艾迪注射液中刺五加提取物对斑蝥素的减毒增效作用

目的探讨艾迪注射液中刺五加提取物对斑蝥素的增效、减毒作用。方法采用MTF法考察刺五加提取物对斑蝥素引起的肿瘤细胞（SMMC-7721肝癌细胞）和正常大鼠肾NRK细胞的细胞毒作用;采用流式细胞术检测SMMC-7721和NRK细胞凋亡情况。用斑蝥素制作大鼠急性肾损伤模型,考察刺五加提取物对肾损伤大鼠的保护作用。结果刺五加提取物可增强斑蝥素对SMMC-7721肝癌细胞增殖的抑制作用,降低斑蝥素对NRK细胞的细胞毒作用（P〈0．05或〈0．01）;刺五加提取物能增强斑蝥素引起SMMC-7721细胞凋亡,抑制NRK细胞凋亡（P〈0．05或〈0．01）。刺五加提取物可降低斑蝥素所致肾损伤大鼠的尿素氮、肌酐含量,减少尿液中尿蛋白含量（P〈0．05或〈0．01）。结论艾迪注射液中刺五加提取物对斑蝥素有增效、减毒作用。     

川楝素对顺铂抗肺癌活性的影响及其机制研究

目的观察川楝素对顺铂抗肺癌活性的协同效应并研究其机制。方法人肺癌细胞系A549分为对照组、川楝素组、顺铂组、川楝素+顺铂组及川楝素+顺铂+X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)质粒组。MTT实验检测各组A549细胞活力抑制率;流式细胞实验检测各组A549细胞凋亡;免疫共沉淀及Western blot实验检测各组A549细胞XIAP表达水平及其与半胱天冬酶-9(Caspase-9)和半胱天冬酶-3(Caspase-3)的相互作用;Western blot实验检测各组A549细胞Caspase-9和Caspase-3的活化。结果川楝素+顺铂组A549细胞活力抑制率[(66.8±5.9)%]显著高于顺铂单治疗组[(15.2±1.2)%,P0.05]和川楝素+顺铂+XIAP质粒组[(20.4±1.8)%,P0.05];川楝素+顺铂组A549细胞凋亡率[(34.5±2.6)%]显著高于顺铂单治疗组[(9.7±0.8)%,P0.05]和川楝素+顺铂+XIAP质粒组[(13.3±1.2)%,P0.05];免疫共沉淀及Western blot实验显示川楝素能显著抑制A549细胞XIAP的表达及其与Caspase-9和Caspase-3的相互作用,川楝素促进顺铂对Caspase-9和Caspase-3的活化。结论川楝素通过下调XIAP表达增强顺铂抗肺癌活性。     

牛磺酸对人肺癌细胞株A549细胞凋亡的影响

探讨牛磺酸（Tau）对人肺癌细胞株A549细胞凋亡的作用及其初步机制。方法 将A549细胞分为6组:Control组（正常对照组,未给予任何药物处理）和Tau 1组(给予Tau 10 mmol·L-1)、Tau 2组(给予Tau20mmol·L-1)、Tau 3组(给予Tau 40 mmol·L-1)、Tau 4组(给予Tau 80 mmol·L-1)、Tau 5组(给予Tau160mmol·L-1);阳性对照组DDP 4mg·L-1,作用时间分别为24、48、72h。应用MTT比色法检测人肺癌细胞株A549的细胞增殖,流式细胞术检测人肺癌细胞株A549的细胞凋亡率,分光光度法检测Caspase-9、Caspase-3的活性,免疫印迹法检测p53正向细胞凋亡调控因子（PUMA）的水平及Bax蛋白、Bcl-2蛋白的表达水平。结果Tau能够以时间剂量依赖方式来抑制A549细胞增殖,并显著增加A549细胞凋亡率。Tau可以明显增加A549细胞内Caspase-9、Caspase-3的活性,以及诱导A549细胞内PUMA、Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调。Tau对人胚肾细胞293T的细胞活性无明显影响。结论 Tau对人肺癌细胞株A549有增殖抑制和凋亡诱导的作用,其机制可能是Tau通过上调PUMA、Bax表达及下调Bcl-2表达,进而增加Caspase-9、Caspase-3的活性来诱导A549细胞发生凋亡。     

IL-24抑癌基因联合大蒜素对肺癌细胞的杀伤作用

目的 探讨IL-24基因联合大蒜素对肺癌A549细胞的增殖抑制和促凋亡作用. 方法 提取前期构建的pDC316-hIL-24-EGFP质粒,转染肺癌A549细胞,分为A组:空白对照组;B组:单独大蒜素组;C组:脂质体+IL-24组;D组:大蒜素+脂质体+IL-24. 荧光显微镜下观察质粒的转染情况,结晶紫染色法和MTT法检测pDC316-hIL-24-EGFP联合大蒜素对肺癌A549细胞生长的影响,用流式细胞仪检测细胞凋亡. 结果 40、80 mg/L大蒜素和pDC316-hIL-24-EGFP单用24、48 h对A549细胞均有明显抑制作用,呈剂量依赖性. 低剂量大蒜素(40 mg/L)联合pDC316-hIL-24-EGFP比单用pDC316-hIL-24-EGFP作用更强(P<0. 05). 40 mg/L大蒜素、pDC316-hIL-24-EGFP和两药联用48 h,A549细胞凋亡率分别为32. 7%,39. 4%和68. 8%. 结论 pDC316-hIL-24-EGFP联合大蒜素对人肺癌A549细胞有协同抑制作用.     

骨髓间充质干细胞抗肺泡上皮细胞凋亡作用研究

目的 研究骨髓间充质干细胞对LPS诱导的肺泡上皮细胞凋亡的影响及作用.方法 用人肺泡上皮细胞株(A549细胞株)与人骨髓间充质干细胞株(第3代hBMMSC株)建立Transwell非接触分层共培养体系,分4组:(1)空白对照组;PBS+A549; (2) LPS诱导组;LPS+A549; (3) BMMSC对照组:BS+A549+BMMSC; (4) BMMSC干预组:LPS+A549+BMMSC.采用Annexin V/PI双染色流式细胞仪检测A549细胞凋亡率;Western blotting检测caspase 3、bcl-2和bax蛋白表达.结果 10 μg/mL LPS可体外诱导A549细胞凋亡;BMMSC干预组A549细胞凋亡率、caspase-3与bax蛋白表达水平明显低于LPS诱导组、空白对照组和BMMSC对照组(P＜0.01);bcl-2蛋白表达水平显著高于LPS诱导组、空白对照组和BMMSC对照组(P＜0.01).结论 与LPS诱导的A549细胞共培养,BMMSC能促进A549细胞表达抗凋亡蛋白bcl-2和抑制促凋亡蛋白caspase-3和bax的表达,具有抗细胞凋亡作用.     

转染 PDCD5质粒促进顺铂诱导 A549细胞凋亡作用的研究

目的：观察程序化死亡因子5（PDCD5）基因联合顺铂诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的作用,探索其可能机制。方法利用脂质体瞬时转染PDCD5重组质粒入 A549细胞,RT-PCR检测其转染效率。Western blot检测转染后 PDCD5、Bcl-2和Survivin蛋白表达情况。M T T法及流式细胞仪检测PDCD5单药和联合顺铂后的细胞凋亡情况。结果 PDCD5重组质粒成功转染入A549细胞,Western bolt结果显示转染重组质粒组中PDCD5蛋白表达高于空白对照组及转染空质粒组,Bcl-2和Survivin蛋白则低于空白对照组及转染空质粒组,差异有统计学意义（P＜0．05）。MTT及流式细胞仪检测显示转染重组质粒组较空白对照组及转染空质粒组细胞凋亡率高（ P＜0．05）。结论 PDCD5基因可以促进顺铂诱导的A549细胞凋亡。     

3-溴丙酮酸联合顺铂抑制肺癌细胞株A549的生长

目的 探讨3-溴丙酮酸(3-bromopyruvate,3-BrPA)联合顺铂体外抗肺癌A549细胞的作用及其可能机制.方法 采用CCK-8检测不同浓度的3-BrPA、顺铂单用及联用对A549细胞的增殖抑制;选择低于半数抑制浓度(IC50)的40 μmol/L 3-BrPA与1 mg/L顺铂单独和联合作用A549细胞48 h后,用倒置相差显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡;不同浓度的3-BrPA作用A549细胞48 h后,流式细胞术检测细胞周期变化,己糖激酶(hexokinase,HK)活性检测试剂盒检测3-BrPA对细胞内HK活性的影响.结果 CCK-8结果显示,与阴性对照组比较,3-BrPA浓度大于20 μmol/L时对A549细胞有明显抑制作用(P＜0.01),与单用顺铂组比较,3-BrPA联合顺铂组可显著增强顺铂对A549细胞的毒性作用(P＜0.01);3-BrPA作用A549细胞48 h后,倒置显微镜观察到3-BrPA组大多数细胞出现凋亡,而联合用药组细胞凋亡更加明显,部分区域出现细胞碎片等坏死征象;流式细胞术结果显示,3-BrPA和顺铂单用组及联合用药组细胞凋亡率均明显高于阴性对照组(P＜0.01),且联合用药组细胞凋亡率明显高于单独用药组(P＜0.01);细胞周期检测结果显示3-BrPA可将A549细胞阻滞于G1期;HK活性结果显示:与阴性对照组比较,3-BrPA组HK活性明显降低(P＜0.01).结论 3-BrPA有抑制肺癌A549细胞增殖、诱导其凋亡的作用,且与顺铂具有协同抗肺癌A549细胞增殖作用,其机制可能为抑制肺癌细胞糖酵解,进而影响肺癌细胞能量代谢.     

芪杉方联合顺铂对肺癌A549细胞PI3K/AKt信号通路的影响

目的观察芪杉方联合顺铂对肺癌A549细胞PI3K/AKt信号通路的影响。方法 Wisatr雄性大鼠随机分成芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组和空白对照组,每组10只,各组连续灌胃3 d后取血。分别运用MTT法、Annexin V-PE/7-AAD双染法、蛋白质印迹(Western blot)法、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测芪杉方含药血清联合顺铂对A549细胞增殖、细胞凋亡及其相关蛋白和基因表达的影响。结果芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组分别作用于A549细胞时,均表现为抑制细胞增殖作用,其抑制率分别为27.20%(P0.01),28.52%(P0.01)和51.25%(P0.01)。芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组Caspase-3、Caspase-9、m TOR及PI3K蛋白和基因表达量与空白对照组相比,表达量降低(P0.01),且芪杉方含药血清联合顺铂组对A549细胞凋亡相关蛋白表达的影响最显著(P0.01)。结论芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组均能够抑制A549细胞增殖,激活Caspase-3、Caspase-9、AKT、m TOR相关凋亡途径,从而诱导A549细胞凋亡。     

黄连素联合顺铂诱导人肺癌耐药A549/DDP细胞凋亡的实验研究

目的观察黄连素联合顺铂对A549/DDP细胞凋亡的影响并探讨其相关机制。方法以A549/DDP细胞为研究对象,分别加入12μg/m L的顺铂、浓度为20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L的黄连素+12μg/m L的顺铂,设置空白对照孔(PBS孔),分别用药物干预24 h、48 h、72 h,采用MTT法检测细胞增殖活性;各组用药干预48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2的蛋白表达情况,Real-time PCR法检测Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2的m RNA表达水平。结果黄连素联合顺铂能够抑制A549/DDP细胞增殖(P0.01),并具有一定的时间-浓度依赖性。黄连素联合顺铂能够诱导耐药细胞A549/DDP凋亡(P0.01),且呈一定的浓度依赖性。不同浓度的黄连素联合顺铂使促凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-9、Bax在蛋白和m RNA水平表达上调(P0.05),而抗凋亡基因Bcl-2在蛋白和m RNA水平表达下调(P0.05)。结论黄连素联合顺铂抑制A549/DDP细胞增殖和促凋亡的分子机制可能是上调促凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-9、Bax的表达,下调抗凋亡基因Bcl-2的表达。     

益气养阴除结方联合顺铂对肺腺癌A549细胞生长及凋亡的影响

目的探讨益气养阴除结方联合顺铂对肺腺癌细胞(A549细胞)凋亡的影响及其机制。方法选用A549细胞培养,实验分为4组,分别为空白对照组、益气养阴除结方组(简称中药组)、顺铂组、联合组。空白对照组不加药物处理;中药组浓度梯度设定分别为1 000、500、200、100、50、20 mg/L;顺铂组浓度梯度设定分别为4 mg/L和8 mg/L;联合组浓度梯度分别为以上2组之间的组合。应用MTT法检测药物对其增殖的抑制作用;TUNNEL法检测细胞凋亡情况;免疫细胞化学法检测肿瘤细胞Bcl-2及Caspase-3蛋白的表达。结果与空白对照组比较,中药组、顺铂组及联合组的细胞抑制率均有明显增加(P0.05~P0.001),其中联合组(中药200 mg/L+顺铂4mg/L)抑制率最高;各用药组凋亡细胞数量均有明显增加(P0.01,P0.001),其中联合组(中药200 mg/L+顺铂4 mg/L)凋亡细胞数量最多;各用药组bcl-2的表达均降低,其中顺铂组(4 mg/L)、联合组(中药200 mg/L+顺铂4 mg/L)Bcl-2的表达明显降低(P0.01);各用药组Caspase-3表达的表达均升高,其中中药组(200 mg/L)、联合组(中药200 mg/L+顺铂4 mg/L)有显著性差异(P0.05,P0.01)。结论该中药复方能促进A549细胞凋亡抑制肿瘤细胞生长,联合一定浓度顺铂后其效果更明显,其机制可能与抑制Bcl-2和增加Caspase-3的表达有关。     

白藜芦醇诱导人肺腺癌A549细胞细胞凋亡及其与p38 MAPK信号途径的联系

目的 探讨白藜芦醇( Res)诱导人肺癌A549细胞株凋亡及其与p38 MARK信号通路的联系. 方法 CCK-8 法检测 Res 对人肺癌 A549 细胞增殖抑制作用, Annexin V-FITC/PI双染法检测Res对肺癌A549 细胞凋亡率, Western blot 法检测 Res 对人肺癌 A549 细胞 Caspase 剪切片断(Caspase-1、Caspase-3)表达的影响,及其对丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)通路蛋白(p38、p-p38)表达的影响.结果 Res对人肺癌A549细胞株生长呈浓度依赖性的抑制作用,48 h的Res作用肺癌A549的半数抑制浓度( IC50 ) 值为( 10. 6 ±1. 2)μmol/L. 用10 μmol/L Res处理 A549 细胞24、36、48 h,细胞凋亡率较对照组明显增加( P<0. 01 ). Res作用于A549 细胞 48 h 后, Western blot 法检测显示 Caspase-1、Caspase-3蛋白出现断裂片断,p38、p-p38表达亦增高. 结论Res明显诱导人肺癌A549细胞毒作用,诱导A549细胞凋亡,其机制与激活p-p38 MAPK途径有关.     

碱制法炮制可显著增强斑蝥的抗肿瘤作用

目的 研究碱制法炮制前后斑蝥对人肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。方法 提取生品斑蝥中的斑蝥素和碱制斑蝥中的斑蝥酸钠。以人非小细胞肺癌A549细胞为研究对象,生斑蝥与碱制斑蝥处理细胞后,采用CCK-8法检测药物对细胞增殖活性的影响,划痕实验观察细胞迁移作用,Transwell实验观察细胞侵袭作用,WB观察药物对A549细胞MMP1、MMP2蛋白表达的影响,ELISA法检测细胞炎症因子IFN-γ、IL-1β和TNF-α水平,AnnexinV/PI染色观察细胞凋亡情况。结果 生斑蝥与碱制斑蝥均可使A549细胞活力明显降低;生斑蝥与碱制斑蝥均能抑制A549细胞迁移,且生斑蝥高浓度组划痕愈合程度最低,与生斑蝥高浓度组相比,差异具有显著性（P<0.01）;碱制斑蝥较生斑蝥抑制A549细胞侵袭作用更明显,差异具有显著性（P<0.01）;且生斑蝥与碱制斑蝥均可抑制 MMP1和MMP2蛋白的表达,显著上调炎症因子IFN-γ水平,但对IL-1β、TNF-α含量则没 有显著影响,Annexin V/PI双染荧光拍照发现生斑蝥组与碱制斑蝥组红绿荧光强度均增加,且碱制斑蝥组荧光增加更明显。结论 碱制法炮制后斑蝥的抗癌作用显著提高,具有抑制A549细胞增殖,侵袭和迁移的作用,其机制可能与下调MMP1和MMP2的表达,促进凋亡及上调炎症因子IFN-γ水平有关。     

Rh2逆转耐药细胞对顺铂抗性作用的机制

目的 探讨人参单体Rh2逆转肺腺癌耐药A549DDP细胞对顺铂抗性作用的机制.方法 以Rh2单独作用为Rh2组,低效浓度的顺铂单独作用为DDP组,二者联合作用为Rh2+DDP组,不加药物干预为对照组,紫外光分光光度计检测各组细胞的线粒体PTP开放情况,流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度及线粒体跨膜电位的变化及细胞凋亡状况,Western印迹检测细胞色素C及Caspase-3表达;Hoechst33258染色荧光显微镜下观察细胞形态的变化.结果 Rh2组和DDP组细胞内钙离子浓度与对照组的接近,Rh2+DDP组细胞内钙离子浓度升高,与对照组比较,差异有统计学意义(t=22.47,P<0.01).前3组细胞的线粒体吸光度(A540nm)值接近,而Rh2+DDP组A540nm值明显低于对照组(t=8.21,P<0.01).前3组线粒体跨膜电位接近,Rh2+DDP组细胞内线粒体跨膜电位明显低于对照组(X~2=46.01,P<0.01).前3组细胞的胞质中细胞色素C和Caspase-3表达极低,Rh2+DDP组细胞色素C和Caspase-3高表达.荧光显微镜下,前3组细胞核荧光分布均匀;Rh2+DDP组的细胞核数目减少,荧光成团块分布,很多细胞核缩小或变形.前3组凋亡细胞百分率分别为6.32%、7.24%、7.41%,3组间差异无统计学意义,Rh2+DDP组凋亡细胞百分率为21.96%,与对照组差异有统计学意义(t=10.92,P<0.05).结论 无毒浓度的Rh2逆转A549DDP细胞对顺铂的耐药性作用可通过线粒体凋亡通路实现.     

辐射诱导的重组载体p Egr 1-sh TRAI L对肺腺癌A549细胞的生长抑制作用

目的: 构建 Egr 1 介导的人分泌型肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体( hs T R AI L ) 重组表达载体 p Egr 1- hs T R AI L , 探讨其对人肺腺癌 A549 细胞的生长抑制作用。方法: 利用基因重组技术构建 Egr 1 介导的 hs T R AI L 重组载体, PCR 、酶切和测序鉴定正确后转染 A549 细胞, 给予 6 Gy X 射线照射。实验分为对照( Cont r ol ) , p Egr 1- hs T R AI L , 6 Gy X 射线和 p Egr 1- hs T R AI L + 6 Gy X 射线组。 ELI S A 法检测各组 A549 细胞中 hs T R AI L 的 表达, MT T 法检测细胞增殖能力, 流式细胞术检测细胞周期, T UNEL 法检测细胞凋亡变化。结果: 成功构建 Egr 1 调控的 hs T R AI L 重组载体 p Egr 1- hs T R AI L , 质粒转染后经 6 Gy X 射线照射, 对照组、 6 Gy 组和 p Egr 1- hs T R AI L 组 hs T R AI L 蛋白表达随时间延长变化不明显, 而 p Egr 1- hs T R AI L + 6 Gy 组随时间延长 hs T R AI L 蛋 白表达显著增加(P ＜0. 05 或 P ＜0. 01) , 8 h 达到峰值; p Egr 1- hs T R AI L 组 A549 细胞增殖能力与对照组比较无 明显差异, 6 Gy 和 p Egr 1- hs T R AI L + 6 Gy 组 A549 细胞增殖能力较对照组显著降低, p Egr 1- hs T R AI L + 6 Gy 组降低更明显(P ＜0. 05 或 P ＜0. 01) ; 与对照组比较, p Egr 1- hs T R AI L 组 A549 细胞各期百分比变化不明显, 而 6 Gy 和 p Egr 1- hs T R AI L + 6 Gy 组 G 0 ／ G 1 细胞百分比明显增加(P ＜0. 05) , G 2 ／ M 期细胞百分比明显降低(P ＜ 0. 05 ) , S 期细胞百分比无明显变化; 各期细胞百分比在 6 Gy 和 p Egr 1- hs T R AI L + 6 Gy 组基本一致; 与对照组 比较, p Egr 1- hs T R AI L 组 A549 细胞凋亡百分比无明显变化, 而 6 Gy 和 p Egr 1- hs T R AI L + 6 Gy 组 A549 细胞 凋亡百分比较对照组增加(P ＜0. 01) , 其中 p Egr 1- hs T R AI L + 6 Gy 组增加更明显。结论: 成功构建了 Egr 1 介导 的 hs T R AI L 重组表达载体 p Egr 1- hs T R AI L , 其能够增加辐射对 A549 细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用, 而对细 胞周期分布影响不大。     

大黄酸对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其机制

目的：探讨大黄酸对非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并阐明其机制。方法：将NSCLC A549细胞分为对照组和低、中及高剂量大黄酸组,采用不含大黄酸的培养基和含有质量浓度为5、10和20 μmol·L^-1大黄酸的培养基分别培养细胞24、48和72 h。采用MTT法检测各组A549细胞增殖率,流式细胞术检测A549细胞凋亡率以及不同细胞周期A549细胞百分比,Western blotting法检测各组A549细胞中半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）、半胱氨酸蛋白酶9（Caspase-9）、细胞色素C（Cyt-C）和凋亡诱导因子（AIF）蛋白表达水平,划痕实验和Transwell实验检测各组A549细胞迁移和侵袭能力。结果：大黄酸处理24h后,与对照组比较,低、中和高剂量大黄酸组A549细胞增殖率明显降低（P<0.05）,细胞迁移距离明显减少,侵袭细胞数量明显减少;中和高剂量大黄酸组A549细胞凋亡率明显升高（P<0.05）;高剂量大黄酸组G₁期细胞百分比明显降低（P<0.05）。大黄酸处理48 h后,与对照组比较,中和高剂量大黄酸组A549细胞中Caspase-3、Caspase-9、Cyt-C和AIF蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：大黄酸可抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其作用机制可能与上调Caspase-3、Caspase-9、Cyt-C和AIF蛋白表达有关。     

塞来昔布对人肺腺癌增殖及凋亡的影响

目的探讨选择性环氧合酶-2抑制剂塞来昔布在人肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡中的作用及其机制。方法应用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法分析1、5和10μmol·L-1塞来昔布对A549细胞分别处理0、12、24、48和72 h后的增殖能力,分光光度法检测Caspase-3和Caspase-9活性,用免疫荧光法检测凋亡标志分子Annexin V的表达。结果塞来昔布处理组细胞的增殖能力明显低于未处理对照组细胞,差异有统计学意义（P〈0.05）,且抑制作用呈时间和剂量依赖性;处理组癌细胞Caspase-3、Caspase-9和Annexin V的表达水平显著高于未处理对照组（P〈0.05）。结论塞来昔布可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖并诱导凋亡,可作为肺癌患者靶向性预防和治疗药物。     

白英提取物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响

目的：探讨白英提取物（Solanum lyratum Thunb extract，STE）对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及凋亡相关蛋白Survivin和Caspase-3表达的影响。方法：体外培养sGC-7901细胞，以2．5、5、10mg／LSTE处理sGC-7901细胞48小时，并以2．5mg／L顺铂（DDP）作为阳性对照。用MTT法检测细胞抑制率，TUNEL法检测凋亡率，二步法免疫组化检测Survivin和Caspase-3表达。结果：与正常对照组相比，STE各浓度组细胞抑制率显著上升（P〈0．001），细胞凋亡率明显升高（P〈0．01），Caspase-3蛋白表达显著上升（P〈0．05或P〈0．01），Survivin蛋白表达明显下降（P〈0．05或P〈0．01）。结论：STE具有诱导SGC-7901细胞凋亡的作用，其分子机制可能与上调Caspase-3及下调Survivin蛋白熹主夭有姜．     

蛇床子素通过c-met/PI3K/AKT途径提高顺铂对肺癌细胞的杀伤活性

目的探讨蛇床子素是否能提高顺铂对肺癌细胞的杀伤活性并研究其机制。方法 A549非小细胞肺癌细胞按对照组、蛇床子素组、顺铂组、蛇床子素+顺铂组及蛇床子素+顺铂+c-met质粒组进行分组后,MTT法检测A549细胞活力,Western blot实验检测A549细胞蛋白酪氨酸激酶(cmet)表达水平,磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)磷酸化水平及半胱天冬酶(caspases)活化水平的影响,流式细胞术检测A549细胞的凋亡。结果顺铂+蛇床子素组A549的细胞活力抑制率[(59.8±3.5)%]显著高于顺铂单治疗组[(16.9±1.2)%,P0.05]和蛇床子素+顺铂+c-met质粒组[(21.6±1.5)%,P0.05]。蛇床子素处理可诱导A549细胞c-met蛋白的下调并抑制A549细胞PI3K和AKT的磷酸化。顺铂+蛇床子素组对A549细胞的凋亡诱导率[(29.7±2.1)%]显著高于顺铂组[(7.8±0.9)%,P0.05]和蛇床子素+顺铂+c-met质粒组[(10.1±1.5)%,P0.05]。顺铂+蛇床子素组A549细胞的Caspase-9、Caspase-3活化水平显著高于顺铂组和蛇床子素+顺铂+c-met质粒组。结论蛇床子素通过下调c-met表达提高肺癌细胞对顺铂的敏感性。     

槲皮素与顺铂对人膀胱癌裸鼠移植瘤抑瘤作用的研究

目的 观察槲皮素（Quercetin）与顺铂(Cisplatin, DDP)联用对膀胱癌 BIU-87 细胞的BALB/ c 裸鼠移植瘤生长的抑制作用,检测移植瘤中 Bcl-2, Caspase-3 和 PCNA 的表达水平及肿瘤细胞凋亡指数,探讨其作用机制。方法 建立膀胱癌细胞株BIU-87裸鼠移植瘤模型并随机分成4组：对照组（A组）、顺铂组（B组）、槲皮素组（C组）、槲皮素+ 顺铂组（D组）。治疗间观察移植瘤体积和裸鼠体重的变化,第15天后将移植瘤完整取出,称瘤重,计算抑瘤率,并用免疫组织化学技术检测各组移植瘤组织中Bcl-2, Caspase-3 和 PCNA 的表达,原位凋亡TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数。结果 B 、C、 D各用药组肿瘤的生长受到明显抑制,瘤体质量明显低于A组,其抑瘤率分别为46.10 %、 39.17 %、 64.09 %, 联合用药组抗瘤作用进一步增强。Bcl-2和PCNA的表达在A组高于 B、C、D 组,Caspase-3 表达在A组明显低于 B、 C、 D 组,各用药组与对照组相比差异均有统计学意义( P < 0. 05);肿瘤细胞的凋亡指数在各用药组都比对照组明显提高,差异有统计学意义( P < 0. 05)。结论 槲皮素和顺铂均可明显抑制膀胱癌细胞在小鼠体内的生长作用,两药联合应用的抑瘤效果优于两药单用。其作用机制可能是通过调控肿瘤中 Bcl-2和 Caspase-3 的表达,也可能通过调节 PCNA 的表达,从而抑制细胞增殖和促进细胞凋亡。     

七叶灵方对紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol增殖和凋亡的影响

目的:观察七叶灵方对紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol增殖和凋亡的影响。方法:将10只SD大鼠随机分为中药组和空白组,每组5只。中药组大鼠灌胃给予18 g/kg七叶灵方药液,每日2次,连续给药3 d。空白组大鼠灌胃给予等体积0.9%NaCl溶液。分别制备含药血清和空白血清。采用浓度梯度诱导法构建紫杉醇耐药肺癌细胞株A549/Taxol。①将细胞分为空白组及不同浓度(5%、10%、20%)含药血清组,各组分别给予空白血清和相应浓度含药血清干预。药物干预前及细胞培养24、48 h后,CCK8法检测各组细胞增殖情况,筛选含药血清干预的最佳浓度。②将细胞分为空白组(常规培养基)、含药血清组(筛选的最佳浓度含药血清)、紫杉醇组(2 mg/L紫杉醇)、含药血清+紫杉醇组(最佳浓度含药血清+2 mg/L紫杉醇),各组予以相应干预。干预前及细胞培养24、48 h后,CCK8法检测各组细胞增殖情况。细胞培养48 h后,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、剪切型Caspase-3(cleaved Caspase-3)、聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)、剪切型PARP (cleaved PARP)的蛋白表达。结果:①与干预前相比,各浓度含药血清作用24、48 h后,A549/Taxol细胞的增殖抑制率显著升高(P0.05,P0.01),具有浓度/时间依赖性。选取20%含药血清进行后续实验。②细胞培养48 h后,紫杉醇组的细胞增殖抑制率明显高于含药血清组(P0.05),含药血清+紫杉醇组对耐药细胞的生长抑制作用明显强于紫杉醇组(P0.01);与空白组相比,含药血清组、紫杉醇组及含药血清+紫杉醇组的细胞凋亡率均明显升高(P0.01),且含药血清+紫杉醇组的细胞凋亡率高于紫杉醇组(P0.01)。③与空白组相比,紫杉醇组、含药血清组和含药血清+紫杉醇组细胞Bcl-2、Caspase-3、PARP的蛋白表达量显著降低(P0.01),Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP的蛋白表达量显著上调(P0.01)。与紫杉醇组相比,含药血清+紫杉醇组细胞Bcl-2、Caspase-3、PARP的蛋白表达量明显下降(P0.01),Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP的蛋白表达量显著增加(P0.05,P0.01)。结论:七叶灵方含药血清可抑制紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol的增殖,诱导细胞凋亡,且与紫杉醇联合应用具有一定的协同效应,其机制可能与调控Bcl-2/Caspase-3/PARP通路有关。