槲皮素抑制ADMA引起的脐静脉内皮细胞内质网应激和细胞凋亡

目的 探讨槲皮素改善ADMA引起脐静脉内皮细胞凋亡的可能机制。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,应用流式细胞仪技术检测细胞凋亡情况,应用Western blot法检测内质网应激蛋白PERK磷酸化水平及IRE1的蛋白表达量,用RT-PCR检测ATF4及CHOP mRNA表达量。结果 ADMA诱导脐静脉内皮细胞凋亡,槲皮素可以抑制ADMA引起的PERK磷酸化及IRE1蛋白表达,并可以减少ATF4及CHOP mRNA量,继而改善ADMA引起的细胞凋亡。结论 槲皮素抑制ADMA引起的脐静脉内皮细胞内质网应激继而抑制细胞凋亡。     

沉默 Fas和 PKCδ表达对游离脂肪酸诱导的 HUVEC 凋亡的影响

目的：探讨Fas与PKCδ在游离脂肪酸（ FFA）诱导的人脐静脉内皮细胞（ HUVEC）凋亡中的作用。方法：①取对数生长期HUVEC,分为空白组,对照组,50、75、100μmol／L FFA组及相应FFA＋PKCδsiRNA转染组,采用比色法检测细胞增殖情况,Western blot检测p-PKCδ蛋白的表达。②将HUVEC分为空白组,对照组,FFA组（100μmol／L FFA处理）和FFA＋PKCδsiRNA组,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。③取100μmol／L FFA干预后的HUVEC分别转染无关序列siRNA和Fas siRNA,以未转染细胞作空白对照,Western blot法检测p-PKCδ和Fas蛋白的表达。结果：①各组细胞增殖水平差异有统计学意义（F＝20．863,P＜0．001）,FFA可抑制细胞增殖（P＜0．05）,而PKCδ siRNA能减弱FFA对细胞增殖的抑制（P＜0．05）。各组细胞p-PKCδ蛋白的表达差异有统计学意义（F＝229．072,P＜0．001）,FFA能提高p-PKCδ蛋白的表达水平（P＜0．05）,而PKCδ siRNA可抑制FFA引起p-PKCδ蛋白的表达（P＜0．05）。②各组细胞凋亡率差异有统计学意义（F＝86．973,P＜0．001）,FFA可增加细胞凋亡（P＜0．05）,而PKCδ siR-NA能降低FFA所致的凋亡（P＜0．05）。③各组细胞Fas蛋白表达差异有统计学意义（F＝122．162,P＜0．001）,Fas siRNA可减低HUVECFas蛋白的表达（P＜0．05）。结论：FFA诱导的HUVEC凋亡可能由PKCδ涉及的Fas通路介导。     

二苯乙烯苷上调Bcl-2抑制内皮细胞凋亡

目的研究二苯乙烯苷（TSG）对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的作用,以及对抗凋亡基因Bcl-2表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,筛选造模内皮细胞凋亡的H2O2浓度,以不同浓度二苯乙烯苷作用24 h。采用MTT法检测细胞生长活力,Hoechst33258染色观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western-blot检测Bcl-2蛋白的含量。结果过氧化氢能引起内皮细胞损伤,抑制细胞增殖,并且随着浓度增加,细胞生存率逐渐降低。其中300μmol/L H2O2作用后细胞增殖明显受到抑制,Hoechst33258染色可见大量凋亡细胞,流式细胞仪检测出明显的凋亡峰,Bcl-2蛋白的表达量显著减少;加入二苯乙烯苷作用后,随着TSG浓度增加,细胞生存率增加,凋亡率逐渐降低;与H2O2造模组比较,10μmol/L的二苯乙烯苷预处理能够显著提高细胞生存率,抑制细胞的凋亡,并且使Bcl-2表达增加（P〈0.05）。结论二苯乙烯苷能抑制过氧化氢诱导的内皮细胞凋亡,该作用与上调Bcl-2表达有关。     

TcpC诱导人血管内皮细胞凋亡及其机制

目的：研究TcpC对人血管内皮细胞凋亡的影响及其机制,为阐明大肠埃希菌所致败血症的病理生理机制提供新的实验依据。 方法：以人脐静脉内皮细胞作为研究对象,将表达TcpC的CFT073野生株（TcpCwt）和敲除tcpc基因的CFT073突变株（TcpCmut）与人脐静脉内皮细胞共培养;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;JC-1染色法检测线粒体膜电位变化;Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达。 结果：TcpCwt与人脐静脉内皮细胞共培养24 h后,人脐静脉内皮细胞数量较少,有脱壁现象,且多数细胞呈碎片状。与TcpCmut相比,TcpCwt能显著诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡（P<0.05）。TcpCwt能显著降低人脐静脉内皮细胞线粒体膜电位,而TcpCmut处理的人脐静脉内皮细胞线粒体膜电位变化与空白对照差异无显著性意义。TcpC能增加多聚ADP核糖聚合酶蛋白裂解,抑制抗凋亡蛋白Mcl-1及XIAP的表达。 结论：大肠埃希菌分泌的TcpC能通过线粒体途径引起多聚ADP核糖聚合酶切割,并抑制抑凋亡蛋白Mcl-1和XIAP的表达,诱导血管内皮细胞凋亡。     

吡格列酮对内皮细胞功能影响及其机制的体外研究

目的了解吡格列酮(PIO)对内皮细胞(EC)功能指标的影响及其可能的作用机理。方法体外原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分别加入5.5mmol/L葡萄糖(对照组)、30mmol/L葡萄糖(高糖组)以及30mmol/L葡萄糖 PIO(10-9mol/L、10-7mol/L、10-5mol/L)(PIO 高糖组),检测各组内皮细胞一氧化氮(NO)和可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)及细胞凋亡率,用激光共聚焦显微镜及Westernblotting杂交分别观察PKCα、PKCδ的位置变化及蛋白表达。结果高糖可诱导EC凋亡增加,NO浓度降低,sICAM-1水平增加;PIO可抑制高糖诱导的上述变化;PIO可抑制高糖诱导的HUVECs的PKCα由胞浆向胞核转移,并抑制PKCδ在高糖作用下由胞核向胞浆及胞膜转移;PIO可抑制高糖诱导的HUVECsPKCδ表达增强的作用,而高糖作用对HUVECs的PKCα表达影响不明显。结论PIO可纠正高糖诱导的EC功能异常,其保护作用可能部分是通过抑制PKCα及PKCδ的激活来实现。     

游离脂肪酸对人近曲肾小管上皮细胞HK-2的影响及作用机制

目的探讨游离脂肪酸（Free Fatty Acids,FFAs）对人近曲肾小管上皮细胞（HK-2）的影响及作用机制。方法用含有不同浓度（0、125、250、500μmol／L）软脂酸的DMEM—F12培养人近曲肾小管上皮细胞（HK-2）在0h、24h、48h三个时段：MTT法检测不同环境下FFAs对HK-2细胞增殖的影响,流式细胞术检测FFAs对细胞凋亡的影响,免疫细胞化学法检测处理前后HK-2细胞中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）及凋亡相关蛋白caspase8蛋白表达的变化。结果FFAs呈剂量和时间依赖性抑制HK-2细胞的增殖（P〈0．05）,并可诱导细胞凋亡（P〈0．05）。经FFAs作用后,iNOS及Caspase8的表达增加。结论游离脂肪酸有抑制HK-2细胞增殖,促进其凋亡的作用,FFAs可能通过激活肾小管上皮细胞内的诱导型一氧化氮合酶（iNOS）,加剧肾小管上皮细胞的凋亡,而caspase8参与了其发生和发展的过程。     

苦豆碱对缺氧/复氧诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的：探讨苦豆碱对缺氧/复氧诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响。方法：培养人脐静脉内皮细胞,随机分为对照组、缺氧/复氧组、苦豆碱（20、50和100 mg/L）预处理组和苦豆碱预处理+LY294002组,并进行相应处理。MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,比色法检测Caspase?3活性,Western blot法检测Bax、Bcl?2、Akt和p?Akt蛋白表达。结果：苦豆碱可提高缺氧/复氧抑制的人脐静脉内皮细胞增殖（P < 0.05）,显著减少缺氧/复氧诱导的细胞凋亡（P < 0.05）,逆转缺氧/复氧引起的Caspase?3活性和Bax表达的增加、Bcl?2表达的降低,提高Bcl?2/Bax值（P < 0.05）。此外,苦豆碱预处理可明显上调缺氧/复氧降低的p?Akt蛋白表达（P < 0.05）,而PI3K/Akt抑制剂LY294002明显逆转苦豆碱抗缺氧/复氧诱导的凋亡作用（P < 0.05）。结论：苦豆碱通过激活PI3K/Akt通路抑制缺氧/复氧诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡。     

丙酮酸脱氢酶激动剂对糖诱导的内皮细胞功能紊乱的改善作用

目的研究丙酮酸脱氢酶激动剂二氯醋酸二异丙胺(DADA)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的功能的影响及可能机制。方法以体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为靶细胞,进行了以下研究:1.DADA对高糖诱导的血管EC功能指标一氧化氮(NO)和可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)的影响;2.用激光共聚焦显微镜及Westernblotting杂交分别观察高糖诱导的PKCα、PKCδ的位置变化及蛋白表达量的影响;实验分组:对照组:浓度为5.5mM;高糖组:浓度为30mM;DADA(1×10-5M,1×10-4Mor1×10-3M) 高糖组。结果1.30mM高糖可诱导EC功能紊乱:高糖可诱导EC功能紊乱:NO浓度降低,sICAM-1水平增加,DADA可抑制高糖诱导的上述变化;高糖可诱导HUVECs的PKCα及PKCδ表达位置转移;PKCδ表达增强,但对PKCα表达影响不明显。结论DADA可以纠正高糖所致内皮细胞功能紊乱,可能部分是通过PKCα及PKCδ途径来实现的。     

丙酮酸脱氢酶激动剂对高糖诱导的内皮细胞功能紊乱的改善作用

目的研究丙酮酸脱氢酶激动剂二氯醋酸二异丙胺(DADA)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的功能的影响及可能机制。方法以体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为靶细胞,进行了以下研究:1.DADA对高糖诱导的血管EC功能指标一氧化氮(NO)和可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)的影响;2.用激光共聚焦显微镜及Westernblotting杂交分别观察高糖诱导的PKCα、PKCδ的位置变化及蛋白表达量的影响;实验分组:对照组:浓度为5.5mM;高糖组:浓度为30mM;DADA(1×10-5M,1×10-4Mor1×10-3M) 高糖组。结果1.30mM高糖可诱导EC功能紊乱:高糖可诱导EC功能紊乱:NO浓度降低,sICAM-1水平增加,DADA可抑制高糖诱导的上述变化;高糖可诱导HUVECs的PKCα及PKCδ表达位置转移;PKCδ表达增强,但对PKCα表达影响不明显。结论DADA可以纠正高糖所致内皮细胞功能紊乱,可能部分是通过PKCα及PKCδ途径来实现的。     

苦碟子注射液对缺氧损伤血管内皮细胞PKCδ/MARCKS通路的调节

目的观察苦碟子注射液对血管内皮细胞缺氧损伤后的保护作用,并初步研究PKCδ/MARCKS信号通路在血管内皮细胞缺氧损伤后的作用机制。方法建立CoCl_2诱导的人脐静脉血管内皮细胞缺氧损伤模型,分为正常组、模型组、苦碟子注射液组、PKCδ特异性抑制剂Rottlerin组。光镜下观察缺氧损伤24 h后各组细胞形态学改变,MTT比色法检测各组细胞的活力,免疫细胞化学法(IHC)及蛋白印迹法(Western Blot)检测各组细胞p-PKCδ、p-MARCKS蛋白质的分布与表达。结果苦碟子注射液、Rottlerin可显著减轻细胞缺氧损伤形态改变,苦碟子、Rottlerin可明显增强缺氧损伤后的细胞活力(P0.01)。与正常组相比,模型组p-PKCδ、p-MARCKS蛋白表达显著增加(P0.05),苦碟子、Rottlerin显著抑制p-PKCδ、p-MARCKS蛋白的表达(P0.05)。结论苦碟子注射液对缺氧诱导的血管内皮细胞损伤具有保护作用,其作用机制与下调PKCδ/MARCKS信号转导通路的活性有关。     

游离脂肪酸及葡萄糖对鼠主动脉内皮细胞的影响及作用机制

目的探讨高糖高游离脂肪酸（freefattyacids,FFAs）对内皮细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法原代培养大鼠主动脉内皮细胞（rataortaendothelialcell,RAEC）,采用不同浓度的葡萄糖（5．5mmol／L,30mmol／L）及棕榈酸（200μmol／L、400μmol／L、600μmol／L）单独或联合作用于细胞24h、48h、72h。免疫组织化学染色方法鉴定内皮细胞并测定IL-8、Bcl-2、BAX表达水平：MTT比色法检测细胞增殖率。结果FFAs及葡萄糖单独及联合应用均可导致细胞出现凋亡形态学变化,增殖呈剂量-时间依赖性（P〈0．05）,且联合组明显低于单独培养组（P〈0．01）;干预后IL-8、BAX表达增加,Bcl-2蛋白表达逐渐减弱,Bcl-2／BAX比值逐渐减小,联合培养组表达更为明显。结论高浓度FFAs及高糖具有抑制内皮细胞生长、促进其凋亡的作用,其作用机制可能是通过葡萄糖及棕榈酸酯参与P13K／AKT等途径激活氧化应激诱导细胞凋亡。     

C反应蛋白调节bcl-2/bax蛋白表达诱导人脐静脉内皮细胞凋亡

目的观察不同浓度C反应蛋白对体外培养的人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,hUVEC）凋亡的影响及其分子机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,用吖啶橙/溴化已啶荧光染色观察凋亡细胞形态。四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）分别测定与不同浓度C反应蛋白（5mg/L、10mg/L、20mg/L）作用12、24、48h后hUVEC的增殖率,流式细胞仪和Western blotting分别检测与不同浓度C反应蛋白作用24h后的细胞早期凋亡率及bcl-2/bax蛋白表达水平。结果随着C反应蛋白浓度的增加,hUVEC的MTT值逐渐降低,而细胞早期凋亡率则逐渐升高。与对照组相比,24h后高C反应蛋白组MTT值明显下降（P〈0.05）,而细胞早期凋亡率显著增加（P〈0.01）。内皮细胞在高C反应蛋白作用24h后,bcl-2蛋白表达减弱,bax蛋白表达增强,它们的表达量与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 C反应蛋白可能通过调节bcl-2/bax蛋白表达诱导人内皮细胞凋亡。     

胰岛素改善高糖诱导的内皮细胞功能紊乱的作用

目的研究胰岛素对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)功能的影响及可能机制。方法体外培养HUVECs作为靶细胞,进行以下研究:(1)对血管EC功能指标一氧化氮(NO)和可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)的影响;(2)用激光共聚焦显微镜观察高糖及胰岛素对PKCα、PKCδ的位置变化及荧光表达的影响。实验分组:(1)对照组:浓度为5.5mmol/L;(2)高糖组:浓度为30mmol/L;(3)胰岛素(10、100、1 000mU/L) 高糖组。结果(1)高糖可诱导EC功能紊乱:NO浓度降低,sI-CAM-1水平增加,不同浓度的胰岛素可抑制高糖诱导的上述变化。(2)高糖可诱导HUVECs的PKCα及PKCδ表达位置转移;PKCδ表达增强,但对PKCα表达影响不明显,不同浓度的胰岛素可抑制高糖诱导的上述变化。结论不同浓度的胰岛素可以纠正高糖所致内皮细胞功能紊乱,可能部分是通过PKCα及PKCδ途径来实现的。     

阿托伐他汀对同型半胱氨酸诱导内皮细胞内质网应激的抑制作用

目的： 观察阿托伐他汀对同型半胱氨酸（Hcy）诱导的人脐静脉内皮细胞内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）以及凋亡的影响。方法: 不同浓度的Hcy或联合阿托伐他汀处理人脐静脉内皮细胞后,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时定量PCR和蛋白质印迹法测定ERS相关分子BiP、CHOP及p-eIF2α、p- PERK的表达变化。结果: Hcy呈浓度依赖性地诱导内皮细胞ERS相关分子BiP、CHOP及p-eIF2α、p-PERK的表达,阿托伐他汀可明显抑制Hcy诱导的内皮细胞ERS相关分子的表达,减少内皮细胞凋亡。结论： 阿托伐他汀可通过下调ERS相关信号通路,抑制Hcy诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡。     

三七皂苷R1对氧化型低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡的保护作用

目的探讨三七皂苷R1（NGR1）对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导血管内皮细胞凋亡的保护作用及其机制。方法将体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）分为对照组、损伤组（ox-LDL组）和4种浓度NGR1治疗组（ox-LDL+不同浓度NGR1组）;采用CCK-8法检测NGR1的药物毒性以及各组HUVECs的增殖活性,采用Westernblot法检测Bcl-2、Bax及Cleaved-caspase-3凋亡相关蛋白表达情况,免疫荧光染色检测Cleaved-caspase-3凋亡情况,钙黄绿素细胞膜标记染色检测细胞黏附能力,Transwell迁移试验检测细胞迁移能力。结果与对照组比较,损伤组HUVECs的凋亡率和Cleaved-caspase-3表达水平显著升高,并且HUVECs的增殖活性、细胞黏附能力和迁移能力均显著降低（均P＜0.05）。与损伤组比较,NGR1治疗组HUVECs的凋亡率和Cleaved-caspase-3表达水平均随着NGR1浓度的增加而逐渐下降,HUVECs的增殖活性、细胞黏附能力和迁移能力均随着NGR1浓度的增加而逐渐升高（均P＜0.05）。结论NGR1通过抑制ox-LDL诱导的HUVECs细胞增殖活性降低、Cleaved-caspase-3表达上调而引起的细胞凋亡增多、细胞黏附和迁移数量减少,从而发挥其对ox-LDL损伤的血管内皮细胞的保护作用。     

地塞米松诱导人脐静脉内皮细胞凋亡

目的：观察地塞米松对人脐带静脉血管内皮细胞( ECV304)增殖的影响。方法：采用细胞凋亡的荧光检测法（Heochst 33342）检测地塞米松对脐静脉血管内皮细胞（ECV304）的形态学改变, MTT 法观察地塞米松对ECV304增殖的抑制作用,流式细胞仪术检测地塞米松引起的ECV304凋亡率改变。结果：较高剂量（100umol/L）地塞米松对脐静脉血管内皮细胞增殖起抑制作用,并诱导其凋亡。结论：地塞米松具有比较明显的抑制血管内皮细胞增殖的作用。地塞米松抗血管生成的机制可能与其抑制血管内皮细胞增殖、诱导内皮细胞凋亡有关。     

清热消积方对人肺腺癌细胞诱导的人脐静脉内皮细胞增殖凋亡的影响

目的研究清热消积方对体外肿瘤细胞诱导的人脐静脉内皮细胞增殖凋亡的影响。方法将不同浓度清热消积方与人肺腺癌细胞SPC-A-1和人脐静脉内皮细胞HUVEC共同作用,用MTT法检测清热消积方对SPC-A-1及HUVEC细胞增殖的影响;流式细胞术检测对HUVCE细胞周期及凋亡的影响。结果不同浓度的清热消积方能够抑制SPC-A-1及HU-VEC细胞的增殖(P<0.01),呈现一定的剂量依赖性;并对两者存在差异细胞毒作用,对HUVEC细胞的增殖抑制显著高于SPC-A-1细胞(P<0.01);可将SPC-A-1细胞诱导的HUVEC细胞阻滞于细胞周期G2～M期;并引起HUVEC细胞凋亡。结论清热消积方可抑制SPC-A-1及HUVEC细胞的增殖、阻滞SPC-A-1诱导的HUVEC细胞周期,并引起该细胞凋亡,清热消积方可能具有抗肿瘤血管形成效应。     

p38MAPK/eNOS信号通道在胰高血糖素样肽-1抑制AGEs诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的探讨p38MAPK信号通道在胰高血糖素样肽-1（GLP-1）拮抗糖基化终末产物（AGEs）诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡
的作用。方法实验组分为对照组、AGEs组、GLP-1组、AGEs+GLP-1组、AGEs+抑制剂组及AGEs+GLP-1+抑制剂组,western
blot技术检测p-p38MAPK/p38MAPK、p-eNOS/eNOS蛋白表达情况,Annexin V/PI流式检测细胞凋亡率。结果与对照相比较,
单独加入AGEs或GLP-1可分别导致p-p38MAPK蛋白表达水平明显上升（P=0.001）或下降（P<0.001）;与对照组相比AGEs可
显著降低p-eNOS表达水平（P=0.007）,而予以GLP-1或p38MAPK抑制剂（SB203580）预处理后,受抑制的eNOS蛋白表达水平
再次显著升高（P=0.004）;在AGEs 组加入SB203580 或GLP-1 预处理后,AGEs诱导的细胞凋亡率均显著下降（P<0.001,P<
0.001）。结论GLP-1至少部分通过抑制p38MAPK蛋白磷酸化,上调磷酸化eNOS蛋白的表达,对人脐静脉内皮细胞起到抗凋
亡的保护作用。
     

紫草素对肺腺癌A549细胞的生长抑制作用及其机制研究

目的观察紫草素抑制人肺腺癌A549细胞的增殖及其机制。方法用不同浓度紫草素处理A549细胞,CCK-8方法检测紫草素对A549细胞生长增殖的抑制作用;细胞周期检测试剂盒测定细胞周期的变化;Western blot法检测磷酸化Akt蛋白（pAkt）的表达。结果紫草素能够抑制人肺腺癌A549细胞的增殖;诱导A549细胞凋亡;阻滞细胞G1期向S期的发展。pAkt蛋白表达量在紫草素处理48 h后明显减少。结论紫草素可以抑制肺腺癌A549细胞的增殖,诱导凋亡,机制可能与紫草素抑制PI3K/Akt信号途径有关。     

高糖条件下外源性胰岛素对人脐静脉内皮细胞增殖凋亡及血管性血友病因子水平的影响

目的探讨高糖条件下外源性胰岛素对人脐静脉内皮细胞增殖凋亡及血管性血友病因子(vWF)水平的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,分为对照组、高糖组、高糖加不同浓度胰岛素组,培养24 h后,MTT法检测细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞周期与凋亡比例,ELISA法检测培养液中vWF水平.结果 高糖条件下,低浓度胰岛素促进内皮细胞增殖,使G1期细胞减少,抑制内皮细胞凋亡,降低vWF;高浓度胰岛素抑制内皮细胞增殖,使细胞阻滞于G1期,促进内皮细胞凋亡,升高vWF水平.结论高糖条件下,低浓度胰岛素对内皮细胞有保护作用,高浓度胰岛素加重内皮细胞损伤.