川芎嗪对大鼠供肝冷保存再灌注损伤中肝细胞凋亡及调控基因表达的影响

目的 探讨川芎嗪对大鼠原位肝移植供肝冷保存再灌注损伤中肝细胞凋亡及调控基因表达的影响。方法雄性SD大鼠180-250g，共24只。配成12对，随机分成2组：实验组和对照组。用自配川芎嗪乳酸钠林格氏液作为实验组供体大鼠肝脏的灌注液和保存液；对照组则用不含川芎嗪的乳酸钠林格氏液，供肝获取后均将其保存在4℃的保存液中4h。然后行大鼠原位肝移植术。术后6h处死受体大鼠，检测血浆中AST、ALT、LDH水平。取肝脏组织，流式细胞法分析肝细胞的凋亡百分比，TUNEL法检测肝细胞的凋亡情况。免疫组化法检测bel-2的表达。结果实验组AST、ALT、LDH水平显著低于对照组。流式细胞法分析实验组凋亡百分比显著低于对照组。TUNEL法检测显示实验组凋亡情况显著轻于对照组。免疫组化显示实验组肝脏中bcl-2表达明显，而对照组则为阴性。结论川芎嗪可能通过促进抑制凋亡基因bcl-2的表达来抑制冷保存再灌注导致的肝细胞凋亡。     

人尿激肽原酶在急性脑梗死大鼠模型中的研究

目的：探讨人尿激肽原酶对急性脑梗死大鼠模型的作用机制。方法应用线拴法构建大脑中动脉栓塞致急性脑梗死大鼠模型,并随机分为实验组及模型对照组。实验组经腹腔注射人尿激肽原酶（3.5×10－3 PNAU ／kg）,模型对照组同法予以生理盐水（10 ml／kg ）,应用免疫组化法分别检测两组梗死灶区微血管密度;应用蛋白质印迹杂交检测两组凋亡相关蛋白Bcl‐2的表达,应用AO／EB法检测梗死灶区神经细胞的凋亡率。结果实验组MVD（84.450±5.104条／HP）高于模型对照组MVD（57.900±3.370条／HP）;实验组的Bcl‐2蛋白表达水平明显高于模型对照组;实验组细胞凋亡率较模型对照组明显降低。结论人尿激肽原酶可使大鼠脑梗死灶中微血管密度增加;应用人尿激肽原酶后大鼠脑梗死灶中细胞凋亡蛋白Bcl‐2表达明显增加,脑细胞凋亡受到抑制,脑细胞凋亡率降低。     

重型颅脑损伤后TNF-α表达及其与细胞凋亡的关系

目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在大鼠重型颅脑损伤后各个阶段的表达水平及其与颅脑损伤后细胞凋亡的关系.方法 将36只大鼠随机分为实验组与对照组.实验组大鼠制作重型颅脑损伤模型,对照组大鼠予以假手术处理,两组大鼠分别在伤后6、24与72h通过RT-PCR法检测TNF-αmRNA水平、TUNEL法检测细胞凋亡水平.结果 重型颅脑损伤后大鼠脑组织TNF-αmRNA水平、细胞凋亡水平均较对照组明显升高,并在伤后24h达到高峰.结论 TNF-α可能在颅脑损伤后的细胞凋亡中起了重要的作用,对TNF-α表达的干预可望起到减少神经元凋亡从而保留更多神经功能的目的 .     

抗卵泡刺激素自身抗体引起大鼠睾丸生精细胞凋亡

目的：研究抗卵泡刺激素（FSH）自身抗体大鼠模型睾丸生精功能低下的可能机制.方法：SD大鼠（21d龄,30只）,随机分为实验组和对照组,每组各15只.实验组用18肽-KLH免疫,对照组用KLH免疫,每隔2周加强免疫1次,共7次,直至实验结束.分别于免疫第77、91及105 d时心脏取血处死实验组和对照组大鼠各5只,收集血清.采用ELISA法检测模型大鼠血清FSH、黄体生成素（LH）和抑制素B水平,并以Rpl19为内参照,用荧光定量PCR法检测睾丸内Bax mRNA水平,同时用末端标记技术（TUNEL）检测睾丸生精细胞凋亡情况.结果：免疫后第77和91 d的实验组大鼠血清FSH水平显著低于对照组（P＜0.05）,免疫105 d后,实验组大鼠FSH水平有所回升.与对照组相比,实验组大鼠血清抑制素B水平均显著降低（P＜0.05）.血清LH水平在两组大鼠间无显著差异.免疫后第77、91及105 d的实验组大鼠睾丸内Bax mRNA水平,分别为对照组的2.15、3.77和1.89倍,TUNEL检测结果也显示实验组大鼠睾丸生精细胞凋亡指数显著高于对照组.结论：抗FSH自身抗体可能通过与FSH形成抗原抗体免疫复合物,以降低外周血中FSH浓度,进而激活Bax相关凋亡通路,诱导生精细胞凋亡,导致模型大鼠睾丸生精功能低下.     

慢性间歇性低氧对大鼠胸主动脉内皮细胞的影响

目的 探讨慢性间歇性低氧对大鼠胸主动脉内皮细胞的损伤变化。方法 将12只10～12周龄的雄性SD大鼠采用抽签法分为对照组和实验组,每组各6只。实验组大鼠每天10点至18点置于间歇性低氧环境中暴露,对照组大鼠不做低氧处理,共4周。饲养时间结束后取大鼠胸主动脉标本行苏木精-伊红染色（hematoxylin and eosin staining,HE染色）及原位末端转移酶标记法（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay,TUNEL）染色观察细胞病变情况,并计算病变细胞、凋亡细胞在视野中所占比例。结果 HE染色光镜下实验组可见血管内皮细胞肥大,排列不规则,细胞核、胞质着色淡,平滑肌细胞核肿胀;对照组见血管内皮细胞和平滑肌细胞排列规则、细胞核形态及染色正常。TUNEL染色光镜下实验组可见多个凋亡细胞,对照组偶见凋亡细胞。实验组大鼠主动脉组织的细胞病变率及凋亡率均显著高于对照组（P<0.01）。结论 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征所产生的慢性间歇性低氧可损伤大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞并诱导血管内皮细胞凋亡。     

地塞米松对大鼠肝脾细胞凋亡的影响

目的探讨地塞米松对大鼠肝脾等器官淋巴细胞的影响和对机体免疫抑制作用的机制。方法将20只Wistar大鼠随机分成两组,每组10只,实验组每天腹腔注射地塞米松3 mg/(kg.d),3 d后称大鼠体重、脾湿重、肝湿重。用流式细胞仪分析Annexin V/PI双染后脾细胞的凋亡率。结果实验组体重、脾湿重明显减轻(P<0.001),肝重改变不明显(P=0.75),脾细胞的凋亡率为(34.9±5.8)%,较对照组的凋亡率(0.71±0.09)%显著高(P<0.01)。结论地塞米松促进大量淋巴细胞凋亡是其抑制机体的免疫功能的一种重要机制。     

大鼠慢性马尾神经受压后脊髓内诱导型一氧化氮合酶与神经细胞凋亡的相关性

目的研究大鼠马尾神经慢性受压后诱导型一氧化氮合酶(i NOS)在脊髓内的变化,及其与相应节段脊髓内神经细胞凋亡的相关性。方法将健康成年SD大鼠30只随机分为对照组和实验组。对照组行假手术,仅切除L5椎板,实验组在L4平面置入硅胶片,造成马尾神经单节段受压。实验组分别于建模后第2、4、8、12周后,对照组于第4周,取腰L4前角脊髓组织,切片后进行免疫组织化学方法并结合图像分析技术,检测脊髓内i NOS的表达变化,应用TUNEL法检测凋亡神经细胞,透射电镜观察神经细胞形态学改变。结果对照组脊髓有极少量i NOS表达;实验组造模后第4周有轻度表达,第8、12周i NOS明显高于对照组。对照组脊髓中可见少量神经细胞凋亡,实验组从第4周起可见明显凋亡的神经细胞,且凋亡数量随时间的延长而增多。透射电镜观察发现实验组神经细胞发生凋亡改变。结论大鼠马尾神经慢性受压后,相应节段脊髓神经细胞i NOS表达增加,神经细胞发生凋亡,i NOS与神经细胞凋亡存在正相关。     

慢性缺氧对大鼠延髓呼吸中枢的损伤作用及其对氧化应激和细胞凋亡的影响

目的 研究慢性缺氧对大鼠延髓呼吸中枢的损伤作用及对氧化应激与细胞凋亡的影响。方法 将同批次实验大鼠随机分为对照组和实验组两组,对照组接受空气实验,实验组接受慢性缺氧处理,两组均连续处理14 d,每天6 h。缺氧处理最后一天将实验组5只存活大鼠和5只对照组大鼠麻醉后抽取动脉血0.2 ml进行血气指标测定,评估慢性缺氧大鼠模型制备效果。将10只大鼠处死后取延髓,采用尼氏染色法评估慢性缺氧对大鼠延髓呼吸中枢的损伤情况,采用生物化学方法测定大鼠延髓丙二醛(MDA)和氧化物歧化酶(SOD)评估慢性缺氧对氧化应激的影响,采用RT-PCR方法检测分析延髓组织内Bax和Bcl-2 mRNA表达水平,以评估评估慢性缺氧对细胞凋亡的影响。结果 实验组大鼠PO2和HCO₃^-低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),两组pH和PCO₂比较差异无统计学意义(P>0.05);实验组大鼠pre-BotC、Amb、NTS、FN、HN尼氏染色光密度值均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);实验组大鼠MDA低于对照组,差异有统...     

不同浓度纳米级氧化锆颗粒诱导大鼠海马凋亡实验研究

目的探讨不同浓度纳米级氧化锆磨屑对大鼠海马细胞凋亡的影响。方法将雄性上海大鼠随机分为：实验组4组,每组10只,分别注射浓度为5g/L（A组）、10g／L（B组）、25g/L（C组）、50g/L（D组）的氧化锆颗粒悬液1ml,悬液溶剂为双蒸水;对照组10只,注射相同体积的双蒸水。经尾静脉连续注射1周后,处死大鼠,断头取海马组织,免疫组织化学技术观察大鼠海马细胞Bax、Bcl-2的表达与分布,细胞计数记录凋亡细胞数量,Westernblot检测caspase-3蛋白的表达情况。结果肉眼观察实验组大鼠脑组织及海马组织均无明显改变。免疫组化检测：对照组、实验A组及实验B组中大鼠海马组织未见明显凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达,实验C组及实验D组均可见凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达,且D组凋亡细胞数大于C组凋亡细胞数（P〈0．05）。Westernblot检测结果显示,所有实验组caspase-3凋亡蛋白表达均高于对照组（P〈0．05）,且蛋白表达随颗粒的给药浓度增加而增加（P〈0．05）。结论纳米级氧化锆磨损颗粒可以透过大鼠血脑屏障进入大鼠中枢神经系统并造成大鼠海马组织凋亡,凋亡程度与颗粒浓度有关。     

新生大鼠脑白质损害时神经细胞凋亡及Nogo-B蛋白的表达变化

目的 探讨Nogo-B蛋白在新生大鼠脑白质损害(WMD)时的表达变化及意义.方法 将2日龄SD大鼠(n=90),随机分为实验组和对照组各45只,制成WMD模型;采用TUNEL法测定神经细胞凋亡及免疫组化(SP)法检测Nogo-B蛋白在脑室周围白质区不同时间点的表达变化.结果 实验组神经细胞凋亡在低氧缺血后3d达到高峰.与对照组比较,在4、12、24h、3、7d有统计学意义(0.05).实验组Nogo-B蛋白在低氧缺血后4h表达增加,3d达高峰,在4h、12h、3d、7d的表达与对照组相比,差异有统计学意义(0.05).结论 新生大鼠脑白质损害时,Nogo-B蛋白可能参与诱导脑白质神经细胞凋亡.     

高功率微波辐照对大鼠卵巢细胞凋亡的影响

【目的】探讨高功率微波辐照对大鼠卵巢生殖细胞凋亡的影响。【方法】健康成年SD雌性大鼠100只,随机分为实验组和对照组。以S波段平均功率密度为20 mW/cm2对固定放置的大鼠进行全身照射10 min;40 mW/cm2照射5 min、10 min。照后6、24、48、72 h和5 d取材,应用原位末端标记技术(TUNEL)检测各组凋亡细胞。【结果】40 mW/cm2辐照10 min组,6、24、48 h凋亡细胞明显增多(P<0.01),72 h降至正常,5 d细胞凋亡数量再次升高,明显高于对照组(P<0.01),其余实验组与对照组间无差别(P>0.05)。【结论】40 mW/cm2HPM辐照大鼠10 min即可触发卵巢组织的细胞凋亡数目增加,影响大鼠生殖功能。     

FK506对大鼠面神经损伤后面运动神经元凋亡及bcl-2,bax表达的影响

目的 研究FK506对大鼠面神经损伤后运动神经元凋亡及bcl-2和bax表达的影响.方法 将40只Wistar大鼠随机分为实验组和对照组,制作大鼠单侧面神经总干切断模型,实验组每日腹腔注射FK506注射液,对照组给予相同剂量的盐水,在术后各时间点,通过Nissl染色观测面神经核神经元的形态学变化;TUNEL检测细胞凋亡;免疫组化检测bcl-2和bax表达的变化.结果 面神经损伤后,FK506组与盐水组相比较,FK506组运动神经元凋亡明显减少,bcl-2表达增加,bax表达降低.结论 FK506有助于增加面神经损伤后运动神经元bcl-2的表达、降低bax表达,抑制细胞凋亡,为药物在神经损伤疾病的临床应用提供了实验依据.     

大鼠大脑皮层神经元缺氧后细胞凋亡情况的动态观察

目的 观察大鼠大脑皮层神经元缺氧后细胞凋亡动态变化.方法 制备大鼠大脑皮层神经元体外原代培养模型,免疫细胞化学鉴定大鼠大脑皮层神经元,透射电镜下观察不同时间点各实验组神经元超微结构的变化,TUNEL法观察不同时间点各实验组神经元凋亡情况.结果 正常对照组神经元透射电镜下形态及染色质正常、内质网、线粒体等结构正常,缺氧组神经元水肿,细胞器破坏或消失;TUNEL法检测神经元凋亡:缺氧后各组神经元凋亡明显增加,与相应正常对照组相比有显著差异(P＜0.01),缺氧48 h神经元凋亡达高峰(IOD为0.187 ±0.007),与缺氧12、24h及72 h相比有显著差异(P＜0.01).结论 细胞凋亡在缺血、缺氧性脑损伤中呈动态变化,是神经元死亡的重要形式.恰当时间窗内对神经元凋亡进行干预将是缺血、缺氧性脑病的有效治疗措施.     

糖尿病大鼠视网膜细胞凋亡与视网膜组织中钙镁离子的关系

目的观察糖尿病大鼠视网膜组织中细胞凋亡量的变化。方法40只Wistar大鼠被随机分成实验组和对照组,每组20只。实验组用链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)诱发糖尿病。并在糖尿病发病后4、6、12和16周检测视网膜细胞凋亡和视网膜组织中钙镁离子浓度的变化。同时对其与空腹血糖、糖化血红蛋白及糖尿病病程的关系进行了分析。结果糖尿病大鼠视网膜细胞溶解液中在发病后4周可测到细胞凋亡,且随糖尿病病程的延长凋亡程度逐渐加重;同时伴有视网膜组织内钙离子浓度的增加、镁离子浓度减少。双变量相关分析表明,糖尿病大鼠视网膜细胞凋亡的程度与空腹血糖浓度、糖化血红蛋白水平、视网膜内钙镁离子含量及糖尿病病程密切相关。结论糖尿病大鼠视网膜中存在细胞凋亡和离子含量的异常,这些变化可能是糖尿病视网膜病变的病理基础之一。     

孕期大鼠急性胰腺炎病因及病理变化的相关研究

目的探讨孕期大鼠急性胰腺炎病因及病理变化的相关情况。方法选择2013年2月至2015年1月由湖北医药学院附属东风医院实验动物中心提供的健康性成熟SD雌性大鼠48只,雄性大鼠24只,按雌雄比2∶1合笼进行交配,发现有阴道栓后记为孕期第1日,根据随机数字表法分为实验组和对照组,各24只。对照组孕后继续进行自由喂养,而实验组在孕期第7日建立急性胰腺炎模型。实验组在造模后6、12、24 h(对照组在相应时间点)进行肺湿重系数测定、肺组织的组织学评分、肺组织细胞凋亡测定及肺组织Bax和Bcl-2 mRNA测定,并进行相关性分析。结果病理学检查发现,与对照组相比实验组的胰腺组织坏死明显,大量炎性细胞浸润,造模获得成功。实验组造模后相应时间点的肺湿重系数、肺损伤病理评分较对照组均显著升高(P<0.01)。对照组肺组织仅见少量细胞凋亡,实验组肺组织细胞凋亡指数较对照组显著增加(P<0.01)。对照组的Bax和Bcl-2mRNA表达均较弱,而实验组的Bax和Bcl-2 mRNA表达较对照组各时点均显著增强(P<0.01)。在实验组中,Pearson相关分析显示肺损伤病理学评分、肺湿重系数与肺组织细胞凋亡指数均呈正相关(P<0.05)。结论孕期大鼠急性胰腺炎可导致肺损伤的发生、发展,而Bcl-2、Bax基因表达的改变参与了孕期大鼠急性胰腺炎肺损伤,可能是促进肺组织细胞凋亡的重要因素。     

急性脑缺血对大鼠肾脏细胞凋亡的影响

目的:探讨急性脑缺血时大鼠肾脏细胞凋亡的动态变化以及钙超载、氧自由基与肾脏细胞凋亡的关系,了解缺血性脑血管病引起肾脏损伤的机制。方法:随机取36 只Wistar大鼠,将其中的6 只作为对照组,另外30只以30、60、90、120、180 min为时限又分为5个实验组。观察各组肾功能、血及肾组织中丙二醛(MDA)浓度、肾组织细胞内钙含量的动态变化以及肾脏细胞凋亡的情况。结果:(1)血清尿素氮(BUN)以及血清肌酐(Cr)水平随缺血时间延长逐渐升高,至180 min时达高峰,对照组与缺血30 min组相比差异有统计学意义(P<0.05);(2)肾脏细胞凋亡指数明显增加,各实验组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);(3)血清及肾组织中MDA浓度、肾组织细胞内钙含量随时间延长持续升高,60、90、120、180 min 4个实验组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05或0.01); (3)电镜下肾脏细胞有超微结构的改变。结论:当发生急性脑缺血时,大鼠血清及肾组织MDA的浓度、肾组织细胞内钙含量随时间延长持续增加,可通过激活促细胞凋亡的程序而诱导肾脏细胞凋亡。     

脓毒症模型大鼠肿瘤坏死因子-α和肝细胞凋亡的关系

目的:探讨脓毒症大鼠肿瘤坏死因子a(TNF a)与肝细胞凋亡的关系以及对肝功能的影响。方法:大鼠随机分为正常对照组和实验组,实验组采用盲肠结扎穿孔术(CLP)致脓毒症大鼠模型,分别于术后30、60、120、180min(CLP术后30、60、120、180 min组)处死动物,测定肝组织和血浆TNF a水平,并检测肝细胞凋亡的情况,同时测定丙氨酸氨基转移酶(ACL)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平。正常对照组麻醉后不行CLP术,其余同实验组。结果: 与正常对照组相比,CLP术后30、60、120、180 min组肝细胞凋亡数、血清TNF-α、ALT水平均明显升高(P<0.01),有随着时间的延长增加的趋势;与正常对照组相比,CLP术后120、180 min组血清AST含量明显升高(P<0.01);CLP术后大鼠肝组织、TNF-α表达强度随时间延长而有增强的趋势。结论: CLP后大鼠肝脏产生大量TNF-α,与肝细胞凋亡有密切关系,肝功能受到损伤。     

核因子-κB与感染性休克大鼠肝细胞凋亡的关系

目的探讨核因子-κB(NF-κB)与感染性休克大鼠肝细胞凋亡的关系,了解感染性休克时肝功能减退的机制。方法将20只大鼠随机分为2组,每组10只,实验组采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备感染性休克大鼠模型;对照组大鼠不进行盲肠结扎穿孔术。2组均测定肝脏细胞NF-κB蛋白、肝功能及肝细胞凋亡的情况。结果与对照组比较,实验组肝细胞凋亡指数明显升高(P<0.01),肝细胞中NF-κB蛋白表达明显增强,血清谷丙转氨酶和乳酸脱氢酶含量明显升高(P<0.01)。结论CLP所致的感染性休克过程中,NF-κB蛋白表达升高,可能导致肝细胞凋亡增加,以致肝功能减退。     

木犀草素对冷保存心脏功能及心肌细胞凋亡的影响

目的研究木犀草素对UW液低温保存离体大鼠心脏的功能及对心肌细胞凋亡的影响。方法将40只成年SD大鼠随机分成2组（n=20）：对照组（UW组）及实验组（添加30μmol/L木犀草素的UW液）。利用Langendorff离体心脏灌流法,观察离体心脏冷保存18h复灌60min后心率、左心室最大收缩压、左心室压力变化率、心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达。结果与对照组比较,实验组复灌期心脏的收缩功能（LVPSP,＋dp/dtmax）、舒张功能（-dp/dtmax）及心率高于对照组差异有统计学义意义（P〈0.05）;心肌细胞的凋亡及促进凋亡Bax基因的表达均明显低于对照组;而抑制凋亡Bcl-2基因的表达均明显高于对照组。结论木犀草素能显著改善UW液低温保存离体大鼠心脏的功能,对心肌细胞凋亡有明显抑制作用。     

糖尿病大鼠视网膜细胞凋亡和钙镁离子含量变化的实验研究

目的：观察糖尿病大鼠视网膜组织中细胞凋亡量的变化。方法：40只Wistar大鼠被随机分成实验组和对照组,每组20只。实验组用链脲佐菌素诱发糖尿病,在糖尿病发病后4、6、12和16周检测视网膜细胞凋亡和视网膜组织中钙镁离子浓度的变化,并与空腹血糖、糖化血红蛋白及糖尿病病程的关系进行分析。结果：糖尿病大鼠视网膜细胞溶解液中在发病后4周可测到细胞凋亡,且随糖尿病病程的延长凋亡程度逐渐加重;同时伴有视网膜组织内钙离子浓度的增加、镁离子浓度减少。双变量相关分析表明,糖尿病大鼠视网膜细胞凋亡的程度与空腹血糖浓度、糖化血红蛋白水平、视网膜内钙镁离子含量及糖尿病病程密切相关。结论：糖尿病大鼠视网膜中存在细胞凋亡和离子含量的异常,这些变化可能是糖尿病视网膜病变的病理基础之一。