MNNG诱导小鼠胸腺细胞DNA损伤修复模型的建立

目的本实验研究了诱导小鼠胸腺细胞DNA损伤的适宜MNNG浓度以及损伤后DNA修复的时间范围。方法用终浓度为5、10、50、100、500、1 000μmol/L的亚硝基胍(N-methyl-N-’nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)分别处理小鼠胸腺细胞0.5 h,然后用RPMI-1640培养基培养,分别于0 h0、.5 h2、h、4 h8、h检测细胞存活情况和细胞DNA损伤修复情况。结果随着MNNG浓度的增大,细胞死亡率、DNA拖尾率以及彗星尾长都显著升高,其中100、5001、000μmol/L MNNG处理细胞后,细胞数量少,拖尾非常严重,无法测量。不同MNNG浓度之间的DNA损伤和修复程度差异显著(P<0.01),呈现明显的剂量反应关系。DNA拖尾率在0.5 h或2 h达到高峰,彗星尾长在2 h最大,在2~8 h内,拖尾率和彗星尾长都显著降低(P<0.01),接近对照。结论采用5μmol/L或10μmol/LMNNG处理小鼠胸腺细胞0.5 h可以诱导细胞DNA损伤,损伤后的DNA可以在2~8 h内基本修复。     

氯化汞对离体小鼠骨髓细胞和睾丸生殖细胞DNA的损伤作用

目的:探讨氯化汞对小鼠骨髓细胞和生殖细胞DNA的损伤作用.方法:利用彗星试验(SCGE)技术检测0.01、0.1、1.0mmol/L氯化汞对离体小鼠骨髓细胞和睾丸细胞的DNA损伤.结果:0.01 mmol/L、0.1mmol/L、1.0 mmol/L氯化汞处理组骨髓细胞DNA损伤率分别为12.8%、57.2%和100%,与阴性对照组(5.5%)相比差异有显著性(P＜0.01);睾丸细胞DNA损伤率分别为26.7%、45.5%和98.0%;这与阴性对照组(6.0%)相比差异有显著性(P＜0.01).其相应的彗星细胞DNA迁移长度分别为:骨髓细胞(20.38±2.98)、(51.72±5.15)、(92.91±3.28);睾丸细胞(19.29±1.63)、(27.77±3.01)、(66.31±3.11);分别与阴性对照组[(12.32±0.61),(15.15±1.35)]相比差异有显著(P＜0.01).结论:氯化汞可引起DNA链损伤,且损伤随着氯化汞剂量增加而加重.     

脾肾双补法对衰老小鼠胸腺细胞DNA氧化损伤修复的影响

目的观察脾肾双补法对衰老小鼠胸腺细胞DNA氧化损伤修复的影响。方法小鼠随机分为6组,每组10只。分别为正常组、模型组、维生素E组、脾肾双补方治疗高剂量组、脾肾双补方中剂量组,脾肾双补方低剂量组,采用单细胞凝胶电泳法检测胸腺细胞DNA氧化损伤修复的情况。结果实验表明:正常组胸腺细胞虽有很短尾长,但并未表现为彗星样拖尾,提示正常组胸腺细胞DNA氧化损伤较少。中、高剂量组和西药对照组的胸腺细胞尾长与模型组比较均有显著性差异,且中药高剂量组作用强于维生素E组。结论脾肾双补法可以减少衰老模型小鼠胸腺细胞彗星拖尾长度,对DNA氧化损伤具有一定的拮抗或修复作用,并存在一定的量效关系,说明脾肾双补法延缓模型小鼠衰老的作用可能与其对DNA氧化损伤的拮抗或修复作用有关。     

脾肾双补法对衰老小鼠胸腺细胞DNA氧化损伤修复的影响

目的观察脾肾双补法对衰老小鼠胸腺细胞DNA氧化损伤修复的影响。方法小鼠随机分为6组,每组10只。分别为正常组、模型组、维生素E组、脾肾双补方治疗高剂量组、脾肾双补方中剂量组,脾肾双补方低剂量组,采用单细胞凝胶电泳法检测胸腺细胞DNA氧化损伤修复的情况。结果实验表明：正常组胸腺细胞虽有很短尾长,但并未表现为彗星样拖尾,提示正常组胸腺细胞DNA氧化损伤较少。中、高剂量组和西药对照组的胸腺细胞尾长与模型组比较均有显著性差异,且中药高剂量组作用强于维生素E组。结论脾肾双补法可以减少衰老模型小鼠胸腺细胞彗星拖尾长度,对DNA氧化损伤具有一定的拮抗或修复作用,并存在一定的量效关系,说明脾肾双补法延缓模型小鼠衰老的作用可能与其对DNA氧化损伤的拮抗或修复作用有关。     

单细胞凝胶电泳法检测双酚A对小鼠睾丸细胞DNA损伤

目的 采用单细胞凝胶电泳法研究双酚A对小鼠睾丸细胞DNA的影响.方法 制备小鼠生殖细胞悬液,用不同浓度的双酚A染毒1 h后,应用单细胞凝胶电泳法检测睾丸细胞DNA损伤情况.结果 与对照组比较,除10-10 mol/L组外,其他各染毒组拖尾率均明显高于对照组(P＜0.05).随着双酚A染毒浓度的增加,小鼠睾丸细胞DNA损伤程度也逐渐增加(P＜0.05),在10-5 mol/L和10-6 mol/L组均出现了Ⅳ级损伤.结论 双酚A体外染毒可造成小鼠睾丸细胞DNA损伤,且随着剂量的增加有加重的趋势.     

单细胞凝胶电泳技术检测小鼠骨髓细胞DNA损伤

目的:探索并优化单细胞凝胶电泳技术并评价其在环境有害物致骨髓细胞DNA损伤检测中的应用价值.方法:离体小鼠骨髓细胞分别用0.1 mmol/L、1.0mmol/L、10.0mmol/L氯化镉37℃处理1 h后,制成凝胶,用pH10.0的冷裂解液裂解1 h,稳压25V、电流80 mA电泳1 h,中性化后用荧光染料染色,在波长为450～490nm的荧光显微镜下观察并统计100个细胞,计算彗星细胞的百分率.结果:氯化镉处理的离体小鼠骨髓细胞的彗星细胞率明显高于对照组(P＜0.001).结论:本方法在原有单细胞电泳技术的基础上加以优化,可以灵敏地检测出骨髓细胞的DNA损伤,可广泛用于环境等对骨髓细胞DNA损伤的研究.     

溴虫腈对小鼠三种脏器细胞DNA损伤程度的比较

目的 探讨溴虫腈对小鼠脾、肝、肾细胞DNA是否具有损伤作用及其损伤程度的差异。方法溴虫腈按4.9、9.8、19.6mg/kg三个剂量,一次性灌胃染毒小鼠,24 h后用彗星试验检测3种细胞的拖尾率和DNA迁移距离。结果 与阴性对照组比较,各剂量组的拖尾细胞率和DNA迁移距离都显著增加(P<0.05～0.001);脾、肝、肾细胞的拖尾率以及肝、肾细胞的DNA迁移距离均具有剂量效应关系(r值依次为0.995、0.9987、0.988和0.9999、0.9896,P<0.05);在相同剂量标准下,除9.8和196 mg/kg剂量组的肝、脾细胞DNA迁移距离之间没有显著性差异以外(P>0.05),其它各组的拖尾率之间及DNA迁移距离之间均有显著性差异(P<0.05～0.01),依次为脾<肝<肾。结论 溴虫腈能致小鼠脾、肝、肾细胞DNA的损伤,且损伤程度依次加重。     

bcr/abl融合蛋白对细胞DNA损伤修复功能的影响

目的:建立稳定表达bcr/ablP210融合蛋白的小鼠转化细胞株BaF3-P210的DNA损伤模型,探讨bcr/abl融合蛋白对细胞DNA损伤修复功能的影响.方法:彗星实验检测不同浓度H2O2诱导的BaF3-P210细胞的DNA损伤建立DNA损伤模型,以空载体转染BaF3-MIGR1细胞为对照;用彗星实验对两组细胞在DNA损伤后的修复进行不同时间段的动态观测.结果:彗星实验确定了细胞DNA损伤模型的建立条件是:采用50 μmol/L终浓度的H2O2对BaF3-MIGR1细胞和BaF3-P210细胞进行染毒,H2O2作用温度和时间均为4℃,10 min.BaF3-P210细胞与BaF3-MIGR1细胞相比DNA损伤后修复时间缩短,在损伤后60 min即可达到完全修复,而后者在损伤后120 min才能完全修复(P＜0.05).结论:建立了表达bcr/ablP210融合蛋白的小鼠转化细胞株BaF3-P210细胞的DNA损伤模型,并发现bcr/abl融合蛋白可增强BaF3-P210细胞的DNA损伤后修复能力.     

单细胞凝胶电泳评价顺铂致人卵巢癌细胞DNA损伤修复的实验研究

目的：采用单细胞凝胶电泳(彗星实验)研究顺铂致人类卵巢癌H08910细胞DNA的损伤及修复，为彗星实验应用于临床检测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性奠定基础。方法细胞采用0．02 EC50、0．03 ECS0及O．05 EC50三种浓度顺铂处理1h，更换培养基后，继续培养3h、24h和48h进行彗星电泳实验。结果：顺铂处理后造成H08910细胞产生明显的DNA损伤，呈现不同彗尾长度的彗星。顺铂浓度增加，平均彗尾长度增加；一定顺铂浓度下，彗尾长度随培养时间的延长逐渐减小，较低浓度(0．02 EC50)处理的细胞在培养48h后彗尾长度可恢复至接近对照组的水平；在顺铂处理0．02 EC50浓度下随培养时间延长，彗星出现比率逐渐下降，而0．05 EC50浓度处理的细胞彗星比率则呈上升趋势。结论彗星实验检测DNA损伤及修复的敏感度较高，H08910细胞可修复一定浓度的顺铂引起的DNA损伤。     

外源性BDE-209对小鼠精子DNA的损伤

目的采用碱性单细胞凝胶电泳技术检测BDE-209染毒小鼠精子DNA的损伤,探讨BDE-209影响受精卵发育的可能机制。方法附睾尾取精法体外获得昆明小鼠精子,分别置于HTF培养基中。按照培养基中BDE-209终浓度的不同将实验分为5组:A组:0μg/ml;B组:2.5μg/ml;C组:5μg/ml;D组:10μg/ml;E组:20μg/ml。精子培养后,做单细胞凝胶电泳,再用彗星分析软件对细胞进行分析(SCGE),比较各组精子损伤的差异。结果在SCGE试验图片中,A组平均尾长为(1.15±1.27)μm。随着BDE-209浓度的增加,D组和E组,可见到部分细胞拖尾,平均尾长分别为(2.13±1.29)μm和(2.83.±2.46)μm,明显长于A组(P<0.01)。细胞尾部DNA的含量比也明显增加(P<0.01)。D组及E组的Olive尾矩、尾长/头长比A组长(P<0.01),C组的尾长/头长比A组大(P<0.05)。小鼠精子DNA损伤中各指标变化与BDE-209浓度的相关系数均大于0.9。结论外源性的BDE-209可造成小鼠精子DNA的损伤,导致小鼠精子DNA链的断裂。外源性BDE-209对小鼠精子DNA的损伤作用呈明显的剂量-效应关系。     

丝状真菌DNA抽提方法的比较

目的寻找一种针对产孢少的丝状真菌简单、有效的DNA抽提方法。方法以红色毛癣菌和须癣毛癣菌为代表菌株,分别用改良后的氯化苄法及小量酵母DNA试剂盒(裂解酶 蛋白酶K)法抽提基因组DNA,并对所抽提DNA的质量及稳定性进行比较研究。结果氯化苄法抽提的皮肤癣菌DNA片段均>21 kb,每克菌丝体的DNA产量均>25μg。小量酵母基因组DNA试剂盒法抽提DNA,初步估测1．0×109／mL孢子菌丝混悬液的DNA得率仅约为0．6μg。采用氯化苄法抽提保存3年的皮肤癣菌基因组DNA仍能很好地适用于聚合酶链反应(PCR)扩增。结论采用氯化苄法抽提丝状真菌的DNA得率和纯度均较高,而且稳定性好,推荐用于产孢少、生长缓慢的丝状真菌DNA的抽提研究。     

一种改进的显微注射用DNA片段的纯化方法

目的显微注射用DNA的纯度是影响转基因动物制备成功与否的重要因素,本文建立一种可行的适用于普通实验室的纯化DNA方法,替代普遍使用的试剂盒纯化方法。方法分别使用酚-氯仿多次抽提法及常规的凝胶提取试剂盒纯化含有蚓激酶基因的DNA片段,通过显微注射技术将纯化的DNA片段导入小鼠受精卵的原核,制备转基因小鼠。根据转基因实验的结果对两种方法进行比较。结果使用两种方法纯化DNA均能获得转基因小鼠。在DNA纯度及注射卵的存活率上,两种方法无明显差别;在移植卵的出生率及转基因阳性率上,抽提法优于试剂盒法。结论本实验建立的抽提方法可以替代试剂盒方法纯化显微注射用DNA片段,在降低实验成本、简化实验条件及提高转基因阳性率方面具有优势。     

一种迅捷、经济及高效回收DNA片段方法的建立

目的:建立一种迅捷、经济、高效的从凝胶中回收DNA的方法。方法:以二氯二甲基硅烷硅化晴纶纱,以硅化的晴纶纱作为过滤垫层,冻融处理凝胶,离心收集液体,计算不同硅化晴纶纱厚度、不同冻融时间、不同离心力、不同离心时间和不同DN片段长度的DNA回收率。结果:用硅化晴纶纱从凝胶中回收DNA时,0.5～2.0 mm硅化晴纶纱厚度DNA片段回收率均在85%左右,提示不同硅化晴纶纱厚度对DNA片段回收率影响较小;冻融时间在30 min 前,随着冻融时间延长,回收率上升明显,至30 min 回收率达85%,再增加冻融时间回收率变化不显著,提示冻融时间对回收率影响较大,冻融时间应为1 h;在5 000 r•min^-1前,随着离心力增加,回收率上升明显,至5 000 r•min^-1回收率达85%,再增加转速,回收率有略微上升,提示离心力对回收率影响较大,离心力应超过10 000 r•min^-1 (约合10 000 g);以10 000 r•min^-1离心,30 min前,离心时间对回收率影响较大,至30 min时,回收率达85%,增加离心时间,回收率不再增加; 250～2 000 bp 长度DNA片段,回收率为80.7%～88.4%,即使100 bp小片段回收率也能达到76%以上,表明片段大小对回收率影响较小,说明本方法的有效性。结论: 硅化晴纶纱厚度0.5～2.0 mm,冻融时间≥1 h,离心力≥10 000 g,离心时间30 min DNA回收率较高;硅化晴纶纱法可以高效地从电泳凝胶中回收目的DNA片段。     

对琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段的有效性的再认识

目的探讨琼脂糖凝胶电泳对DNA酶切片段的分离效果.方法将酶切后DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳,回收单一目的片段并再行电泳,观察非目的片段的分离效果.结果第一次回收的"单一"目的片段中,除目的DNA外,还含有多条较小的DNA分子;再次电泳回收的单一目的片段中,肉眼已看不见其它DNA分子,其纯度已大为提高;但是将几个批次的再次回收的目的片段浓缩后进行电泳发现其中仍然含有其它DNA片段.结论琼脂糖凝胶电泳难以将大小不同的DNA片段彻底分开,电泳后回收的目的片段中含有大小不同的污染分子.     

TTV与HBV重叠感染的研究

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)感染者重叠感染输血传播病毒(TTV)的状况.方法采用斑点杂交法检测乙型肝炎病毒感染者血清TTV DNA.结果在364例乙型肝炎病毒感染者中检出血清TTV DNA阳性者82例,阳性率22.53%.其中,急性乙型肝炎患者组阳性率23.21%,慢性乙型肝炎患者组阳性率26.25%,HBsAg携带者组阳性率15.22%,三者之间的差异无统计学意义P>0.05.结论在我国存在TTV感染,但其致病性值得进一步探讨.     

两种获取牙龈卟啉单胞菌基因组DNA方法比较

目的：筛选方便、快捷、有效地获取细菌基因组DNA的方法。方法：采用UNIQ-10柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒法和Chelex-100法获取患者龈下菌斑DNA，比较作为PCR扩增模板检测牙龈卟啉单胞菌感染位点的检出率差异，并对2种方法进行比较。结果：试剂盒法与Chelex-100法对牙龈卟啉单胞菌的感染位点检出率差异无统计学意义，但Chelex-100法提取DNA更简单、快速。结论：Chelex-100法抽提细菌基因组DNA适用于对大样本牙周炎患者作细菌学检测分析。     

大量提取质粒的简便方法

0　引言　质粒提取是分子生物学实验室一项最基本的工作 .我们介绍一种非常简便的大量提取质粒方法 ,此法提取的质粒可直接用于酶切鉴定、转化、探针标记等 .菌种为转化了重组 p U C19质粒的 DH5α E.coli.重组 p UC19质粒为在 H inc II位点插入不同的 PCR产物连接而成 .1　方法　挑一个单菌落接种于 5 m L L B/ Amp(含氨苄青霉素0 .1g· L-1 )培养液中 ,37℃振荡过夜 (A=0 .6 ) ,转 1m L菌液于 10 0 m L L B/ Amp培养液中 ,37℃振荡过夜 (A=0 .6 ) ,将菌液倒入两个 5 0 m L离心管 ,10 0 0 0 g离心 2 min,弃去上清 ,沉淀中加入 4…     

抗核抗体、抗双链DNA抗体与红斑狼疮活动期的相关性

系统性红斑狼疮(SLE)是一种发病率较高的自身免疫性疾病，病情活动的的结果常致多系统的病变，对人类健康危害重大。近几年，SLE患者血清中存在的多种自身抗体已被逐渐发现，其中抗核抗体(ANA)、抗双链DNA抗体(dsDNA)尤其受到人们的重视。本研究采用间接免疫荧光法检测2001—2002年我院住院及门诊的80例SLE患者血清ANA、抗dsDNA抗体，探讨这两种抗体与SLE活动的相关性。     

论DNA的所有权

分析了作为学术财产的DNA的特征和作为个人财产的DNA的特征，以及可能的理解和处理准则或标准。同意这样的观点：若作为学术财产，应该制定良好的信息共享政策以改善无条件可及的共享；若作为个人财产，应该对所捐赠的含有DNA信息的组织予以征税的方式调整目前存在的双重标准的问题，并针对个人对这类个人财产缺乏控制力方面存在的问题，提出可能的解决办法。     

甲醛对大鼠脑组织超氧化物歧化酶和脑细胞DNA损伤影响的研究

目的研究甲醛染毒对大鼠脑组织超氧化物歧化酶（SOD）和脑细胞DNA损伤的影响。方法采用腹腔注射方式给大鼠染毒,15只大鼠随机均分为对照组（生理盐水）、低剂量甲醛组O．2mg／kg（1／2000LD50）、高剂量甲醛组20．0mg/kg（1／20LD50）;每天1次,染毒7d。染毒结束后,检测大鼠脑组织SOD的含量,利用单细胞凝胶电泳技术（彗星实验）检测脑细胞DNA损伤。结果高剂量染毒组大鼠脑组织的SOD的活力[（12．89&#177;2．12）U／mg Pro]低于对照组[（16．34&#177;2．68）U／mg Pro]（P〈0．05）;腹腔注射甲醛可导致脑细胞DNA片段断裂,高剂量甲醛组彗星尾巴明显长于对照组。结论甲醛可使脑组织SOD活力下降,造成脑细胞DNA的断裂;甲醛对大鼠中枢神经系统具有一定的毒性作用。