右美托咪定对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用及其机制

目的 研究右美托咪定(Dex)对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用及机制.方法 应用高浓度谷氨酸处理PC12细胞以建立细胞缺氧损伤模型.应用MTT法测定细胞存活率,采用试剂盒分别测定细胞培养液中乳酸脱氢酶释放量,细胞丙二醛含量和超氧化物歧化酶活力,DCFH-DA染色流式细胞仪检测细胞内活性氧水平,Fluo-8染色流式细胞仪检测细胞内钙离子含量,JC-1染色流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位.结果 在0.01～100 μmol/L浓度范围内,Dex浓度依赖性地拮抗谷氨酸所致PC12细胞损伤,至100 μmol/L时,细胞存活率达到正常组的(86.6±2.2)％,显著高于模型组(P＜0.01),乳酸脱氢酶释放量为正常组的1.4±0.1倍,显著低于模型组(P＜0.01).1μmol/L Dex预处理谷氨酸损伤的PC12细胞,与模型组相比,能够显著降低丙二醛含量(P＜0.01),提高超氧化物歧化酶活力(P＜0.01),抑制胞内活性氧过度生成(P＜0.01),降低细胞内Ca2+浓度(P＜0.01),稳定细胞线粒体膜电位(P＜0.01).结论 Dex对谷氨酸所致PC12细胞损伤具有保护作用,其机制可能与Dex抗氧化和抑制细胞内钙超载,保护线粒体功能相关.     

右美托咪定对氧糖剥夺再复氧下Huvecs的保护机制

目的 探讨右美托咪定(DEX)预处理对氧糖剥夺再复氧条件下人脐静脉内皮细胞(Huvecs)的保护机制.方法 人工培养Huvecs,实验分为2部分,氧糖剥夺前细胞分3组:对照组(NC组)、DEX组、DEX+育亨宾(YHB)组.DEX组、DEX+YHB组加入50μmol/L的DEX和100μmol/L的YHB处理细胞2 h,DEX组加入50μmol/L的DEX处理细胞2 h.氧糖剥夺再复氧后细胞分为4组:对照组(NC组)、ogd/r组、DEX+ogd/r组、DEX+YHB+ogd/r组.DEX+ogd/r组加入50μmol/L DEX预处理2 h,DEX+YHB+ogd/r组加入50μmol/L DEX和100μmol/L YHB处理2 h,ogd/r组加入等体积的PBS,随后将3组细胞置于Hank's液中于缺氧恒温细胞培养箱内培养12 h,之后换正常培养基置于常氧恒温培养箱内培养4 h,NC组置于正常条件下培养18 h.采用Western blot检测各组Huvecs内部AMP依赖的蛋白激酶α(AMPKα)磷酸化水平,通过Seahorse能量分析检测缺氧复氧前各组Huvecs线粒体呼吸功能.结果 与NC组相比,DEX组线粒体基础氧耗速率升高(P<0.05),最大氧气消耗速率升高(P<0.05),线粒体三磷酸腺苷(ATP)产生能力升高(P<0.05);与DEX组相比,DEX+YHB组线粒体基础氧耗速率降低(P<0.05),最大氧气消耗速率降低(P<0.05),线粒体ATP产生能力降低(P<0.05);与ogd/r组相比,DEX+ogd/r组AMPKα磷酸化水平升高(P<0.05);与DEX+ogd/r组相比,DEX+YHB+ogd/r组AMPKα磷酸化水平降低(P<0.05).结论 DEX预处理激活AMPKα分子可提高Huvecs的线粒体呼吸功能,减轻氧糖剥夺再复氧条件下的损伤.     

线粒体DNA缺失肝癌细胞内活性氧、线粒体膜电位变化实验研究

目的 比较活性氧、线粒体膜电位在线粒体DNA缺失肝癌细胞株SK-Hep1(ρ0SK-Hep1)与亲本细胞中的差别.方法 采用溴化乙锭诱导制备ρ0SK-Hep1细胞株;荧光探针标记、流式细胞计数及激光共聚焦显微镜方法检测细胞内活性氧和线粒体膜电位.结果 ρ0SK-Hep1细胞内活性氧荧光强度显著高于其亲本SK-Hep1细胞株(P＜0.01),ρ0SK-Hep1肝癌细胞平均计数35.5,而SK-Hep1肝癌细胞平均计数15.9.ρ0SK-Hep1细胞线粒体膜电位显著低于亲本细胞(P＜0.01),ρ0SK-Hep1细胞平均计数55.0,而SK-Hep1细胞平均计数65.9.结论 线粒体DNA缺失后细胞内活性氧水平增加,而线粒体膜电位有所减低.     

黑米花色苷对白血病细胞株HL-60及正常淋巴细胞活性氧及线粒体膜电位的影响

目的 观察黑米花色苷对白血病HL-60细胞和正常淋巴细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平及线粒体膜电位的影响.方法 以2,7-二氯荧光素(2,7-dichloro fluoreseeineiactate,DCFH-DA)为细胞内活性氧探针,以罗丹明-123为反映线粒体膜电位荧光探针,流式细胞仪和激光共聚焦扫描显微镜检测分析黑米花色苷作用下HL-60细胞及正常淋巴细胞活性氧水平及线粒体膜电位的变化.结果 黑米花色苷处理正常淋巴细胞2、24 h其ROS水平未见显著变化(P＞0.05);黑米花色苷处理HL-60细胞,ROS水平首先显著升高(P＜0.01),随后逐渐降低,并在12 h显著低于对照纽(P＜0.01).黑米花色苷处理正常淋巴细胞24 h线粒体膜电位无显著变化(P＞0.05),处理HL-60细胞24 h线粒体膜电位显著降低(P＜0.01).结论 黑米花色苷能够显著影响HL-60细胞活性氧水平,并显著降低HL-60细胞线粒体膜电位,而对正常淋巴细胞活性氧及线粒体膜电位无显著影响.     

小檗碱对高糖诱导血管内皮细胞损伤中蛋白O-GlcNAc修饰和氧化应激的影响

目的观察小檗碱(BBR)对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤中蛋白O-GlcNAc修饰和氧化应激的影响及机制。方法将4～8代的HUVECs分为正常组、高糖组、高糖+腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)抑制剂Compound C(CC)组、高糖+BBR组、高糖+CC+BBR组。通过Western blot法检测AMPK总蛋白、磷酸化蛋白和OGlcNAc蛋白变化,采用DHE和JC-1染色分别检测细胞内活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位变化。结果高糖刺激显著降低细胞AMPK蛋白磷酸化水平和线粒体膜电位,增加O-GlcNAc蛋白和ROS水平,差异有统计学意义(P0.05)。BBR能够增加细胞AMPK蛋白磷酸化水平和线粒体膜电位,降低O-GlcNAc蛋白和ROS水平,差异有统计学意义(P0.05)。CC能够显著抑制AMPK蛋白磷酸化水平,减弱BBR对高糖刺激下HUVECs降低O-GlcNAc蛋白和ROS水平和升高线粒体膜电位的保护作用。结论 BBR可能通过AMPK信号通路实现降低高糖刺激下HUVECs的蛋白O-GlcNAc修饰水平及氧化应激而发挥血管保护作用。     

弱精子症患者精子凋亡和线粒体膜电位等相关研究

目的 比较正常人与弱精子症患者精子早期凋亡率、线粒体膜电位、活性氧及钙离子含量的差异,探讨其与精子活力的相关性.方法 收集50例精液标本,标本洗涤处理后分别行Annexin V-FITC/PI、JC-1、DCFH-DA及Fluo3-AM荧光染色,采用流式细胞术(FCM)分析两组精子早期凋亡率、死亡率、线粒体膜电位、活性氧及钙离子含量.结果 与对照组精子比较,弱精子症组精子早期凋亡率显著增加(P＜0.01),线粒体膜电位明显降低(P＜0.01),两组精子死亡率,精子内活性氧及钙离子含量无统计学意义(P均＞0.05);精子早期凋亡率与线粒体膜电位丧失率间呈显著正相关(r=0.789,P＜0.01).结论人精子早期凋亡率增加及线粒体膜电位降低可能是弱精子症的重要病因;线粒体膜电位检测对预测精子早期凋亡具有重要的应用价值.     

低表达NADH脱氢酶[辅酶Q]铁硫蛋白4对乳鼠心肌细胞线粒体功能的影响

目的 探讨低表达NADH脱氢酶[辅酶Q]铁硫蛋白4(NDUFS4)蛋白对乳鼠心肌细胞线粒体功能的影响.方法 通过原代培养30只乳鼠心肌细胞,将培养出的心肌细胞80盘简单随机分为siRNA处理组和对照组,每组40盘细胞.siRNA处理组:在乳鼠心肌细胞上转染NDUFS4 siRNA;对照组:在乳鼠心肌细胞上转染无义siRNA.继续培养48 h后,比较两组细胞在NDUFS4蛋白的表达、线粒体膜电位、细胞活性氧簇(ROS)水平、线粒体钙离子摄取能力和线粒体呼吸控制率上的差异.结果 乳鼠心肌细胞NDUFS4蛋白表达处理组较对照组下调73.58％(P＜0.001),线粒体的膜电位处理组较对照组下降20.49％ (P＜0.05),同时ROS水平处理组较对照组上升32.11％(P＜0.001).乳鼠心肌细胞线粒体钙离子摄取能力处理组较对照组降低33.33％ (P ＜0.001),细胞最大呼吸速率处理组较对照组下降29.18％ (P ＜0.05).结论 NDUFS4在乳鼠心肌细胞线粒体中维持膜电位、ROS的生成、MPTP的开放和能量供应等过程中发挥着重要的功能.     

右美托咪定联合布比卡因通过cAMP/PKA-CREB-BDNF信号通路对大鼠坐骨神经阻滞效果的影响

目的探究右美托咪定联合布比卡因通过cAMP/PKA-CREB-BDNF信号通路对大鼠坐骨神经阻滞效果的影响。方法选取SD大鼠36只随机均分为假手术组(Sham组)、布比卡因组(Bup组)、右美托咪定+布比卡因组(Dex组)和毛喉素+右美托咪定+布比卡因组(Fors组)。分别于阻滞前和阻滞后不同时间测定各组大鼠热刺激缩足反应最大效应百分比(MPE)和后肢伸姿推力(EPT)。于阻滞12 h检测各组脊髓环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)、磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(p-CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF)的水平。结果Bup组和Fors组在阻滞后10~180 min、Dex组在阻滞后10~360 min MPE较Sham组升高(P＜0.05);Bup组在阻滞后10~90 min、Dex组和Fors组在阻滞后10~120 min EPT较Sham组降低(P＜0.05)。Dex组在阻滞后10~360 min MPE较Bup组升高(P＜0.05);Dex组和Fors组在阻滞后10~120 min EPT较Bup组降低(P＜0.05)。Fors组在阻滞后10~360 min MPE较Dex组降低(P＜0.05)。阻滞后12 h cAMP、PKA、p-CREB、BDNF表达水平Sham组较其余3组升高,Dex组较Bup组下降,Fors组较Dex组升高(P＜0.05)。结论右美托咪定联合布比卡因增强大鼠坐骨神经阻滞效果,并延长了感觉和运动阻滞时间,其机制可能与抑制cAMP/PKA-CREB-BDNF信号通路有关。     

何首乌提取物对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的 研究何首乌提取物对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用.方法 体外培养SH-SY5Y细胞,建立MPP+致SH-SY5Y细胞损伤模型,实验分为对照组、MPP+损伤模型组、何首乌提取物干预组.干预组在MPP+损伤的基础上,给予不同浓度何首乌提取物(终质量浓度5、25、100 mg/L).MTT比色法检测细胞活力;Hoechst33258染色和白光下观察细胞形态变化,比色法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)及细胞中丙二醛(MDA)含量;通过荧光强度观察活性氧(ROS)的含量和线粒体膜电位的变化.结果 与对照组相比,模型组中细胞活性显著降低,Hoechst33258染色和白光下可见细胞胞体变小、核皱缩、碎裂有明显的颗粒状和固缩状荧光,并且细胞上清液中LDH泄漏明显增多、细胞中MDA含量和ROS显著升高而线粒体膜电位显著降低(P＜0.05).与模型组比较,预先4h给予不同浓度的何首乌提取物(5、25、100 mg/L)能明显改善SH-SY5Y细胞的活性,降低细胞产生的LDH、MDA含量,并恢复线粒体膜高能电位,且对ROS有明显的抑制效果(P＜0.01).结论 何首乌提取物对Mpp+诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有显著的保护作用,其保护作用与其抗氧化应激作用有关.     

右美托咪定对大鼠离体肺缺血再灌注所致线粒体损伤的影响

目的：探究右美托咪定（dexmedetomidine,Dex）对大鼠离体肺缺血再灌注所致线粒体损伤的影响。方法：将SD大鼠随机分成4组（n=6）：对照组（C组）、缺血再灌注组（IR组）、1 nmol/L Dex组（D1组）、10 nmol/L Dex组（D10组）,制备大鼠离体肺缺血再灌注模型。记录平衡末（T0）、再灌注即刻（T1）、再灌注30 min（T2）和再灌注60 min（T3）时的潮气量（tidal volume,VT）、肺顺应性（compliance,Cdyn）、气道阻力（airway resistance,Raw）和肺静脉氧分压（oxygen partial,PaO2）;测定肺湿/干重比;HE染色观察组织病理学改变;测定灌流末流出液乳酸脱氢酶（LDH）活性和肺组织中活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、三磷酸腺苷（ATP）含量以及超氧化物歧化酶（SOD）活性。分离肺组织线粒体,检测线粒体肿胀程度和线粒体膜电位（MMP）。结果：与C组相比,IR组、D1组、D10组肺功能不同程度降低,LDH活性升高,ROS、MDA增加,SOD活性下降,ATP生成减少,线粒体肿胀程度升高,MMP下降（P < 0.05）;与IR组相比,D1组、D10组肺功能改善,病理显示肺损伤明显减轻,LDH释放减少,ROS、MDA含量减少,SOD活性升高,ATP生成增加,线粒体肿胀程度减轻,MMP上升（P < 0.05）;与D1组相比,D10组改善肺功能作用更明显,Raw下降,LDH活性降低,SOD活性升高,线粒体肿胀程度减轻（P < 0.05）。结论：右美托咪定减轻了离体肺缺血再灌注损伤,其机制可能与减轻线粒体损伤,减少氧化应激反应有关。     

姜黄素对过氧化氢诱导内皮细胞凋亡及衰老的影响

目的 探讨姜黄素对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)自噬、凋亡及衰老的影响.方法 体外培养HUVECs,分为对照组(只给予培养基),模型组(给予60 μmol/L H2O2),姜黄素组(给予60μmol/L H2O2+ 10 μmol/L姜黄素),3-MA组[(给予60 μmol/L H2O2+ 10μmol/L姜黄素+1 mmol/L3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine)],培养4d后,DCFH-DA法检测细胞培养液中活性氧(ROS)的含量,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色检测细胞衰老程度,Western blot技术检测自噬相关蛋白LC3和p62的表达水平.结果 与对照组相比,模型组ROS含量、凋亡率、SA-β-gal阳性率及p62水平升高(均P＜0.05),而LC3-Ⅱ/Ⅰ比值差异无统计学意义(P＞0.05).与模型组比,姜黄素组ROS含量、凋亡率及SA-β-gal阳性率及p62水平降低(均P＜0.05),但LC3-Ⅱ/Ⅰ比值升高(P＜0.05).与姜黄素组比较,3-MA组ROS含量、凋亡率、SA-β-gal阳性率及p62水平升高(均P＜0.05),但LC3-Ⅱ/Ⅰ比值降低(P＜0.05).结论 姜黄素可减轻H2O2诱导内皮细胞凋亡及衰老,其机制与提高内皮细胞自噬有关.     

PKA-PINK1/Parkin信号通路在氧糖剥夺/复氧复糖后大鼠皮质星形胶质细胞凋亡和焦亡中的作用

目的评价蛋白激酶A（protein kinase A,PKA）-PTEN诱导性激酶蛋白1（PTEN induced putative kinase 1,PINK1） /E3泛素连接酶（E3 ubiquitin ligases, Parkin）信号通路在氧糖剥夺/复氧复糖后大鼠皮质星形胶质细胞凋亡和焦亡中的作用。 方法体外培养SD新生大鼠原代皮质星形胶质细胞,将细胞接种于6孔板或96孔板,根据随机数字表法将星形胶质细胞分为4组（n=42）：对照组（C组）、氧糖剥夺组（oxygen-glucose deprivation,OGD/R组）,H89+氧糖剥夺（H89+OGD/R, HO组）,H89对照组（H组）,H89为PKA特异性抑制剂。采用无糖培养基在无氧条件下（95% N2和5% CO2的混合气体内）孵育6 h,再放置在含有5% CO2的正常环境下培养24 h的方法制备氧糖剥夺/复氧复糖损伤模型,HO组和H组在氧糖剥夺前1 h向培养基内加入H89 10 μmol/L, C组和H组PBS洗涤后置于含有5% CO2的正常培养箱中培养。根据上述各组处理后,采用膜联蛋白（Annexin V）-FITC/碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）免疫荧光双染流式细胞学法测定细胞凋亡率,采用半胱天冬酶-1裂解片段（cleaved caspase-1）/PI免疫荧光双染流式细胞学法测定细胞焦亡率,采用四甲基偶氮唑法测定细胞存活率,采用Fluo-3/AM免疫荧光法测定细胞内钙离子浓度,二氯荧光黄双乙酸盐（2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA）法测定活性氧（reactive oxygen species, ROS）含量,酶联免疫吸附法检测PKA活性,蛋白免疫印迹法法检测PINK1和Parkin的表达。 结果与C组比较,OGD/R组和HO组皮质星形胶质细胞的凋亡率和焦亡率、细胞内游离钙离子浓度、ROS含量、PKA活性、PINK1和Parkin表达升高,细胞存活率下降（P＜0.05）;与OGD/R组比较,HO组皮质星形胶质细胞的凋亡率和焦亡率、细胞内游离钙离子浓度、ROS含量、PKA活性PINK1和Parkin表达下降,细胞存活率升高（P＜0.05）;C组与H组以上各项指标差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论抑制PKA-PINK/Parkin信号通路过度活化能够减轻氧糖剥夺/复氧复糖后大鼠星形胶质细胞凋亡和焦亡。     

沉默ANGPTL2对氧—葡萄糖剥夺/复氧诱导的HT22细胞氧化应激及凋亡的影响

目的 探究沉默血管生成素样蛋白2(angiopoietin-like protein 2,ANGPTL2)对氧-葡萄糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R)诱导的神经元细胞(hippocampal neuronal cell line, HT22)细胞氧化应激及凋亡的影响。方法 通过OGD/R处理建立小鼠海马HT22细胞模型。通过实时荧光定量聚合酶链反应、细胞计数试剂盒、末端标记法及试剂盒检测ANGPTL2 mRNA的含量、细胞活力、细胞凋亡、细胞乳酸盐脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)水平及细胞氧化应激。通过蛋白质印迹检测各种蛋白质含量。结果 与对照组比较,模型组ANGPTL2 mRNA表达水平、LDH、凋亡率、ROS、MDA、核苷酸寡聚化结构域样受体家族3(nucleotide oligomeric domain-like receptor family 3,NLRP3)及凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein contain...     

Exendin-4改善氧化应激减轻t-BHP诱导的HUVECs凋亡

目的 探讨Exendin-4对第三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响.方法 在原代培养的HUVECs中,采用t-BHP(100 μmol/L)干预4 h,加用或不加用Exendin-4(100 nmol/L)预处理细胞24 h,分为:对照组(A组)、t-BHP处理组(B组)、Exendin-4处理组(C组)及Exendin-4+t-BHP组(D组).应用MTT比色法检测细胞存活率,DAPI染色荧光显微镜观察细胞凋亡率,活性氧(ROS)检测试剂盒检测ROS的产生.结果 与A组比较,100 μmol/L t-BHP作用4 h,B组的HUVECs存活率下降40%(P<0.001);DAPI染色荧光显微镜观察证实,t-BHP可以诱导HUVECs凋亡;加用Exendin-4预处理细胞24 h,D组的HUVECs存活率较B组增高(P<0.01).DAPI染色荧光显微镜观察细胞凋亡率提示,与B组比较,Exendin-4预处理可使D组的细胞凋亡率减少44%(P<0.05),并减少ROS的产生(P<0.05).结论 t-BHP能够诱导HUVECs凋亡,Exendin-4可减少t-BHP诱导的HUVECs凋亡.     

齐墩果酸对损伤血管内皮细胞的保护作用及其机制探讨

目的:探讨齐墩果酸(oleanic acid,OA)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)诱导人血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用及其机制?方法:培养HUVECs,分为正常组?H2O2模型组?H2O2+OA (0.25 ?滋mol/L)组?H2O2+OA (0.50 ?滋mol/L)组?H2O2+OA (1.00 ?滋mol/L)组?H2O2+维生素C(1.50 mmol/L)组?各组培养24 h后,通过MTT法检测细胞增殖能力,酶生化法测定上清液中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,酶生化法测定细胞裂解液中的丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量?谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力,流式细胞仪测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)和细胞凋亡率?结果:OA能够恢复H2O2损伤的细胞活力,减轻H2O2诱导的LDH释放,减少H2O2诱导的MDA生成,恢复H2O2损伤的GSH-Px和SOD活力,清除H2O2诱导的ROS,减轻H2O2诱导的细胞凋亡,提高HUVECs细胞NO的生成?结论:OA对损伤血管内皮细胞有保护作用,这与OA能够启动HUVECs细胞内抗氧化防御机制,清除细胞内的ROS,提高HUVECs细胞NO的生成,抑制H2O2诱导的HUVECs细胞凋亡有关?     

硫氢化钠对高浓度葡萄糖环境下原代人脐静脉内皮细胞的影响

目的 观察硫氢化钠(NaHS,外源性的H2S供体)对高浓度葡萄糖环境下原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的作用。方法 以0.125%胰酶和0.01%EDTA灌注法获得HUVECs,分别用5.5mmol/L葡萄糖、25mmol/L葡萄糖、25mmol/L葡萄糖+50μmol/L NaHS及50μmol/L NaHS处理72h,采用MTT法检测各组细胞的存活率,Western blot法检测H2S生成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-Iyase,CSE)的变化。结果 MTT检测表明,25mmol/L葡萄糖组的HUVECs存活率比5.5mmol/L葡萄糖组下降28.37%(P<0.05),而50μmol/L NaHS和25mmol/L葡萄糖共同处理组的细胞存活率比25mmol/L葡萄糖组上升30.3%(P<0.05),50μmol/L NaHS组与5.5mmol/L葡萄糖组无明显差异(P>0.05)。与5.5mmol/L葡萄糖组相比,以25mmol/L葡萄糖处理72h后能使CSE蛋白的表达下降(P<0.05),而25mmol/L葡萄糖+50μmol/L NaHS 则能改善这种损害作用(P<0.05),CSE蛋白的表达比25mmol/L葡萄糖组增强。结论 高浓度葡萄糖降低人原代脐静脉内皮细胞的生长和存活率,减少CSE蛋白的表达,而NaHS能够减轻高浓度葡萄糖对CSE的作用。     

姜黄素和氯沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导的内皮间质细胞转化的作用及机制研究

目的 研究姜黄素和氯沙坦对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的内皮间质细胞转化(EndMT)的作用及机制.方法 培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)然后分为4组:对照组(不加刺激药物的正常培养组);AngⅡ组(加入刺激浓度为0.1 μmol/L或1μmol/L的AngⅡ);姜黄素+AngⅡ组(先加入12.5 μmol/L的姜黄素预孵1h,再加入1 μmol/L的AngⅡ);氯沙坦+AngⅡ组(先加入10 μmol/L的氯沙坦孵育2h,再加入1μmol/L的AngⅡ);刺激24 h后行划痕试验检测各组细胞迁移能力改变和CCK-8检测细胞活力;刺激5d后,显微镜观察各组细胞形态变化和Western blot检测各组血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达量.结果 HUVECs经AngⅡ刺激后形态改变,长梭形样细胞明显增多;姜黄素和氯沙坦可维持内皮细胞铺路石样形态.AngⅡ呈浓度依赖性地降低HUVECs存活率(P＜0.01);各组存活率均＞50％(均P＜0.05).相比对照组,AngⅡ促进HUVECs的迁移(P＜0.05);相比AngⅡ组,加入姜黄素和氯沙坦可抑制HUVECs的迁移(均P＜0.05).AngⅡ可诱导EndMT,AngⅡ刺激5d后VE-cadherin表达减弱(P=0.003),而α-SMA和TGF-B1的表达都明显增强(均P＜0.01),姜黄素和氯沙坦使VE-cadherin表达明显增加,而α-SMA和TGF-β1的表达均明显下调.结论 姜黄素和氯沙坦通过下调TGF-β1表达抑制AngⅡ诱导的EndMT.     

帕潘立酮对地佐环平损伤脑皮层神经元的保护作用及其机制

目的 探讨帕潘立酮对地佐环平损伤大鼠脑皮层神经元的保护作用及机制。方法 取孕15d胎鼠脑皮层神经元体外培养,应用地佐环平损伤神经元,然后加入不同浓度的帕潘立酮。采用MTT技术检测脑皮层神经元的生长活性,采用酶标仪检测乳酸脱氢酶（LDH）的活性及激光共聚焦技术检测神经元细胞内Ca2+浓度观察神经元凋亡情况,通过神经元突起数目及长度检测神经元生长情况,应用实时定量PCR技术检测Akt1、GSK3β的表达变化。结果 与正常对照组相比,地佐环平损伤组神经元活性明显下降,LDH释放增加,细胞内游离钙离子浓度升高（P均＜0.01）,神经元突起总长度下降,神经突起数目呈现不同程度的减少（P＜0.01）,RT-PCR结果显示,Akt1及GSK3β表达下降（P＜0.01）;加入不同浓度的帕潘立酮能明显对抗地佐环平对神经元的损伤,MTT结果显示神经元活性升高（P＜0.01）,LDH活性明显降低(P＜0.001),细胞内游离Ca2+浓度显著下降（P＜0.01）,神经突起数目和长度增加（P＜0.01）,Akt1及GSK3β表达上升（P＜0.01）。结论 帕潘立酮对地佐环平损伤脑皮层神经元具有明显保护作用,可抑制细胞凋亡,并通过Akt1 GSK3β通路促进神经突起的生长。     

中药脑心通对血管内皮细胞的保护作用

目的：研究脑心通对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）损伤血管内皮的保护作用及其分子机制.方法：在建立人脐静脉内皮细胞（HUVEC）ox-LDL（50mg/L）损伤模型的基础上,以阿托伐他汀（1μmol/L）作为阳性对照,并给予0.2,0.4,0.6,0.8g/kg不同剂量脑心通含药血清预先干预.采用硝酸还原酶法、放免法、分光光度计比色法、流式细胞技术等检测HUVECNO,ET-1,LDH释放量,细胞内Caspase-3活性和早期凋亡率.结果：HUVEC损伤后,ox-LDL组（4.74±1.61）μmol/L与对照组（9.96±1.57）μmol/L相比较,NO的合成显著减少,而ET-1释放明显增加[（44.72±2.01）ng/Lvs（21.42±2.84）ng/L,P〈0.01].与ox-LDL组（4.74±1.61）μmol/L相比较,ox-LDL＋脑心通0.2,0.4,0.6,0.8g/kg组[（8.33±1.78）,（11.35±2.14）,（14.80±2.40）,（17.82±2.02）μmol/L,P〈0.05）]呈剂量依赖性,并可促进NO合成,但对ET-1释放无明显影响.而ox-LDL＋阿托伐他汀组不仅可以促进NO合成,且能抑制ET-1释放（P〈0.01）;ox-LDL可显著提高HUVEC的Caspase-3酶活性,促进LDH释放（P〈0.05）,与ox-LDL组比较,ox-LDL＋脑心通组对此呈剂量依赖性抑制作用[（193.00±16.81）μmol/Lvs（168.00±11.51）,（135.00±11.18）,（117.00±10.37）,（99.00±9.62）μmol/L,P〈0.05],[（470.28±23.34）μmol/Lvs412.14±25.67）,（311.37±28.34）,（294.57±20.22）,（276.49±25.32）μmol/L,P〈0.05],但阿托伐他汀对LDH释放无明显影响.脑心通、阿托伐他汀均能明显抑制ox-LDL诱导的内皮细胞凋亡（P〈0.01）.结论：中药脑心通可促进内皮细胞NO释放,减轻内皮细胞的损伤与凋亡,是其保护血管内皮的可能机制.