棘托竹荪菌盖胞外β-葡萄糖苷酶酶学特性研究

目的 研究棘托竹荪菌盖胞外β-葡萄糖苷酶酶学特性. 方法 将棘托竹荪菌盖胞外酶冻干粉以缓冲液进行溶解,经透析、离心后,以DNS为显色剂,以水杨苷为底物,采用分光光度法,对β-葡萄糖苷酶的主要酶学特性和不同抑制剂、激活剂对酶活性的影响进行研究. 结果 β-葡萄糖苷酶的最适反应pH为4.0,最适反应温度为65℃;Hg2＋、Cu2＋对酶起抑制作用,Fe2＋、Zn2对酶具有激活作用;棘托竹荪菌盖胞外β-葡萄糖苷酶对水杨苷的米氏常数（Km）为1.320×10-2 mol/L,最大反应速度Vmax为0.143 7μmol/min,比活力为2.874 U/mg. 结论棘托竹荪菌盖胞外β-葡萄糖苷酶偏好酸性环境,其温度适应范围较宽,温度升高可提升酶催化活性,但影响酶的稳定性.     

一株黑曲霉所产α-淀粉酶的提取及其特性研究

目的研究一株黑曲霉所产α-淀粉酶的提取方法及特性。方法 黑曲霉在米曲培养基中培养一段时间，粗提酶液经不同方法进行分离提取，并比较了各方法的得率。并对通过酶的干燥得到粗酶制剂成品的性质进行进一步的分析。结果 该黑曲霉α-淀粉酶最适反应温度为60℃，最适pH为5．0。Ca^2＋表现出明显促进作用，Fe^3＋、Zn^＋强烈抑制酶活力。结论 该菌株是一株具有应用价值的优良生产菌株。     

壳聚糖的酶法降解

用壳聚糖酶降解壳聚糖,探讨了壳聚糖降解过程中温度、pH值、底物浓度和金属离子对酶促反应的影响。结果表明:酶促反应进行到5 h左右时,即可得到聚合度小于10的壳寡糖。该酶促反应的最适温度为50℃,最适pH=5.5;最适底物浓度为0.02 g/mL;金属离子Ca2+和Mg2+对酶降解有一定的促进作用,而Zn2+、Cu2+对酶降解有较强的抑制作用。该酶促反应符合米氏动力学方程,米氏常数Km=7.80 g/L,最大反应速率Vmax=7.72 g/(min.L)。     

PCR-RFLP方法检测锰超氧化物歧化酶基因V（16）A多态性的实验条件研究（摘要）

目的为确定PCR-RFLP技术检测锰超氧化物歧化酶基因（MnSOD）V（16）A多态性的最适实验条件,对影响PCR的主要因素进行了研究.结果最适变性温度为95℃;最适退火温度为55℃；最适引物浓度为0．25μmol／L；最适Mg^2＋浓度为1．5mmol／L；最适dNTP浓度为0．20mmol／L；最适反应体系为25μL，以0．6U为最适Taq酶量．酶切体系为15μL体系中加8μL产物用2U的酶消化．为后续研究奠定了实验基础．     

PCR-RFLP技术检测SUMO4基因163A/G多态性的实验条件研究

目的确定PCR-RFLP技术检测小泛素样修饰蛋白4（SUMO4）163A/G多态性的最适实验条件.方法对影响SUMO4基因PCR反应的主要因素设定系列浓度梯度分别进行研究.结果最适变性温度为94℃;最适退火温度为55℃;最适引物浓度为0.25μmol/L;最适Mg2＋浓度为1.5mmol/L;最适dNTP浓度为0.25mmol/L;以2.5U为最适Taq酶量;酶切体系为31μL体系中加10μL产物用10U的酶消化.结论最佳实验条件的摸索是进行糖尿病实验研究的关键.     

芽胞杆菌C14菌株鉴定及其碱性纤维素酶性质

从碱性污泥中分离到一株产碱性纤维素酶活力较高的耐碱性芽胞杆菌,所产的酶为单一的羧甲基纤维素酶(CMC ase),其专一性底物为羧甲基纤维素钠(CMC—Na)。酶的最适反应pH为9.0,在pH7.0～10.0范围内较稳定,酶作用的最适温度为55℃,在50℃时较稳定,在60℃处理10、30、60和90分钟后,残余酶活分别为91.5%、72.0%、36.7%和10.3.Co~(2 )、EDTA对酶促反应有明显的促进作用,Hg~(2 )、Ag~ 、Mn~(2 )和Zn~(2 )则有显著的抑制作用。     

单核细胞吞噬细胞脂加氧酶酶促反应动力学的研究

采用10.000×g 离心细胞上清,对脂加氧酶的酶促反应动力学进行研究。结果表明,以亚油酸作为酶促反应底物,酶活性在1。5min 达到最大,其 km(app)=61.1μM;活性的最适 pH 在8.3附近,最适温度为25～30℃;Mg~(2+)对酶活性具有促进效应,而去甲二氢愈创木酸和维生素 E 均可强烈抑制该酶活性。     

蒜酶催化蒜氨酸动力学研究

目的:研究酶促反应的动力学参数,为新药设计提供依据。方法:采用HPLC方法测定酶促反应的动力学参数及蒜酶的最适pH和最适温度。结果:蒜酶以蒜氮酸为底物,最大反应速度Vmax=27.9 μnml·min-1·mg-1,米氏常数Km=3.6 mmol/L,其最适pH为6.6,最适温度为35℃。结论:酶促反应的动力学参数为蒜酶寻求有利的反应条件、更大限度地提高酶反应的效率提供了参考数据。     

PCR-RFLP方法检测CCR5基因启动子区59029G/A多态性的实验研究

目的：确定PCR-RFLP技术检测CCR5基因启动子区59029G／A多态性的最适实验条件．方法：对主要影响因素设系列浓度梯度分别进行PCR后观察电泳结果。结果：最适变性温度为94℃；最适退火温度为60℃；最适引物浓度为0．4μmol／L；最适Mg^2＋浓度为1．5mmol／L；最适dNTP浓度为0．20mmol／L；以1．0U为最适Taq酶量．结论：酶切体系为20μL体系中加5μL产物用4U的酶消化，为后续研究奠定了实验基础．     

甲壳胺-羧甲基纤维素钠高分子复合物固定酶的研究

本文采用天然高分子甲壳胺与羟甲基纤维素钠的高分子复合物作哉体,固定葡萄糖氧化酶和纤维素酶。得到的固定化酶活性较高、热稳定性好。固定化后的葡萄糖氧化酶比固定化前的最适反应温度提高50℃,固定化后的纤维素酶最适反应温度提高20℃。固定酶的贮存稳定性明显提高,并可反复使用。     

高产耐热3′-磷酸二酯酶菌种的选育及酶性质的研究

以粘红酵母(Rhodotorula glutinis)Q0402为出发菌株,经紫外谤变,得到一株粘红酵母QX0402.5 L发酵罐的发酵液中3'-磷酸二酯酶酶活力可达250 U/mL,为文献报道过的最高酶活力的2.5倍.所产生的3'-磷酸二酯酶在70℃下保温1 h,酶活力仍有50%以上.该酶最适反应pH为5.4,最适反应温度为60℃,反应3 h的反应转化率为56.37%,底物浓度可以提高到3%,生产效率为文献报道的3倍.     

PCR-RFLP方法检测锰超氧化物歧化酶基因V(16)A多态性的实验条件研究

目的：确定PCR-RFLP技术检测锰超氧化物歧化酶基因（MnSOD）V（16）A多态性的最适实验条件．方法：对影响MnSOD基因PCR反应以及用限制性内切酶BsawI切割主要因素进行了系统研究．结果：最适退火温度为55℃；最适引物浓度为0．25μmol／L；最适Mg^2＋浓度为1．5mmol／L；最适dNTP浓度为0．20mmol／L；以0．6U为最适Taq酶量．酶切体系为15止体系中加8pL产物用2U的酶消化，为后续研究奠定了实验基础．     

色氨酸酶基因工程菌固定化及其培养条件的研究

目的 :对色氨酸酶基因工程菌ＷＷ 11进行固定化及培养条件研究 ,为工业化生产Ｌ 色氨酸奠定基础。方法 :通过色氨酸酶活力测定 ,考察三种固定化材料及温度、ｐＨ、单价阳离子降乙醇对固定化ＷＷ 11色氨酸酶活力的影响。结果 :以聚乙烯醇作为ＷＷ 11的固定化载体 ,其活力回收为 6 0 9%。固定化ＷＷ 1色氨酸酶降解反应最适 ｐＨ为 9 0、最适温度为 5 0℃ ;固定化ＷＷ 1色氨酸酶合成反应最适 ｐＨ为 7 5、最适温度为 45℃。Ｋ 、ＮＨ 4对固定化工程菌色氨酸酶有明显激活作用 ,而Ｎａ 则有一定的抑制作用。结论 :固定化工程菌色氨酸酶对温度…     

一种诊断用谷氨酸脱氢酶酶学性质研究

目的研究一种国产谷氨酸脱氢酶的热稳定性、酸碱耐受性、最适温度、最适pH和动力学参数等性质。方法以α-酮戊二酸、铵离子及还原型辅酶I（NADH）为底物,在谷氨酸脱氢酶催化作用下,转变为谷氨酸和氧化型辅酶I（NAD）,利用NADH在340nm处有吸收峰,监测其反应速率（-△A Jmin）,计算谷氨酸脱氢酶的活力单位,采用Linewaeaver-Burk作图法（双倒数作图法）对谷氨酸脱氢酶的米氏常数进行测定。结果谷氨酸脱氢酶于50℃保温20min保留活力约为87．5％,而在60℃保温20min后残存活力为54％;最适反应温度为45℃;最适反应pH为7．5;在pH为5～10范围内酸碱耐受性较好,25℃放置20h残留活力为90％以上。结论动力学研究表明该酶与国外知名厂家产品相差不大。     

耐热脂肪酶产生菌的筛选及其产酶条件和酶学特性的研究

从福州温泉等地取样品若干，筛选耐热脂肪酶产生菌，最终获得一株脂肪酶产生菌wi-2，初步鉴定为细菌。经发酵产酶条件优化得到：Wi-2最佳产酶条件为：发酵周期35h，培养温度37℃（2，培养起始pH6．5，摇瓶装量25ml／250ml，接种量7％。用硫酸铵提取wi-2发酵液中脂肪酶，进行酶学特性的初步研究，结果：最适反应pH为8．2，最适反应温度为45℃（2。酶的热稳定性：在40℃下处理100min，酶活基本不损失，在60℃下处理100min，酶残余酶活为40％以上。     

酿酒酵母表面展示脂肪酶LipB52的酶学性质

酿酒酵母表面展示脂肪酶重组菌株EBY100-pLHJ026在含半乳糖(20 g/L)的YNB-CAA培养基中进行诱导表达,脂肪酶在诱导48 h时酶活达到最高。以不同碳链长度的对硝基苯酚酯为底物对全细胞酶活进行性质检测,结果表明:对硝基苯酚癸酸酯(C10)为最适反应底物;全细胞脂肪酶在pH 8.0时的最适反应温度为37℃,在60℃保温2 h酶活保持90%,在60℃保温3 h酶活保持55%,表现出较好的热稳定性。在等体积二甲基亚砜中处理3 h后酶活保持28.4%。     

中药菊花过氧化物酶酶学特性及炮制工艺的研究

目的 探讨中药菊花过氧化物酶酶学特性及炮制工艺.方法 以愈创木酚为底物,采用分光光度法测定菊花过氧化物酶的酶学特性,并比较不同加工工艺下菊花过氧化物酶学特性及总黄酮含量.结果 菊花反应时间不宜超过2 min,最适pH 7.0,最适温度36℃,100℃处理30 s后,过氧化物酶活性完全丧失.过氧化物酶催化的酶促褐变反应动力学符合米氏方程,动力学参数Km=1.58×10-2 mol/L,Vmax=14.278 U/min.四种炮制工艺比较过氧化物酶的抑制效果为水蒸汽>微波干燥>80℃热风干燥>自然阴干.分光光度计法测定样品总黄酮含量,蒸制干燥>微波干燥>80℃热风干燥>自然阴干.结论 菊花过氧化物酶适应温度范围广,20~80℃,相对耐热性好.本研究可为中药菊花炮制工艺的改善提供理论参考.     

产植酸酶青霉菌株的分离及其生物学特性的初步研究

从霉变的菜籽粕中筛选出具有产生植酸酶、降解植酸能力的青霉菌株P7。在液态发酵条件下，48h植酸降解率达96％。采用DEAE－52柱层析技术部分纯化植酸酶，对其生物学特征的研究表明：该植酸酶的最适反应温度为60℃，最适反应酸碱度为pH5.0，测得酶的米氏常数为0．25mmol／L。     

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis ZY-1)溶栓酶的分离纯化及其酶学性质

目的 分离纯化枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis ZY-1)溶栓酶,探讨该酶的理化性质.方法 枯草芽孢杆菌培养,利用(NH4)2SO4沉淀、Sephadex G-100柱层析对该酶发酵液进行分离纯化,利用四肽底物Sue-Ala-Ala-Pro-Phe-PNA作为底物,研究酶的理化性质.结果 经发酵并纯化后获得的酶液其比活高达26 400 U/mg,酶反应最适温度45℃,最适pH 8.0.且具有较好的热稳定性.结论 枯草芽孢杆菌溶栓酶具有溶血栓作用.     

源于纤维单胞菌的聚阿拉伯糖内切酶性质的研究

目的确定源于纤维单胞菌（Cellulomonose sp．）的聚阿拉伯糖内切酶的性质。方法SDS—PAGE和凝胶层析测定相对分子质量，离子交换层析估计等电点，TLC法测定酶活力，Lineweare—Burk双倒数做图法测定酶促反应动力学特性。结果相对分子质量为45kD，等电点约为6．0，酶促反应动力学符合Michaelis—Menten动力学规律，在37℃反应条件下，米氏常数Km为2．5mg／ml，最大反应速率Vmax为0．083μmol／L·min，最适pH为8．0，pH6．0～9．0时较稳定。最适温度为40℃，在40℃以下较稳定，超过50℃时酶活力开始下降。结论确定了一种聚阿拉伯糖内切酶的性质。