子痫前期蜕膜组织差异蛋白的筛选与鉴定

目的应用蛋白质组学方法筛选子痫前期差异蛋白,探讨差异蛋白与子痫前期发生的可能关系.方法收集5例正常足月妊娠妇女和5例足月子痫前期重度患者胎盘母面及宫壁上的蜕膜组织,提取总蛋白.双向凝胶电泳技术对总蛋白进行分离,考马斯亮兰染色,获得蛋白质图谱.用PDQuest软件进行图像分析,寻找差异蛋白,随机选取8个差异蛋白质点进行胶内酶解,用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术获得肽质量指纹谱,搜寻蛋白质数据库鉴定蛋白质并进行初步分析.结果获得了正常妊娠及子痫前期重度患者蜕膜组织双向电泳凝胶图谱,蛋白质点子痫前期组为(436±13)个点,正常妊娠组为(425±16)个点,图像分析结果显示表达丰度相差2倍以上的差异蛋白质点有14个,它们在子痫前期中均表现下调.随机选取的8个蛋白质点均成功得到鉴定,它们分别是膜联蛋白-V,血红蛋白β链,Rho-GDP解离抑制剂1,氯离子细胞内通道蛋白1,原肌球蛋白4,平滑肌蛋白2202,α1-抗胰蛋白酶和纤维蛋白原β链.结论子痫前期重度患者蜕膜组织中存在差异蛋白,这些蛋白质在子痫前期的发病过程可能起重要作用.     

人骨髓间质干细胞诱导成骨分化过程中差异表达蛋白的质谱鉴定及生物信息学分析

目的 比较入骨髓间质干细胞(hMSCs)诱导成骨分化过程中的蛋白质组差异,寻找hMSCs成骨分化相关蛋白质.方法 体外培养hMSCs并诱导成骨分化,收集hMSCs和成骨诱导分化3d的细胞的全蛋白,应用双向凝胶电泳(2-DE)分离和图像分析软件进行蛋白质点的识别和检测,通过比较蛋白质组学技术找出凝胶上差异2.0倍以上的蛋白质点,应用基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和生物信息学方法对差异蛋白点进行蛋白质的鉴定和分析.结果 hMSCs在体外成功诱导成骨分化,通过2-DE分离、MALDI-TOF-MS分析和生物信息学方法鉴定出了38种差异蛋白,其中22种蛋白质在成骨诱导3d后表达明显上调,16种蛋白质在成骨诱导3d后表达明显下调.利用Gene Ontology对所鉴定的蛋白质按分子功能和生物学途径进行分析显示,参与体内代谢、发育过程、催化反应和酶调节活性的蛋白质分别占29％、32％、44％、16％.结论 蛋白质组学较好地显示了hMSCs诱导成骨分化过程中的蛋白质表达差异,这为进一步阐明hMSCs成骨分化的分子机制提供了新的思路.     

正常乳腺与乳腺癌核基质蛋白的双相电泳-飞行时间质谱研究

目的：应用比较蛋白质组学方法分析正常乳腺与乳腺癌组织的差异表达核基质蛋白,为人乳腺癌发病机制及其早期诊断的研究提供理论依据．方法：应用双相电泳（2-DE）每组分离4例乳腺组织核基质蛋白;应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）获得差异蛋白点的肽质量指纹图谱（PMF）;通过Mascot软件查询NCBI数据库鉴定蛋白质．结果：每张图谱约检测到900个蛋白质点,共发现27个差异表达蛋白,选择背景清晰、重复性及分辨率较好、蛋白表达差异明显的点进行质谱分析,结合表观分子质量及等电点,初步鉴定了12种蛋白质．结论：这些差异蛋白质部分有望成为乳腺癌诊断及治疗的分子标志物．     

Sj-UV-致弱尾蚴单链抗体库的构建及筛选

目的构建和鉴定日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)紫外线(UV)-照射致弱尾蚴单链抗体(single chain Fv,ScFv)表达文库,并以此作为高通量的库源筛选出针对有潜在保护力的Sj尾蚴66-68 kDa抗原(Schistosoma japonicum cercariae antigen 66-68kDa,SCA66-68kDa)的单链抗体。方法选择最佳紫外灯照射条件,构建UV-致弱尾蚴小鼠模型,通过其血清被动转移实验证实其是否具有抗血吸虫攻击感染的保护效果;随后提取该小鼠脾脏mRNA,利用噬菌体展示技术构建UV-照射致弱尾蚴单链抗体库,并从库容量、多样性等方面进行鉴定;运用直接菌落挖集法以SjSCA66-68kDa筛选该抗体库,获得阳性克隆进行蛋白表达,再与SCA进行反应,验证其与SjSCA66-68kDa反应的特异性。结果构建UV-致弱尾蚴动物模型中的血清转移至小鼠体内得到42.5%的减虫率,显著高于日本血吸虫感染血清转移组的减虫率(28.0%);日本血吸虫UV-致弱尾蚴单链抗体库的库容量测定为1.9×108,重组率为100%;运用抗原直接菌落挖集法筛选共获得6个SCA66-68kDa阳性克隆,经SDS-PAGE、Western-blot分析结果显示可溶性ScFv获得了正确表达,且与相应抗原SjSCA66-68kDa特异性结合,证实成功获得了特异性抗SjSCA66-68kDa单链抗体。结论成功构建了高效日本血吸虫UV-致弱尾蚴单链抗体库,从该库筛选共获得6个阳性克隆,均能诱导表达SjSCA66-68kDa特异性可溶性单链抗体。     

多囊卵巢综合征差异蛋白质组分析

筛选和鉴定与多囊卵巢综合征相关蛋白.方法:以固相pH梯度等电聚焦为第一向,垂直平板十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳为第二向进行血清蛋白质分离;图像分析软件PDQuest 7.3分析电泳图谱寻找有意义的差异蛋白点,运用MALDI-TOF-MS质谱鉴定,分析其意义.结果:选取具有明显差异的3个蛋白点进行质谱鉴定,经数据库查询,2个蛋白点获得了有意义的结果分别为载脂蛋白A-I(Apolipoprotein A-I,ApoA-I),热休克蛋白70(Heat shock protein,HSP70).结论:多囊卵巢综合征患者与正常妇女的血清蛋白表达存在差异,这些差异蛋白有可能是多囊卵巢综合征特异相关性蛋白,并有可能成为多囊卵巢综合征诊断的分子标志物.     

脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证蛋白质组学比较研究

目的 建立脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证血清双向凝胶电泳图谱,初步分析其差异蛋白质表达情况.方法 双向凝胶电泳(2-DE)分离脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证血清标本,考马斯亮兰染色,PD-QUEST图像分析系统分析,从凝胶中选取分离较好的蛋白质点,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析获取肽质量指纹图谱(PMF),Mascot软件搜索SWISS-PROT数据库鉴定蛋白质,对差异蛋白质进行组间对比.结果 获得了分辨率较好的脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证双向凝胶电泳图谱,质谱分析了29个差异蛋白质点,获取了87张肽质量指纹图谱,通过查询数据库鉴定了29个蛋白质,其中部分蛋白质与肝阳化风证及阴虚风动证发生发展有关.结论 建立了脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证血清双向凝胶电泳图谱,并应用质谱技术鉴定了部分差异蛋白质点,为脑梗死肝阳上亢证与阴虚风动证与正常组血清双向凝胶电泳图谱血清蛋白质组数据库的建立提供了有意义的数据,并认为蛋白质组学能在脑梗死不同证型具有代表意义.     

激光捕获显微切割技术在食管鳞癌蛋白质组学研究中的应用

目的:探讨激光捕获显微切割技术(1aser capture microdissection system,LCM)在获得较单一食管鳞癌细胞中的价值,为食管癌组织蛋白质组学的研究奠定基础.方法:通过激光捕获显微切割技术获取食管鳞癌和正常食管上皮细胞,采用双向凝胶电泳方法分离蛋白质,采用计算机辅助的图像分析技术比较分析凝胶图像.结果:激光捕获了较纯的目的细胞,获得到了分辨率和重复性较好的双向凝胶电泳图谱,比较分析发现38个蛋白点的表达量存在明显差异,其中新增蛋白点3个,缺失5个,20个蛋白点明显上调,10个蛋白点发生明显下调.结论:本研究结果提示LCM技术能较好地获取较为均一的目的细胞,并发现食管鳞癌与正常食管上皮细胞蛋白质表达存在明显差异,可能与食管鳞癌发生机制有关.     

肺癌相关蛋白的筛选与鉴定

目的:应用蛋白质组学方法筛选肺癌相关蛋白,为阐明肺癌发生的分子机制和预后研究提供理论依据. 方法: 收集8例手术切除的新鲜肺癌组织及同一患者手术切缘的癌旁组织,提取可溶性总蛋白. 应用等电聚焦(IEF)电泳和十二烷基磺酸钠聚丙烯酰凝胶电泳(SDS-PAGE)技术将可溶性总蛋白分离,得到肺癌的蛋白质组分析型双向电泳图谱,经PDQuest凝胶图像分析软件分析后找出差异蛋白点. 胶内酶解差异表达的蛋白点,基质辅助电离解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获得肽质量指纹图谱(PMF),搜寻蛋白质数据库,并运用生物信息学鉴定蛋白质,分析蛋白的生物学意义和生物学功能,作为肺癌标志物的候选蛋白. 结果: 分别将8例肺癌组织及配对的癌旁组织可溶性总蛋白经过重复3次双向电泳,建立了肺癌组织蛋白质表达谱. 经PDQuest凝胶图像分析软件进行分析后, 12个蛋白质斑点只在肺癌组织有表达;6个蛋白质斑点只在癌旁表达. 对高丰度的肺癌特异表达的蛋白点进行鉴定,结果表明这些特异蛋白分别为钙粒蛋白B,Calgizzarin,载脂蛋白A-I,载脂蛋白E,Ras相关蛋白Rab-14,亲环素. 结论: 建立了人肺癌组织和癌旁组织的双向电泳图谱,为建立相应的蛋白质数据库提供了基础数据;鉴定了钙粒蛋白B等肺癌相关蛋白质,为进一步寻找肺癌蛋白标志物奠定了基础,对阐明肺癌发生的分子机制和预后研究有重要理论意义.     

人肺腺癌细胞系A549与正常支气管上皮细胞系HBE的比较蛋白质组学研究

目的利用蛋白质组学技术建立人肺腺癌细胞系A549与正常支气管上皮细胞系HBE的差异蛋白质表达谱,并对部分在A549细胞中表达明显上调的蛋白质点进行鉴定。方法提取A549和HBE细胞的总蛋白,进行双向凝胶电泳(2-DE),经图像分析识别差异表达蛋白质点,再应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定出部份在A549细胞中表达明显上调的蛋白质。结果 (1)分析两种细胞系的2-DE图谱,发现差异表达蛋白质点共256个,仅在A549细胞中表达的蛋白质点15个,仅在HBE细胞中表达的蛋白质点21个;(2)通过肽质量指纹图谱分析鉴定出在A549细胞中表达明显上调的7种蛋白质,分别是表皮生长因子受体(EGFR)、鼠双微粒体2蛋白(MDM2)蛋白、CD44蛋白、细胞骨架蛋白细胞角蛋白8(CK8)、不均一性核糖体蛋白H(hnRNP H)、热休克蛋白60(HSP60)、磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)。结论运用蛋白质组学技术成功获得了A549细胞与HBE细胞的2-DE图谱,并鉴定出部分在A549细胞中表达明显上调的蛋白质,为进一步筛选用于人肺腺癌诊断、治疗及预后评估的分子标志物奠定了一定的基础。     

日本血吸虫紫外线致弱尾蚴免疫小鼠攻击感染后的组织细胞反应

目的 观察日本血吸虫紫外线致弱尾蚴疫苗(UVC)免疫动物攻击感染后的局部组织免疫病理变化.方法 将70只C57BL/6小鼠随机分为疫苗免疫组和感染对照组.疫苗组小鼠接种紫外线致弱日本血吸虫尾蚴后5周,再经腹部皮肤攻击感染正常日本血吸虫尾蚴(800±50)条;感染对照组经皮肤感染同量尾蚴.于攻击感染后6～120 h的不同时间点各剖杀小鼠5只,取攻击部位皮肤及/或肺组织,进行病理学观察.结果 UVC疫苗免疫小鼠攻击感染日本血吸虫尾蚴后,皮肤炎症反应较感染对照出现早、反应强烈、持续时间长,EOS百分比高,但肺部出血斑点出现时间(72 h)迟于感染对照组(48 h).72～120 h,疫苗组小鼠肺部局灶性炎症明显,肉芽肿样结节形成,肺泡壁多正常.而感染对照组小鼠肺组织炎症轻,但肺泡壁水肿明显,且有较多红细胞渗出.结论 紫外线致弱尾蚴疫苗免疫增强了小鼠皮肤及肺组织的细胞反应及其杀虫作用.     

Differential analysis of two-dimensional gel electrophoresis profiles of spermatozoa protein in human normal motility sperm and idiopathic asthenospermia

Objective: To evaluate the application of two-dimensional electrophoresis in the research of differentially expressed proteins in the human asthenospermia. Methods: Two-dimensional gel electrophoresis was performed on 4 normal sperm samples from healthy men and 4 sperm samples from 4 asthenospermia patients. After silver staining, the differential expression proteins were analyzed by PDQuest 2D analysis software. Results: Six differential protein spots were identified. Four spots showed increased expression in the control gels compared with the patient gels. Conclusion: The protein profiles of differential expression between the normal spermatozoa and idiopathic asthenospermia were established and some differential proteins were found. The data of this study would establish the better fundament for further isolation and identification of differentially expressed proteins in human asthenospermia sperm.     

应用二维电泳和质谱技术筛选乳腺癌相关差异表达蛋白质的初步研究

目的:通过分离并鉴定乳腺癌、癌旁和正常乳腺组织的差异表达蛋白质,以发现可能用于早期诊断的乳腺癌肿瘤标志物.方法:提取人乳腺癌、癌旁和正常乳腺组织的总蛋白质,用双向电泳分离蛋白并进行比较.选择在乳腺癌组织中明显差异表达的蛋白点,行质谱分析.结果:获得了分辨率和重复性均很好的凝胶蛋白图谱.对筛选出的在乳腺癌组织中明显差异表达的20个蛋白点,共有13个蛋白点被成功鉴定,其中在乳腺癌组织巾高表达的为8个,低表达的为5个.结论:乳腺癌组织相对于癌旁、正常乳腺组织蛋白存在明显的差异,过蛋白质组学方法筛选并鉴定出的这些蛋白质可能成为用于早期诊断和评价预后的乳腺癌标志物.     

新生儿神经管畸形的血清蛋白组学研究

目的 寻找神经管畸形新生儿血清中异常表达的蛋白质。 方法 通过二维凝胶电泳分离神经管畸形新生儿及正常新生儿血清,用PDQuest图像软件比较电泳图谱中的异常蛋白质点,用MALDI TOF/ TOF串联质谱仪分析蛋白质,所得的质谱图通过GPS软件在Mascot数据库中检索并鉴定蛋白质。结果 筛选出35个表达差异的蛋白质点,其中有8个蛋白质点表达上调,27个蛋白质点表达下调。选取四个蛋白质点进行鉴定,其中结合珠蛋白前体表达升高, HP protein, 血清载脂蛋白A-1前体及immunoglobulin heavy constant gamma 1三种蛋白表达均降低。 结论 神经管畸形可以导致血清中多种蛋白的的异常表达。     

Up-regulated manganese superoxide dismutase expression increases apoptosis resistance in human esophageal squamous cell carcinomas

Background Esophageal cancer is one of the most common malignancies in the world. In order to identify the proteins associated with esophageal squamous cell carcinomas （ESCC）, we analyzed the protein profiles of ESCC cases with tumor and matched adjacent normal tissues. Methods Two-dimensional electrophoresis （2-DE） was carried out to analyze the protein profiles. Dysregulated protein spots were identified by Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Time-of-Flight （MALDI-TOF） and verified by liquid chromatography/electrospray ionization ion trap-mass spectrometry/mass spectrometry （LC-ESI-IT MS）. RT-PCR and immunohistochemistry on tissue microarray were performed to confirm the gene dysregulation in esophageal cancerous tissues. RNA interference （RNAi） was used to knock down the gene expression in ESCC cell lines. Apoptosis assay with annexin V-FITC/PI staining was conducted and cells were analyzed by flow cytometry. Results 2-DE showed that two protein spots with approximate molecular weights and different pl were elevated in 12 out of 18 ESCCs as compared to the corresponding normal tissues. Both the two spots were identified as MnSOD by MALDI-TOF and were verified by LC-ESI-IT MS. MnSOD overexpression was detected in 14 tumors out of 24 cases by RT-PCR and 52 tumors out of 116 cases by immunohistochemistry comparing to normal epithelia, siRNA-mediated silencing of MnSOD in KYSE450 and KYSE150 cell lines revealed that MnSOD protected ESCC cells from apoptosis induced by ultraviolet （UV） and doxorubicin （DOX）. Conclusions These findings suggest that there existed two isoforms of MnSOD protein in normal and tumor esophageal tissues. MnSOD was overexpressed in ESCC and its up-regulation in esophageal cancer cells was associated with apoptosis resistance.     

荧光差异双向凝胶电泳筛选肾透明细胞癌及癌旁组织中的差异表达蛋白

目的 寻找肾癌相关肿瘤标记物,用于肾癌临床诊断、药物治疗靶点的选择及预后监测.方法 采用荧光差异双向凝胶电泳技术筛选15例肾透明细胞癌及癌旁正常肾组织差异表达蛋白质点.统计学采用t检验进行定量比较,以两组蛋白含量比值在1.5倍及以上,P<0.05,被认为是差异表达蛋白质点.用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱或串联质谱技术进行差异表达蛋白质点鉴定.结果 共筛选分离出27个差异表达蛋白质点,经质谱技术共成功鉴定了26种蛋白质,11种蛋白质在肾癌组织中上调,15种蛋白质下调.其功能覆盖细胞活动的多个方面,其中线粒体短/支链特异性酰基辅酶A脱氢酶、醛糖1-表异构酶、PRDX4、CAPG、β-防御素107、微纤丝相关糖蛋白4等6种蛋白是我们首次采用蛋白质组学技术成功筛选的肾癌差异表达蛋白质,并发现了1个预测蛋白(UCRIL).结论 荧光差异双向凝胶电泳在肾癌组织中获得较好的筛选效果,新筛选的差异表达蛋白有望成为肾癌分子生物学标记物,为后续研究提供了实验依据.     

仙台病毒载体对未成熟树突状细胞蛋白表达的影响

目的:研究仙台病毒载体对未成熟树突状细胞(DC)蛋白质表达的影响. 方法:提取转染仙台病毒载体的树突状细胞和对照细胞的总蛋白,定量. 双向凝胶电泳分离蛋白质组分,胶体银染显色,PDQuest进行图像分析后选取差异点,胶内酶解后MALDI-TOF MS进行肽指纹图谱鉴定. 结果:图像分析结果显示,处理组2-DE图缺少了40个以上的蛋白点,对其中明显没有表达的5个蛋白点进行了鉴定. 结论:仙台病毒载体感染未成熟树突状细胞可引起蛋白表达的减少.     

与食道鳞状上皮细胞癌发生相关的细胞骨架及相关蛋白的筛选鉴定

目的 比较永生化食道上皮细胞系和食道鳞状上皮细胞癌(ESCC)细胞系的差异表达细胞骨架相关蛋白图谱,筛选并探讨与ESCC发生发展相关的细胞骨架及相关蛋白.方法 采用组分蛋白分离方法提取细胞骨架相关蛋白,利用双向凝胶电泳(2DE)联合MALDI-TOF/TOF串联质谱技术,分析并鉴定永生化食道上皮细胞系NE1及ESCC细胞系HKESC-2中差异表达的细胞骨架及相关蛋白,并用Westem blot验证其中感兴趣的差异蛋白在一组食道上皮来源细胞系和ESCC患者肿瘤组织中的表达情况.结果 三次独立实验结果表明永生化食道上皮细胞系NE1和ESCC细胞系HKESC-2有52个蛋白点表达差异超过2倍,31个蛋白点经质谱分析鉴定为28种蛋白质,其中16种蛋白质在HKESC-2细胞中表达上调,12种表达下调.Vimentin在所有ESCC细胞系和大部分ESCC肿瘤组织中均呈现高表达,而Annexin Ⅱ则呈现低表达甚至缺失.结论 多种细胞骨架及相关蛋白在ESCC发生发展过程中表达发生变化,某些细胞骨架及相关蛋白的特异性表达模式可能可以作为ESCC诊断的分子标志.     

慢型克山病患者血清蛋白质双向凝胶电泳图谱分析

目的 分析克山病(KD)患者差异表达的血清蛋白质。 方法 以慢型KD和正常血清标本为研究对象,利用双向凝胶电泳(2-DE)分离KD和健康人血清蛋白质,银染显色,PowerLook2100XL扫描仪(Umax)透射扫描获取图像,ImageMaster 2D Platinum 5.0软件分析图像。并通过与ExPASy-SWISS-2DPAGE数据库关联,推测KD相关的差异蛋白。 结果 建立了稳定的慢型KD和健康人血清蛋白质2-DE图谱,分别检测到808和814个蛋白质点,匹配率96.5475%。软件分析显示2组样本共有44个差异蛋白质点,11个仅在KD组血清中表达,12个仅在正常血清组出现,21个为共有蛋白但在表达量上存在差异(KD组14个上调、7个下调,差异倍数 ≥ 3倍,P<0.01)。将差异蛋白与ExPASy-SWISS-2DPAGE数据库关联,在匹配值范围内出现的353个蛋白中,仅比对出KD 2-DE图谱胶内编号为1177的蛋白点在属性上与数据库中的P02774 2-D0004T6名为维生素D结合蛋白(VDBP)匹配度最高,推测编号为1177的差异蛋白是VDBP。 结论 KD患者与正常人血清蛋白质组存在明显差异。推测VDBP可能通过炎症免疫反应途径参与了KD的心肌损伤。     

蛋白质双向电泳技术分析志贺菌诱导耐多药相关蛋白

目的:利用双向电泳技术对志贺菌敏感株与诱导耐多药株全菌蛋白进行蛋白质组学比较,寻找耐多药相关蛋白。方法:采用四类抗生素的次抑菌浓度对临床分离鉴定志贺菌敏感株进行诱导耐多药试验;对志贺菌敏感株及诱导耐多药株全菌蛋白进行双向电泳;电泳图谱采用Image Master 2D Platinum软件分析。结果:成功获得志贺菌诱导耐多药株,在志贺菌敏感株与耐多药株全菌蛋白质图谱中分别检测出946±37个和1 096±189个蛋白质斑点;经分析共发现48个差异表达的蛋白点。结论:蛋白质双向电泳技术可以成功应用于志贺菌耐多药相关蛋白的筛选,此图谱为进一步研究细菌耐多药机理奠定基础。     

Characterization of acute renal allograft rejection by human serum proteomic analysis

To identify acute renal allograft rejection biomarkers in human serum, two-dimensional differential in-gel electrophoresis （2-D DIGE） and reversed phase high-performance liquid chromatography （RP-HPLC） followed by electrospray ionization mass spectrometry （ESI-MS） were used. Serum samples from renal allograft patients and normal volunteers were divided into three groups： acute rejec- tion （AR）, stable renal function （SRF） and normal volunteer （N）. Serum samples were firstly processed using Multiple Affinity Removal Column to selectively remove the highest abundance proteins. Differentially expressed proteins were analyzed using 2-D DIGE. These differential protein spots were excised, digested by trypsin, and identified by RP-HPLC-ESI/MS. Twenty-two differentially expressed proteins were identified in serum from AR group. These proteins included complement C9 precursor, apolipoprotein A-IV precursor, vitamin D-binding protein precursor, beta-2-glycoprotein 1 precursor, etc. Vitamin D-binding protein, one of these proteins, was confirmed by ELISA in the independent set of serum samples. In conclusion, the differentially expressed proteins as serum biomarker candidates may provide the basis of acute rejection noninvasive diagnosis. Confirmed vitamin D-binding protein may be one of serum biomarkers of acute rejection. Furthermore, it may provide great insights into understanding the mechanisms and potential treatment strategy of acute rejection.