蛋白精氨酸甲基化酶在小鼠外周神经损伤后背根神经节中的转录表达

目的 探讨蛋白精氨酸甲基化酶(PRMT)在外周神经损伤背根神经节(DRG)转录表达与疼痛行为关系.方法 构建C57BL6小鼠双侧L4脊神经结扎(SNL)外周神经损伤神经病理性疼痛模型,假手术Sham组作对照,收集SNL或Sham术后第7天DRG组织,行RNA-Seq测序全面分析PRMT家族9个基因在转录表达规律和组织分布情况,筛选出差异表达基因;建立小鼠单侧L4 SNL模型(Sham组作对照),测量各组在SNL术前(0 d)、术后3、7和14 d不同时点机械缩爪反应频率(PWF)和热缩爪反应潜伏期(PWL),收集两组上述不同时点患侧和对侧DRG行RT-qPCR验证差异基因表达情况;建立坐骨神经结扎慢性缩窄损伤(CCI)模型,假手术组Sham作对照,疼痛行为检测方法和时间点同SNL模型,RT-qPCR进一步验证CCI术后上述时点差异基因表达情况.结果(1)RNA-Seq测序结果表明,9个PRMT基因均表达与DRG内,其基础表达量最多的是Prmt2和Prmt3,最少的是Prmt6.与Sham组比较,SNL神经损伤上调DRG Carm1转录表达(增加1.7倍),抑制Prmt5、Prmt8和Prmt9这3个基因转录,其中Prmt8抑制最明显(下降16.3倍).(2)RT-qPCR验证表明,与Sham组较,SNL外周神经损伤增加术后3、7和14 d PWF,降低PWL,上调DRG Carm1转录表达,而仅抑制Prmt8转录表达,Prmt1、Prmt5和Prmt9无明显改变.(3)同样的,CCI坐骨神经损伤亦增加CCI术后3、7和14 d PWF,降低PWL,上调DRG Carm1,抑制Prmt8在上述时点的表达.结论 外周神经损伤致机械痛觉高敏和热痛觉过敏的同时,上调DRG Carm1转录表达,抑制Prmt8基因转录.     

小干扰RNA修饰BMSCs分泌的外泌体 对CCI动物模型修复的促进作用研究

目的 探讨Piezo2沉默质粒转染骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC）来源外泌体修复慢性压迫性神经损伤（chronic constriction injury,CCI）动物模型的相关作用。方法 以成熟的大鼠为实验对象,提取大鼠的骨髓组织培养原代BMSC,超速离心法提取Piezo2基因siRNA沉默质粒转染的BMSC来源外泌体,用手术方案构建CCI动物模型,根据实验目的将入组的SD大鼠分成模型组、BMSC组和外泌体组,利用荧光定量聚合酶链反应和免疫荧光染色法检测Piezo2、NeuN、IbA1和胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）的mRNA相对表达量。结果 原代BMSC的CD29、CD90和CD105蛋白呈阳性,而CD45、CD34和CD11b呈阴性。而外泌体组动物（dorsal root ganglion,DRG）组织中脊髓背角小胶质细胞的激活明显弱于模型组和BMSC组。外泌体组Piezo2的mRNA相对表达量明显低于BMSC组和模型组（P<0.05）,外泌体组NeuN、IbA1和GFAP的mRNA相对表达量明显高于BMSC组（P<0.05）。结论 Piezo2沉默质粒转染BMSC来源外泌体可以促进CCI的修复,值得进一步推广。     

RNA干扰沉默VDR基因对小鼠成骨细胞Dmp1?Cbfa1及BMP-2 mRNA 表达的影响

目的:利用RNA干扰技术,阻断VDR在小鼠成骨细胞株mc3t3-E1中的表达,观察VDR表达受抑后对小鼠成骨细胞Dmp1、Cbfa1及BMP-2基因mRNA表达的影响.方法:针对小鼠VDR mRNA 144、594、852、3 628位点设计、合成4对21核苷酸siRNA(siRNA1、siRNA2、siRNA3、siRNA4);在阳离子脂质体介导下转染mc3t3-E1细胞,以空白及非特异性siRNA作为对照,各组于转染24 h及72 h后收集细胞分别抽提RNA及蛋白.采用RT-PCR法检测细胞中VDR mRNA表达水平的改变,Western blot法检测VDR蛋白表达的变化,从而筛选有效序列.进一步应用SYBR Green荧光实时PCR方法定量检测成骨细胞功能基因-Dmp1、cbfa1及BMP-2基因mRNA表达情况.结果:与空白对照组相比,转染siRNA3、siRNA4的mc3t3-E1细胞VDR mRNA和蛋白表达明显下调(P＜0.01).转染siRNA1、2及非特异性siRNA的mc3t3-E1细胞VDR的表达与对照组相比无显著差异(P＞0.05).荧光定量PCR结果显示,转染siRNA3、siRNA4的mc3t3-E1细胞Dmp1、cbfa1、BMP-2mRNA表达明显下调(P＜0.01).结论:针对小鼠VDR mRNA 852、3 628位点设计、合成的siRNA可有效抑制小鼠成骨细胞株VDR的转录和表达;VDR表达受抑可下调mc3t3-E1细胞功能基因Dmp1、Cbfa1、BMP-2mRNA的表达;VDR在维持成骨细胞功能中起着一定的作用.     

RNA干扰下调FoxM1基因表达对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响

目的探讨RNA干扰下调叉头转录因子M1（Forkheadboxprotein M1,FoxMl）基因小干扰RNA（smallinterferingRNA,siRNA）对胰腺癌细胞化疗药物敏感性的影响及分子机制。方法设计合成3个FoxM1siRNA,转染人胰腺癌Panc-1细胞后采用定量PCR方法筛选下调FoxM1mRNA效果最好的siRNA;然后以该siRNA转染Panc-1细胞后,分别以实时定量PCR检测各组细胞FoxM1mRNA表达情况;以不同浓度siRNA转染胰腺癌细胞后,分别以MTT法检测吉西他滨（20nM,Gemcitabine）对各组细胞生长和化疗敏感性的影响;以蛋白质印迹方法检测Akt磷酸化情况。结果3个siRNA均明显下调FoxM1mRNA水平,以S3效果最好。MTT结果显示,Con-A＋Gem组、Con—B＋Gem组、siRNA（3．125nM）＋GemsiRNA、siRNA（6．25nM）＋Gem、siRNA（12．5nM）＋Gem组抑制率分别为17．78％、17．56％、35．39％、52．81％及70．98％。蛋白质印迹检测发现,siRNA转染组Akt磷酸化水平明显下调。结论FoxM1基因siRNA可促进胰腺癌细胞化疗敏感性,通过下调Akt磷酸化水平可能是其重要机制之一,但其内在的分子机制尚需进一步探讨。     

环氧合酶-2基因敲低对足细胞凋亡及nephrin蛋白表达的影响

目的观察足细胞环氧合酶-2（COX-2）基因敲低对足细胞凋亡及nephrin蛋白表达的影响。方法（1）以条件永生性小鼠足细胞株为研究对象：分为正常对照组、5μl的siRNA组、10μl的siRNA组、15μl的siRNA组。经诱导分化成熟,在干扰48h后用半定量RT-PCR和Westernbolt分别检测COX-2mRNA及蛋白表达水平,用流式细胞仪检测足细胞凋亡水平。（2）以10μl的siRNA组作为研究对象,分别设立足细胞正常对照组、足细胞COX-2基因敲低组和足细胞阴性转染对照组,用Westernboh检测nephrin蛋白、BAX蛋白及BCL-X1蛋白的表达水平。结果（1）与正常对照组比较,随着干扰浓度的增加,COX-2mRNA及蛋白表达逐渐减少,而足细胞的凋亡率逐渐升高,15μ1的siRNA组凋亡率明显增高。（2）lμlCOX-2siRNA转染组nephrin蛋白表达显著低于阴性转染组（P〈0．05）。（3）与阴性转染组相比,10IxlCOX-2siRNA转染组Bax蛋白表达显著上调,而Bcl-xl蛋白表达稍有下调。结论敲低COX-2的基因表达可以导致足细胞凋亡,并随着干扰浓度的增加,足细胞凋亡率逐渐增加;在干扰浓度为10μl时,足细胞nephrin蛋白的表达下调;BAX蛋白上调及BCL-X1蛋白下调参与了足细胞的凋亡。     

羌活水提液通过TRPV1调节神经病理性疼痛镇痛机制研究（英文）

目的探索羌活水提液(Water extract of notopterygium incisum, WN)对神经病理性疼痛的作用及分子生物学机制。方法疼痛行为实验检测WN灌胃对急性疼痛模型小鼠和慢性缩窄性损伤(Chronic constriction injury, CCI)引起的神经病理性疼痛模型小鼠热痛觉过敏和机械痛觉过敏的影响。免疫组织化学、qPCR法检测WN灌胃对小鼠DRG神经元TRPV1表达的影响。钙成像法检测WN灌胃后CCI模型小鼠DRG神经元对TRPV1激动剂辣椒素钙内流的影响。结果 WN灌胃后,可显著减轻急性疼痛模型小鼠和CCI模型小鼠的热痛觉过敏和机械痛觉过敏(P0.001)。与模型组比较,WN组DRG神经元TRPV1蛋白及mRNA表达均受到显著抑制(P0.05),DRG神经元对TRPV1激动剂辣椒素的反应显著减弱(P0.001)。结论 WN可能通过调节TRPV1来减轻CCI引起的疼痛,为中药镇痛的分子生物学机制提供新的思路和基础。     

CEP55可能是治疗成熟阻滞型非梗阻无精子症的分子靶标

目的应用siRNA技术沉默CEP55基因表达对小鼠精原细胞增殖的影响。方法选取2017年1月1日~12月31日在南方 医科大学南方医院妇产科生殖中心就诊的无精子症男性不育症患者,根据其睾丸病理切片诊断分为成熟阻滞组和生精正常组 各3 名。应用核素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术,发现两组患者的睾丸组织表达差异蛋白质CEP55 蛋白。设计并合成 CEP55 基因特异性的siRNA 序列,转染小鼠精原细胞,分为空白对照组、阴性对照组及siRNA 转染组,应用Western blot 和 qPCR检测在siRNA 对CEP55的影响,CCK8实验观察siRNA抑制CEP55后对小鼠精原细胞增殖的影响。结果通过iTRAQ 核素标记结合LC/MS/MS分析,共鉴定出差异蛋白共两百多个,CEP55在基因表达水平差异最显著。Western blot结果显示, siRNA转染组CEP55蛋白的相对表达水平明显低于空白对照组和阴性对照组（P<0.05）。qPCR结果显示,siRNA转染组CEP55 的mRNA表达量低于空白对照组和阴性对照组（P<0.05）。CCK8实验发现siRNA干扰CEP55表达后,小鼠精原细胞生长明显 受到抑制（P<0.05）。结论CEP55可能在精子发生过程中起到关键作用,CEP55可能成为治疗成熟阻滞型非梗阻无精子症的分 子靶标。     

羌活水提液通过TRPV1调节神经病理性疼痛镇痛机制研究

目的  探索羌活水提液(Water extract of notopterygium incisum, WN)对神经病理性疼痛的作用及分子生物学机制。方法  疼痛行为实验检测WN灌胃对急性疼痛模型小鼠和慢性缩窄性损伤(Chronic constriction injury, CCI)引起的神经病理性疼痛模型小鼠热痛觉过敏和机械痛觉过敏的影响。免疫组织化学、qPCR法检测WN灌胃对小鼠DRG神经元TRPV1表达的影响。钙成像法检测WN灌胃后CCI模型小鼠DRG神经元对TRPV1激动剂辣椒素钙内流的影响。结果  WN灌胃后,可显著减轻急性疼痛模型小鼠和CCI模型小鼠的热痛觉过敏和机械痛觉过敏(P < 0.001)。与模型组比较,WN组DRG神经元TRPV1蛋白及mRNA表达均受到显著抑制(P < 0.05),DRG神经元对TRPV1激动剂辣椒素的反应显著减弱(P < 0.001)。结论  WN可能通过调节TRPV1来减轻CCI引起的疼痛,为中药镇痛的分子生物学机制提供新的思路和基础。      

碘乙酸钠诱导的骨关节炎疼痛大鼠背根神经节KCNA2的表达

目的研究背根神经节（DRG）神经元电压门控钾离子通道亚基KCNA2在碘乙酸钠诱导的骨关节炎（OA）疼痛模型大鼠 中的表达及机制。方法156只成年雄性SD大鼠随机均分为空白对照组（C组）、生理盐水组（S组）和骨关节炎组（OA组）,通过 膝关节腔内注射碘乙酸钠建立骨关节炎模型。分别于注射前、注射后1、2、4、6周测定大鼠机械刺激缩足阈值（PWMT）。注射后 4周,HE及番红固绿染色观察膝关节病理学变化,免疫荧光染色检测DRG神经元活化转录因子-3（ATF-3）、诱生型一氧化氮合 酶（iNOS）的表达情况。RT-qPCR检测1、2、4、6周DRG神经元Kcna2 mRNA表达,4周时Western blot分析KCNA2的表达情况、 MSPCR检测Kcna2甲基化程度。结果与注射前相比,OA组2、4、6周PWMT显著降低（P<0.05或P<0.001）;与C组相比,OA 组2、4、6周PWMT显著降低（P<0.05或P<0.001）。OA组大鼠膝关节软骨表面断裂、缺损,骨质增生,潮线模糊不清;C、S组未发 现明显异常。4周时OA组ATF-3与iNOS表达显著增高（P<0.01）,2、4、6周Kcna2 mRNA及4周KCNA2表达显著降低（P<0.05 或P<0.01）、Kcna2 甲基化程度显著增高（P<0.01）。结论骨关节炎疼痛大鼠DRG神经元KCNA2 的表达降低,其机制可能与 Kcna2启动子区域甲基化增强有关。     

胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA表达载体的构建及其对胃癌细胞生长特性的影响

目的研究胃癌相关基因GCRG213 siRNA转染对胃癌细胞MKN45的影响。方法1）设计两对针对GCRG213可转录为小干扰RNA（siRNA）的DNA片段,退火后插入小干扰RNA表达载体IMG-800。2）测序正确的重组子IMG-800—1,IMG-800-2和空载体转染MKN45细胞,采用RT—PCR及Western法比较GCRG213在mRNA和蛋白质水平上的表达差异。3）绘制细胞生长曲线,分析细胞的增殖状态,检测凋亡细胞。结果1）干扰片段正确插入小干扰RNA表达载体IMG-800。2）重组子和空载体转染MKN45细胞。3）转染siRNA的MKN45细胞中其mRNA的表达下调44．9％和49．5％;其蛋白的表达下调55．3％和64．2％。4）转染siRNA的MKN45细胞生长增殖速度减慢,处于G0-G1期的细胞增加,G2／M期和／或S期的细胞比例减少,细胞凋亡率增加。结论siRNA转染可抑制肿瘤细胞的生长和增殖,促进肿瘤细胞的凋亡。     

骨形态蛋白2 siRNA靶向抑制对体外培养人脐动脉平滑肌细胞成骨样分化及钙化的影响

目的 研究骨形态蛋白2（BMP2）小分子干扰RNA（siRNA）靶向抑制对人脐动脉平滑肌细胞（HUASMC）由白介素6（IL-6）诱导刺激的成骨样分化和细胞层钙化的影响。方法 以体外培养的原代HUASMC作为实验对象。建立RNA干扰（RNAi）实验平台,通过FAM标记阴性对照siRNA优化转染条件;将BMP2基因的4条候选siRNA分别转染原代HUASMC,Real-Time PCR检测BMP2 mRNA表达,筛选有效抑制siRNA。将复苏的原代HUASMC分为siRNA转染组（转染有效抑制siRNA）和模拟转染组（对照组,不转染siRNA）,两组均加入重组人IL-6（rhIL-6）(10 ng/mL)刺激孵育,Real-Time PCR检测刺激孵育12、48 h时点成骨样转化相关基因BMP2、骨特异性碱性磷酸酶（BAP）、骨钙素（OC）和骨桥蛋白（OPN）mRNA表达。将复苏的原代HUASMC分为siRNA转染组、对照组和空白组(不予rhIL-6刺激孵育,其余处理与对照组相同),siRNA转染组和对照组均加入rhIL-6（50 ng/mL）刺激孵育,甲氧－酚酞络合酮法检测rhIL-6刺激孵育前及孵育后2、4 d时点各组HUASMC细胞层钙盐含量,以总蛋白含量校正。结果 成功建立合适的RNAi实验平台。10 ng/mL rhIL-6刺激孵育后12 h时点,siRNA转染组HUASMC BMP2和BAP mRNA表达明显低于对照组（P<0.05）;刺激孵育后48 h时点,siRNA转染组OC和OPN mRNA表达显著低于对照组（P<0.05）。加入50 ng/mL rhIL-6刺激孵育前,siRNA转染组、对照组和空白组HUASMC细胞层钙盐含量比较差异无统计学意义（P>0.05）;在siRNA转染组,50 ng/mL rhIL-6刺激孵育后2 、4 d时点的细胞层钙盐含量均明显低于对照组（P<0.05）,刺激孵育后2 d时点的细胞层钙盐含量明显高于空白组（P<0.05）。结论 体外培养的原代HUASMC能够实现BMP2基因的siRNA靶向抑制,能显著抑制由IL-6诱导刺激的成骨样分化和钙化。     

S100A7表达下调对胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移能力的影响

目的 研究S100A7表达下调对胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移的影响,并探讨其可能的分子机制.方法 将胃癌SGC-7901细胞分为3组:未转染组、对照siRNA组和S100A7 siRNA组,后两组分别转染对照siRNA和S100A7 siRNA.利用实时荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹分析检测各组胃癌SGC-7901细胞中S100A7 mRNA和蛋白的表达;采用CCK-8和Boyden小室分别检测各组细胞增殖和细胞迁移能力的变化.最后采用蛋白质印迹分析法检测3组胃癌细胞中cyclin D1、Cdk2和MMP-2蛋白的表达.结果 S100A7 siRNA能下调胃癌SGC-7901细胞中S100A7 mRNA和蛋白的表达.S100A7 mRNA和蛋白表达下调抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖和迁移,并降低cyclin D1、Cdk2和MMP-2蛋白的表达.结论 S100A7表达下调介导的胃癌细胞增殖抑制和迁移降低可能与cyclin D1、Cdk2和MMP-2表达的下调密切相关.     

siRNA下调叉头框M1基因表达对大肠癌细胞化疗敏感性的影响

目的: 观察叉头转录因子M1(forkhead box protein M1,FoxM1)基因小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）对大肠癌细胞化疗药物敏感性的影响,并探讨其可能机制。方法: 设计合成3个FoxM1 siRNA,转染人大肠癌SW620细胞后,采用定量PCR方法筛选下调FoxM1 mRNA效果最好的siRNA,然后以不同浓度（3.125 ,6.25 ,12.5 nmol/L）的该siRNA转染处理大肠癌细胞,用RPMI 1640代替FoxM1 siRNA作为空白对照组（Con A）;48 h后,各组细胞分别用伊立替康（Irinotecan,CPT 11,7.5 μmol/L）处理,以MTT法检测siRNA转染对各组细胞增殖及对伊立替康敏感性的影响;以蛋白质印迹方法检测Akt磷酸化情况。结果： MTT结果显示,空白对照组、siRNA 3.125 nmol/L组、siRNA 6.25 nmol/L组和siRNA 12.5 nmol/L组SW620细胞生长抑制率分别为18.36%,39.78%,58.18%,78.28%。统计学分析显示,抑制率呈浓度依赖性(r=0.775,P<0.05）。蛋白质印迹结果表明,siRNA转染组Akt磷酸化水平明显下调。结论： FoxM1 基因siRNA可提高大肠癌细胞化疗敏感性;下调Akt磷酸化水平是其重要机制之一。     

RNA干扰沉默STAT3基因表达对人胰腺癌细胞SW1990侵袭能力的影响

目的：观察信号转导与转录因子3（STAT3）siRNA表达载体对胰腺癌细胞侵袭能
力的影响,并探讨其机制。方法：实验分为空白对照组、阴性对照组及STAT3 siRNA组。以人
胰腺癌细胞株SW1990作为研究对象,将合成的STAT3 siRNA转染SW1990细胞后,采用RT-PCR及
Western blotting检测转染前后STAT3 mRNA及蛋白的表达变化,Transwell法检测其对胰腺癌
细胞侵袭能力的影响,RT-PCR及Western blotting检测其对胰腺癌细胞MMP-2和MMP-9表达
的影响。结果：STAT3 siRNA转染胰腺癌细胞72 h后,STAT3 mRNA和蛋白表达水平均明显降低,
与空白对照组及阴性对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;转染后胰腺癌细
胞的侵袭细胞数及MMP-2和MMP-9的表达显著减小,与阴性对照组及空白对照组比较,差异有统
计学意义（P<0.05）。结论：STAT3 siRNA能特异地阻断胰腺癌细胞中STAT3信号的活
化,并进一步通过下调MMP-2和MMP-9的表达从而抑制胰腺癌细胞的侵袭能力。     

RNA干扰沉默人血管平滑肌细胞胱抑素C基因表达及对组织蛋白酶S表达的影响

目的研究小干扰RNA（siRNA）对胱抑素C（CysC）基因表达的抑制作用及对组织蛋白酶S（CatS）表达的影响。方法利用Ambion公司设计合成的以CysC为靶标的siRNA,通过脂质体转染人血管平滑肌细胞（VSMC）,以未转染siRNA细胞和转染无关siRNA细胞为对照,采用RT PCR和Western blot分别检测CysC在mRNA水平和蛋白水平的改变。选取抑制效率最高siRNA转染VSMC,以空白对照组、无关干扰组和CysC高表达组为对照,采用RT PCR法和Western blot分别检测CatS在mRNA水平和蛋白水平的改变。结果转染24?h后,siRNA组CysC mRNA和蛋白表达均被有效抑制,与空白对照组相比,差异有统计学意义（P<0.01）,其中,siRNA2的抑制效率最高。CatS的mRNA及蛋白表达水平在siRNA组均有明显升高,与其他三组比较,差异有统计学意义（P<0.01）。结论体外转录合成的siRNA可有效抑制人VSMC中CysC的表达,并对CatS基因表达有一定影响。     

特异性SiRNA沉默小鼠NK细胞Ly49C基因的实验研究

目的：探讨特异性的SiRNA对小鼠NK细胞Ly49C基因表达的影响。方法：将特异性的SiRNA小鼠NK细胞后, SYBR Real-time PCR及流式检测NK细胞Ly49C基因mRNA及其蛋白质表达。结果：特异性siRNA片段作用NK细胞后能有效降低Ly49C mRNA和蛋白质水平的表达（P<0.05）。结论：特异性的SiRNA可有效降低小鼠NK细胞中Ly49C mRNA水平,明显下调Ly49C蛋白表达。     

RNA干扰技术特异性抑制肾癌survivin表达的实验研究

目的:体外转录合成survlvin siRNA(Small interference RNA,siRNA),观察其在肾癌786-O细胞株中抑制survivin的表达情况.方法:体外转录合成3组survivin序列特异性双链RNA(Double-stranded RNA,dsRNA),转染786-O细胞株中,用RT-PCR和Western blot检测转染后survivin基因的mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞活性.结果:有2组转染特异性siRNA的786-O细胞表达survivin mRNA及蛋白均下调.活性受到抑制,另一组效果不明显.结论:体外转录合成特异性survivin siRNA能有效抑制肾癌786-O细胞中survivin的表达,抑制细胞的活性,RNA干扰(RNA interfering,RNAi)技术可能为肾癌的基因治疗提供一种新策略.     

α-胞衬蛋白siRNA对干燥综合征模型NOD小鼠IFN-γ和IL-4表达水平及基因沉默效果的影响

目的： 观察α-胞衬蛋白（α-Fodrin）特异性小干扰RNA（siRNA）对干燥综合征（SS）动物模型非肥胖糖尿病(NOD）小鼠细胞因子IFN-γ和IL-4表达水平的影响,探讨α-Fodrin siRNA治疗NOD的可能性。方法： 12只NOD雌性小鼠随机分为对照组、空载体组、α-Fodrin siRNA1组和α-Fodrin siRNA2组,每组3只。将成功构建的α-Fodrin siRNA1和α-Fodrin siRNA2表达载体分别经尾静脉注射α-Fodrin siRNA1组和α-Fodrin siRNA2组NOD小鼠,对照组和空载体组小鼠分别注射同等剂量的PBS和pGFP-V-RS空载体,测定每周每只小鼠的饮水量。注射后1、3、5和7 d,各组小鼠尾部采血,ELISA法检测4组小鼠血清中细胞因子IFN-γ、IL-4的表达水平, RT-PCR法检测NOD小鼠肺脏组织中α-Fodrin mRNA的表达水平,免疫组织化学法检测NOD小鼠肺脏组织中α-Fodrin的表达水平。结果：4组小鼠饮水量比较差异无统计学意义(P>0.05)。注射后1和3 d,siRNA1组和siRNA2组NOD小鼠血清中IL-4水平明显升高、IFN-γ/IL-4比值减低,与对照组和空载体组比较差异有统计学意义（P<0.05）,对照组与空载体组比较差异无统计学意义,siRNA1组与siRNA2组比较差异亦无统计学意义;注射后5和7 d,4组小鼠血清中IL-4水平和IFN-γ/IL-4比值比较差异无统计学意义。注射后7 d,siRNA1组和siRNA2组 NOD小鼠肺脏组织中α-Fodrin及其 mRNA的表达水平明显低于对照组和空载体组（P<0.05）,对照组和空载体组比较差异无统计学意义,siRNA1组和siRNA2组比较差异无统计学意义。结论： NOD小鼠注射α-Fodrin siRNA载体后,血清中IL-4的水平升高、IFN-γ/IL-4的比值降低,同时α-Fodrin mRNA表达水平和α-Fodrin表达水平下降,提示α-Fodrin siRNA可以通过减轻NOD小鼠炎症反应延缓SS病情进程。     

小干扰RNA沉默MAT1基因治疗胰腺癌的实验研究

目的了解体外转录法合成的小干扰RNA（siRNA）沉默MAT1基因对胰腺癌的体内体外抗癌效应。方法用siPORT-脂质体（1ipid）中性阳离子脂质体转染由体外转录法合成、Cy3荧光标记的双链siRNA人胰腺癌BxPC3细胞,观察对胰腺癌细胞生长和细胞周期曲线的影响,检测MAT1基因被siRNA沉默后mRNA和蛋白质的表达水平。在裸鼠胰腺癌皮下移植瘤瘤体内直接注射siRNA观察抑瘤效应。结果合成的4条MAT1-siRNA序列中有一半可显著抑制BxPC3细胞的生长。体外转染MAT1-siRNA72h后,BxPC3细胞生长抑制率达34．9％（P〈0．01）;83．9％的BxPC3细胞滞留于G。／G,期,而空白对照组仅59．86％（P〈0．01）。体外转染MAT1-siRNA48h后MAT1-mRNA水平下调了80．12％,72h后MAT1蛋白质水平下调了50．12％,与各对照组相比差异均有统计学意义（均P〈0．01）。MAT1-siRNA注射组裸鼠移植瘤重量和体积均明显低于对照组（均P〈0．05）,抑瘤率达42．53％。结论siRNA介导的MAT1基因沉默在体外实验中显著抑制了胰腺癌细胞的生长,在体内实验中对裸鼠胰腺癌皮下移植瘤产生明显的抑瘤效应。