木聚糖酶的纯化与性质研究

木聚糖酶是可将木聚糖降解成为低聚木糖和木糖的复合酶系,在饲料、造纸、食品和酿酒等行业中的应用日益广泛。微生物产生的木聚糖降解酶系较为复杂,在进行酶学性质、分子结构、基因克隆等研究中,分离纯化是研究的前提和基础。作者介绍了色谱法、CBM配基结合法、双水相系统等木聚糖酶纯化技术,并对木聚糖酶的分子量与构成、酶的稳定性和底物特异性等酶学性质进行了综述。     

木聚糖热解过程的分子动力学模拟

采用Hyperchem聚合物构建软件和半经验方法建立并优化木聚糖分子结构模型,得到木聚糖分子链的结构参数。基于Amber力场,采用周期性边界条件,在300~1 300 K,模拟研究了聚合度为9的木聚糖链热解过程。结果表明：当温度为550 K时,木聚糖分子链上的木糖苷键发生断裂,同时羟基脱落;当温度升高到650 K时,木聚糖吡喃环上的C—O键发生断裂,之后相应发生C—C键断裂。模拟得到木聚糖链热解的主要断裂基团,并分析了基团碎片可能对应的产物以及木聚糖主要裂解产物2糠醛、乙醇醛、丙酮醇、二氧化碳、一氧化碳的生成机理。     

黄芪药渣中阿拉伯木聚糖提取、分离和结构初步分析

目的从黄芪药渣中分离和纯化阿拉伯木聚糖,对其基本理化性质和结构组成进行分析。方法采用分级提取法,依次除去黄芪药渣中的木质素、果胶和纤维素,获得黄芪药渣中的阿拉伯木聚糖。采用DEAE-纤维素52阴离子交换柱层析和Sephacryl S-400 HR凝胶柱对获得的阿拉伯木聚糖进行分离纯化,得到纯化后的阿拉伯木聚糖。对粗多糖的总糖含量,相对分子质量和单糖组成进行分析,对纯化后的阿拉伯木聚糖采用单糖组成、甲基化、气质联用(GC-MS)和红外光谱(IR)进行化学结构解析。结果从黄芪药渣中经1 mol/L KOH和4 mol/L KOH碱提获得的粗阿拉伯木聚糖均为杂多糖,进一步分离纯化得到了8种水溶性多糖组分。对其中一种阿拉伯木聚糖采用高效液相凝胶色谱法测得其相对分子质量为10.425 k D。结构分析表明,阿拉伯木聚糖是一种β-吡喃型杂多糖,含有鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,其比例为0.67∶53.36∶17.56∶0.20∶0.21∶1,其高度分支化,含有的连接方式为3,4→)-Rhap-(1→,L-Araf-(1→,→4)-L-Arap-(1→,→3,4)-L-Arap-(1→,→2,4)-L-Arap-(1→,D-Xylp-(1→,→2,3,4)-D-Xylp-(1→,→4)-D-Manp-(1→,2,3→)-Glcp-(1→,D-Galp-(1→,和→6)-D-Galp-(1→。结论从黄芪药渣中提取分离得到了9种水溶性多糖组分,并初步确定了1种水溶性杂多糖的结构为阿拉伯木聚糖。     

木聚糖酶高产菌株Pichia pastoris G12摇瓶发酵工艺的优化

目的研究甲醇诱导的Pichia pastoris G12在摇瓶发酵条件下产木聚糖酶的表达规律。方法以木聚糖酶酶活力为评价指标,通过单因素试验和L9(34)正交试验考察确定摇瓶发酵条件下pH、接种时间、甲醇体积分数、诱导时间等因素对酶活力的影响。结果各因素影响程度依次为pH>甲醇体积分数>诱导时间>接种时间,最优表达条件为接种时间21 h,pH为5.5,甲醇诱导体积分数为1.50%,诱导时间为162 h。在此最优条件下培养菌株酶活力可达395.124 U.mL-1。结论该研究为木聚糖酶的工业化生产和应用提供了依据。     

α-甘露糖苷酶研究进展

N-糖基化是机体蛋白质翻译后的一种重要的修饰过程。蛋白质N-糖基化生物过程和相关的许多酶主要定位于胞浆内质网和高尔基体。α-甘露糖苷酶是一种参与糖蛋白合成和代谢的重要蛋白酶，它的功能是修剪N-聚糖中的甘露糖。本文重点介绍α-甘露糖苷酶的分类、在体内参与糖蛋白的成熟和降解过程，以及α-甘露糖苷酶基因突变可导致的相关疾病。     

壳聚糖酶的研究进展

目的 壳聚糖的降解产物壳寡聚糖在医药领域中有着广泛的应用前景,而壳聚糖酶是酶法制备壳寡聚糖的专一性酶.本文综述了壳聚糖酶的研究概况,主要是壳聚糖酶的酶学特性、分离纯化以及分子生物学研究进展,同时展望了其应用前景.     

二乙基亚硝胺诱导大鼠肝细胞癌过程中明胶酶的动态变化

目的观察肝癌形成过程中明胶酶表达(蛋白及mRNA水平)的动态变化,探索明胶酶在肝癌生长浸润中的作用。方法应用免疫组化法、明胶酶谱法和RT-PCR法对大鼠肝癌形成过程中各期明胶酶表达情况进行观察,并与正常对照组进行比较分析。结果正常肝组织及肝硬化组织内明胶酶有表达,肝癌形成后主要在癌细胞内表达;明胶酶原在正常肝组织中有低表达,诱癌过程中呈持续增高趋势;明胶酶-2 mRNA与其酶蛋白表达趋向一致。结论在肝癌形成过程中明胶酶转录和翻译水平均呈持续增高趋势。     

β- D- 葡萄糖苷酶对5种菊花总黄酮的影响

目的 基于菊花传统加工过程中“杀酶保苷”的炮制原理,研究在不同炮制过程中,β- D- 葡萄糖苷酶对不同药用菊花总黄酮的影响。方法 模拟抑制酶、激活酶、杀灭酶的加工炮制原理,分别与不同药用菊花总黄酮进行反应,并以乙腈- 0.2%醋酸水为流动相进行梯度洗脱,通过高效液相色谱法分别对不同炮制后的药用菊花总黄酮进行含量测定。结果 与激活酶组相比,黄酮苷类成分木犀草苷、芹菜素苷、香叶木苷在抑制或灭活酶组所测得含量升高,其相应的次级苷元类成分木犀草素、芹菜素、香叶木素、金合欢素含量降低。结论 5种菊花总黄酮在抑制或灭活酶的条件下有利于黄酮苷的保存。     

阳春砂1-去氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶基因的克隆及表达分析

【目的】克隆阳春砂萜类生物合成途径的上游关键酶——1-去氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶(1-deoxy-D-xylulose-5-phosphate reducto iso merase,DXR)(EC:1.1.1.267)的编码基因;分析基因的功能及其在阳春砂不同组织中的表达。【方法】通过基于逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)的方法从阳春砂叶片中获得编码DXR的cDNA全长序列,克隆基因编码区;用生物信息学的方法对其编码蛋白进行相似性检索和功能分析;用半定量RT-PCR法比较基因在阳春砂不同组织中的表达差异。【结果】获得了全长1749bp的编码阳春砂DXR的cDNA序列,命名为AvDXR1(GenBank登记号:FJ459894)。AvDXR1编码的蛋白与其他植物来源的DXR有很高相似性,含有烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)结合基序和DXR活性位点基序,N-端有叶绿体靶向转运肽。保守功能结构域的分析结果表明AvDXR1属于1-去氧-D-木酮糖-5-磷酸还原酶家族。AvDXR1在包括茎、根、果皮和种子团的广泛组织中表达,且在这些组织中的表达量均高于在叶片中的表达。【结论】AvDXR1基因是阳春砂DXR的编码基因,该基因在阳春砂的叶、茎、根、果皮和种子团中广泛表达。     

前列腺特异性膜抗原、α-甲基酰基辅酶A消旋酶在前列腺癌中的表达及其临床意义

目的 检测前列腺特异性膜抗原、α-甲基酰基辅酶A消旋酶在前列腺癌的表达情况,探讨其在前列腺癌中的意义.方法 采用免疫组化EnVision法观察前列腺特异性膜抗原、α-甲基酰基辅酶A消旋酶的表达特点.结果 (1)前列腺特异性膜抗原在前列腺癌中的表达分别强于良性前列腺增生(P=0.000)和高级别前列腺上皮内瘤变中的表达(P=0.005),前列腺特异性膜抗原的表达与Gleason评分及预后(P＞0.05)均不相关.(2)α-甲基酰基辅酶A消旋酶在良性前列腺增生中的表达明显低于高级别前列腺上皮内瘤变(P=0.000)和前列腺癌(P=0.000)中的表达,且与Gleason评分呈负相关(P=0.005,rs =-0.430);与预后不相关(P＞0.05).结论 前列腺特异性膜抗原、α-甲基酰基辅酶A消旋酶在前列腺癌的发生发展中起一定作用,但不能作为预测预后的指标.     

二乙基亚硝胺诱导大鼠肝细胞癌过程中明胶酶的动态变化

目的：观察肝癌形成过程中明胶酶表达（蛋白及mRNA水平）的动态变化，探索明胶酶在肝癌生长浸润中的作用。方法：应用免疫组化法、明胶酶谱法和RT-PCR法对大鼠肝癌形成过程中各期明胶酶表达情况进行观察，并与正常对照组进行比较分析。结果：正常肝组织及肝硬化组织内明胶酶有表达，肝癌形成后主要在癌细胞内表达；明胶酶原在正常肝组织中有低表达，诱癌过程中呈持续增高趋势；明胶酶-2mRNA与其酶蛋白表达趋向一致。结论：在肝癌形成过程中明胶酶转录和翻译水平均呈持续增高趋势。     

纤维二糖酶在不同pH下的拉曼光谱分析

分析了绿色木霉产的纤维二糖酶在pH 5.0和pH 2.0下的拉曼光谱图.实验结果表明:纤维二糖酶在pH 5.0时具有酶活功能,蛋白主链结构主要为α-螺旋和无规则卷曲,侧链中酪氨酸和色氨酸均为"埋藏式";纤维二糖酶在pH 2.0时无酶活,酶蛋白主链结构主要为α-螺旋,而无规则卷曲发生较大变化,铡链中的酪氨酸和色氨酸均为"暴露式".根据光谱特征分析,该纤维二糖酶中可能不舍二硫键.     

子宫内膜癌中乙酰肝素酶和基质金属蛋白酶-2的表达及意义

目的:探讨乙酰肝素酶和基质金属蛋白酶-2蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及意义。方法:采用免疫组化S-P法检测43例子宫内膜癌组织、31例子宫内膜增生症组织及20例正常子宫内膜组织中乙酰肝素酶和基质金属蛋白酶-2蛋白的表达,并结合各临床病理学参数进行分析。结果:乙酰肝素酶和基质金属蛋白酶-2在正常子宫内膜组织、增生症组织及子宫内膜癌中的表达呈上升趋势,其表达有显著性差异。子宫内膜癌中,乙酰肝素酶和基质金属蛋白酶-2的表达随手术-病理分期的升高、组织学病理分级下降和肌层浸润程度增加而逐渐升高,二者呈正相关。结论:乙酰肝素酶和基质金属蛋白酶-2可能与子宫内膜癌的发生发展有关,有望作为判断子宫内膜癌生物学行为和预后的参考指标。     

磁性壳聚糖纳米介导eNOS基因转染受损平滑肌细胞初探

目的:探讨磁性壳聚糖(后简称磁聚糖)纳米载体对血管平滑肌细胞的毒性及介导内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因对受损血管平滑肌细胞的转染效率、表达及对细胞增生的影响。方法:原位共沉淀法制备磁聚糖并耦合eNOS质粒;MTT法检测磁聚糖对血管平滑肌细胞生长的毒性;分别以重组腺病毒表达载体(AdCMV-eNOS)、磁聚糖-eNOS和磁聚糖空载体在外加磁场下转染受损血管平滑肌细胞,免疫荧光染色及RT-PCR测定eNOS表达,流式细胞术检测转染效率及血管平滑肌细胞周期和凋亡情况。结果:在浓度低于20 mg.ml-1时,磁聚糖对血管平滑肌细胞的生长无明显毒副作用;磁聚糖-eNOS组转染效率[(58.7±3.6)%]较AdCMV-eNOS组[(78.1±2.5)%]低,但两组均检测到eNOS mRNA和蛋白表达,且两组受损血管平滑肌细胞G0/G1期细胞较磁聚糖空载体组明显增多(P<0.01),S/G2-M期细胞减少(P<0.01),3组的细胞凋亡无显著差异(P>0.05)。结论:正常浓度的磁聚糖对血管平滑肌细胞生长无抑制作用,该载体能成功介导eNOS基因的转染,延缓受损后血管平滑肌细胞增生周期。     

胱硫醚-γ-裂解酶在过敏性休克小鼠肺组织中的表达

探讨过敏性休克小鼠肺组织中胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）的表达。方法：取健康昆明种小鼠36只,随机分为过敏性休克模型组和磷酸盐缓冲液（PBS）对照组,每组再分为死亡即时组、冷冻48 h组和冷冻7 d组,每组6只,模型组通过注射卵蛋白（OVA）制作过敏性休克模型,致敏第3周诱发过敏性休克致死或颈椎脱臼处死动物。对照组采用PBS代替OVA,第3周与模型组小鼠一并处死。各组小鼠分别在3个时间点取肺组织,福尔马林固定,制作石蜡切片,并行免疫组织化学染色检查观察CSE在肺组织中的表达情况。结果：模型组各时间点肺组织中见胱硫醚-γ-裂解酶主要表达在肺泡上皮细胞胞浆,对照组肺泡上皮细胞呈弱阳性。结论：过敏性休克小鼠肺组织中有胱硫醚-γ-裂解酶表达,死后冷冻7 d之内,肺组织中胱硫醚-γ-裂解酶表达随着时间的延长呈下降趋势,应用免疫组化染色检查肺组织中胱硫醚-γ-裂解酶的表达可为过敏性休克死亡提供一定的法医病理学诊断依据。     

MDR基因及MDR基因编码产物在咽喉部恶性黑色素瘤中表达及其意义

目的 :研究多药耐药 (mnlti-drugresistance ,MDR)基因胎盘型谷胱甘肽 -S -转移酶 (GST -π)和DNA拓朴酶Ⅱ (TopoⅡ )以及MDR基因编码产物P -糖蛋白 (Pgp)、在咽喉部恶性黑色素瘤中的表达及其意义。方法 :应用链霉素亲生物素 -过氧化物酶标S -P法检测 2 8例咽喉部恶性黑色素瘤中Pgp、GST -π和TopoⅡ的表达 ,分析MDR基因及MDR基因编码产物阳性表达率与肿瘤主要临床病理特征的关系。结果 :2 8例标本中Pgp、GST -π和TopoⅡ的表达率分别为 35 .7%、5 7.1%和 4 6 .4 % ,相互间差异无显著性 (P >0 .0 5 )。Pgp、GST -π和TopoⅡ的表达与性别、年龄、肿瘤大小无明显相关 (P >0 .0 5 ) ,与AJC分级显著相关 (P <0 .0 5 )。结论 :Pgp、GST -π和TopoⅡ等多因素联合作用是咽喉部恶性黑色素瘤多药耐药的主要作用机理 ,其表达在化疗敏感性预测中具有必要性和可行性。     

裂蹄木层孔菌菌丝体培养物中的β-分泌酶抑制剂hispidin

阿尔茨海默病(AD)的主要特征是淀粉样蛋白沉积(淀粉样斑块),淀粉斑块主要成分是β-淀粉肽(Aβ)Aβ的形成与β-分泌酶有直接关系,而α-分泌酶则可防止Aβ的形成。因此,抑制β-分泌酶和诱导α-分泌酶可能是减少脑中Aβ形成的标靶。作者测试了256种植物和真菌提取物,从裂蹄木层孔菌Phelli-nus linteus Teng菌丝体培养液中分离、鉴定     

β-葡萄糖苷酶、IL-6和IL-12在诊断新生儿坏死性小肠结肠炎中的应用价值

目的探讨β-葡萄糖苷酶、IL-6和IL-12在诊断新生儿坏死性小肠结肠炎中的应用价值，以期为疾病的发生、发展及临床治疗工作提供理论支持。方法96例新生儿坏死性小肠结肠炎的血清标本作为观察组，选取60例证实为正常的新生儿血清标本作为对照组，观察不同病变分期患儿血清中β-葡萄糖苷酶、IL-6和IL-12的表达差异。结果观察组血清中β-葡萄糖苷酶、IL-6和IL-12的表达明显高于对照组，观察组血清中β-葡萄糖苷酶、IL-6和IL-12的表达与病变分期相关。观察组中IL-6和IL-12的表达呈正相关。结论新生儿坏死性小肠结肠炎患儿血清中β-葡萄糖苷酶、IL-6和IL-12呈高表达，三者对疾病的进展可能有促进作用。联合检测β-葡萄糖苷酶、IL-6和IL-12对早期判断病变分期可能有一定价值。     

5-α还原酶的表达与前列腺癌生物学行为相关性研究

目的 探讨两型5-α还原酶表达情况与前列腺癌Gleason分级、血清前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)浓度、TNM分期的相关性。方法 选取2013至2014年间首都医科大学附属北京朝阳医院病理科前列腺癌的石蜡包埋组织40例,并收集患者基本信息、前列腺体积,术前PSA浓度,术后病理TNM分期,Gleason分级等。采用χ²检验和Spearman相关分析对2种5-α还原酶表达与病理分期、Gleason分级、PSA浓度及年龄等参数的关系进行分析。 结果 Ⅰ型5-α还原酶在前列腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P <0.001),相反Ⅱ型5-α还原酶在癌旁组织的表达强于癌组织(P=0.002),Ⅰ型5-α还原酶在癌细胞中的表达与肿瘤的恶性程度呈正相关,Gleason分级越高,病理分期越高,Ⅰ型5-α还原酶的表达越强;Ⅰ型5-α还原酶表达和血PSA浓度及年龄呈正相关。结论 5-α还原酶在前列腺癌组织中呈现差异性表达的特点,前列腺癌组织内I型酶升高,II型酶降低;I型酶的表达与年龄、PSA浓度、病理分期及Gleason分级呈正相关,在老年人群前列腺癌的发生发展中可能具有重要的作用,I型酶对判断前列腺癌的生物学行为及预后可能具有一定意义。     

裂蹄木层孔菌菌丝体培养物中的β-分泌酶抑制剂hispidin[英]／Park I-H…∥Planta Med

阿尔茨海默病(AD)的主要特征是淀粉样蛋白沉积(淀粉样斑块)，淀粉斑块主要成分是β-淀粉肽(Ap)。Aβ的形成与β-分泌酶有直接关系，而α-分泌酶则可防止Aβ的形成。因此，抑制β-分泌酶和诱导α-分泌酶可能是减少脑中Aβ形成的标靶。作者测试了256种植物和真菌提取物，从裂蹄木层孔菌Phellinus linteus Teng菌丝体培养液中分离、鉴定了一种小分子β-分泌酶(BACEl)抑制剂hispidin，