烧伤小鼠肝组织糖皮质激素受体的变化及安定-氯胺酮的影响

目的　研究烧伤小鼠 2 4h内肝组织糖皮质激素受体 (GR)时相变化特点 ,初步探讨安定 氯胺酮麻醉对创伤应激的调控作用。方法　将 80只BALB/C小鼠随机分为正常对照组、麻醉对照组、烧伤组、预处理组 (麻醉后 15min烧伤 )及后处理组 (烧伤后 15min麻醉 )。烧伤组给予背部Ⅲ°15 %～ 2 0 %烧伤 ,伤后 2 ,4,6 ,12 ,2 4h取血和肝脏 ;麻醉对照组、预处理组及后处理组均采用安定 氯胺酮麻醉 ,烧伤或麻醉后 4h取血和肝脏。测定血清皮质酮浓度 ,采用Westernblot在蛋白水平测定肝组织GR。结果　烧伤后小鼠血清皮质酮浓度明显升高 ,4h达到高峰 ;肝组织GR明显降低 ,6h降至最低。安定 氯胺酮麻醉明显抑制烧伤应激引起的血清皮质酮和肝组织GR的变化 ,甚至烧伤后麻醉 ,也有同样的作用。结论　烧伤应激引起小鼠血清皮质酮水平明显升高 ,其受体在蛋白水平显著降低。安定 氯胺酮麻醉对其具有抑制作用。     

烧伤后小鼠血清皮质酮及肝组织糖皮质激素受体水平的变化

目的：探讨烧伤小鼠24h内肝组织糖皮质激素受体时相变化特点,方法：将60只BALB／c小鼠随机分为正常对照组和实验组，实验组造成背部Ⅲ度15％－20％烧伤，分别于伤后2，4，6，12，24h测定血清皮质酮浓度，采用Western blotting ,RT-CPR在蛋白和mRNA水平测定肝组织糖皮质激素受体。结果：烧伤小鼠血清皮质酮浓度4h达到高峰，24h仍未恢复正常；肝组织糖皮质激素受体在蛋白质水平明显降低4－6h降至最低，而mRNA水平仅仅在伤后2h有短暂降低，结论：烧伤应激引起小鼠血清皮质酮水平明显升高，其受体在蛋白及mRNA水平均可降低，但蛋白降低不主要发生在mRNA水平。     

安定-氯胺酮麻醉对烧伤小鼠早期三种炎性细胞因子影响

目的研究安定-氯胺酮麻醉对烧伤小鼠早期炎性细胞因子的影响,初步探讨其对创伤应激早期炎症反应的调节作用.方法雄性BALB/c小鼠,随机分为正常对照组、烧伤对照组、麻醉对照组、预处理组(麻醉后15 min烧伤)及后处理组(烧伤后15 min麻醉).麻醉采用安定-氯胺酮麻醉,背部15%～20% Ⅲ度烧伤.烧伤后4 h测定血清TNF-α、IL-1β、IL-10浓度.结果烧伤后血清TNF-α、IL-1β、IL-10水平均比正常对照组显著增高;预处理组与后处理组血清TNF-α、IL-1β、IL-10的浓度明显低于烧伤对照组;预处理组除IL-10明显高于正常对照组以外,其余均与正常对照组相差不明显,而后处理组只有TNF-α水平与正常对照组相差不显著,其余都显著高于正常对照组;血清中IL-1β后处理组明显高于预处理组,而TNF-α、IL-10的水平两组相差不显著.结论安定-氯胺酮麻醉对严重创伤后炎性细胞因子的表达和释放有一定抑制作用,甚至在严重创伤后使用也有部分作用.     

复方红景天制剂对高 Gz应激大鼠血清皮质酮及心肌组织糖皮质激素受体的影响

【摘要】目的 研究复方红景天制剂对高 Gz应激大鼠血清皮质酮及心肌组织糖皮质激素受体的影响。方法 72只雄性SD大鼠随机分为6组,分别为空白对照组、应激对照组、 10Gz应激组、复方红景天制剂低剂量组、复方红景天制剂中剂量组和复方红景天制剂高剂量组,每组12只。各组均灌胃给药14 d,第15 天进行 10Gz离心机暴露,ELISA方法测定各组动物血清皮质酮浓度,免疫印迹法分析各组动物心肌组织糖皮质激素受体表达变化。 结果 与正常对照组和应激对照组相比, 10Gz应激组大鼠血清皮质酮浓度明显升高,而心肌组织糖皮质激素受体表达水平明显降低（P<0.01, P<0.05）。复方红景天制剂预处理可以降低 10Gz应激大鼠血清皮质酮浓度,上调心肌组织糖皮质激素受体表达水平,复方红景天制剂中、高剂量组大鼠血清皮质酮浓度明显低于 10Gz应激组（P<0.05）, 心肌组织糖皮质激素受体表达水平明显高于 10Gz应激组（P<0.01）。结论 复方红景天制剂可以调节 Gz应激大鼠血清糖皮质激素浓度及其心肌受体表达水平,可能与该制剂对持续正加速度致心肌损伤的防护作用有关。     

复方红景天制剂对高正加速度应激大鼠血清皮质酮及心肌组织糖皮质激素受体的影响

目的研究复方红景天制剂对高正加速度(positive acceleration,+Gz)应激大鼠血清皮质酮及心肌组织糖皮质激素受体的影响。方法 72只雄性SD大鼠随机分为6组,分别为空白对照组、应激对照组、+10Gz应激组以及药物低、中、高剂量组,每组12只。各组均灌胃给药14 d,低、中、高剂量组大鼠每天分别按0.75g/kg、1.5 g/kg和3.0 g/kg给予复方红景天中药制剂,其余3组动物给等量的生理盐水。第15天进行+10 Gz离心机暴露,ELISA方法测定各组动物血清皮质酮浓度,免疫印迹法分析各组动物心肌组织糖皮质激素受体表达变化。结果与空白对照组和应激对照组相比,+10 Gz应激组大鼠血清皮质酮浓度明显升高,而心肌组织糖皮质激素受体表达水平明显降低(P0.01,P0.05)。复方红景天制剂预处理可以降低+10 Gz应激大鼠血清皮质酮浓度,上调心肌组织糖皮质激素受体表达水平,药物中、高剂量组大鼠血清皮质酮浓度明显低于+10 Gz应激组(P0.05),而心肌组织糖皮质激素受体表达水平明显高于+10 Gz应激组(P0.01)。结论复方红景天制剂可以调节+Gz应激大鼠血清糖皮质激素浓度及其心肌受体表达水平,可能与该制剂对持续正加速度致心肌损伤的防护作用有关。     

安定-氯胺酮麻醉对严重烧伤小鼠肺组织糖皮质激素受体表达的影响

目的 观察严重烧伤早期小鼠肺组织糖皮质激素受体(GR)表达的变化,并探讨安定-氯胺酮麻醉对其表达变化的影响.方法 70只成年健康昆明小鼠,随机分为健康对照组、烧伤组、烧伤后麻醉组,20%～30%体表总面积Ⅲ度烧伤作为烧伤模型,烧伤后麻醉组在小鼠严重烧伤后立即肌肉注射安定0.4mg/kg、氯胺酮10mg/kg进行麻醉.应用Western blot技术检测各组小鼠肺组织GR蛋白表达水平.结果 在严重烧伤后30min,小鼠肺组织中GR蛋白表达水平就已经开始降低,12h后逐渐恢复至正常水平.而烧伤后应用安定-氯胺酮麻醉,小鼠肺组织GR蛋白表达水平均无明显变化.结论 严重烧伤可引起小鼠肺组织GR表达水平的早期下降,而严重烧伤后应用安定-氯胺酮麻醉能显著抑制GR表达水平下调,结果提示安定-氯胺酮麻醉可能部分改善严重烧伤诱发的应激状态,这可能与抑制GR表达水平下调有关.     

严重烧伤早期小鼠腹腔巨噬细胞糖皮质激素受体变化及安定-氯胺酮对其影响

目的观察严重创伤早期小鼠腹腔巨噬细胞糖皮质激素受体(GR)蛋白表达的变化,并探讨安定-氯胺酮对其变化的影响,为安定-氯胺酮在创伤应激中的作用提供可靠实验依据.方法 95只成年健康昆明小鼠,随机分为正常对照组、烧伤组、安定-氯胺酮处理组、烧伤后安定-氯胺酮处理组,应用Western blot技术检测各组小鼠处理后早期24h内不同时期腹腔巨噬细胞GR的蛋白表达水平.结果小鼠严重烧伤后30min,腹腔巨噬细胞中GR的表达就已经开始降低,在6h达到最低,显著低于正常对照组,12h时逐渐回升,但在24h时仍低于正常.而安定-氯胺酮组GR的表达水平无显著差异,在严重烧伤后应用安定-氯胺酮能明显地抑制GR蛋白表达水平的降低,烧伤后安定-氯胺酮处理组各时相点与正常对照组相比无显著差异.结论严重烧伤可引起小鼠腹腔巨噬细胞GR表达水平的下降,而单纯应用安定-氯胺酮对小鼠腹腔巨噬细胞GR的表达水平无明显影响,在严重烧伤后应用安定-氯胺酮能显著抑制GR水平的下调,故安定-氯胺酮可能部分改善小鼠严重烧伤诱发的应激状态.     

安定-氯胺酮对严重烧伤小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达的影响

目的 观察严重烧伤早期小鼠腹腔巨噬细胞c-Jun激活区结合蛋白1(JAB1)蛋白表达变化,探讨安定-氯胺酮对其表达变化的影响.方法 将成年健康雄性昆明小鼠随机分为4组,即对照组、严重烧伤组、安定-氯胺酮组和严重烧伤后安定-氯胺酮处理组,以20%～30%体表总面积(TBSA)Ⅲ度烧伤作为严重烧伤模型,肌肉注射安定0.4mg/kg、氯胺酮10mg/kg给予麻醉.收集腹腔巨噬细胞提取总蛋白,运用Western blotting方法检测各组小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达水平的变化.结果 在严重烧伤后30min,小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达水平与对照组相比明显降低(P<0.05),于6h时达到最低(P<0.01),严重烧伤后12h逐渐恢复至正常水平.然而,严重烧伤后应用安定-氯胺酮麻醉,小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达水平在各时相点变化差异无统计学意义.结论 严重烧伤可引起小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达水平的早期下降,而严重烧伤后应用安定-氯胺酮麻醉能显著抑制JAB1蛋白表达水平下调.     

烧伤后小鼠皮质类固醇结合球蛋白水平变化

【目的】探讨烧伤后小鼠血清皮质醇及肝组织皮质醇结合球蛋白(corticosterone binding globulin,CBG)的时相变化特点。【方法】将40只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组和实验组,实验组造成Ⅲ度烧伤,烧伤面积15%~20%。分别于伤后12、24、48 h测定血清总皮质醇、游离皮质醇浓度,采用免疫印迹、逆转录PCR在蛋白质和m RNA水平测定肝组织CBG水平。【结果】烧伤后小鼠血清总皮质醇浓度升高,12 h升至顶峰,为(95.52±6.73)mmol/L,48 h恢复正常,为(50.99±9.52)mmol/L;同时肝组织CBG m RNA和CBG水平下降,使血清游离皮质醇浓度升高,烧伤后24 h升至顶峰,为(25.6±5.01)mmol/L,48 h时仍未恢复正常,为(16.06±6.56)mmol/L。【结论】烧伤应激引起小鼠血清皮质醇水平明显升高,CBG水平下降对血清皮质醇起正相调节作用。     

小鼠严重颅脑撞击伤早期咪唑安定-氯胺酮对肝脏GR与海马NR1变化的影响

目的 研究小鼠闭合性严重颅脑损伤(TBI)后肝脏糖皮质激素受体(GR)、海马N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NR)蛋白功能亚单位1(NR1)蛋白水平变化及其与血清TNF-α、IL-1β变化的关系,以及应用咪唑安定-氯胺酮干预后的变化.方法 利用BIM-Ⅲ型小型多功能动物撞击机对小鼠清醒致伤后将其随机分为5组,即假致伤组(J组)、致伤对照组(N组)、致伤后氯胺酮治疗组(K组)、致伤后咪唑安定治疗组(M组)、致伤后复合用药治疗组(F组).于致伤后30 min及2、8、24、48、72 h采用Western blot免疫印迹法检测大脑皮质和肝脏GR蛋白水平变化,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组外周血清中TNF-α、IL-1β含量.结果 肝脏GR蛋白表达在致伤2 h开始降低,8 h呈现恢复趋势,72 h仍未完全正常;海马NR1蛋白表达在致伤后2 h开始明显降低,24 h基本恢复,72 h明显增加;应用咪唑安定-氯胺酮干预后可明显降低GR、NR1蛋白表达的这种变化趋势;外周血中TNF-α、IL-1β含量致伤后明显升高,均具有两个峰值特征,应用咪唑安定-氯胺酮干预后可明显降低二者的升高.结论 严重TBI后存在糖皮质激素抵抗,NR激活可能是其中一个重要原因.咪唑安定、氯胺酮能明显抑制HPA轴的兴奋性,改善糖皮质激素抵抗,调控应激反应.其作用机制除直接抑制炎性细胞因子释放外,还可能有中枢性的作用机制,其中之一可能与调节NR1蛋白表达有关.     

补肾益气方对老年大鼠内源性皮质酮分泌及IL-2基因表达的影响

目的:观察补肾益气方对自然衰老大鼠皮质酮及IL-2基因表达的影响。方法:将20月龄老年大鼠随机分为对照组与补肾组,各10只。另设3月龄青年组。其中老年补肾组自分组日起以饮料方式饲喂补肾益气方药液,连续3个月,其余两组予正常饮水和饲料。于干预3月结束时,取腹主动脉血和脾脏。采用ELISA法检测大鼠血清IL-2含量;EIA法检测大鼠血清皮质酮含量;qRT-PCR法检测大鼠脾淋巴细胞中IL-2、糖皮质激素受体(GR)mRNA的表达;Western blotting法检测大鼠脾淋巴细胞GR蛋白表达。结果:与青年组相比,老年对照组大鼠血清皮质酮含量明显升高(P0.05),血清IL-2含量明显降低(P0.05),脾淋巴细胞IL-2 mRNA、GR mRNA和蛋白表达明显下降(P0.05);与老年对照组比较,老年补肾组血清IL-2水平明显升高(P0.05),GR mRNA和蛋白表达明显升高(P0.05)。结论:补肾益气方可通过调节老年大鼠异常的皮质酮/糖皮质激素受体通路,改善IL-2基因表达的增龄性衰退。     

地西泮和莫达非尼对小鼠试验性急性肝衰竭的影响

目的：研究地西泮、莫达非尼对小鼠试验性急性肝衰竭的影响。方法：雄性昆明小鼠240只,给予D-半乳糖胺(D-GalN)和脂多糖（LPS）同时腹腔注射,制备小鼠急性肝衰竭模型;并于造模前2h,治疗组分别给予相应药物灌胃,对照组给予蒸馏水灌胃。比较各组小鼠的24h存活率,血清转氨酶水平,肝脏组织病理学改变,血清TNF-α,IL-1的水平,肝脏组织中SOD,MDA ,GR,１GSH,NO,NOS的水平。结果：地西泮可以提高小鼠存活率,减轻肝脏病变程度,降低血清转氨酶活性及TNF-α,IL-1的浓度,增加肝脏组织中SOD,GR的活性,降低NOS的活性及MDA,NO的浓度。莫达非尼可加重肝脏病变程度,升高血清转氨酶的活性及 TNF-α,IL-1的浓度,降低肝脏组织中SOD,GR的活性及升高MDA的浓度。结论 ：地西泮可减轻D-GalN/LPS所致的急性肝衰竭,提高小鼠的存活率,莫达非尼可加重小鼠的肝损伤。     

GR和HSP70在大鼠严重多发伤后肝组织中的变化及其意义

目的 从组织细胞受体水平探讨糖皮质激素受体（GR），热休克蛋白70（HSP70）在严重多发伤后肝脏中的变化及其作用。方法 采用严重胸部撞击伤伴单侧股骨肌折模型，肝组织GR采用放射配体结合分析法测定最大结合容量，免疫印迹法测定其蛋白含量，HSP70采用免疫印变法测定其蛋白含量，并进行计算机图像分析。结果 严重多发伤后肝组织GR的最大结合容量及蛋白含量均显著下降，12h降至最低，24h有所恢复；，HSP70在伤后迅速增加，8h达到峰值，24h仍持续在较高水平。但肝脏病理无明显改变；血清生化指标ALT，TB的改变呈逐渐增高的趋势，但无显著意义。结论 GR在严重多发伤后肝组织细胞的抗损伤机制方面可能起着重要作用，HSP70可能参与了肝组织细胞抗损伤机制的启动。     

颈交感神经阻滞对烧伤早期小鼠肝脏干扰素诱导蛋白IFIT1表达的影响

目的检测干扰素诱导蛋白IFIT1(interferon-induced protein with tetratricopetide repeats1)在小鼠各器官组织的表达状况,并在此基础上探讨颈交感神经阻滞(SB)对烧伤后早期小鼠肝脏IFIT1表达的影响。方法雄性C57/129小鼠50只,分为对照组和SB治疗组,TBSA15%～20%Ⅲ度小鼠烧伤模型,分别于烧伤前、烧伤后1、6、12h和24h取肝组织,采用免疫印迹法(Western blot)观察IFIT1的蛋白表达情况,同时提取正常小鼠心、肝、脾、肺、肾、小肠、淋巴细胞和骨骼肌组织RNA,以RT-PCR检测IFIT1表达情况。结果RT-PCR结果显示IFIT1在正常小鼠各组织均有表达,但组织间的表达量存在差异。Western blot结果表明对照组烧伤后肝组织IFIT1表达显著增高(P<0.01),烧伤后SB治疗组IFIT1表达量较对照组相应时相点降低非常显著(P<0.01)。结论IFIT1在小鼠体内广泛表达。SB对严重创伤的治疗作用可能是通过抑制肝内IFIT1表达来实现的。     

颈交感神经阻滞对放烧复合伤小鼠HPA轴的调节及相关机制研究

目的 探讨颈交感神经阻滞(SB)对放烧复合伤小鼠HPA轴的调节及可能机制.方法 TBSA15%Ⅲ度烧伤合并5 Gy放射损伤小鼠分为:对照组、放烧复合伤组及伤后SB治疗组,比较各组血清糖皮质激素(GC)及ACTH浓度的差异;同时利用膜片钳技术检测各组间海马NMDA受体通道特性的变化.另外,将腹腔注射足量NMDA受体阻断剂MK-801的小鼠分为:放烧复合伤组、伤后SB治疗组,比较两组血清GC及ACTH浓度的差异.结果 放烧复合伤后血GC及ACTH水平显著升高,SB治疗组血GC和ACTH水平显著底于放烧复合伤组.SB组海马NMDA受体通道开放概率、开放时间常数τ1、τ2虽然高于对照组,但显著低于放烧复合伤组.足量MK-801预处理的放烧复合伤组与SB组之间的血清GC和ACTH水平无显著差异.结论 SB通过降低NMDA受体的活性,抑制了严重创伤(放烧复合伤)小鼠HPA轴的亢进.     

Impact of psychosocial stress on airway inflammation and its mechanism in a murine model of allergic asthma

Background  It has already been recognized that psychosocial stress evokes asthma exacerbation; however, the mechanism of how stress gets inside the body is not clear. This study aimed to observe the impact of psychosocial stress on airway inflammation and its mechanism in the ovalbumin-induced asthmatic mice combined with social disruption stress.

Methods  Thirty-six male BALB/c mice were randomly divided into: control group, asthma group (ovalbumin-induced), asthma plus social disruption stress group (SDR), and SDR group. The open field video tracking system was used to assess animal behaviors. The invasive pulmonary resistance (RL) and dynamic lung compliance (cdyn) test system from Buxco was applied to detect pulmonary function. The enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was utilized to determine OVA-IgE, T-helper type 2 (Th2) cytokines (IL-4, IL-5, IL-13) and corticosterone in mouse serum, the Th2 cytokines (IL-4, IL-5, IL-13, IL-6, TNF-α) in bronchoalveolar lavage fluid (BALF), and IL-6 and TNF-α levels in the supernatant of splenocytes cultured in vitro. Hematoxylin-eosin (H&E) staining was used to assess airway inflammation in lung histology. The cell count kit-8 assay (CCK-8) was applied to evaluate the inhibitory effect of corticosterone on splenocyte proliferation induced by lipopolysaccharide (LPS). Real time-PCR and Western blotting were utilized to determine glucocorticoid receptor (GR) mRNA and GR protein expression in lungs.

Results  The open field test showed that combined allergen exposure and repeated stress significantly shortened the time the mice spent in the center of the open field (P <0.01), increased ambulatory activity (P <0.01) and the count of fecal boli (P <0.01), but deceased vertical activity (P <0.01). Results from pulmonary function demonstrated that airway hyperresponsiveness (AHR) was enhanced by psychosocial stress compared with allergy exposure alone. The ELISA results showed that cytokines in serum and BALF were significantly increased (P <0.05). Moreover, the lung histology showed that infiltrated inflammatory cells were significantly increased in the asthma-SDR group compared with the asthma group (P <0.05). Interestingly, serum corticosterone was remarkably raised by psychosocial stress (P <0.05). In addition, the inhibitory effect of corticosterone on IL-6 and TNF-α in LPS-stimulated splenocyte cultures in vitro was diminished in the asthma-SDR group compared to the asthma group. The CCK-8 test revealed that the inhibition effect of corticosterone on splenocyte proliferation induced by LPS was significantly impaired in the SDR and asthma-SDR groups, while no significant effect was observed in the control and asthma groups. Furthermore, expression of GR mRNA and GR protein were significantly reduced in the lung tissues of the asthma-SDR group (P <0.05).

Conclusions  Social disruption stress can promote anxiety behavior, activate the hypothalamic-pituitary-adrenal (HPA) axis, increase AHR and inflammation, and also impair glucocorticoid sensitivity and its function in a murine model of asthma. The down-regulation of GR expression induced by social disruption stress is in part associated with glucocorticoid insensitivity, which leads to asthma exacerbation.

     

硫喷妥钠、氯胺酮与安定在实验兔麻醉中的应用

目的　探讨硫喷妥钠、氯胺酮与安定复合麻醉在兔实验外科手术中的应用效果。方法　对 1 1 6只外科手术实验用新西兰大白兔经耳缘静脉缓慢推注硫喷妥钠 (2 5 % ,0 6ml kg)行诱导麻醉 ,实验手术前按 1ml kg腹腔注射氯胺酮和安定混合液 1ml kg(氯胺酮 1 2 5 % ,安定 0 1 2 5 % )。术中发现动物有苏醒躁动征象 ,可通过腹腔注射追加氯安合剂 (1ml kg)及硫喷妥钠溶液 (0 5ml kg)。结果　动物无一例死亡。三种药物合用每次可产生麻醉时间为 30～ 4 5min ,可根据手术需要决定追加药物次数。该麻醉能满足手术要求。结论　采用静脉诱导 腹腔注射可安全快速地获得麻醉效果 ,适用于连续多个动物手术。硫喷妥钠、氯胺酮联合使用 ,麻醉时效同步 ,便于控制麻醉时间。以上方案产生麻醉效果确实 ,过程安全 ,可满足常见兔实验 ,如四肢、脊柱和颅脑手术需要