诱导痰RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区甲基化在肺癌诊断中的价值

目的：探讨诱导痰中RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区异常甲基化及其联合检测在肺癌诊断中的价值。方法：采用甲基化特异性PCR（MSP）技术,检测82例肺癌患者诱导痰和对应肿瘤组织以及25例肺部良性病变组织中RASSF1A,p16和DAPK3种基因启动子区甲基化改变,并分析三者与临床病理资料的关系。结果：肺癌病理组织中RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区甲基化检出率分别为63.4%,59.8%和58.5%,对应的诱导痰三者甲基化检出率分别为54.9%,48.8%和51.2%;肺部良性病变组织中甲基化检出率均为零,两组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。RASSF1A基因甲基化检出率在中高分化和无淋巴结转移的肺癌中明显低于低分化和未分化及有淋巴结转移者（P〈0.05）,与年龄、性别、吸烟指数、临床分期及病理类型无关,而p16和DAPK基因甲基化检出率与上述因素均无明显相关性（P〉0.05）;联合检测3种基因甲基化的检出率为73.2%。结论：联合检测诱导痰中RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区高甲基化有可能作为诊断肺癌及评估预后的简便有效的指标,并能提高检出率。     

食管癌组织RASSF1A基因启动子区甲基化检测及其临床意义

目的探讨Ras相关结构域家族基因1A（RASSF1A）启动子区异常甲基化与食管癌发生发展的关系。方法采用甲基化特异性PCR方法,检测66例食管癌组织及相应的癌旁正常组织RASSF1A基因启动子区异常甲基化。分析食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化与临床病理特征的关系。结果在食管癌组织、癌旁正常组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化的发生率分别为48．5％（32／66）、6．1％（4／66）。淋巴结转移者食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化的发生率（61．1％）明显高于无淋巴结转移者（33．3％）（χ^2=5．055,P=0．025）;晚期（Ⅲ～Ⅳ期）食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化的发生率（69．2％）明显高于早期（Ⅰ～Ⅱ期）（35．0％）（χ^2=7．392,P=0．007）;食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化与肿瘤分化程度无相关性（P〉0．05）。结论食管癌组织中存在RASSF1A基因启动子区的异常甲基化,甲基化与食管癌病理分期和淋巴结转移有关。     

乳腺癌患者RASSF1A基因启动子区甲基化及临床意义

目的 探讨乳腺癌组织中RASSF1A（RAS association domain family 1A）基因启动子区CPG岛甲基化状态及临床意义。方法 用甲基化特异性PCR（MSP）检测40份乳腺癌组织和24份正常乳腺组织中RASSF1A基因启动子区甲基化状态。结果 乳腺癌组织中RASSF1A基因启动子区CPG岛甲基化率为45．0％（18／40），与正常乳腺组织比较差异有显著性（2／24）（P〈0.05），但与肿瘤病理类型、患者年龄、有无淋巴结转移的差异无显著性（P〉0．05）。结论 RASSF1A基因启动予区在乳腺癌中发生异常甲基化，为乳腺癌的候选基因。     

内蒙古地区ＲASSF 1A、P16、DAPK、ＲUNX3 基因甲基化在非小细胞肺癌中的研究

目的: 探讨内蒙古地区RASSF 1A、P16、DAPK、
RUNX 3 基因甲基化在非小细胞肺癌( nonsmall cell
lung cancer,NSCLC) 早期诊断及判断预后之间的关系。方法: 应用甲基化特异性PCR( ( methlation specific PCRMSP) 方法检测50 例NSCLC 病人和50 例健康人群外周血、30 例NSCLC 癌组织和30 例癌旁正常组织中RASSF
1A、P16、DAPK、RUNX 3 基因启动子区的甲基化率,分析NSCLC 病人与健康人群甲基化水平的差异,癌组织、癌
旁组织及外周血中各基因甲基化水平的差异,并分析年龄、性别、吸烟史、组织学类型及临床分期对基因启动子
区甲基化率的影响。结果: 肺癌组织中RASSF 1A、P16、DAPK 和RUNX 3 基因启动子区甲基化检出率分别为
66． 67%( 20 /30) 、56． 67%( 17 /30) 、63． 33%( 19 /30) 和56． 67%( 17 /30) ; 其对应的血浆标本中这4 个基因的甲基
化检出率分别为60． 00%( 30 /50) 、44． 00% ( 22 /50) 、60． 00% ( 30 /50) 和42． 00% ( 21 /50) ,两组标本甲基化检出
率存在着较好的一致性( P ＞ 0． 05) 。30 例癌旁正常组织标本和50 例健康人群血浆标本均未检测出基因甲基
化,与肺癌组比较差异有统计学意义( P ＜ 0． 05) 。RASSFIA 基因启动子区甲基化检出率与病人分化程度、淋巴
结转移有关( P ＜ 0． 05) ; P16 基因启动子区甲基化检出率与病人临床分期有关( P ＜ 0． 05) ;RUNX 3 基因启动子
甲基化与病人临床分期、分化程度、淋巴结转移有关( P ＜ 0． 05) 。结论: RASSF 1A、P16、DAPK、RUNX 3 基因启动
子区的甲基化与NSCLC 有关,检测外周血中RASSF 1A、P16、DAPK、RUNX 3 基因启动子区甲基化水平可能有助
于NSCLC 的早期预警、早期诊断与判断预后。     

多基因甲基化检测在尿路上皮癌中作用的研究

目的 探讨多基因甲基化检测在尿路上皮癌诊断中的价值.方法 应用甲基化特异性聚合酶链式反应检测36例膀胱尿路上皮癌和24例上尿路尿路上皮癌组织中GSTP1、APC、DKK-3、RASSF1A、DAPK、EDNRB、TNFRSF25、P16和MGMT共9种基因的甲基化状态.结果 在尿路上皮癌组织中RASSF1A、DAPK、EDNRB、TNFRSF25和P16基因异常甲基化的程度相对比较高,分别是83.3％、75.0％、85.0％、70.0％和55.0％,而APC、DKK-3、GSTP1和MGMT基因异常甲基化的程度相对较低,分别是3.3％、25.0％、23.3％和5.0％.甲基化程度与病理分级和分期没有显著关系(P＞0.05).在上尿路尿路上皮癌中,RASSF1A、DAPK、EDNRB、TNFRSF25和P16基因的甲基化率分别是91.7％、95.8％、83.3％、70.8％和33.3％,而在膀胱尿路上皮癌中,RASSF1A、DAPK、EDNRB、TNFRSF25和P16基因的甲基化率分别是77.8％、61.1％、91.7％、69.4％和69.4％.结论 在尿路上皮癌中RASSF1A、DAPK、EDNRB、TNFRSF25和P16基因甲基化过表达.DAPK和P16基因的甲基化检测可能有助于上尿路尿路上皮癌和膀胱尿路上皮癌的定位鉴别诊断.     

非小细胞肺癌患者血清死亡相关蛋白激酶基因启动子甲基化的分析

目的：分析非小细胞肺癌（NSCLC）患者血清中死亡相关蛋白激酶（DAPK）基因启动子区域甲基化的改变状况及其临床意义。方法：运用甲基化特异性PCR技术，检测65例NSCLC组患者血清DAPK基因启动子区域甲基化的改变情况，并分析与临床病理资料的关系。结果：NSCLC组患者血清DAPK基因甲基化检出率为30．8％（20／65），而对照组未检出，DAPK基因甲基化检出率与NSCLC病理类型、分期及转移状态无明显相关性。结论：DAPK基因启动子区域异常甲基化是NSCLC早期辅助诊断的分子标记物之一。     

非小细胞肺癌患者血清p16基因启动子甲基化分析

目的：分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中p16基因启动子区域甲基化状况及其临床意义。方法：运用甲基化特异性PCR技术，检测65例NSCLC患者血清p16基因启动子区域甲基化情况，并分析与临床病理资料的关系。结果：NSCLC患者血清p16基因甲基化检出率为43．1％(28／65)，而正常对照组和良性肺部疾病组未检出；p16基因甲基化检出率与NSCLC病理类型、分期及转移状态无明显关系。结论：p16基因启动子区域甲基化是NSCLC早期辅助诊断的分子标记物之一。     

卵巢癌组织和血清中RASSF1A基因甲基化的检测及临床意义

目的：检测卵巢肿瘤组织和血清中Ras相关区域家族1A（Ras association domain family 1A,RASSF1A）基因启动子区异常甲基化,并探讨其与卵巢癌的关系。方法：收集新鲜的卵巢癌组织及其对应的血清标本67例,采用半巢式甲基化特异性PCR技术分别检测肿瘤组织DNA和血清游离DNA中RASSF1A基因启动子异常甲基化情况。结果：卵巢癌患者血清和癌组织中RASSF1A基因甲基化的检出率分别为28.4%和40.3%。卵巢良性肿瘤组织和血清以及健康志愿者血清中均未发生RASSF1A基因甲基化。癌组织中RASSF1A基因的甲基化状况与血清中出现RASSF1A基因甲基化关系密切（P＜0.01）;卵巢癌患者血清和癌组织中RASSF1A基因的甲基化改变与肿瘤的临床分期、细胞分化程度、组织学类型无明显相关性（P＞0.05）;与淋巴结转移密切相关（P＜0.01）。结论：检测血清DNA 的RASSF1A基因异常甲基化有可能成为辅助卵巢癌诊断的有效方法之一。     

喉鳞状细胞癌中RASSF1A基因启动子区甲基化及蛋白表达

目的：探讨RASSF1A基因启动子区甲基化与喉癌的关系。方法：运用甲基化特异性PCR,检测RASSF1A基因在48例喉癌组织、相对应癌旁组织及48例正常人外周血中的启动子区甲基化情况。用Western blotting方法检测喉癌组织、癌旁组织及正常人外周血中RASSF1A表达情况。结果：在48例喉癌组织、相对应的癌旁组织和48份正常人外周血中,RASSF1A基因启动子区分别有34例（70.83%）、11例（22.92%）和6例（12.50%）发生了甲基化, 喉癌组织甲基化程度明显高于癌旁组织和正常人外周血（P<0.05）。在48例喉癌组织中27例（56.25%）不能正常表达RASSF1A蛋白,而相对应癌旁组织中仅有8例（16.67%）,喉癌组织中RASSF1A蛋白的表达程度明显低于癌旁组织(P<0.01)。启动子区发生甲基化的34例喉癌组织中共有25例（73.53%）呈弱阳性,而7例未发生甲基化的喉癌组织中为1例（14.29%）,两组间比较差异具有显著性(P<0.05)。结论：RASSF1A基因启动子区甲基化与喉癌的发生有关,有望成为喉癌诊断的分子标志。     

乳腺癌组织及血浆中RASSF1A,CDH1甲基化的检测及临床意义

目的 研究乳腺癌组织、乳腺良性肿瘤组织及相应患者血浆中Ras相关区域家族1A(RASSF1A)、上皮型钙黏附素(CDH1)基因启动子区异常甲基化状态及其临床意义.方法 应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法对乳腺癌组织、乳腺良性肿瘤组织及相应血浆中RASSF1A,CDH1基因甲基化状态进行检测.结果 34例乳腺癌组织RASSF1A基因启动子甲基化率为73.53%(25/34),CDH1基因启动子甲基化率为50.00%(17/34),相应血浆中RASSF1A的甲基化检出率为55.88%(19/34);CDH1的甲基化检出率为35.29%(12/34);联合检测血浆中RASSF1A和CDH1基因启动子区甲基化的敏感性为64.71%(22/34);而25例良性肿瘤组织RASSF1A基因启动子甲基化率为12.00%(3/25),CDH1基因启动子甲基化率为4.00%(1/25),相应血浆中未检测出甲基化的RASSF1A和CDH1基因.RASSF1A,CDH1甲基化率与肿瘤病理类型、患者年龄、有无淋巴结转移的差异无显著性(P>0.05).结论 联合检测血浆中RASSF1A和CDH1基因启动子区甲基化,可用于乳腺癌的辅助诊断.     

非小细胞肺癌组织中RASSF_(1A)和p16基因启动子甲基化研究

目的:研究肺癌新型侯选抑癌基因Ras相关结构域家族基因1A(RASSF1A)和p16基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中的甲基化情况,揭示两基因表达失活的机制,为NSCLC的基因诊断和治疗寻找新途径。方法:用甲基化特异性PCR(MSP)方法对96例NSCLC患者癌组织及相应的远癌正常肺组织中RASSF1A和p16基因启动子甲基化状态进行检测。结果:(1)96例NSCLC组织RASSF1A甲基化率48.96%,p16基因34.38%,96例远癌正常肺组织均未发现此两基因甲基化。(2)RASSF1A甲基化率鳞癌组(64.29%)高于腺癌组(37.04%,P<0.05);p16基因甲基化率50岁以上组(44.93%)高于50岁以下组(7.41%,P<0.05),鳞癌(61.90%)高于腺癌(12.96%,P<0.05),有淋巴结转移组(46.67%)高于无淋巴结转移组(13.89%,P<0.05)。(3)RASSF1A与p16基因启动子CPG岛甲基化呈正相关(r=0.256,P<0.05)。结论:RASSF1A和p16在NSCLC尤其是鳞癌中频繁甲基化,可能是两基因表达失活的主要原因。     

甲基化特异性PCR检测肺癌p16基因甲基化及其临床意义

目的 :探讨甲基化特异性聚合酶链反应 ( MSPCR)在肺癌临床诊断中的应用价值。方法 :选取 5 6例肺部疾病住院患者手术切除的病变肺组织和相应的支气管肺泡灌洗液( BALF)及痰标本 ,其中 32例为肺癌 ,2 4例为良性肺部疾病。标本经一般处理 ,PCR扩增后 ,产物经电泳 EB染色 ,紫外灯下观察。结果 :32例肺癌组织标本中 ,1 4例 ( 4 3.8% )在 p1 6基因启动子区域呈现异常甲基化 ,其中 9例 ( 64.3% )在相应的 BALF中检出甲基化存在 ,5例 ( 35 .8% )在相应的痰标本中也检出甲基化存在。良性肺部疾病 2 4例 ,其中肺囊肿 1 0例 ,肺结核 1 4例 ,无论在手术切除标本还是 BALF和痰标本中均未检出 p1 6基因甲基化存在。结论 :MSPCR技术对肺癌患者 BALF及痰标本中的异常甲基化检测具有高度特异性 ,是一项很有潜力的肺癌早期诊断新技术。     

纤维支气管镜联合p16基因甲基化检测对肺癌的诊断价值

对42例肺癌患者和25例肺部良性病变患者行纤维支气管镜检查,并利用甲基化特异性PCR方法检测外周血血浆、痰液、支气管肺泡灌洗液中p16基因甲基化状态。42例确诊肺癌患者p16基因异常,甲基化阳性数在血浆、痰液和支气管肺泡灌洗液中分别为22例（52．4％）、20例（47．6％）和25例（59．5％）,各标本的阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）;25例良性病变者中除1例在血液中检测到异常甲基化外,均未检测到p16基因的异常甲基化。经纤维支气管镜确诊25例,敏感度、特异性和准确性分别为59．5％、100．0％和74．6％;纤维支气管镜联合p16基因甲基化检测后敏感度、特异性和准确性分别为92．9％、96．2％和94．0％。     

肺癌病人痰细胞中p16基因高甲基化分析

目的　分析肺癌病人痰标本中p16基因启动子区域异常高甲基化的改变情况 ,评价该指标作为肺癌辅助诊断分子标记物的价值。方法　运用半巢式甲基化特异性PCR技术 ,检测 94例原发性肺癌病人痰标本和部分对应肿瘤组织 ,以及 10例慢性炎病例痰标本中p16基因启动子区域的甲基化改变。结果　 74%的肺癌病人痰标本中检测到了p16基因异常高甲基化 ,与传统细胞学相比 ( 4 6.8%) ,痰标本中p16基因异常高甲基化对肿瘤的检出率灵敏度更高 (P <0 .0 1) ;痰细胞中p16甲基化检测和细胞学相结合 ,对肿瘤的检出率可达 86.17%( 81 94)。如果痰标本中p16基因启动子区域发生高甲基化 ,其对应的肿瘤组织中p16基因亦为高甲基化。 10例慢性炎病人痰标本中仅 3例检测出p16基因甲基化。结论　痰标本中p16基因甲基化是临床肺癌辅助诊断的有效分子生物标记物之一。     

肺癌组织、支气管肺泡灌洗液及痰标本中p16基因甲基化特异性PCR检测

目的：探讨肺癌组织、支气管灌洗液及痰标本中p16基因甲基化特异性PCR检测的临床应用价值。方法：选取56例肺部疾病住院患者手术切除的病变肺组织和相应的支气管肺泡灌洗液(BALF)及痰标本，其中32例为肺癌，24例为良性肺部疾病。标本经一般处理，PCR扩增后，产物经电泳EB染色，紫外灯下观察。结果：32例肺癌组织标本中，14例(43．8％)在p16基因启动子区域呈现异常甲基化，其中9例(64．3％)在相应的BALF中检出甲基化存在，5例(35．8％)在相应的痰标本中也检出甲基化存在。24例良性肺部疾病，其中肺囊肿10例，肺结核14例，无论在手术切除标本还是BALF和痰标本中均未检出p16基因甲基化存在。结论：MSP技术对肺癌患者BALF及痰标本中p16基因的异常甲基化检测具有高度特异性，是一项很有潜力的肺癌早期诊断新技术。     

p16基因甲基化检测指导非小细胞肺癌放疗靶区设计的初步探讨

目的探讨利用肺癌组织、癌旁组织p16基因甲基化的差异来指导精确放疗的临床价值。方法选取33例肺部疾病住院病人手术切除的肺组织标本,其中29例为肺癌,4例为良性肺部疾病。采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSPCR)法检测其p16基因甲基化状态。结果29例肺癌组织标本中12例(41.4%)在p16基因启动子区域呈现异常甲基化,近癌旁组织、远癌旁组织标本中均未检测出甲基化存在。4例良性肺部疾病中肺脓肿1例,肺炎性假瘤3例,手术切除标本中均未检测出甲基化存在。结论MSPCR技术对肺癌病人标本中的异常甲基化检测具有特异性,可进一步应用于肺癌生物靶区设计的探讨。     

RASSF1A和APC基因启动子区甲基化与前列腺癌的关系

目的研究Ras相关区域家族1A (Ras association domain family 1 isoform A,RASSF1A)及结肠腺瘤性息肉病(adenomatosis polyposis coli,APC)基因启动子区CpG甲基化及与前列腺癌(PCa)之间的关系,探索PCa早期诊断的检测方法。方法收集60例PCa和40例前列腺增生(BPH)病例的组织标本及其相关的临床指标。应用亚硫酸氢盐修饰后测序法检测PCa组织及BPH组织中RASSF1A、APC基因启动子区CpG甲基化情况。结果PCa组RASSF1A、APC基因CG位点甲基化率高于BPH组(60.8% vs 14%,48.84% vs 1.19%,P＜0.05);基因甲基化率与PSA、Gleason评分、病理分期和PCa危险分期关系密切(P＜0.01);RASSF1A及APC基因甲基化联合检测用于判断PCa及BPH的敏感度和特异度是95.74%和82.9%。结论RASSF1A、APC基因启动子区甲基化与PCa发生及发展有关,其甲基化率的变化与PCa的危险分期关系密切。检测前列腺组织中相关基因甲基化状态,有望成为诊断早期PCa的一种方法。