结肠癌肝转移患者血清双向电泳图谱的建立及优化

目的建立并优化结肠癌肝转移患者血清蛋白质组双向电泳分离技术。方法对2-DE的各种条件进行调整、优化,通过双向电泳图谱比较各种方法对血清蛋白的分离效果。结果采用pH4~7胶条,含尿素9M、硫脲2M的上样缓冲液,12.5%的SDS-PAGE胶提高了血清蛋白的分离效果。结论血液中高丰度蛋白质的去除能提高了2-DE图谱的斑点数和分辨率。成功建立了血清蛋白质的纯化技术,为寻找疾病的血清学标志物的研究奠定基础。     

激光捕获显微切割技术在食管鳞癌蛋白质组学研究中的应用

目的:探讨激光捕获显微切割技术(1aser capture microdissection system,LCM)在获得较单一食管鳞癌细胞中的价值,为食管癌组织蛋白质组学的研究奠定基础.方法:通过激光捕获显微切割技术获取食管鳞癌和正常食管上皮细胞,采用双向凝胶电泳方法分离蛋白质,采用计算机辅助的图像分析技术比较分析凝胶图像.结果:激光捕获了较纯的目的细胞,获得到了分辨率和重复性较好的双向凝胶电泳图谱,比较分析发现38个蛋白点的表达量存在明显差异,其中新增蛋白点3个,缺失5个,20个蛋白点明显上调,10个蛋白点发生明显下调.结论:本研究结果提示LCM技术能较好地获取较为均一的目的细胞,并发现食管鳞癌与正常食管上皮细胞蛋白质表达存在明显差异,可能与食管鳞癌发生机制有关.     

蛋白质组学方法鉴定喉鳞状细胞癌中的肿瘤相关蛋白

目的利用蛋白质组学方法，建立人喉鳞状细胞癌（简称鳞癌）组织及其癌旁正常黏膜组织的双向凝胶电泳图谱，并识别鉴定其差异表达的蛋白质。方法利用固相pH梯度分离人喉鳞癌组织及癌旁正常黏膜组织的总蛋白质，用图像分析软件比较，以识别差异表达的蛋白质；应用质谱仪得到相应的肽质指纹图谱，’然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点。结果获得分辨率和重复性均较好的双向凝胶电泳图谱，并鉴定出可能与喉癌发生密切相关的13种蛋白质。其中有10种蛋白质在喉癌组织中上调，分别是切丝蛋白1（cofilin-1），核体蛋白SP140（nuclear body protein SP140），内质网素，热休克蛋白90（heatshockprotein90，HSP90），谷胱甘肽S转移酶P（glutathioneS-transferase，GSTP1—1），锰-超氧化歧化酶（superoxidedismutase[Mn]），亲环素A（cyclophilinA），蛋白酶活性复合体2（proteasome activator complex subunit2），载脂蛋白A-I前体（apolipoproteinA．Iprecursor），钙调素（CaM—like protein）。3种蛋白质在喉癌组织中下调，分别是银屑病相关脂肪酸结合蛋白（fatty acidbinding protein，epidermal，E—FABP），钙粒蛋白A（calgranulin A），钙粒蛋白B（calgranulin B）。结论本研究鉴定出了可能与喉癌的发生密切相关的13种蛋白质，提示多种蛋白分子可能同时成为应对这种疾病的有效策略的靶分子，为理解喉癌的癌变机制和改善临床诊治方法提供理论基础。