华蟾素对Wnt/β-catenin通路抑制肾癌细胞增殖及侵袭的影响

目的 探讨华蟾素对肾癌细胞侵袭和迁移的影响,并探讨其对Wnt/β-catenin信号通路的调控机制。方法将肾癌细胞分为对照组（添加PBS）和华蟾素组（添加华蟾素）,CCK-8法检测细胞增殖力,Transwell侵袭和细胞迁移法检测细胞侵袭和迁移力,流式细胞检测细胞凋亡和细胞周期,免疫蛋白印迹法检测Wnt/β-catenin和上皮间质变（epithelial mesenchymal transition,EMT）信号通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,华蟾素组可抑制肾癌细胞增殖,抑制细胞侵袭和迁移力,促进细胞凋亡,阻滞细胞周期 (P<005);E-cadherin蛋白表达上调(P<005),Wnt/β-catenin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达下调(P<005)。结论华蟾素可通过调控Wnt/β-catenin信号通路,逆转EMT,抑制肾癌细胞增殖和侵袭。     

幽门螺杆菌Tipα通过Wnt/β-catenin通路诱导胃癌细胞EMT

探讨幽门螺杆菌(H.pylori)肿瘤坏死因子α诱导蛋白(Tipα)是否通过Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路诱导人胃癌SGC7901细胞上皮-间质转化(EMT)。设置PBS组、Tipα组和通路抑制剂XAV939预处理组,采用Western blot和免疫荧光观察β-catenin磷酸化和核转位情况;qRT-PCR和Western blot检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、紧密连接蛋白(ZO-1)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)以及通路下游靶基因(c-myc和cyclinD1)的表达情况;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力。结果显示,Tipα能以时间依赖性方式诱导β-catenin Ser675和Ser552磷酸化和核转位,且下调E-cadherin和ZO-1表达,上调N-cadherin和Vimentin表达(P＜0.01);与PBS相比,Tipα增强c-myc和cyclinD1的表达(P＜0.05)以及细胞的迁移能力(P＜0.05)。XAV939预处理抑制Tipα诱导的SGC7901细胞EMT形成及通路下游靶基因的表达。表明Wnt/β-catenin信号通路参与了Tipα诱导的胃癌细胞EMT形成。     

LPS对乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化的诱导作用及其对β-catenin表达的影响

目的：探讨脂多糖（LPS）对人乳腺癌MDA-MB-231细胞中上皮间质转化（EMT）标志物及β-连环素（β-catenin）表达的影响,阐明其可能机制。方法：人乳腺癌MDA-MB-231细胞分为对照组和不同浓度（5、10、20和40 mg·L^-1）LPS组,倒置显微镜观察各组MDA-MB-231细胞的形态表现,免疫荧光实验检测各组MDA-MB-231细胞中β-catenin表达及定位,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法和Western blotting法检测各组MDA-MB-231细胞中EMT标志物E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和β-catenin mRNA及蛋白表达水平。结果：对照组MDA-MB-231细胞形态表现为上皮细胞表型,不同浓度LPS组MDA-MB-231细胞形态表现为间质细胞表型。免疫荧光实验,β-catenin表达定位主要在细胞核。与对照组比较,不同浓度LPS组细胞中Vimentin和β-catenin mRNA及蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,以20 mg·L^-1LPS组升高最为明显;与对照组比较,不同浓度LPS组细胞中E-cadherin mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,以20 mg·L^-1 LPS组降低最为明显。结论：LPS通过下调E-cadherin表达、上调Vimentin表达促进乳腺癌MDA-MB-231细胞发生EMT、侵袭和转移,其作用机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。     

姜黄素通过抑制HDGF/β-catenin复合物降低胶质瘤细胞的侵袭性

目的探讨姜黄素对胶质瘤细胞的侵袭、迁徙能力的影响及相关机制。方法四甲基偶氮唑蓝实验筛选合适的姜黄素药物 浓度;Transwell小室、Boyden小室及划痕实验检测姜黄素对胶质瘤细胞侵袭、迁移能力的影响;蛋白免疫印迹实验和蛋白质免 疫共沉淀实验检测相关蛋白质表达水平变化及相关蛋白质之间相互作用。结果终浓度为20 μmol/L的姜黄素培养基培养48 h 作为实验组处理因素;姜黄素能明显降低胶质瘤细胞的侵袭、迁移能力（P<0.05）;机制分析显示,与空白对照组相比,姜黄素处 理组HDGF、N-cadherin、Vimentin、Snail、Slug蛋白表达水平下降,E-cadherin蛋白表达水平升高;在姜黄素处理过的胶质瘤细胞 中干扰和过表达HDGF可分别协同抑制和逆转上皮细胞-间充质转化(EMT)信号;姜黄素可以明显降低HDGF与β-catenin的结 合量。结论姜黄素通过抑制HDGF/β-catenin复合物,降低了EMT信号,从而抑制了胶质瘤细胞侵袭、迁移能力。     

Livin表达与口腔鳞状细胞癌上皮间质转化的关系及其临床意义

  目的  探讨Livin蛋白和上皮间质转化(EMT)相关蛋白Vimentin、E-cadherin在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中的表达,探讨三者表达的相关性及其临床意义。  方法  应用免疫组化EliVision法检测56例OSCC组织及56例癌旁组织中Livin、Vimentin、E-cadherin的表达,并分析三者表达的相关性及其与OSCC患者临床病理特征的关系。进一步应用Western blotting检测10例新鲜OSCC组织中Livin、Vimentin、E-cadherin蛋白的表达水平。  结果  Livin在OSCC组织中的阳性率为67.9%,明显高于癌旁组织中Livin的阳性率(16.1%),且Livin表达与OSCC的淋巴结转移及TNM分期相关。E-cadherin、Vimentin在OSCC组织中的阳性率分别为44.6%、50.0%,Livin与E-cadherin表达呈负相关,与Vimentin表达呈正相关。Western blotting检测结果显示Livin高表达的OSCC组织中,E-cadherin呈低表达,Vimentin呈高表达。  结论  Livin表达可促进OSCC侵袭转移,这种促进作用可能是通过表达Livin从而激活上皮间质转化(EMT)发生实现的。      

lncRNASMAD5-AS1在肺腺癌细胞中的表达及其通过 Wnt/β-catenin通路对癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响

摘要:目的 探讨长链非编码 RNA(lncRNA)SMAD 家族成员5反义 RNA1(SMAD5-AS1)在肺腺癌(LUAD)中的 表达及其对 LUAD细胞恶性生物学行为的影响,并分析其潜在机制。方法 通过生物信息学网站对 LUAD 组织中lncRNASMAD5-AS1的表达进行分析;应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测72例LUAD组织与邻近正常组织以及人 正常支气管上皮细胞(BEAS-2B)与人 LUAD 细胞(SPC-A-1、A549、H1299、LTEP-a-2)中lncRNASMAD5-AS1表达水 平。体外培养对数生长期的 SPC-A-1和 H1299细胞,分 为 SPC-A-1 对 照 组(SPC-A-1-Ctr组)、SPC-A-1+sh-NC 组、 SPC-A-1+sh-SMAD5-AS1组、H1299对照组(H1299-Ctr组)、H1299+LV5-NC 组、H1299+LV5-SMAD5-AS1组。采 用携带lncRNASMAD5-AS1敲除的短发夹 RNA(sh-SMAD5-AS1)和lncRNASMAD5-AS1过表达的重组质粒(LV5- SMAD5-AS1)及相应空载体的重组慢病毒转染细胞,qRT-PCR 验证转染效率;5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)测定细胞增 殖活性;划痕愈合实验和 Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;Westernblot检测细胞上皮间质转化(EMT)和 Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路相关蛋白[E-钙粘蛋白(E-cadherin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、糖 原合酶激酶-3β(GSK-3β)、β-catenin]的表达。结果 lncRNASMAD5-AS1在 LUAD 组织和细胞中呈高表达(均 P< 0.05);敲低lncRNASMAD5-AS1表达后,SPC-A-1细胞的增殖活性、侵袭和迁移能力及 N-cadherin、Vimentin和细胞核 β-catenin蛋白水平显著降低(均 P<0.05),E-cadherin和 GSK-3β蛋 白 水 平 显 著 升 高(均 P<0.05);过 表 达lncRNA SMAD5-AS1后,H1299细胞的增殖活性、侵袭和迁移能力及 N-cadherin、Vimentin和细胞核β-catenin蛋白水平显著升 高(均P<0.05),E-cadherin和 GSK-3β蛋白水平显著降低(均 P<0.05)。结论 lncRNASMAD5-AS1在 LUAD 中高 表达,其可能通过激活 Wnt/β-catenin通路促进 LUAD细胞增殖、迁移、侵袭和 EMT。     

鼻咽癌中上皮间充质改变现象观察

目的 观察鼻咽癌中上皮间充质改变(EMT)现象,初步探讨上皮间充质改变在鼻咽癌侵袭转移中的作用.方法 对58例鼻咽癌和29例鼻咽黏膜慢性炎免疫组化SP法检测Vimentin抗体,根据结果.Vimentin阳性病例再用相同的方法分别检测E-cadherin、β-catenin和Snail的表达.结果 58例鼻咽癌中8例边缘部位癌细胞Vimentin阳性表达,29例慢性炎上皮细胞均为阴性(P=0.037).在8例阳性病例中.Vimentin阳性的区域癌细胞E-cadherin染色明显弱于Vimentin阴性部位,甚至呈阴性;Snail在肿瘤周边区的阳性细胞数量明显多于中央区,阳性强度也强于中央区;β-catenin在肿瘤中央区为细胞间连接部位膜阳性,周边区部分细胞,尤其是散在于间质中单个癌细胞呈现阳性表达向胞质胞核内移现象.结论 鼻咽癌在侵袭和转移过程中存在EMT现象,EMT现象的发现为研究鼻咽癌转移机制提供了新的理论基础,为鼻咽癌的治疗提供了新途径.     

双氢青蒿素通过Wnt信号通路对胶质瘤细胞增殖侵袭的影响

目的:研究双氢青蒿素(dihydroartemisinine,DHA)对人胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭的影响及其作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法观察DHA对胶质瘤活性的影响;细胞划痕实验检测细胞迁移力; Transwell小室法检测细胞侵袭力;免疫印迹试验(Western blot,WB)检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及β-catenin、GSK-3β、Axin2、c-myc蛋白的表达水平。结果:DHA显著抑制胶质瘤U251细胞的增殖活性、迁移能力及侵袭能力且呈浓度依赖性; WB法显示DHA下调E-cadherin、β-catenin、c-myc蛋白的表达水平,上调N-cadherin、Vimentin、GSK3β、Axin2蛋白的表达水平且呈浓度依赖性。结论:DHA可以抑制人胶质瘤U251细胞增殖、迁移及侵袭,其机制可能与其抑制Wnt/β-catenin通路从而抑制EMT相关进程。     

MMP14通过调节Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌的发生、发展机制研究

目的 探讨基质金属蛋白酶-14(MMP14)对胃癌发生、发展的作用及其相关分子机制。方法 体外培养胃癌细胞和胃黏膜上皮细胞,检测MMP14基因表达差异的统计学意义;将胃癌SGC-7901细胞体外培养分为对照组(NC-shRNA)和实验组(MMP14-shRNA),分别进行转染实验;利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞凋亡,黏附试验、Transwell试验分别检测细胞黏附、侵袭和迁移能力,蛋白印迹检测上皮-间质转化(EMT)和Wnt/β-catenin信号通路相关的蛋白表达。将体外转染的细胞接种于体内建立荷瘤裸鼠模型,观察和测量肿瘤体积和重量,蛋白印迹检测组织信号相关蛋白分子的表达。结果 与GSE-1细胞比较,胃癌SGC-7901、BGC-823和MKN45细胞的MMP14表达均显著性上调(P<0.01);与NC-shRNA组比较,体外结果表明MMP14-shRNA能够显著抑制SGC-7901细胞的增殖、黏附、侵袭和迁移能力,影响VEGF、E-cadherin、Vimentin和Wnt/β-catenin信号蛋白的表达(P<0.05);体内结果表明,MMP14-shRNA能够显著抑制肿瘤的生长,影响Wnt/β-catenin信号蛋白的表达(P<0.05)。结论 本研究表明MMP14可能通过调节Wnt/β-catenin信号通路活化影响胃癌的发生、发展。     

姜黄素对TGF-β诱导的A549细胞上皮间质转化的影响

目的 研究姜黄素对转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β)诱导的肺腺癌A549细胞的上皮间质转化（Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT）的作用及可能的机制。方法 选取体外培养肺腺癌A549细胞采用MTT法检测姜黄素细胞抑制率。实验分为4组：对照（Control）组、TGF-β组（TGF-β5ng/mL）、TGF-β+姜黄素组（TGF-β5ng/mL+姜黄素10μmol/L）、姜黄素组（姜黄素10μmol/L）。采用Transwell细胞迁移及浸润实验检测各组的运动迁移和侵袭浸润的能力,采用免疫荧光和Western印迹法实验检测各组EMT相关标记物E-钙粘蛋白、N-钙粘蛋白和波形蛋白的表达水平与Wnt /β-catenin信号通路相关P-GSK3β, GSK3β, β-catenin, c-Myc蛋白以及Snail蛋白表达水平,同时检测Wnt /β-catenin抑制剂XAV939（1、2、4 μmol/L）作用后EMT表达情况。结果 MTT实验表明姜黄素对A549细胞的抑制作用呈时间和剂量浓度依赖性,10μmol/L姜黄素作用A549细胞24h和48h时,细胞增殖抑制率分别为12.21±2.60%和21.33±3.25%（P<0.05）;细胞运动迁移及侵袭浸润实验表明TGF-β能显著促进细胞的运动迁移和侵袭浸润,而姜黄素对其表现出抑制作用（P<0.05）。免疫荧光实验及免疫蛋白印迹实验表明TGF-β能下调E--钙粘蛋白的表达,上调波形蛋白及N--钙粘蛋白的表达,伴有P-GSK3β,β-catenin和c-Myc的表达增加以及Snail蛋白表达增加,而GSK3β表达无明显变化,而姜黄素表现出对这种现象的一个抑制作用。同时,XAV939对TGF-β诱导的EMT表现出抑制作用。结论 姜黄素可能通过抑制Wnt /β-catenin信号通路来抑制TGF-β诱导的A549细胞EMT。     

成纤维细胞激活蛋白对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及机制研究

目的:探讨成纤维细胞激活蛋白(FAP)在胃癌细胞增殖、侵袭和迁徙过程中的作用及机制。方法:体外培养的人胃癌细胞株MGC803,分别加入不同浓度的FAP(50,100和150pmol/L)处理细胞48h;采用MTT法检测细胞增殖;细胞划痕实验检测FAP对MGC803迁徙能力的影响;Transwell侵袭实验检测FAP对MGC803侵袭能力的影响;RT-PCR、Western Blot检测细胞上皮间质转化(EMT)相关标志分子(Vimentin、E-cadherin、ZO-1、Ncadherin)及EMT的上游不同信号通路分子表达。结果:不同浓度的FAP可呈剂量依赖性促进胃癌细胞增殖、迁移及侵袭(P<0.05);RT-PCR、Western Blot检测结果显示FAP作用于MGC803细胞后诱导细胞上皮标志分子Ecadherin、ZO-1表达下调,间质标志分子Vimentin、N-cadherin表达上调,且均呈剂量依赖性(P<0.05);Western Blot检测上游不同信号通路分子表达结果显示,Wnt/β-catenin信号通路分子(DKK1、LEF-1)表达呈剂量依赖性上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:FAP可通过激活Wnt/β-catenin信号通路,调控活化EMT,促进胃癌细胞的增殖、迁徙和侵袭。     

人结肠癌组织中VM、EMT及Wnt通路关键蛋白表达的相关性分析

目的：本研究探讨结肠癌组织中VM、EMT和Wnt通路关键蛋白表达的相关性。方法：选取200例结肠癌患者的组织标本,利用免疫组化测定VM、EMT的两种标记蛋白（Vimentin、E-cadherin）及Wnt通路调节蛋白β-catenin的表达,并探讨其相关性。结果：200例人结肠癌组织中有45例VM表达阳性,VM阳性患者肿瘤分化更差、分期更晚,更易发生复发转移,差异有统计学意义（P＜0.05）。VM阳性时Vimentin高表达（66.7%）,E-cadherin低表达(15.5%),差异有统计学意义(P<0．05)。同时VM阳性β-catenin为高表达（60.0%）,VM阴性β-catenin为低表达（8.4%）,差异具有统计学意义（P<0．05) 。β-catenin阳性的结肠癌组织中,Vimentin为高表达（72.5%）,而E-cadherin低表达（30.0%）,差异具有统计学意义(P<0．05)。结论：在结肠癌组织内存在VM现象,VM与EMT存在相关性。VM与Wnt通路存在相关性。结肠癌中Wnt通路活化可能促进EMT发生。     

FOXA2过表达对卵巢癌OVCAR3细胞上皮-间充质转化的抑制作用及机制研究

目的检测叉头框架蛋白A2(FOXA2)在卵巢癌细胞中的表达情况,探讨其对上皮间质转化(EMT)的抑制作用及机制。方法培养卵巢癌上皮细胞系OVCAR3,构建并转染FOXA2过表达载体。采用CCK-8法、Transwell实验分别检测FOXA2过表达对OVCAR3细胞增殖、侵袭能力的影响;采用Westernblot法及免疫荧光实验检测FOXA2过表达后OVCAR3细胞EMT发生相关蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin）和波形蛋白(Vimentin)以及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin的改变。结果FOXA2过表达明显抑制了OVCAR3细胞的增殖、侵袭能力。OVCAR3细胞FOXA2过表达后显著上调了E-cadherin蛋白的表达,下调了Vimentin蛋白的表达,即EMT过程受到了抑制。免疫荧光结果显示FOXA2过表达后OVCAR3细胞中β-catenin蛋白在细胞质和细胞核中出现明显的异位聚集。结论FOXA2过表达可能通过Wnt/β-catenin信号通路影响了EMT过程,进而抑制了卵巢癌OVCAR3细胞的增殖和侵袭能力。     

舒尼替尼通过Wnt/β-catenin信号抑制肾癌细胞体外生长和侵袭的实验研究

目的:研究舒尼替尼对肾癌细胞体外生长、侵袭及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:培养肾癌细胞株ACHN并用不同剂量舒尼替尼(1、2、4、8μmol/L)进行处理,以不含舒尼替尼的处理条件作为阴性对照。处理后24h时,测定细胞中凋亡基因、侵袭基因、Wnt/β-catenin信号通路的mRNA表达量。结果:处理后24h时,1、2、4、8μmol/L舒尼替尼组中NPRL2、Bax、caspase-3、caspase-9的mRNA表达量显著高于阴性对照组,MMP2、MMP9、Vimentin、N-cadherin、Wnt、β-catenin的mRNA表达量显著低于阴性对照组;舒尼替尼剂量越高,细胞中NPRL2、Bax、caspase-3、caspase-9的mRNA表达量越高,MMP2、MMP9、Vimentin、N-cadherin、Wnt、β-catenin的mRNA表达量越低。结论:舒尼替尼能够通过抑制肾癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路来增加凋亡基因的表达、抑制侵袭基因的表达,进而抑制细胞的生长和侵袭。     

柴胡皂苷D对人肾小管上皮细胞转分化的影响及机制

目的探讨柴胡皂苷D(SSD)对人肾小管上皮细胞转分化的影响及其作用机制。 方法将人肾小管上皮细胞HK-2细胞分为对照组、空白溶剂对照组、肾间质纤维化(RIF)组(5 μg/L TGF-β1)、阳性对照组(5 μg/L TGF-β1+10 μmol/L贝那普利)、SSD组(5 μg/L TGF-β1+10.00 μmol/L SSD)、SSD+DKK-1组(5 μg/L TGF-β1+10.00 μmol/L SSD+100 μg/L DKK-1)。光学显微镜观察各组细胞形态变化,免疫荧光检测细胞E-钙黏素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,Western blotting检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-7、Snail、E-cadherin、α-SMA、β-catenin蛋白表达,qRT-PCR检测细胞胶原蛋白Ⅰ(Collagen Ⅰ)相对表达量。 结果对照组、空白溶剂对照组细胞有序、紧密排列,RIF组细胞呈现出长梭形且细胞排列分散；阳性对照组、SSD组和SSD+DKK-1组中长梭形细胞较RIF组减少且细胞分散程度降低。RIF组E-cadherin荧光斑低于对照组(P＜0.05),α-SMA荧光斑和MMP-7、Snail、E-cadherin、α-SMA、β-catenin蛋白表达、Collagen Ⅰ基因相对表达量高于对照组(P＜0.05)。阳性对照组、SSD组E-cadherin荧光斑和蛋白表达高于RIF组(P＜0.05),α-SMA荧光斑和MMP-7、Snail、α-SMA、β-catenin蛋白表达、Collagen Ⅰ基因相对表达量低于RIF组(P＜0.05)。SSD+DKK-1组E-cadherin荧光斑和蛋白表达高于SSD组(P＜0.05),α-SMA荧光斑和MMP-7、Snail、α-SMA、β-catenin蛋白表达、Collagen Ⅰ基因相对表达量低于SSD组(P＜0.05)。 结论SSD可抑制人肾小管上皮细胞转分化,可能与抑制Wnt/β-catenin途径活化有关。     

Wnt2、Wnt3a和β-catenin在硬皮病患者皮损中的作用

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路异常活化在硬皮病（SD）发病机制中的作用及其与SD临床分型的关系。方法采用免
疫组织化学SP法检测45例SD患者［系统性硬化症（SSc）25例,局限性硬皮病（LSc）20例］皮损中Wnt2、Wnt3a及β-catenin的量
与分布,以20例健康成人皮肤作为正常对照（NC）。结果Wnt2、Wnt3a分别定位于SD患者皮损真、表皮胞浆和胞核,β-catenin
定位于真皮类成纤维细胞、外分泌腺上皮细胞及浸润淋巴细胞的胞核及NC、部分SD表皮细胞的胞膜;SD皮损中Wnt2胞浆着
色、Wnt3a及β-catenin核着色均显著高于NC（P<0.01）,而β-catenin膜着色则明显低于NC（P<0.01）;Wnt2、Wnt3a分别与
β-catenin核着色呈正相关（r=0.663,0.654,P<0.01）,而与β-catenin膜着色呈负相关（r=-0.532,-0.529,P<0.01）;SSc上述3种蛋白
的着色与LSc间的差异无统计学意义（P>0.05）。结论SD皮损中存在的异常活化的Wnt/β-catenin信号在其发病机制中可能起
重要作用;LSc和SSc分居于SD病谱的两端而非两种独立疾病。
     

上皮间质转化标记物在大肠癌中的表达及意义

目的:探讨上皮间质转化(EMT)标志物在大肠癌组织中的表达情况及与大肠癌恶性程度的关系.方法:采用免疫组化SP法检测131例大肠癌组织及癌旁组织EMT标志物上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)、波形蛋白(Vimentin)的表达情况.结果:大肠癌组织E-cadherin、β-catenin的阳性表达率明显低于癌旁组织,Vimentin的阳性表达率明显高于癌旁组织(P＜0.05).低分化大肠癌组织E-cadherin、β-catenin的阳性表达率明显低于高-中分化,Vimentin的阳性表达率明显高于高-中分化,不同分化程度大肠癌比较差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:EMT与大肠癌的发生发展及分化程度有关.     

幽门螺杆菌通过Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞侵袭及血管新生因子的作用研究

目的 研究幽门螺杆菌（Hp）通过Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞侵袭及血管新生因子的作用。方法 收集手术切除的胃癌组织并检测Wnt1、Wnt3a、β-catenin、MMP-7、N-cadherin、E-cadherin、VEGF、bFGF、Ang-2 mRNA的相对表达量。培养胃癌细胞株SGC-7901,分为对照组、Hp组、Hp + ICG-001组。对照组用不含细菌及药物的DMEM处理,Hp组用含有Hp的DMEM处理,Hp + ICG-001组用含有Hp及Wnt/β-catenin信号通路抑制剂ICG-001的DMEM处理。采用Western blotting检测Wnt1、Wnt3a、β-catenin、MMP-7、N-cadherin、E-cadherin蛋白的相对表达量。采用Transwell检测侵袭数目。采用酶联免疫吸附试验检测VEGF、bFGF、Ang-2的含量。结果 与Hp阴性胃癌组织比较,Hp阳性胃癌组织中Wnt1、Wnt3a、β-catenin、MMP-7、N-cadherin、VEGF、bFGF、Ang-2 的mRNA相对表达量均增加（P <0.05）,E-cadherin 的mRNA相对表达量降低（P <0.05）;Hp组Wnt1、Wnt3a、β-catenin、MMP-7、N-cadherin蛋白相对表达量、侵袭数目、VEGF、bFGF、Ang-2的含量高于对照组（P <0.05）,E-cadherin的相对表达量低于对照组（P <0.05）;Hp + ICG-001组Wnt1、Wnt3a、β-catenin、MMP-7、N-cadherin蛋白相对表达量、侵袭数目、VEGF、bFGF、Ang-2的含量低于Hp组（P <0.05）,E-cadherin的相对表达量高于Hp 组（P <0.05）。结论 Hp通过Wnt/β-catenin信号通路促进胃癌细胞的侵袭及血管新生因子生成。     

外源性BMP9对骨肉瘤细胞MG63的影响与Wnt/β-catenin信号通路的关系

目的 研究外源性骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)过表达对骨肉瘤细胞的影响与Wnt/β-catenin信号通路的关系.方法 用携带人BMP9基因的重组腺病毒AdBMP9转染人骨肉瘤细胞MG63,上调MG63中BMP9的表达水平;MTT法检测细胞增殖能力的变化,Hochest染色法检测细胞凋亡的变化,Transwell实验检测细胞迁移能力的变化;实时定量PCR和Western blot分别检测Wnt/β-catenin信号通路中相关分子β-catenin、c-myc、cyclinD1和E-cadherin在mRNA和蛋白水平表达的变化.统计分析实验结果.结果 获得了过表达BMP9的MG63细胞;BMP9能促进MG63细胞的增殖、迁移和凋亡;MG63细胞中BMP9的过表达增强了Wnt/β-catenin信号通路中相关分子β-catenin、c-myc、cyclinD1的表达,减弱了E-cadherin的表达.结论 BMP9对于骨肉瘤细胞MG63具有正性调节作用,该调控作用可能与Wnt/β-catenin信号通路相关.     

二烯丙基二硫下调β-catenin抑制人胃癌MGC803细胞EMT

目的　研究二烯丙基二硫（DADS）抑制人胃癌MGC803细胞EMT与形态学变化。　方法　应用相差显微镜与透射电镜观察30　mg·L^-1　DADS处理后的MGC803细胞形态学与超微结构的变化。RT-PCR与Western　blot检测β-catenin和EMT标记E-cadherin与Vimentin表达。　结果　30　mg·L^-1　DADS处理MGC803细胞24　h后,相差显微镜显示,与未处理比较,细胞圆形、椭圆形,核浆比值降低,巢状分布,均未见伪足。透射电镜显示,细胞表面微绒毛数目减少,细胞核变规整,核浆比值下降,异型性降低,细胞与细胞之间出现连接结构,细胞器增多。RT-PCR与Western　blot表明,DADS可呈时间依赖性分别下调MGC803细胞β-catenin和Vimentin　mRNA与蛋白和上调E-cadherin　mRNA与蛋白。　结论　DADS可通过下调β-catenin上调E-cadherin与下调Vimentin抑制EMT和伪足形成。