二甲双胍对饱和脂肪酸诱导的大鼠H9C2型心肌细胞损伤的保护作用研究

目的 探讨二甲双胍(Met)对饱和脂肪酸所诱导的大鼠H9C2型心肌细胞损伤作用的保护机制.方法 在对照、棕榈酸(PA)及3种不同浓度梯度Met与PA联合组培养液中培养大鼠H9C2型心肌细胞株24 h.采用蛋白质印迹法(Western blot)测定各组细胞核因子κB(NF-κB)p65、细胞间黏附因子(ICAM1)、磷酸化核因子κB抑制蛋白(p-IκBα)及磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)的蛋白表达,实时荧光定量PCR测定各组细胞NF-κB、单核细胞趋化因子(CCL2)和ICAM1的mRNA表达.结果 与对照组相比,PA组的细胞中NF-κB p65、ICAM1、p-IκBα蛋白表达量增加(P<0.05);与PA组相比,Met+PA联合组细胞NF-κB p65、ICAM1、p-IκBα的蛋白表达量随Met浓度梯度增加表现为不同程度递减(P<0.05),p-AMPK蛋白表达量随Met浓度增加而显著增加(P<0.05).与对照组相比,PA组CCL2、ICAM1的mRNA表达量增加(P<0.05);与PA组相比,Met+PA联合组细胞CCL2和ICAM1的mRNA表达量下降(P<0.05).结论 Met可以减轻由饱和脂肪酸诱导细胞黏附因子和趋化因子表达增加而引起的大鼠H9C2型心肌细胞损伤.     

bFGF经Akt信号转导通路诱导胃癌BGC-823中COX-2和NF-κB表达研究

目的:在胃癌BGC-823细胞中,经bFGF诱导后观察COX-2和NF-κB蛋白表达,探讨bFGF通过Akt途径抑制凋亡促进细胞增殖的信号转导机制。方法:胃癌BGC-823细胞传代培养。MTT方法检测bFGF对胃癌BGC-823细胞的促增殖的作用。Western blotting检测Akt酶的活性和不同处理BGC-823中COX-2和NF-κB的表达。结果:25ng/mlbFGF能够激活BGC-823细胞中Akt磷酸化,p-Akt在10min表达最多,进而促进COX-2和NF-κB蛋白的表达,这种表达具有时间依赖性,能够促进BGC-823细胞的增殖。Akt抑制剂wortmannin可抑制bFGF的这些作用。结论:bFGF经Akt细胞信号转导通路能够诱导BGC-823细胞中COX-2和NF-κB的表达。Akt信号转导通路、COX-2和NF-κB与BGC-823细胞的增殖密切相关。     

多西他赛对鼠骨骼肌细胞的胰岛素信号转导通路上各种蛋白表达及活性的影响

目的 研究乳腺癌常用化疗药物多西他赛对鼠骨骼肌细胞的胰岛素信号转导通路上各种蛋白表达及活性的影响.方法 用不同浓度(150、300、600 nmol/L)和不同时间(3、6、12 h)的多西他赛处理分化好的C2C12肌管细胞,以不添加药物组作为对照组,通过Western blot检测胰岛素信号通路的关键蛋白Akt的磷酸化程度,确定多西他赛作用的最佳时间和浓度;后以多西他赛作用的最适条件处理分化好的C2 C12肌管细胞,以不添加药物组作为对照组,检测其胰岛素信号通路上的关键蛋白[胰岛素受体β亚基(IRβ),Akt,糖原合成激酶-3β(GSK-3β)、160 kD的Akt底物(AS160)]及其磷酸化程度.结果 多西他赛处理6 h,150 nmol/L组与对照组相比Akt磷酸化程度差异无统计学意义(P>0.05),300 nmol/L组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);600 nmol/L组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).与对照组相比,3、6、12 h条件下Akt的磷酸化程度降低.多西他赛处理3 h与对照组相比Akt磷酸化程度相近,6 h和12 h组与对照组相比Akt磷酸化程度降低.经多西他赛300 nmol/L作用12 h后,与对照组相比,胰岛素刺激后的小鼠骨骼肌细胞的IRβ的磷酸化程度无影响;与对照组相比,胰岛素刺激后Akt、GSK-3β、AS160的磷酸化程度降低.结论 多西他赛能够抑制骨骼肌细胞上胰岛素转导信号通路关键蛋白Akt的磷酸化及其下游蛋白GSK-3β、AS160的活化,这可能引起鼠骨骼肌细胞上的胰岛素抵抗.     

胰岛素信号转导通路相关蛋白在肺气肿患者肺组织中的表达

目的:研究胰岛素治疗对慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺组织的作用机制。方法:择期行肺减容手术患者99例,术前2周开始即给予极化液(含胰岛素液)治疗。术中取肺减容切除肺组织,Western blot印迹法检测肺组织蛋白激酶B(Akt)、p38丝裂原活化蛋白激酶(P38-MAPK)、核转录因子-κB(NF-κB)表达的变化。结果:胰岛素治疗后肺气肿患者肺组织内磷酸化蛋白激酶B(pAkt)表达水平较其对照组增加(P<0.05)。胰岛素治疗后肺气肿患者肺组织内P38-MAPK表达与其对照组比较无统计学差异(P>0.05)。胰岛素治疗后肺气肿患者肺组织内NF-κB表达较其对照组增加(P<0.05)。结论:胰岛素可能通过在COPD患者的肺组织中激活PI3/Akt信号转导途径并激活其下游的转录因子NF-κB抑制多种刺激所诱发的细胞凋亡。     

HCVC蛋白调控肝门部胆管癌细胞中NF-κB活性的研究

目的 探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV C)在肝门部胆管癌细胞中对核转录因子κB(NF-κB)的调控作用。方法 利用稳定表达HCV C蛋白的QBC939细胞株(QBC939HCV C )，通过NF-κB报道基因分析法、凝胶迁移率分析(EMSA)检测HCVC蛋白增强肝门部胆管癌细胞NF-κB的DNA结合活性和反式激活活性。RT-PCR、Western blot检测HCV C蛋白对核转录因子-κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA及P50、P65、IκBα蛋白表达及IκBα蛋白磷酸化的影响。结果 ①EMSA结果显示QBC939HCV C 细胞系中NF-κB相对信号密度明显比QBC939细胞高。②将pNF-κB-lun表达质粒转染稳定表达HCVC蛋白胆管癌细胞系中，通过单光子检测仪检测荧光素酶活性，结果显示QBC939HCV C 细胞中活化NF-κB为12．8倍，而QBC939细胞中NF-κB为2．6倍。③RT-PCR显示IκB mRNA在QBC939HCV C 细胞和QBC939细胞中的表达无明显差异；Western blot结果显示稳定表达HCVC蛋白的QBC939HCV C 细胞株的胞核中的P50、P65蛋白高水平表达，而未转染HCVC蛋白的QBC939细胞仅检测出极低水平的P50、P65蛋白。在QBC939HCV C 细胞胞浆中IκBα蛋白低水平表达。QBC939细胞高水平表达，但IκBα蛋白磷酸化水平则相反。结论 HCVC蛋白通过增加IκB降解激活的NF-κB在肝门部胆管癌的发生中起重要作用。     

胃肠道间质瘤中PTEN、蛋白激酶B与转录因子家族NF-κ B、bcl-2关系的研究

目的 研究磷酸化抑癌基因(PPTEN)、蛋白激酶B(Akt)基因与转录因子家族NF-κB、B细胞淋巴瘤/白血病2(bcl-2)在胃肠道间质瘤(GIST)中的表达及意义.方法 应用RT-PCR及Western blot检测124例GIST中Akt、PTEN、NF-κB、bcl-2基因mRNA和蛋白表达情况.结果 在GIST中,随着NIH分级增高,Akt的mRNA及蛋白表达水平上调,而抑癌基因PTEN的mRNA及蛋白表达水平下调,二者阳性表达率与肿瘤侵袭转移和黏膜受侵关系密切,PTEN与pAkt蛋白阳性表达之间呈显著负相关(r=-0.386,P=0.024).NF-κB、bcl-2的mRNA的表达变化与NIH分级以及肿瘤侵袭转移、黏膜受侵密切相关,而与年龄、性别、组织学类型无关;NF-κB和bcl-2 mRNA表达水平呈正相关;Akt和NF-κB、bcl-2的mRNA表达水平呈正相关.结论 GIST中PTEN基因失活可以活化蛋白激酶Akt,进一步激活NF-kB转录因子,上调凋亡相关因子bcl-2 mRNA水平的表达.     

Akt信号通路对肾小管上皮细胞分泌核因子-κB的影响

目的:探讨Akt信号通路在肾小管上皮细胞(NRK-52E)分泌转化生长因子β1(TGF-β1)和核因子-κB(NF-κB)表达中的作用。方法:体外培养NRK-52E细胞,分别加入不同浓度(5,15,30g/L)白蛋白和/或Akt抑制剂Ly294002。应用RT-PCR方法测定TGF-β1mRNA表达,Western blot测定Akt和TGF-β1蛋白的表达。应用凝胶电泳迁移率(EMSA)检测NF-κB活化。两两比较用t检验。结果:白蛋白呈浓度依赖性上调肾小管上皮细胞TGF-β1mRNA表达增加。TGF-β1蛋白表达也增加。白蛋白激活NF-κB活性,增加磷酸化Akt表达。Ly294002能够抑制白蛋白引起的NF-κB活性以及TGF-β1的表达。NF-κB活化与TGF-β1表达呈显著正相关(r=0.61,P<0.05)。结论:白蛋白刺激肾小管上皮细胞分泌TGF-β1和NF-κB的活性增加,其机制部分依赖于Akt的磷酸化作用。     

HCVC蛋白调控肝门部胆管癌细胞中NF-кB活性的研究

目的　探讨丙型肝炎病毒核心蛋白 (HCV C)在肝门部胆管癌细胞中对核转录因子 κB(NF- κB)的调控作用。方法　利用稳定表达 HCV C蛋白的 QBC939细胞株 (QBC939HCV C+) ,通过 NF- κB报道基因分析法、凝胶迁移率分析 (EMSA)检测 HCV C蛋白增强肝门部胆管癌细胞 NF- κB的 DNA结合活性和反式激活活性。 RT-PCR、Western blot检测 HCV C蛋白对核转录因子 κB抑制蛋白 α(IκBα) m RNA及 P5 0、P6 5、IκBα蛋白表达及 IκBα蛋白磷酸化的影响。结果　 1EMSA结果显示 QBC939HCV C+细胞系中 NF- κB相对信号密度明显比 QBC939细胞高。 2将 p NF- κB- lun表达质粒转染稳定表达 HCV C蛋白胆管癌细胞系中 ,通过单光子检测仪检测荧光素酶活性 ,结果显示 QBC939HCV C+细胞中活化 NF- κB为 12 .8倍 ,而 QBC939细胞中 NF- κB为 2 .6倍。 3RT- PCR显示IκB m RNA在 QBC939HCV C+细胞和 QBC939细胞中的表达无明显差异 ;Western blot结果显示稳定表达 HCV C蛋白的 QBC939HCV C+细胞株的胞核中的 P5 0、P6 5蛋白高水平表达 ,而未转染 HCV C蛋白的 QBC939细胞仅检测出极低水平的 P5 0、P6 5蛋白。在 QBC939HCV C+细胞胞浆中 IκBα蛋白低水平表达 ,QBC939细胞高水平表达 ,但 IκBα蛋白磷酸化水平则相反。结论　 HCV     

复方贞术调脂方对游离脂肪酸诱导的胰岛素抵抗HepG2细胞的作用

目的 探讨复方贞术调脂方(FTZ)对游离脂肪酸(FFA)诱导的胰岛素抵抗HepG2细胞NF-κB-IRS1-GLUT4通路的影响,阐明FTZ缓解胰岛素抵抗的作用机制.方法 采用FFA诱导HepG2细胞使其产生胰岛素抵抗,3个剂量的FTZ干预后,葡萄糖氧化酶法检测HepG2细胞培养液上清液中葡萄糖的含量,酶联免疫法检测HepG2细胞培养液上清液中TNF-α、IL-6的含量,Western blot检测HepG2细胞中NF-κB、IRS1、GLUT4蛋白表达,采用PDTC阻断NF-κB蛋白,测定其下游靶点IRS1的蛋白表达.结果 FTZ可降低细胞上清液中葡萄糖、TNF-α、IL-6的含量,下调NF-κB的蛋白表达,上调IRS1和GLUT4的蛋白表达.阻断NF-κB之后,再加入FTZ,IRS1的蛋白表达量较未阻断时显著降低.结论 FTZ可改善FFA诱导的胰岛素抵抗,其作用机制可能是通过抑制NF-κB介导的IRS1-GLUT4通路来改善胰岛素抵抗.NF-κB是FTZ作用的关键靶点.     

胰高血糖素样多肽1拮抗游离脂肪酸诱导的胰岛β细胞胰腺衍生因子表达与机制

目的 观察游离脂肪酸(FFA)对胰岛β-TC3细胞胰腺衍生因子(PANDER)表达的影响,并探讨胰高血糖素样多肽1(GLP-1)对其的拮抗作用及与蛋白激酶B(Akt)信号通路的关系.方法 培养β-TC3细胞,以不同浓度棕榈酸(PA)处理12 h,0.5 mmol/L的PA处理不同时间后实时荧光定量PCR法检测PANDER mRNA表达;Western印迹检测对照组、PA组、PA+GLP-1组、GLP-1组处理12 h后PANDER、P-Akt及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3酶原蛋白表达;在上述各组加入Akt特异阻断剂(Akti-1/2)后,再检测PANDER蛋白表达,并以Hoechst33258核染色法检测细胞凋亡情况.结果 (1)PA浓度依赖性及时间依赖性增加PANDER mRNA表达(P<0.05);(2)与对照组(100%)比较,PA组诱导PANDER蛋白表达高[(148±18)%,P<0.05),PA+GLP-1组PA诱导PANDER表达为[(70±17)%,P<0.01];(3)Akti-1/2减弱GLP-1抑制PA诱导的PANDER表达及细胞凋亡的效应:PA+GLP-1+Akti-1/2组较PA+GLP-1组PANDER蛋白显著高[(249+49)%比(110±54)%,P<0.01],细胞凋亡率显著高[(37.8±-1.5)%比(20.1±3.5)%,P<0.01].结论 PA可诱导PANDER的表达及胰岛B细胞凋亡,GLP-1通过激活Akt通路拮抗PA诱导的PANDER表达及胰岛B细胞凋亡.

Abstract：

Objective To investigate the effects of free fatty acid(FFA)on the expression of pancreatic derived factor(PANDER)in β-cells and to explore the possible relationship between PANDER and Akt signaling pathway at the anti-apoptotic effects of glucagon-like peptide-l(GLP-1).Methods β-TC3 cells were cultured in vitro witH palmitic acid(PA)of different concentrations and different time courses.The expression of PANDER mRNA was analyzed by realtime quantitative PCR β-TC3 cells were cultured with vehicle.0.5 mmol/L PA.0.5 mmol/L PA+10 nmol/L GLP-1 and 10nmol/L GLP-1respectively with or without Akti-1/2, a selective inhibitor of Akt, for 12 hours.The protein levels of PANDER, P-Akt and pro-caspase3 were detected by Western blot And cell apoptosis was analyzed by Hoechst33258 staining.Results (1)PA could dose and time dependently increased the expression of PANDER mRNA in β cells(vs control, P<0.05);(2)PA increased the PANDER protein expression [(148±18)%vs control 100%.P<0.05].However,these effects were attenuated by GLP-1 [(70±17)%vs PA group,P<0.01];(3)Akt inhibitor-1/2 alleviated the effects of GLP-1 on PA inducing the expression of PANDER.The expression of PANDER increased significantly in PA+GLP-1+Akti-1/2 group [(249±49)%vs PA+GLP-1 group(110±54)%,P<0.01],and cell apoptosis increased significantly as well[(37.8±1.5)%vs PA+GLP-1 group(20.1±3.5)%,P<0.01].Conclusion PA induces the expression of PANDER and the apoptosis of β cell while GLP-1 counteracts the above effects through an activation of Akt signaling pathway.     

抑制炎症反应治疗急性肺损伤的实验研究

目的通过观察急性肺损伤（ALI）大鼠血液和肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α、NF-κΒ等炎性细胞因子的变化,探讨抑制炎症反应在治疗急性肺损伤中的作用。方法应用气管内滴入内毒素（LPS）复制大鼠急性肺损伤模型。将48只大鼠随机分成4组：对照组（N组）、LPS组、N-乙酰半胱氨酸（NAC）治疗组（NAC组）、NAC联合地塞米松（Dex）治疗组（NAC＋Dex组）,采用免疫印迹法（Western Blotting）检测NF-κΒ的含量,采用RT-PCR检测肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α、NF-κΒmRNA的表达,并采用放免检测血清及支气管肺泡灌洗液（BALF）中的IL-6、TNF-α的含量。结果LPS组大鼠肺病理可见明显的肺损伤表现,NAC组及NAC＋Dex组肺组织病理改变明显减轻;NAC组及NAC＋Dex组肺NF-κB,肺IL-6、IL-10、TNF-α、NF-κΒmRNA表达水平及血清和BALF中的IL-6、TNF-α含量明显高于N组（P〈0.01）,而明显低于LPS组（P〈0.05）。结论NAC、Dex等可以抑制炎症反应,减少炎性介质的释放从而减轻肺损伤的程度,达到防治急性肺损伤的目的。     

HSV-1对星形胶质细胞炎性细胞因子表达的影响

目的：探讨单纯疱疹病毒1型（HSV-1）对星形胶质细胞内胞核转录因子kappa B（NF-κB）转录活性及炎性细胞因子肿瘤坏死因子α（ TNF-α）和白细胞介素10（ IL-10）表达的影响。方法 HSV-1感染星形胶质细胞,通过ELISA,Western blot等方法检测星形胶质细胞NF-κB,TNF-α,IL-10的表达;同时研究NF-κB通路抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸（ PDTC）对TNF-α,IL-10表达的影响。结果星形胶质细胞被HSV-1感染后,胞核内NF-κB蛋白表达明显增强,星形胶质细胞分泌的TNF-α,IL-10均上调,与对照组比较差异有显著性（P＜0．05）。PDTC可抑制NF-κB活化,导致核内NF-κB蛋白表达下调,使得细胞分泌TNF-α,IL-10降低,与HSV-1组比较差异显著（ P＜0．05）。结论被HSV-1感染的星形胶质细胞通过活化NF-κB,从而上调TNF-α,IL-10的表达。     

黄芩苷对脂多糖诱导人牙龈成纤维细胞表达炎症因子的影响

  目的  从PI3K/Akt/NF-κB信号通路探讨黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(HGFs)损伤的影响及机制。  方法  运用LPS诱导建立人牙龈成纤维细胞损伤模型,设置正常对照组、模型组和模型+黄芩苷(1、10和20μg/mL)组,每组设3个复孔,经不同浓度的黄芩苷干预后,Western blotting检测p-Akt、Akt、NF-κB p65等蛋白的表达,采用qPCR法检测炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6等基因的表达。用PI3K抑制剂LY294002作用半小时后,再用黄芩苷干预,qPCR和Western blotting法检测Akt、p-Akt、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β、IL-6等基因和蛋白的表达。  结果  与模型组比较,黄芩苷低、中、高剂量能有效降低TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA的表达水平,促进p-Akt蛋白表达,抑制NF-κB p65核蛋白表达,并呈剂量依赖性(均P < 0.05)。与模型组比较,模型+黄芩苷组p-Akt表达升高(P＜0.05),NF-κB p65表达降低(P＜0.01)。PI3K抑制剂LY294002作用后,模型+黄芩苷组p-Akt/Akt表达量(0.63±0.18)较模型组(0.56±0.14)升高(P＜0.05),模型+黄芩苷组NF-κB p65、IL-6、IL-1β、TNF-α表达量较模型组降低(均P＜0.01)。黄芩苷对LY294002作用后,p-Akt/Akt、NF-κB p65、IL-6、IL-1β、TNF-α表达量与模型组比较,差异无统计学意义。  结论  黄芩苷可抑制LPS诱导的人牙龈成纤维细胞损伤引起的炎症反应,其作用机制可能与促进Akt的磷酸化,抑制NF-κB p65核转录和炎性因子的释放有关。      

河湟谷地胃癌患者TNF-α、NF-κB P65的表达及临床意义

目的 探讨河湟谷地胃癌患者TNF-α及NF-κB P65的表达及临床意义.方法 采用ELISA法检测河湟谷地健康人、胃炎患者及胃癌患者（各20例）血清中TNF-α的表达,Western blot法检测上述胃癌患者癌组织及癌旁组织NF-κB P65蛋白的表达,分析TNF-α和NF-κB P65与胃癌发生、发展的相关性.结果 TNF-α在健康入、胃炎患者及胃癌患者血清中的表达具有差异性（P ＜0.001）,并与胃癌分期及淋巴结转移具有相关性（P＜0.05）.NF-κB P65蛋白在胃癌组织和癌旁正常组织中的表达差异具有统计学意义（P＜0.001）,并与胃癌分期及淋巴结转移有相关性（P＜0.05）.胃癌患者TNF-α和NF-κBP65的表达呈正相关（r=0.745,P＜0.01）.结论 TNF-α和NF-κB P65具有作为河湟谷地胃癌患者早期诊断的分子标志物的潜力,并且二者在胃癌发生、发展及转移过程中可能起重要协同作用.     

塞来昔布在2型糖尿病中的作用及其机制

目的：探讨新型非甾体抗炎药塞来昔布在2型糖尿病中作用及其机制。方法：80例患者随机分为拜唐平＋二甲双胍治疗方案组（A组）、塞来昔布联合拜唐平＋二甲双胍治疗方案组（B组）及20例健康对照组。比较各组治疗前、后血糖、C-反应蛋白（C—Reaction protein,CRP）、核转录因子-κB mRNA水平,肿瘤坏死因子（TNF—α）、白介素-2（IL-2）、白介素-6（IL-6）含量水平的差异;比较各治疗组治疗前与治疗后上述各指标含量的差异。结果：治疗前各治疗组与健康对照组相比较血糖、CRP、血中NF—κB mRNA水平,TNF—α、IL-2、IL-6含量水平的差异均有显著性（P〈0．05）;各治疗组治疗前、后之间CRP、血中NF—κB mRNA水平,TNF—α、IL-2、IL-6含量水平的差异均有显著性（P〈0．05）;治疗后,治疗组1与治疗组2相比较,血糖差异无显著性（P〈0．05）。结论：在2型糖尿病患者中存在明显的炎症反应过程,塞来昔布作为新型非甾体抗炎药,其不仅具有明显的抗炎症反应,且可降低患者的血糖水平。     

不同剂量阿托伐他汀对老年早期糖尿病肾病患者外周血NF-κB活性和尿白蛋白排泄率的影响

目的：观察不同剂量阿托伐他汀对老年早期糖尿病肾病（DN）患者外周血单个核细胞中核因子-κB（NF-κB）P65（ser536）的磷酸化水平、血清炎症因子水平（hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-1β）及尿白蛋白排泄率（UAER）的影响。方法将72例2型糖尿病早期DN老年患者,半随机分为两组,分别给予阿托伐他汀钙片10mg/d（DN1组,37例）和20mg/d（DN2组,35例）,疗程16周。测定两组患者治疗前和治疗16周后外周血NF-κBP65的磷酸化水平、血清炎症因子水平、UAEA、血脂（TC、TG、DHL-C、LDL-C）。结果两组患者治疗后外周血NF-κBP65水平、血清炎症因子水平、TC及LDL-C均较治疗前降低（P＜0.01或P＜0.05）,以DN2组降低更显著。DN2组治疗后UAER较治疗前显著降低（P＜0.01）,DN1组无显著下降（P＞0.05）。结论阿托伐他汀在降低血脂的同时可降低外周血NF-κBP65的活性、血清炎症因子hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-1β水平,改善患者炎症状态,减少尿蛋白,且呈剂量依赖性。     

卡托普利对脓毒症小鼠心肌损伤的保护作用及机制研究

目的:研究卡托普利对脓毒症小鼠心肌损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法:按随机数字表法将48只雄性C57BL/6J小鼠（6～8周龄）分为4组:对照组（Control组）、卡托普利组（Captopril组）、脂多糖组（LPS组）、卡托普利+脂多糖组（Captopril+LPS组）,每组12只。实验前30 min,Captopril组和Captopril+LPS组预先经腹腔给予卡托普利（50 mg/kg）处理,Control组和LPS组给予等量生理盐水对照。采用腹腔注射脂多糖（LPS,15 mg/kg）的方法制备脓毒症模型（LPS组和Captopril+LPS组）,Control组和Captopril组给予等量生理盐水。各组于制模后12 h采集标本,采用无创尾套测压法测量小鼠平均动脉压（MAP）,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清炎性因子白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,HE染色观察心肌组织病理形态改变,高分辨小动物超声成像系统检测心功能,Western印迹检测心肌组织磷酸化核因子-κB p65（p-NF-κB p65）蛋白表达。结果:造模后12 h,Captopril组各项指标与Control组比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。与Control组相比,LPS组MAP下降（q=4.377,P＜0.05）;血清IL-6 、TNF-α水平明显升高（q=4.966、10.440,均P＜0.05）; 左室射血分数（LVEF%）、左室短轴缩短率（LVFS%）水平明显降低（q=6.104、6.390,均P＜0.01）;心肌纤维断裂,间质水肿,炎性细胞浸润加重;心肌组织p-NF-κB p65蛋白表达水平明显升高（q=12.430,P＜0.001）。和LPS组比较,Captopril+LPS组MAP差异无统计学意义（q=2.617,P＞0.05）;血清IL-6、TNF-α水平下降（q=4.085、5.721,均P＜0.05）; LVEF%、LVFS%水平升高（q=4.366、4.297,均P＜0.05）;心肌损伤病理改变减轻;心肌组织p-NF-κB p65蛋白表达水平下降（q=5.124,P＜0.01）。结论:卡托普利可能通过抑制核因子-κB的活化,减少炎性细胞因子（IL-6和TNF-α）产生,抑制脓毒症引起的心肌炎症,从而减轻脓毒症心肌损伤。     

ASP对T2DM大鼠肝细胞NF-κB表达及血清TNF-α的影响

目的 观察阿司匹林对2型糖尿病（T2DM）大鼠肝细胞NF-κB表达及血清TNF-α水平的影响.方法 建立 T2DM大鼠模型,将其随机分为T2DM组、阿司匹林治疗组和二甲双胍对照组,给药1个月后检测各组大鼠血糖、血脂、血清胰岛素、血清TNF-α含量和肝细胞NF-κB变化.结果 ①T2DM组大鼠以上指标明显升高,阿司匹林治疗组和二甲双胍组除血糖外,以上指标显著降低,差异有显著性（P＜0.05）;NF-κB阿司匹林组表达为阴性,T2DM和二甲双胍组均为阳性.②相关性分析表明T2DM组大鼠NF-αB表达与TNF-α、胰岛素浓度呈正相关.结论 阿司匹林可通过抑制肝细胞NF-κB的表达,降低血清TNF-α的水平,有效改善胰岛素抵抗状态.     

棕榈酸诱发的肝细胞脂质沉积和炎症机制中AMPKα2的作用研究

目的:探讨AMP活化蛋白激酶（AMPK）α2在棕榈酸（PA）诱发的肝细胞脂质沉积和脂多糖（LPS）诱导的炎症中的作用和机制。方法:分离小鼠原代肝细胞,将一部分细胞分为非特异性小干扰RNA（siRNA）对照组（siNR）和敲除AMPKα2 （siAMPKα2）组,每组细胞再分别用10%牛血清白蛋白（BSA）、200 μmol/L PA、磷酸盐缓冲液（PBS）、10 μg/mL LPS孵育16 h或6 h。油红O染色检测细胞中的脂质,Western 印迹检测核因子κB抑制蛋白（IκB）激酶（IKK）和激活c-Jun氨基末端激酶（JNK）的磷酸化。将另一部分肝细胞分为转染对照腺病毒组（Ad-GPF）和AMPKα2腺病毒组（Ad-AMPKα2）,每组再分别用10% BSA、200 μmol/L PA、PBS、10 μg/mL LPS孵育16 h或6 h,Western 印迹检测JNK和IKKα/β的磷酸化。结果:与对照组相比,siAMPKα2组 PA诱导的细胞内脂质积累增加（t=2.133,P<0.05）,PA和LPS磷酸化JNK（1.51±0.08,t=2.701,P<0.05）和IKKα/β（1.35±0.03,t=1.657,P<0.05）的作用加强,而AMPKα2腺病毒组PA和LPS升高JNK和IKKα/β磷酸化的作用显著受抑制。结论:AMPKα2可能通过抑制JNK及核因子-κB信号通路,改善PA诱导的肝细胞脂质沉积以及和PA和LPS诱导的肝细胞炎症。     

DN不同中医证型NF-κB信号通路相关细胞因子的检测及意义

目的 探讨糖尿病肾病(DN)不同中医证型核因子-κB(NF-κB)通路相关细胞因子的表达差异及其临床意义.方法 选取该院146例DN患者,按中医辨证进行分型,检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素(IL)-1、IL-6、IL-8水平,并与62倒健康体检者(对照组)比较.结果 不同中医证型DN各组的TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8水平比较,均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).各个证型DN患者中TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8水平比较,差异有统计学意义(P＜0.05).随着DN病程进展,各细胞因子水平均呈逐步升高的趋势,且DN不同证型升高的幅度与时间不一致.结论 NF-κB通路相关细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8与DN不同中医证型具有相关性,可能在DN不同证型的发生、发展中起一定的作用.