LncRNA H19对大鼠胰腺腺泡细胞AR42J细胞凋亡的影响

目的 研究长链非编码RNA(LncRNA) H19对雨蛙素刺激的大鼠胰腺腺泡细胞AR42J细胞凋亡的影响.方法 在体外通过用雨蛙素刺激AR42J细胞建立AP模型,采用qRT-PCR和Western blot检测沉默以及过表达H19后凋亡相关基因Caspase 3及Caspase 9的mRNA和蛋白表达水平;流式细胞术检测各组细胞的凋亡率.结果 H19沉默后,凋亡相关基因Caspase 3及Caspase 9的mRNA和蛋白水平下降,细胞凋亡率也相对减少(P＜0.05);而过表达H19后,Caspase 3及Caspase 9的mRNA和蛋白水平增加,细胞凋亡率也是升高的(P＜0.05).结论 沉默LncRNA H19可减少雨蛙素诱导的胰腺腺泡细胞凋亡,提示其可能成为治疗急性胰腺炎的潜在有效靶点.     

LncRNANNT-AS1对胃癌细胞增殖、凋亡作用机制研究

目的探讨LncRNANNT-AS1对胃癌细胞增殖、凋亡的作用机制。方法采用实时荧光定量PCR法检测胃癌细胞系KATO-III、NUGC-3、AGS、N87及正常胃成纤维细胞系NSFC中LncRNANNT-AS1的表达水平;将KATO-III细胞系分成对照组、sh-vector组及sh-NNT-AS1组,分别不感染慢病毒、感染阴性shRNA慢病毒及感染lenti-sh-NNT-AS1慢病毒。采用MTT实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Westernblot检测细胞凋亡蛋白Caspase3、8、9的表达水平,并进行组间比较。结果胃癌细胞系KATO-III、NUGC-3、AGS、N87LncRNANNT-AS1的表达水平均明显高于正常胃成纤维细胞系NSFC（均P＜0.01）。细胞培养12、24、48、72h后,相比sh-vector组、对照组,sh-NNT-AS1组吸光度值（OD490值）明显降低（均P＜0.05）。细胞培养7d后,sh-NNT-AS1组克隆形成数明显低于sh-vector组、对照组（均P＜0.05）。sh-NNT-AS1组细胞凋亡率明显高于sh-vector组、对照组（均P＜0.01）。sh-NNT-AS1组细胞凋亡蛋白Caspase3、9表达水平均高于sh-vector组（均P＜0.05）,而Caspase8表达水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论LncRNANNT-AS1促进胃癌细胞增殖,抑制凋亡,机制可能与上调凋亡蛋白Caspase3、9表达有关。     

人质膜型唾液酸酶对丁酸钠诱导细胞凋亡的影响及其机制

目的：研究人质膜型唾液酸酶(hmSD)对丁酸钠(NaBT)诱导人雄激素非依赖型前列腺癌细胞(PC3细胞)凋亡的影响及其可能机制。方法：以前列腺癌细胞PC3和稳定转染hmSD的前列腺癌细胞(PC3-hmSD)为靶细胞,分别设对照组、NaBT 2.5 mmol•L^-1组、NaBT 5.0 mmol•L^-1组、NaBT 10.0 mmol•L^-1组,采用MTT法检测细胞存活率,吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色方法检测细胞凋亡情况,DCFH-DA激光共聚焦法检测细胞内ROS,Western blotting方法检测Bcl-XL、P65和Caspase 9蛋白表达。结果：① NaBT作用48和72 h时,PC3-hmSD细胞的生存率明显高于PC3细胞（P<0.05）;② NaBT 5.0 mmol•L^-1作用4 h,PC3-hmSD组细胞凋亡数明显少于PC3细胞（P<0.05）;③ NaBT诱导细胞内活性氧产生,PC3-hmSD细胞与PC3细胞比较差异无显著性;④ NaBT作用下,与PC3细胞比较,PC3-hmSD细胞Bcl-XL、P65蛋白表达水平增强,而 Caspase 9蛋白表达水平减低（P<0.05）。结论：① hmSD具有抵抗NaBT诱导细胞凋亡的作用;② hmSD对NaBT诱 导活性氧产生无抑制作用;③ hmSD抗凋亡作用可能与Bcl-XL和P65表达上调、Caspase 9表达下调有关。     

过表达miR-29a对人椎间盘退变髓核细胞凋亡的影响

目的 探讨miR-29a在人椎间盘退变髓核(NP)细胞凋亡的调控作用.方法 体外培养椎间盘退变NP细胞,构建重组真核表达质粒cherry/miR-29a,脂质体Lipofectamine转染进入NP细胞,应用反转录实时定量PCR(RT-qPCR)检测NP细胞中miR-29a的表达变化,Western blot法检测凋亡相关蛋白Caspase-3前体的表达变化,流式细胞仪检测NP细胞凋亡水平变化.结果 NP细胞转染重组质粒cherry/miR-29a 48 h后,NP细胞中miR-29a的表达水平较NP细胞和转染空质粒的NP细胞中的miR-29a明显升高(P＜0.05);凋亡相关蛋白Caspase 3前体的水平则明显下降(P＜0.05);NP细胞凋亡水平明显升高(P＜0.05).结论 在椎间盘NP细胞中过表达miR 29a能促进NP细胞凋亡,其机制可能是通过Caspase3途径起作用.     

Borna disease virus inhibits proliferation and induces apoptosis in human oligodendrocyte in vitro

目的 探讨博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)感染对人少突胶质细胞(oligodendrocytes,OL)增殖与凋亡的影响.方法 用BDV感染OL细胞,免疫荧光检测OL细胞中博尔纳病病毒P40蛋白的表达,CCK8测定法观察细胞的生长增殖情况,用流式细胞技术检测细胞的凋亡情况和周期变化,Western blot检测凋亡指标Bax、Bcl-2的相对表达量.结果 与阴性对照组细胞比较,感染组在博尔纳病病毒感染少突胶质细胞第3天时,免疫荧光能够检测到P40蛋白的表达.随着感染时间的增加,BDV感染的OL细胞增殖能力下降(P＜0.05),且通过流式细胞仪检测到病毒感染3d后,细胞出现凋亡增多.流式细胞仪检测结果显示,与对照组比较,感染细胞周期G2期延迟(P＜0.05),细胞增殖指数降低(P＜0.05).Western blot检测结果显示,与对照组比较,感染细胞促凋亡蛋白Bax表达量增加(P＜0.05),抑凋亡蛋白Bcl-2表达量下降(P＜0.05).结论 BDV感染可以抑制OL细胞增殖,并能通过上调Bax蛋白及下调Bcl-2蛋白表达量,诱导细胞凋亡的发生.     

苦瓜核糖体失活蛋白诱导HL-60细胞发生凋亡及其分子机制的研究

目的　探讨苦瓜核糖体失活蛋白 (Ribosomalinactivatingprotein ,RIP)诱导HL 60细胞凋亡的活性 ,以及对HL 60细胞Bcl 2、Bax、caspase 3表达变化的影响及其分子机制。方法　以一定浓度苦瓜RIP处理HL 60细胞 2 4～ 72h ,用TUNEL法检测细胞凋亡。运用RT PCR和Westernblot免疫印记法检测Bcl 2、Bax、caspase 3mRNA和蛋白表达的变化。结果　苦瓜RIP在一定作用浓度下可使HL 60细胞发生凋亡 ,且随着作用时间的延长凋亡细胞比例逐渐升高。在此过程中 ,HL 60细胞的caspase 3mRNA的表达及其胞内活性亚单位水平显著升高 (P <0 .0 5 ) ,Bcl 2mRNA表达变化虽不显著 ,但其蛋白水平明显降低 (P <0 .0 5 ) ,与此同时 ,BaxmRNA和蛋白表达均有所上调。结论　在苦瓜RIP诱导的HL 60细胞凋亡中 ,caspase 3发挥了极为重要的作用 ,而Bcl 2和Bax可能通过其表达量的变化、转录后调节等方式对细胞凋亡发挥重要的调控功能     

PTEN基因表达对甲状腺癌BCPAP和FTC133细胞凋亡以及ERK和AKT表达的影响

  目的  探讨PTEN基因表达对甲状腺癌BCPAP细胞和FTC133细胞凋亡以及信号通路蛋白ERK和AKT表达的影响。  方法  BCPAP细胞和FTC133细胞经PTEN-pCMV6转染和si-PTEN RNA干扰后，光镜下观察细胞形态变化，MTT检测细胞活力，Annexin V-FITC和PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡率，Western blot检测Caspase 8、9、12、3、Bax、Bcl-2、ERK和AKT的表达水平，分析PTEN基因的不同表达与甲状腺癌BCPAP和FTC133细胞凋亡以及信号通路蛋白表达的关系。  结果  与对照组相比较，甲状腺癌BCPAP和FTC133细胞在PTEN基因过表达时，光镜下均出现细胞变形、体积缩小、核固缩等凋亡改变，细胞活力降低（P < 0.01），细胞凋亡率增加（P < 0.01），凋亡蛋白Caspase 8、9、12、3以及促凋亡蛋白Bax表达量增加（P < 0.01），抗凋亡蛋白Bcl-2表达量减低（P < 0.01），ERK和AKT表达量均较对照组减低（P < 0.05），ERK的相对表达量在FTC133细胞的减低程度显著高于BCPAP细胞（P < 0.01），AKT的相对表达量减低程度在BCPAP和FTC133，差异无统计学意义（P > 0.05）；PTEN基因干扰表达减低时，光镜下BCPAP和FTC133细胞数目、细胞形态、体积及细胞核形态变化、细胞活力和细胞凋亡率变化，差异无统计学意义（P > 0.05）；凋亡蛋白Caspase 8、9、12、3以及促凋亡蛋白Bax表达量减低（P < 0.01），抗凋亡蛋白Bcl-2表达量增加（P < 0.01），FTC133细胞ERK和AKT表达量分别较空白对照组均为增高（P < 0.01），BCPAP细胞ERK表达量较对照组增高（P < 0.01）。而AKT表达量与对照组比较，差异无统计学意义（P > 0.05），ERK的相对表达量增高程度在BCPAP和FTC133，差异无统计学意义（P > 0.05），AKT的相对表达量在FTC133细胞的增高程度显著高于BCPAP细胞（P < 0.05）。  结论  PTEN基因可促进BCPAP和FTC133细胞凋亡，线粒体途径、死亡受体途径和内质网激活通路均参与BCPAP和FTC133细胞凋亡的过程，ERK在PTEN基因调控BCPAP细胞凋亡发挥重要作用，而AKT和ERK均参与PTEN基因促进FTC133凋亡的过程。     

新城疫病毒诱导结肠癌Caco2细胞株发生Caspase和p38MAPK依赖性诱凋亡

目的研究新城疫病毒(newcastle disease virus, NDV)毒株FMW(NDV/FMW)诱导结肠癌Caco2细胞发生凋亡及其机制。方法通过病毒滴度法测定病毒在细胞内复制情况;CCK8法检测细胞存活率;显微镜下观察细胞形态学的变化;Western印迹法检测细胞凋亡相关蛋白Caspase3、PARP及MAPK下游信号通路相关p38、JNK、Erk1/2蛋白表达水平。结果NDV/FMW在Caco2细胞内复制,降低2D及3D培养Caco2细胞存活率（P＜0.001）;NDV/FMW诱导Caco2细胞中裂解的Caspase3(cleaved-Caspase3)及PARP裂解片段(cleaved-PARP)增加,泛Caspase抑制剂预处理降低Caspase3及PARP裂解片段表达水平;NDV/FMW感染组Caco2细胞磷酸化p38和磷酸化JNK较对照组增加,磷酸化ERK1/2及总p38、JNK、ERK1/2蛋白水平无显著增加;与NDV/FMW感染组相比较,p38抑制剂预处理组凋亡相关蛋白表达水平显著减低,但JNK抑制剂预处理组凋亡相关蛋白表达水平没有显著变化。结论NDV/FMW诱导结肠癌Caco2细胞发生Caspase和p38MAPK依赖性细胞凋亡。     

孤儿受体ROR2诱导慢性髓细胞白血病细胞株K562凋亡的研究

目的 研究ROR2抑制慢性髓细胞白血病细胞株K562增殖并诱导其凋亡的作用,初步探讨可能的机制.方法 采用重组ROR2腺病毒(AdROR2)感染K562细胞为实验组,重组RFP腺病毒(AdRFP)感染K562细胞为对照组.采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期变化和细胞凋亡.Western blot检测实验组和对照组促凋亡基因caspase3和抗凋亡基因survivin的表达.结果 与对照组比较,实验组ROR2感染K562细胞48 h后,细胞增殖明显受抑(P＜0.05),细胞周期主要阻滞在G2/M期(P＜0.05),细胞凋亡增多,48 h凋亡显著(P＜0.05),同时促凋亡蛋白caspase3表达升高(P＜0.05),抗凋亡蛋白survivin表达下降(P＜0.05).结论 过表达ROR2能够抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调了促凋亡蛋白caspase3和下调了抗凋亡蛋白survivin表达有关.     

TRAF6通过内源性凋亡通路促进卡介苗诱导的巨噬细胞凋亡

目的 探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）对卡介苗（BCG）诱导巨噬细胞凋亡的调控作用。方法 Q-PCR检测活动性结核患者外周血中TRAF6的表达后利用不同感染复数的BCG感染RAW264.7细胞,在感染的不同时间通过Q-PCR和Western blot检测巨噬细胞中Caspase 3和TRAF6的表达。时间梯度试验处理组分为5组：对照组（未感染,C）、BCG感染6 h组、12 h组、18 h组和24 h组;感染复数试验处理组分为5组：对照组（未感染,C）、5 MOI组、10 MOI组、15 MOI组和20 MOI组。随后,通过小干扰RNA技术敲减RAW264.7细胞中TRAF6的表达,并结合BCG感染建立TRAF6敲减模型。TRAF6敲减实验分为4组：阴性对照组（NC）、BCG单独感染组（BCG）、TRAF6小干扰RNA单独处理组（siRNA）和TRAF6小干扰RNA与BCG共处理组（siRNA+BCG）。利用平板涂布法检测巨噬细胞菌载量变化。通过流式细胞术检测巨噬细胞凋亡率和线粒体膜电位变化。利用Western blot检测TRAF6、Caspase 3、PARP、Bcl-2,BAX的表达。使用免疫荧光技术检测TRAF6与Caspase 3的表达。结果与健康人群相比,活动性结核患者外周血中TRAF6高表达（P<0.001）。BCG感染显著上调RAW264.7中TRAF6与Caspase 3的表达,且当感染时间为18 h（P=0.03,P=0.04）,感染复数为15时二者表达量最高（P<0.001,P<0.001）。敲减TRAF6上调BCG感染的巨噬细胞内的菌载量（P=0.05）。与BCG单独处理组相比,敲减TRAF6显著抑制BCG感染的巨噬细胞凋亡率（P<0.001）,并显著下调Caspase 3（P=0.002）和PARP的表达（P<0.001）。同时,BCG感染RAW264.7细胞的线粒体膜电位上升（P<0.001）,而敲减TRAF6抑制BCG感染的巨噬细胞线粒体膜电位（P<0.001）。敲减TRAF6显著下调BCG感染巨噬细胞中BAX表达（P=0.005）的同时上调Bcl-2的表达（P=0.04）。结论 TRAF6通过内源性凋亡通路促进BCG感染的巨噬细胞凋亡。     

白细胞介素-4在脂多糖诱导急性肺损伤模型中的保护作用

  目的  探讨白细胞介素-4（IL-4）在急性肺损伤（acute lung injury,ALI）中的保护作用。  方法  脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导A549细胞形成ALI细胞模型。使用不同浓度的IL-4（0.1 μg/mL、1 μg/mL、10 μg/mL）在不同时长下干预该模型,通过流式细胞术检测A549细胞凋亡率,ELISA法测定A549细胞分泌IL-1、IL-6、IL-10、TNF-α、TNF-γ情况。  结果  IL-4可降低ALI模型中A549细胞凋亡率、抑制Caspase3表达（P < 0.05）,其效果随IL-4浓度增加及干预时长延长而加强;同时促进Bcl-2表达（P < 0.05）,IL-4浓度1 μg/mL干预12 h时效果最佳。上述条件下,IL-4可降低ALI模型中A549细胞的IL-1、IL-6、TNF-α、TNF-γ,并增加IL-10（P < 0.05）。  结论  IL-4可以通过改善ALI体外模型中细胞因子分泌情况,在急性肺损伤中发挥正向调节作用。     

腺病毒55型对人肠道细胞感染性的实验研究

  目的  明确腺病毒55型（HAdV-55）对人肠道细胞的感染性。  方法  体外培养人结直肠腺癌细胞Caco-2,以HAdV-3、7、14和55感染,免疫荧光法检测感染细胞内病毒蛋白的表达,荧光定量PCR方法检测不同时间点细胞内和上清中病毒DNA水平,采用腺病毒敏感细胞株HEp-2感染实验检测Caco-2细胞上清中感染性病毒颗粒水平。  结果  免疫荧光检测结果显示,感染48 h后,Caco-2细胞内HAdV-55病毒蛋白表达为阳性。HAdV-3、7、14、55在Caco-2细胞内均能持续复制和增殖,感染细胞内和上清中病毒DNA水平随感染时间的增加而升高,并且HAdV-55病毒DNA水平明显高于HAdV-3、7和14型。Caco-2上清中HAdV-55感染性病毒颗粒高于HAdV-3、7和14,差异有统计学意义（P<0.05）。采用低剂量病毒〔1×半数组织培养感染剂量（TCID₅₀）〕感染Caco-2细胞,HAdV-55感染孔细胞病变效应（CPE）比HAdV-3、7和14感染孔细胞显著。  结论  人呼吸道病毒HAdV-55对肠道细胞易感,感染水平高于其他常见的呼吸道感染腺病毒3、7和14型。     

抑制硬脂酰辅酶A去饱和酶1表达对乳腺癌细胞增殖和周期的影响

  目的  检测硬脂酰辅酶A去饱和酶1(stearoyl-CoA desaturase 1,SCD1)在乳腺癌细胞中的表达,分析抑制SCD1对乳腺癌MCF-7细胞增殖和周期的影响及机制。  方法  采用蛋白质印迹法检测乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231及正常人皮肤成纤维细胞株HSF中SCD1的表达。应用SCD1特异性抑制剂MF-438干预MCF-7细胞,采用MTS法测定细胞增殖的抑制率,计算IC₅₀值;采用PI染色流式细胞术分析细胞周期分布,蛋白质印迹法检测特异性周期蛋白Cyclin D1、Akt、pAkt、pAMPK、pACC蛋白的表达。  结果  乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞中SCD1的表达高于人皮肤成纤维细胞HSF细胞(P＜0.05)。MF-438在100 nmol/L~100 μmol/L浓度范围内,抑制低血清培养下的MCF-7细胞的增殖,并显示出显著的剂量依赖性,IC₅₀值为(3.9±0.45) μmol/L。5 μmol/L MF-438干预MCF-7细胞后,处于细胞周期中S期和G₂/M期的细胞比例减少(P＜0.01),G₀/G₁期细胞比例增加(P＜0.01),Cyclin D1的表达水平降低(P＜0.01);同时,pAkt及pAkt/Akt表达下降(P＜0.05),pAMPK及pACC表达水平升高(P＜0.05)。  结论  SCD1在乳腺癌的发生和发展中发挥重要作用,抑制SCD1活性能通过下调Akt通路、活化AMPK通路,阻滞乳腺癌细胞周期进展,抑制细胞增殖。     

金丝桃苷改善雷公藤诱导的POI小鼠卵巢储备的作用及机制

  目的  探讨金丝桃苷（Hyperin）对雷公藤苷（TG）诱导的早发性卵巢功能不全（POI）小鼠卵巢储备的改善作用及机制。  方法  以成年雌性BALB/c小鼠为研究对象,随机分为对照组、POI模型组和Hyperin治疗组,每组40只。雷公藤苷40 mg/kg,每日2次,灌胃2周,构建POI小鼠模型,Hyperin治疗组于造模后给予Hyperin 75 mg/(kg·d),灌胃4周。称取小鼠体质量,计算性腺指数。HE染色观察卵巢组织学改变,计算各级卵泡数量。ELISA法检测血清雌二醇（E₂）、促卵泡生成素（FSH）、抗苗勒管激素（AMH）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）的水平。RT-qPCR和Western blot分别检测卵巢颗粒细胞中核因子E2相关因子2（Nrf-2）、血红素氧化酶-1（HO-1）、Caspase3、Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白水平,Western blot检测颗粒细胞中磷酸化磷脂酰肌醇-3-羟激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的蛋白水平。H2DCFDA探针法检测颗粒细胞活性氧簇（ROS）水平。TUNEL法检测颗粒细胞凋亡水平。  结果  与POI模型组相比,Hyperin治疗组小鼠体质量和性腺指数均上升（P<0.05）;卵巢病理损伤减轻,各级卵泡数和黄体数均增加（P<0.05）;血清E₂、AMH、SOD、CAT水平升高,FSH水平降低（P<0.05）;卵巢颗粒细胞中的Nrf-2、HO-1、p-PI3K、p-Akt、Bcl-2表达上升,Caspase3、Bax表达下降（P<0.05）;ROS水平降低（P<0.05）;TUNEL显示颗粒细胞凋亡降低（P<0.05）。  结论  Hyperin通过Nrf-2/HO-1抗氧化应激和PI3K/Akt抗凋亡途径改善TG诱导的POI小鼠卵巢储备功能的下降。     

肿瘤坏死因子α诱导蛋白3在胶质瘤中的表达特性及其对胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响

  目的  探讨肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(TNFAIP3)在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞侵袭、迁移的影响。  方法  采用实时荧光定量法(qRT-PCR)检测人星形胶质细胞NHA和胶质瘤细胞株U87、U251、SNB19、T98和LN229中TNFAIP3的表达,以U87和SNB19为实验对象。使用阳离子脂质体Lipofectamine 2000介导小干扰RNA(siRNA)转染U87和SNB19以下调TNFAIP3的表达;采用Transwell检测下调TNFAIP3对U87及SNB19侵袭的影响;运用划痕实验检测下调TNFAIP3对U87及SNB19迁移的影响。  结果  和NHA(0.144±0.008)相比,TNFAIP3在U87(1.380±0.066)、U251(0.663±0.062)、SNB19(1.405±0.032)、T98(1.002±0.068)、LN229(0.667±0.027)中的表达均升高(均P＜0.05)。si-TNFAIP3转染U87及SNB19可下调TNFAIP3的表达,继续培养24 h,U87及SNB19侵袭和迁移能力均下降(均P < 0.05)。  结论  TNFAIP3在胶质瘤中高表达,TNFAIP3可促进U87及SNB19的侵袭和迁移,si-TNFAIP3可抑制胶质瘤细胞的侵袭和迁移。      

肽基脯氨酰同分异构酶（Pin1）对子宫颈癌细胞脂质代谢的作用

  目的  探讨肽基脯氨酰同分异构酶（Pin1）蛋白对宫颈癌细胞脂质代谢的作用。  方法  应用免疫组织化学方法检测Pinl和ACC1蛋白在女性慢性宫颈癌及宫颈癌组织的表达；Western blotting技术和RT-PCR技术检测Pin1基因在宫颈癌SiHa、C33a及H8细胞中的蛋白本底表达情况，采用RNA干扰技术下调子宫颈癌C33a细胞中Pin1的表达；Western blotting技术检测宫颈癌细胞中Pin1蛋白表达水平变化对ACC1蛋白表达的影响；脂溶性荧光染色（BODIPY493/503）观察转染Pin1低表达慢病毒前后宫颈癌细胞中性脂肪含量的变化。  结果  与慢性宫颈炎相比，宫颈癌组织中Pin1和ACC1蛋白表达明显上调（P < 0.05），两者在宫颈癌组织中的表达呈正相关（χ2 = 6.02，P < 0.05）。与C33a细胞相比，SiHa细胞中Pin1蛋白的表达水平较低，故选用C33a细胞转染Pin1低表达慢病毒。C33a细胞转染Pin1低表达慢病毒后，Pin1及ACC1蛋白表达水平明显降低（P < 0.05），与正常对照组和阴性对照组比，转染Pin1低表达慢病毒的细胞内中性脂肪酸含量降低。  结论  Pin1蛋白的表达参与宫颈癌细胞内的脂质代谢，具体调控机制尚待研究。     

纳米二氧化硅通过PI3K/AKt信号通路影响肺泡巨噬细胞凋亡的研究

  目的  探讨磷脂酰肌醇激酶-3/蛋白激酶B（phosphatidyl inositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKt）信号通路对纳米二氧化硅（nano silica,NS）粉尘诱导肺泡巨噬细胞（alveolar macrophages,AM）凋亡发生的影响。  方法  通过不同质量浓度的NS粉尘染毒AM细胞后,CCK-8法检测细胞存活率;荧光显微镜观察细胞形态;流式细胞术检测PI3K抑制剂LY294002预处理前后细胞的凋亡率与线粒体膜电位;Western blot法检测PI3K抑制剂LY294002预处理前后细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2以及磷酸化（p）-PI3K、p-AKt的表达水平。  结果  NS可降低AM细胞的存活率,部分细胞出现凋亡形态学改变;LY294002预处理AM后,线粒体膜电位水平的下降程度增加,并下调Bcl-2、p-PI3K、p-AKt蛋白的表达,同时上调Bax蛋白的表达,增加细胞凋亡率。  结论  PI3K/AKt信号通路可能参与了NS诱导AM细胞的凋亡过程。     

组蛋白乙酰化激活人脑胶质瘤中胶质细胞源性神经营养因子转录的机制研究

  目的  研究组蛋白乙酰化对人脑胶质瘤中胶质细胞源性神经营养因子基因(GDNF)的表达调控和具体机制。  方法  取正常人脑组织、低级别胶质瘤脑组织(LG-glioma)、高级别胶质瘤脑组织(HG-glioma)各6例。用组蛋白乙酰化酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制处理人脑神经胶质瘤U251细胞。实时荧光定量PCR检测脑组织及细胞中的GDNF mRNA水平,染色质免疫共沉淀(ChIP)-PCR检测GDNF启动子区转录因子cAMP应答元件结合蛋白(CREB)结合位点的H3K9乙酰化水平,以及转录因子CREB与GDNF启动子区的结合能力,同时检测组蛋白乙酰化酶和脱乙酰化酶抑制剂对转录因子CREB结合能力和GDNF表达的影响。  结果  与正常脑组织和低级别脑胶质瘤组织比较,高级别胶质瘤组织的GDNF mRNA水平高(P < 0.01),GDNF启动子区的H3K9乙酰化水平增加(P < 0.01),且GDNF启动子上CREB结合区的乙酰化水平高于非CREB结合区的乙酰化水平(P < 0.01)。高级别胶质瘤组织中CREB与GDNF启动子区的结合能力高于正常脑组织和低级别脑胶质瘤组织(P < 0.05)。组蛋白乙酰化酶抑制剂处理U251细胞后,GDNF启动子上CREB结合区的乙酰化水平下降,CREB与GDNF启动子结合活性下调,并下调GDNF mRNA和蛋白水平,而组蛋白去乙酰化酶抑制剂具有相反作用(P < 0.01)。  结论  组蛋白乙酰化通过促进转录因子CREB与GDNF基因启动子区的结合,从而促进胶质瘤中GDNF的高转录。