旋毛形线虫预感染对致死型约氏疟原虫感染C57BL/6小鼠免疫应答的影响

目的研究预感染旋毛形线虫1周后C57BL/6小鼠抵御致死型约氏疟原虫攻击感染的能力。方法实验组在小鼠感染旋毛形线虫1周后感染约氏疟原虫,对照组单纯感染约氏疟原虫,观察小鼠原虫血症及生存率的变化。采用流式细胞仪技术检测脾细胞悬液中T细胞数量,酶联免疫吸附试验定量检测脾细胞培养上清中细胞因子,Real-Time PCR法检测转录因子的表达情况。结果与对照组相比,实验组小鼠原虫血症水平降低,差异有统计学意义(P0.05),生存率并未发生改变。实验组小鼠于感染后3 d,CD4+IFN-γ+T细胞及其效应分子IFN-γ,转录因子T-bet相对表达量明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论旋毛形线虫预感染1周可增强C57BL/6小鼠对致死型约氏疟原虫的早期抗感染能力。     

约氏疟原虫感染早期小鼠免疫应答的实验研究

目的:探讨约氏疟原虫感染早期小鼠免疫应答的差异性.方法:约氏疟原虫腹腔感染DBA/2、BALB/c和C57BL/6小鼠,制备薄血膜,姬姆萨染色,计数红细胞感染率;通过ELISA和Griess实验分别检测脾细胞培养上清中γ干扰素(IFN-γ)和一氧化氮(NO)水平.结果:感染第3 d之后,DBA/2小鼠的虫体血症水平显著低于BALB/c和C57BL/6小鼠;将疟原虫寄生的红细胞(PRBC)和脂多糖(LPS)或IFN-γ分别与3种感染第3 d小鼠脾细胞共同培养后,DBA/2小鼠脾细胞培养上清中的IFN-γ和NO水平明显高于BALB/c和C57BL/6小鼠.结论:约氏疟原虫感染早期,不同遗传背景小鼠在Th1型细胞免疫应答的建立和巨噬细胞活化方面存在显著差异.     

日本血吸虫感染C57BL/6小鼠脾脏调节性B细胞的检测

目的探讨日本血吸虫感染C57BL/6小鼠脾脏不同亚群调节性B细胞的含量。方法使用日本血吸虫尾蚴经腹部感染C57BL/6小鼠,5周后分离感染组及正常对照组小鼠脾细胞,制备单个细胞悬液。使用细胞表面染色的方法,通过流式细胞术检测小鼠CD19~+B细胞含量及表达免疫调节相关分子CD5、CD11b以及PD-1的B细胞亚群的含量。结果 C57BL/6小鼠感染日本血吸虫后,脾脏B细胞的百分比含量及数目明显增多,差异有统计学意义(P0.01);CD5~+和CD11b~+B细胞的含量明显增加,差异有统计学意义(P0.05);而PD-1~+B细胞的含量变化不明显,差异无统计学意义(P0.05)。结论日本血吸虫感染能在C57BL/6小鼠体内诱导CD5~+和CD11b~+调节性B细胞产生。     

CpG寡核苷酸对C57BL/6小鼠肝癌模型影响的初步研究

目的建立C57BL/6小鼠肝癌模型并研究CpG寡核苷酸（ODN）对C57BL/6小鼠肝癌模型的治疗效果。方法用HE染色鉴定C57BL/6小鼠肝癌模型。肝癌模型建立后,分别用PBS及CpG寡核苷酸处理C57BL/6小鼠肝癌模型,并用FCM检测小鼠脾脏CD3-FITC、CD4-FITC、CD8-FITC、NK1.1-FITC的组成,ELISA法测免疫小鼠血清中IFN-γ、IL-4水平。结果成功建立C57BL/6小鼠肝癌模型,ODN处理组的肝癌细胞裂解物中CD3-FITC、CD4-FITC、CD8-FITC、NK1.1-FITC的体外杀伤活性以及荷瘤小鼠血清中IFN-γ、IL-4水平均显著高于PBS组。结论 CpG ODN能够提高小鼠对肝癌的免疫功能,尤其是特异性细胞免疫功能     

免疫抑制受体igsf9基因敲除鼠的构建以及对肿瘤生长的影响

目的 构建免疫抑制受体igsf9基因敲除小鼠模型,并探究该小鼠模型对肺癌细胞生长的影响.方法 将Cas 9 mRNA和igsf9-sg RNA显微注射到C57BL/6小鼠受精卵中,利用非同源重组修复引入突变,造成igsf9基因蛋白移码突变、功能缺失;应用PCR和测序技术进行基因型鉴定.将2×106个Lewis肺癌细胞(LL/2)皮下接种到C57BL/6-igsf9+/+和C57BL/6-igsf9-/-小鼠皮下,每3天检测肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线;当肿瘤体积大于2 cm3时,在麻醉状态下处死小鼠,称肿瘤质量、流式细胞仪检测肿瘤组织各免疫细胞水平.结果 igsf9基因4-9外显子区域出现了2892 bp缺失,igsf 9基因发生移码突变,提前出现终止密码子,成功构建igsf9基因敲除小鼠模型,而且该小鼠的体质量以及外周血、脾脏和骨髓中免疫细胞的比例未见明显差异.与C57BL/6-igsf9+/+小鼠相比,C57BL/6-igsf9-/-小鼠显著抑制肿瘤细胞的生长,肿瘤组织浸润,CD3+T细胞、CD3+/CD4+T细胞、CD3+/CD8+T细胞水平显著升高,B细胞、中性粒细胞和巨噬细胞数量未见明显变化.结论 C57BL/6小鼠敲除igsf9基因表达能够促进肿瘤组织中T细胞的浸润或激活,从而抑制肿瘤生长.     

伯氏疟原虫感染小鼠脾脏T淋巴细胞及其表面分子的检测

目的 探讨感染伯氏疟原虫的C57BL/6小鼠脾脏不同免疫细胞的含量及表面分子变化。方法 将C57BL/6小鼠尾静脉注射伯氏疟原虫进行感染,6 d后分离感染组和正常对照组小鼠的脾脏,制备单细胞悬液,然后通过流式细胞术检测小鼠CD8⁺T细胞、γδT细胞和T细胞的含量及其表面分子CXCR3、CD69、CD62L的表达水平变化情况。结果 感染伯氏疟原虫的小鼠脾脏CD8⁺T细胞（5.51%±0.76%）、γδT细胞（0.31%±0.03%）和T细胞（18.60%±3.37%）的百分比含量较正常组（14.04%±1.31%、0.75%±0.07%、33.27%±3.76%）明显减低,差异有统计学意义（P<0.01）;与正常组（21.45%±0.10%、33.49%±3.17%、16.72%±2.16%）相比,感染组小鼠脾脏CD8⁺T细胞、γδT细胞和T细胞的CXCR3（6.30%±0.15%、18.34%±0.61%、5.25%±0.25%）均明显下调（P<0.05）;感染组小鼠脾脏CD8⁺T细胞、γδT细胞和T细胞的CD62L（67.98%±1.18%、54.37%±0.98%、55.06%±1.53%）较正常组（91.96%±0.75%、71.38%±1.02%、82.10%±1.04）%）均明显下调（P<0.05）,而感染组小鼠脾脏CD8⁺T细胞、γδT细胞和T细胞的CD69 （28.13%±0.37%、42.58%±2.06%、34.65%±0.43%）表达水平比正常组（3.70%±0.62%、11.59%±0.41%、7.69%±1.56%）高,差异有统计学意义（P<0.01）。结论 感染伯氏疟原虫的C57BL/6小鼠脾脏CD8⁺T细胞、γδT细胞和T细胞及其表达的CXCR3和CD62L均明显下调,而CD69的表达水平升高,提示机体感染疟原虫后,小鼠的T淋巴系细胞增殖不明显,但其迁移情况有所不同,存在一定的复杂性。     

体外诱导C57BL/6小鼠CIK细胞研究

目的:诱导培养C57BL/6小鼠CIK细胞,并检测其对肿瘤细胞杀伤作用。方法:使用三种细胞因子及抗CD3单抗体外诱导C57BL/6小鼠脾细胞,用CCK-8试剂检测对肿瘤细胞杀伤作用。结果:培养出的CIK细胞主要为CD8+NK1.1+细胞,对肿瘤细胞有较强杀伤作用。结论:成功诱导出C57BL/6小鼠CIK细胞。     

伯氏疟原虫氯喹敏感株和抗性株感染ICR鼠病理变化的比较研究

目的：研究伯氏疟原虫（Plasmodium berghei)的抗药性与致病力的关系。方法：比较伯氏疟原虫氯喹敏感株（N）和抗性株（RC）感染ICR鼠的肝、脾、脑、心、肺、肾等重要脏器病理组织学的动态变化。结果：N株感染后,小鼠肝、脾有较多的疟色素沉着,肺脏呈郁血性水肿;脑微血管充血和阻塞;各脏器呈急性炎症的病理变化特点。RC株感染后,小鼠肝、脾脏的病理组织学改变与原虫血症的变化有关。肺脏呈间质性肺炎,各脏器呈慢性增生性炎症的病理变化特点。结论：N株致病力较强,感染后引起宿主死亡的主要原因是感染疟原虫的红细胞对脑微血管内皮细胞的粘附,造成微血管阻塞;RC株致病力较弱,宿主的免疫应答反应在感染早期可能是CD4^ Th1相关的迟发型超敏炎症反应,而感染后期是CD4^ Th2辅助作用下的抗体依赖性的免疫应答,并在疟原虫的最后清除上起着关键性的作用。     

非洲爪蟾TGF-β5和小鼠TRP-2联合免疫诱导产生抗肿瘤免疫应答

目的研究非洲爪蟾转化生长因子-β5(aTGF-β5)基因免疫对肿瘤治疗性质粒DNA疫苗诱导抗肿瘤免疫应答的效能的影响,探讨所诱导免疫应答的抗肿瘤机制.方法用aTGF-β5真核表达质粒和小鼠酪氨酸酶相关蛋白2(mTRP-2)真核表达质粒联合免疫野生型C57BL/6小鼠、CD4缺陷的C57BL/6小鼠和CD8缺陷的C57BL/6小鼠,于免疫前或免疫后接种黑色素瘤细胞B16F10,观测肿瘤生长和小鼠存活情况.结果两种质粒联合免疫能在野生型C57BL/6小鼠体内诱导产生保护性和治疗性抗肿瘤免疫,而mTRP-2真核表达质粒单独免疫野生型C57BL/6小鼠及两种质粒联合免疫CD4或CD8缺陷的C57BL/6小鼠均不能诱导产生抗肿瘤免疫应答.结论 aTGF-β5基因免疫能增强编码mTRP-2的肿瘤治疗性质粒DNA疫苗诱导抗肿瘤免疫应答的能力;T细胞免疫应答的诱导是抗小鼠黑色素瘤免疫应答所必需的.     

剔除CCR5基因供者小鼠细胞加重急性移植物抗宿主疾病

目的评价供者CCR5在经过强化预处理的骨髓移植动物模型受者体内的作用,为异基因造血干细胞移植的临床应用提供科学依据。方法经过致死剂量照射的BALB/C小鼠接受异基因C57BL/6小鼠骨髓移植。根据回输的细胞不同分为4组:1)B6 CCR5 KO组,受者接受C57BL/6 CCR5-/-小鼠骨髓和脾脏细胞;2)B6 WT组,受者接受野生型C57BL/6小鼠骨髓和脾脏细胞;3)B6 CCR5 KO BMC组,受者只接受C57BL/6 CCR5-/-小鼠骨髓细胞;4)B6 WT BMC组,受者只接受野生型C57BL/6小鼠骨髓细胞。结果与B6 WT组比较,B6 CCR5 KO组小鼠以更快的速度死于急性移植物抗宿主疾病(GVHD);其受者体内的CD8+T细胞大量增生;T细胞恢复后产生更多的干扰素-γ(INF-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α),T细胞有丝分裂原刀豆素水平处于较高水平,进一步促进T细胞增生。组织学检测提示移植剔除CCR5基因受者细胞的小鼠肾脏出现病理损伤,肝脏存在更为严重的病理变化。结论剔除CCR5基因的异基因骨髓移植使GVHD发病率增加,供者CD8+T细胞在受者体内增生加重肝肾损害。提示CCR5在异基因骨髓移植中起着重要作用。     

北沙参对免疫抑制C57BL/6J小鼠T淋巴细胞亚群影响的实验研究

目的研究北沙参超临界二氧化碳(SFE-CO2)萃取物对免疫抑制C57BL/6J小鼠T淋巴细胞亚群的影响。方法将实验用C57BL/6J雌性小鼠32只,随机分为空白组、模型组、北沙参SFE-CO2萃取物低、高剂量组,每组8只。第7天处死小鼠,眼静脉取血,EDTA抗凝,血球计数仪自动检测WBC、RBC、PLT;流式细胞术检测,计算T细胞亚群绝对数量。结果北沙参SFE-CO2萃取物可显著提高免疫抑制C57BL/6J小鼠外周血中WBC、PLT、CD3+T、CD4+T和CD8+T细胞的绝对数量。结论北沙参SFE-CO2萃取物对免疫抑制C57BL/6J小鼠外周免疫系统有较显著的恢复作用。     

蝎毒素对小鼠多种免疫细胞活化的影响

目的:探讨东亚钳蝎毒素(BMK IA)对小鼠体内多种免疫细胞活化的影响.方法:C57BL/6小鼠48只,随机数字表法分为空白对照组和实验组,每组分为4批,每批6只,各检测一种免疫细胞.实验组小鼠一次性静脉注射0.004 mg/kg的BMK IA,对照组给予等体积的生理盐水.流式细胞术分别检测2组小鼠给药0、2、8、12...     

不同品系小鼠对实验感染念珠状链杆菌敏感性的观察

本文通过念珠状链杆菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｕｓｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ，Ｓ．ｍ．）实验感染昆明、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、ＢＡＬＢ／ｃ、ＩＣＲ、ＮＩＨ、ＤＢＡ共６个品系小鼠，观察其对Ｓ．ｍ．敏感性的差异。其中昆明、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ两个品系在腹腔接种后表现出明显的临床、病理改变。昆明小鼠发病率和死亡率分别为９２％和８０％；Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ分别是８０％和１２％。昆明小鼠较之Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠起病急、病情严重，多数动物死于感染的急性期。其余品系的发病率为：ＮＩＨ８％、ＢＡＬＢ／ｃ和ＤＢＡ４％，没有动物死亡；ＩＣＲ在接种后无任何临床病理改变。在实验感染后临床病理改变方面，昆明小鼠和Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠间有较大不同。昆明小鼠以末梢血管淤血、四肢尾部水肿、关节炎、截瘫、腹泻为主，而Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠则以注射部位和其它部位皮下脓肿、化脓性关节炎为主。本研究提示，中国昆明小鼠对Ｓ．ｍ．敏感性最高，可以将其作为“哨兵动物”用于实验大鼠Ｓ．ｍ．的常规监测；不同品系小鼠不仅对实验感染Ｓ．ｍ．的敏感性不同，而且表现出不同的临床病理改变。     

ICOS-Ig combined with CsA induces long term survival of cardiac allografts in mouse

Objective： To study the synergistic effect of ICOS-Ig combined with cyclosporine （CsA） on mouse heart transplantation and explore its therapeutic potential. Methods： ICOS-Ig fusion protein was generated by fusing the extraeellular portion of human ICOS and Fc portion of human IgG. To investigate the effect of ICOS-Ig on T-cell proliferation in vitro, ICOS-Ig or IgG was added to the primary MLR cultures （BALB/c spleen T cells as responder cells and irradiated C57BL/6 spleen cells as stimulator cells）. The cells responsiveness rates were detected by 3H-TdR methods. Then the T cells of each group in primary MLR were cultured as responder cells for secondary MLR, and irradiated C57BL/6 （donor） or C3H （third party） spleen cells as stimulator cells. To study the effect of ICOS-Ig on T-cell proliferation in vivo, CFSE-labeled C57BL/6 spleen cells were transferred to irradiated BALB/c mice. Mice were then treated with IgG, ICOS-Ig or CsA. Seventy two hours after transfer, the spleen cells of the mice were harvested for the detection of CD4^＋CFSE^＋ and CD8^＋CFSE^＋ by FACS. C57BL/6 mouse underwent transplantation of the hearts of BALB/c mouse and were then randomly divided into five equal groups： no treatment group, control lgG treated group （250 gg i.p. d2, 4, 6）, ICOS-Ig treated group （250 μg i.p. d2, 4, 6）, CsA treated group （10 mg/kg i.p. d0-6）, ICOS-Ig combined with CsA group. The cardiac allograft survival was monitored by daily palpation. Results： In primary MLR, ICOS-Ig inhibited T-cell proliferation, （inhibition ratio 58i8.2% in 50 μg/ml）. In secondary MLR, ICOS-Ig specifically inhibited donor spleen cells, which suggested ICOS-Ig could induce donor-specific hyporesponsiveness. In the CFSE dye assay, CD4^＋CFSE^＋ and CD8^＋CFSE^＋ in ICOS-Ig and CsA group was stronger than those in control group, which showed ICOS-Ig and CsA could inhibit the proliferation of allo-reactive T cells in vivo. In mouse heart transplantation model, survival was significantly prolonged in animals treated with ICOS-Ig or CsA as compared with controls. Moreover, ICOS-Ig combined with CsA group had even longer engraftment （〉100 d） than ICOS-Ig or CsA used alone. In histological examination, it was found that there were congestions and edemas in no treatment and IgG treated recipients, together with a lot of inflammatory cells infiltrated. Allogeneic hearts from ICOS-Ig and/or CsA immunized recipients revealed milder histological changes. It was revealed in mechanical analysis that splenic T cells from recipients also exhibited depressed mixed leukocyte reactions （MLR） and cytotoxic lymphocyte reactions （CTL）. Conclusion： These data suggest that ICOS-Ig combined with CsA induces a long-term survival of mouse cardiac allografts, whereas monotherapy is less effective in this regard. Thus, ICOS-Ig combined with CsA treatment may be a novel regimen to combat allograft rejection.     

门静脉输注诱导耐受中CD4~+T细胞和CD8~+T细胞的不同作用

目的:探讨不同T细胞在门静脉输注诱导耐受中的作用。方法:门静脉输注经丝裂霉素处理过的C57小鼠脾细胞给BALB/c,7 d后分离受鼠脾细胞,流式分选其中CD3+、CD4+、CD8+T细胞,过继输注给另一BALB/c,并同时行C57或C3H来源的心脏移植,观察并比较心脏移植物存活时间。结果:过继输注PVI鼠T细胞后,可以转移耐受;过继输注PVI鼠CD4+T细胞,可使供体来源的C57供心存活时间延长,而对第三系C3H供心存活时间无明显延长。过继输注PVI鼠CD8+T细胞无此效应。结论:在门静脉输注诱导耐受的模型中,CD4+T细胞可以转移耐受,且此耐受为抗原特异性,CD8+T细胞无此效应。     

昆明小鼠对伯氏疟原虫的易感性和组织病理研究

目的探讨昆明小鼠对伯氏疟原虫(Plasmodium berghei)的易感性及其感染后的组织病理变化。方法 6周龄昆明小鼠腹腔接种1×106个感染伯氏疟原虫的红细胞,观察小鼠的生存时间及临床症状。感染后第2天开始每天采尾静脉血制作薄血膜片,Giemsa染色,计数血虫率。感染后第4天开始经肛门测小鼠体温。小鼠临死时取脑、肺、肝和脾组织,经10%中性福尔马林固定24h以上,脱水、包埋后制成4μm厚石蜡切片,苏木素-伊红染色,显微镜下观察各组织的病理变化。结果昆明小鼠腹腔接种感染伯氏疟原虫后的生存时间为8～21d;小鼠感染后第2天外周血可检出疟原虫,小鼠临死前血虫率达高峰;肉眼观察肝、脾体积增大,颜色变深,显微镜下见大量疟色素沉着,肝实质组织可见少量灶性炎性细胞聚集;脑和肺组织见感染疟原虫红细胞沉积在微血管壁,引起脑血管堵塞、大脑皮层出血灶和肺水肿、肺泡腔内炎性细胞渗出。结论昆明小鼠对伯氏疟原虫易感性较高,脑、肺、肝和脾组织均呈现出典型的疟疾病理特征,可作为研究疟原虫致病机制的动物模型。     

红景天苷对脓毒症小鼠脾脏免疫功能的影响

目的 评价红景天苷对脓毒症小鼠脾脏免疫细胞数量及功能的影响。方法 采用随机数字表法将30只C57BL小鼠分为假手术组、对照组和实验组（每组10只）。七氟烷麻醉下制备盲肠结扎穿孔脓毒症模型,手术后假手术组和对照组尾静脉给予1 mL生理盐水,实验组手术后尾静脉给予1 mL红景天苷（20 mg/kg）。各组小鼠尾静脉给药后12 h,取小鼠脾脏及外周血,ELISA检测细胞因子IL-6、IL-2和IL-10水平,流式细胞术检测小鼠脾脏CD4⁺与CD8⁺ T细胞数量变化,RT-PCR检测趋化因子CXCL-10 mRNA表达水平。结果 对照组较假手术组小鼠脾脏及外周血细胞因子IL-6,IL-2,IL-10水平显著升高;脾脏中CD4⁺与CD8⁺ T细胞数量显著增加;趋化因子CXCL-10 mRNA表达水平显著升高。与对照组相比,实验组小鼠脾脏及外周血细胞因子IL-6、IL-2、IL-10水平显著降低;脾脏中CD4⁺与CD8⁺ T细胞数量显著减少;CXCL-10 mRNA表达水平显著降低。结论 脓毒症时小鼠脾脏免疫功能发生明显变化,红景天苷可显著改善脓毒症小鼠脾脏免疫功能。     

混合胸腺裸小鼠移植模型的建立及重建T细胞功能的体外研究

目的　建立混合胸腺移植模型 ,并在体外观察重建T细胞的功能状况。方法　首先建立混合胸腺裸小鼠左肾包膜下移植模型 ,流式细胞仪检测受体动物外周血中T细胞的重建情况 ,并利用刀豆素A(concanavalinA ,ConA)增殖实验和混合淋巴细胞培养检测其体外功能状态。结果　混合胸腺移植 3个月后 ,移植的胸腺组织在裸小鼠肾包膜下能够正常发育 ,并有效重建了受体外周血中的CD4 T和CD8 T细胞。体外功能检测显示 ,受体的脾细胞对ConA的刺激有良好的反应性 ,并对供体胸腺来源的F3Q44大鼠抗原刺激表现为特异性的低反应。结论　混合胸腺移植不仅在数量上可重建受体裸小鼠外周血中CD4 T和CD8 T细胞 ,而且受体中重建的T细胞还可发挥正常的免疫功能