激光辅助孵出对冻融胚胎着床潜能的影响

目的:探讨激光辅助孵出(LAH)对前次冻融胚胎移植失败患者临床妊娠率及胚胎种植率的影响。方法:对前次IVF-ET失败并排除子宫内膜、胚胎质量等因素的116例患者,根据是否采用激光辅助孵化分为LAH组(56例)和对照组(60例),对LAH组患者的胚胎采用部分透明带薄化后进行移植。比较两组患者临床妊娠率和胚胎种植率。结果:LAH组的临床妊娠率为53.3%,与对照组的36.7%比较差异有显著性(P<0.05),胚胎种植率为29.3%,显著高于对照组的17.9%(P<0.05)。结论:LAH可提高前次FET失败患者的临床妊娠率和胚胎种植率。     

解冻周期序贯移植在反复种植失败患者中的应用

目的探讨胚胎序贯移植法是否能够提高反复种植失败(recurrent implantation failure,RIF)患者的临床妊娠率。方法回顾性分析128例行常规体外受精或卵胞质内单精子注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)的RIF患者,按不同的移植法分为3组:解冻周期序贯移植36例,卵裂期移植45例,囊胚期移植47例。分析比较3组患者一般资料及胚胎和妊娠结局。结果解冻周期序贯移植组临床妊娠率(72.2%)及持续妊娠率(69.4%)明显高于卵裂期胚胎移植组(44.4%,37.8%)及囊胚期胚胎移植组(48.9%,44.7%),差异有统计学意义(P0.05)。结论解冻周期序贯移植法能够有效提高RIF患者的妊娠率,对于RIF患者序贯移植可作为一种有效的可供选择的移植手段,该方案避免了取消移植的可能性并对有较多移植胚胎数的患者有效。     

重组人生长分化因子-9蛋白对小鼠促排卵作用的研究

目的探讨重组蛋白生长分化因子-9(GDF-9)对小鼠卵泡发育的作用。方法选取30只性成熟雌性昆明小鼠随机分为3组,每组10只。对照组小鼠腹腔注射0.5 mL生理盐水;尿促性腺激素(hMG)组注射hMG 10 IU;联合组注射hMG 10 IU联合重组蛋白GDF-9 10μg;48 h后所有小鼠腹腔注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)10 IU。注射hCG后16～20 h处死小鼠,比较各组小鼠卵巢指数(卵巢相对重量/相对体质量)及获卵数,酶联免疫吸附法(ELISA)法检测小鼠血清雌二醇(E2)含量,并对卵母细胞进行体外受精,观察各组受精情况。结果 hMG组、联合组获卵数(28.9±10.2、36.5±13.0)、卵巢指数[(32.26±6.33)mg/100 g、(38.80±8.90)mg/100 g]、血清E2含量[(45.64±14.19)ng/L、(52.02±16.08)ng/L]均高于对照组[11.4±5.4、(26.11±7.16)mg/100 g、(25.03±13.62)ng/L],差异有统计学意义(P=0.001、P=0.034、P=0.029;P=0.000、P=0.028、P=0.014);尤以联合组获卵数最多、卵巢指数最大、E2含量最高,与hMG组相比差异亦有统计学意义(P=0.025、P=0.031、P=0.043);对照组、hMG组、联合组组间小鼠卵母细胞体外受精率相近,差异无统计学意义(P0.05)。结论重组蛋白GDF-9可以辅助促性腺激素(Gn)有效增加小鼠促排卵获卵数,且对卵母细胞的正常受精能力无影响。     

胚胎行植入前遗传学诊断后妊娠并分娩一例

女性有2个以上X染色体时可能导致闭经、卵巢功能早衰、生育性染色体异常患儿等生育障碍。经胚胎植入前遗传学诊断技术治疗1例XXX综合征嵌合型、有两次不良妊娠史的女性,患者成功妊娠并分娩了正常男婴。     

蚓激酶基因在山羊乳腺中的瞬时表达

构建了包括山羊β-酪蛋白基因启动子和蚓激酶基因cDNA的乳腺表达载体pβLK。通过直接注射将重组载体DNA导入山羊的乳腺组织,以纤维蛋白平板法测定乳汁中蚓激酶基因表达产物的活性。实验证实蚓激酶基因可以在山羊乳腺中瞬时表达。在进行山羊乳腺的瞬时表达时,适宜的注射剂量为500μg/ml。注射后6~9 h的表达量最高,达到2.0×105U/L,并持续表达至60 h。     

一种改进的显微注射用DNA片段的纯化方法

目的显微注射用DNA的纯度是影响转基因动物制备成功与否的重要因素,本文建立一种可行的适用于普通实验室的纯化DNA方法,替代普遍使用的试剂盒纯化方法。方法分别使用酚-氯仿多次抽提法及常规的凝胶提取试剂盒纯化含有蚓激酶基因的DNA片段,通过显微注射技术将纯化的DNA片段导入小鼠受精卵的原核,制备转基因小鼠。根据转基因实验的结果对两种方法进行比较。结果使用两种方法纯化DNA均能获得转基因小鼠。在DNA纯度及注射卵的存活率上,两种方法无明显差别;在移植卵的出生率及转基因阳性率上,抽提法优于试剂盒法。结论本实验建立的抽提方法可以替代试剂盒方法纯化显微注射用DNA片段,在降低实验成本、简化实验条件及提高转基因阳性率方面具有优势。     

低形态学评分卵裂期胚胎的X、Y及18号染色体分析

目的:分析低形态学评分的D3卵裂期胚胎X、Y及18号染色体的非整倍体情况。方法:收集体外受精-胚胎移植术后剩余的废弃胚胎,胚胎固定后采用荧光原位杂交技术检测细胞核内的X、Y及18号染色体。结果:共收集废弃胚胎60个,其中正常胚胎29个,18号染色体异常胚胎12个,X/Y染色体异常胚胎8个,18、X/Y染色体均异常胚胎11个。观测到荧光信号的细胞核有233个,其中正常细胞核115个(49.4%),异常细胞核118个(50.6%)。18号染色体非整倍体率40.8%,X/Y染色体非整倍体率33.5%,差异无统计学意义(χ2=2.65,P>0.05)。18号染色体三体发生率(21.9%)与X/Y染色体三体发生率(12.0%)差异有统计学意义(χ2=11.58,P<0.01)。结论:D3形态评分低的胚胎有相当大的比例存在染色体异常,通用的胚胎形态学评分系统能够在一定程度上反映胚胎的染色体情况。