组,通过免疫共沉淀（IP）和免疫荧光共定位实验验证CBL与NCK2蛋白互作情况。通过环己酰亚胺追踪实验和泛素化实验检测CBL对NCK2蛋白稳定性和泛素化的影响。采用CCK-8和Transwell实验检测NCK2对CBL介导的乳腺癌细胞增殖及迁移能力的影响。结果 过表达CBL组的细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低（P<0.05）;沉默CBL组的细胞增殖、迁移、侵袭能力显著增加（P<0.01）。沉默CBL促进MCF7细胞周期G1/S转换（P<0.05）。过表达CBL下调乳腺癌细胞周期相关蛋白 CDK2/4（P<0.01）、Cyclin A2/B1/D1/D3/E2（P<0.05）、EMT 相关蛋白 Snail、N-Cadherin、Claudin-1（P<0.05）,同时上调E-Cadherin（P<0.05）;沉默CBL上调乳腺癌细胞周期相关蛋白CDK2/4/6（P<0.05）、Cyclin A2/B1/D1/D3/E2（P<0.05）,EMT相关蛋白Snail、Vimentin、Claudin-1（P<0.05）,同时下调E-Cadherin（P<0.05）。过表达CBL使乳腺癌细胞系MDA-MB-231中丝状伪足数量减少;沉默CBL使乳腺癌细胞系MCF7中丝状伪足数量增加。NCK2与CBL相互作用。过表达CBL抑制NCK2蛋白稳定性（P<0.05）,并促进其泛素降解（P<0.01）。过表达NCK2能够逆转CBL介导的乳腺癌细胞增殖和迁移的抑制作用（P<0.01）。结论 CBL可通过泛素化降解NCK2抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路诱导人晶状体上皮细胞的凋亡和细胞周期阻滞

目的 探讨姜黄素对人晶状体上皮细胞株SRA01/04（HLEC-SRA01/04）细胞周期和凋亡的影响及其相关分子机制,为姜黄素治疗和预防后发性白内障提供理论依据。方法 体外培养HLEC-SRA01/04细胞,加入终浓度分别为0 μmol/L（对照组）以 及20、40和60 μmol/L的姜黄素处理孵育24 h或48 h后,MTT法检测各组细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测HLEC-SRA01/04细胞周期、线粒体膜电位和细胞凋亡率;Western blot法检测姜黄素对HLEC-SRA01/04细胞中caspase-9、caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyclin B1、CDK1、β-catenin、c-myc、Cyclin D1蛋白水平表达的影响。结果 MTT显示：随着姜黄素的浓度逐渐增加,HLEC-SRA01/04细胞较对照组抑制率逐渐增高（P<0.001）;随着作用时间的延长,各实验组HLEC-SRA01/04细胞增殖抑制率均逐渐增高（P<0.001）;流式细胞仪结果显示：各组中HLEC-SRA01/04细胞凋亡率和细胞G2/M期比例随姜黄素浓度增加逐渐增高,而线粒体膜电位随着姜黄素浓度增加逐渐下降（P<0.001）。Western blot 实验显示：随着姜黄素浓度的增加,HLEC- SRA01/04细胞中caspase-3、caspase-9和Bax的表达量逐渐增高,Bcl-2、Cyclin B1、CDK1和β-catenin的表达量逐渐降低,同时Wnt/β-catenin信号通路下游靶蛋白Cyclin D1和c-myc表达量也逐渐降低。结论 姜黄素可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路进而抑制HLEC-SRA01/04细胞增殖,并将细胞周期阻滞在G2/M期,从而诱导其凋亡。     

HMGB1对人鼻咽癌细胞株C666-1体外增殖的影响

目的观察高迁移率族蛋白1（HMGB1）对人鼻咽癌细胞株C666-1增殖的影响并探讨其可能的机制。方法用siRNA干扰
鼻咽癌细胞株C666-1 HMGB1基因,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测cyclin D1,CDK6及相
关通路蛋白表达。用带GFP的HMGB1质粒转染鼻咽癌细胞株C666-1,EDU和CCK-8检测细胞增殖。结果干扰HMGB1的表
达后,细胞增殖明显减慢（P<0.001）;细胞周期分析显示处于G1期细胞比例增多（P<0.001）,S期细胞比例明显下降（P<0.001）;
Western blot结果显示cyclin D1、CDK6的表达下调,STAT3,P-STAT3的表达也下调。过表达HMGB1后,EDU显示处于S期细
胞比例增多（P<0.05）;CCK-8显示细胞增殖明显增快（P<0.001）。结论HMGB1促进人鼻咽癌细胞株C666-1的增殖,可能通过
STAT3信号通路上调cyclin D1、CDK6促进鼻咽癌细胞株C666-1由G1期进入S期从而调控其增殖。
     

双黄升白颗粒对化疗所致骨髓抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠细胞周期的双重调控作用及其机制

目的：探讨双黄升白颗粒对化疗所致骨髓抑制荷瘤小鼠骨髓和肿瘤细胞周期双重调控的作用机制。 方法：本研究采用Lewis肺癌荷瘤小鼠,30只小鼠随机分为空白组、模型组和治疗组。除空白组外,腹腔注射环磷酰胺制作骨髓抑制模型。治疗组用40g/（kg·d）双黄升白颗粒治疗6d后,流式细胞仪检测细胞周期情况,并计算增殖指数（proliferationindex,PI）;蛋白印迹法和免疫组织化学法检测骨髓及肿瘤组织中细胞周期蛋白依赖激酶4（cyclin-dependent kinase4,CDK4）、细胞周期蛋白依赖激酶6（cyclin-dependent ki-nase6,CDK6）和细胞周期蛋白D1（cyclin D1）的表达。 结果：模型组骨髓及肿瘤的G0/G1期细胞比例均低于空白组（P〈0.05）,PI和CDK4、CDK6、cyclin D1表达高于空白组（P〈0.05）。治疗组骨髓G0/G1期细胞比例低于模型组及空白组,PI及CDK4、CDK6、cyclinD1表达均高于模型组及空白组;肿瘤组织G0/G1期细胞比例高于模型组及空白组,PI及CDK4、CDK6、cyc-lin D1表达均低于模型组及空白组。 结论：双黄升白颗粒对骨髓抑制Lewis肺癌荷瘤鼠的细胞周期具有双重调控作用,其机制可能与双重调节cyclin D1、CDK4和CDK6表达有关。     

大黄素抑制人口腔鳞癌细胞Tca8113增殖及细胞周期进程的实验研究

目的探讨大黄素对人口腔鳞癌细胞体外生长增殖及细胞周期改变的影响。方法采用2.5、5.0、10、20、40、60和80 μmol/L
大黄素分别干预体外培养的口腔鳞癌细胞Tca8113,作用24、48和72 h后,并设含0.1%二甲基亚砜的培养液作为对照组,通过
MTT检测不同浓度大黄素干预对于口腔鳞癌细胞Tca8113的增殖作用;以FCM检测不同浓度大黄素干预对于口腔鳞癌细胞周
期的影响;结合Western blotting 方法分析大黄素干预后对口腔鳞癌细胞周期相关蛋白CDK2、Cyclin E和P21 表达水平的变
化。结果大黄素能够在72 h内明显抑制Tca8113细胞生长以及增殖行为。MTT结果显示,随作用时间从24、48到72 h,大黄素
对于Tca8113细胞的抑制效应呈明显的时间—浓度依赖关系;由细胞周期检测结果显示,大黄素作用使口腔鳞癌Tca8113细胞
周期表现为G0~G1期细胞时相阻滞;蛋白免疫印迹则表明经大黄素干预口腔鳞癌Tca8113 细胞的细胞周期相关蛋白CDK2、
Cyclin E和P21表达水平明显降低,与空白对照组相比较,具有显著的统计学差异（P<0.05）。结论大黄素能够明确抑制人口腔鳞
癌细胞Tca8113的生长增殖以及影响其细胞分裂周期,这可能与抑制细胞周期调控信号通路中分子的活化与转导有关。
     

雌二醇与ESR1靶向结合通过ERK信号通路调控软骨细胞的增殖

目的探讨雌二醇（E2）/ESR1（ERα）对C28I2软骨细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法应用Ad-Easy 腺病毒包装系 统构建和包装过表达腺病毒Ad-ESR1,Western blot及QPCR检测该基因在细胞中蛋白及RNA表达情况。在E2处理下,设立不 同病毒感染组处理C28I2细胞,Western blot 检测各处理组C28I2细胞的自噬、凋亡相关蛋白的表达及ERK信号通路的磷酸化 水平;免疫荧光实验观察细胞内自噬流的强弱;FCM检测各组细胞凋亡率及周期;QPCR检测mRNA水平增殖相关标志基因 （PCNA）、细胞周期蛋白B1（CyclinB1）和细胞周期蛋白D1（CyclinD1）表达。ERK特异性抑制剂处理细胞,Western blot检测抑 制ERK通路后自噬及凋亡相关蛋白表达,QPCR检测增殖相关标志基因表达。结果成功构建过表达腺病毒Ad-ESR1。过表达 ESR1 能够促进E2 处理后LC3 和ATG7 的表达,促进LC3 和LAMP1 在细胞质中共定位,抑制cleaved caspase3、cleaved caspase12的表达并且促进PCNA、cyclinB1和cyclinD1表达,且细胞内pERK明显减少;而干扰ESR1表达后,自噬相关蛋白表 达减少,自噬流减弱,凋亡蛋白表达增加,增殖标志基因表达下调,细胞内pERK相对增加。特异性抑制剂阻断ERK活化,E2/ ESR1诱导的自噬增加以及凋亡减少被抑制,增殖相关基因表达被抑制。结论E2与ESR1的靶向结合可促进软骨细胞的增殖, 其作用机制可能与抑制ERK信号通路活化从而促进自噬、抑制凋亡有关。     

咖啡酸苯乙酯对大肠癌细胞HCT116细胞周期和cyclin D1表达的影响

目的探讨咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester, CAPE)对体外培养的大肠癌细胞HCT116细胞周期和cyclin D1表达的影响.方法以人大肠癌细胞株HCT116为研究对象,PI染色、流式细胞仪检测CAPE处理24 h后细胞周期分布,Western blotting、RT-PCR检测CAPE处理24、48 h 后cyclin D1表达的变化.结果 2.5、5.0、10 mg/L CAPE处理HCT116细胞24 h后,G0/G1期细胞百分率上升,S期细胞百分率下降,呈剂量依赖性.2.5、5.0、10 mg/L CAPE处理HCT116细胞24、48 h后cyclin D1蛋白和mRNA表达均降低,呈剂量和时间依赖性.结论 CAPE诱导HCT116细胞周期阻滞,其机制可能与其下调cyclin D1表达有关.