当归补血汤对RAW264.7细胞的TNF-α、ICAM-1表达的作用

目的探讨当归补血汤抗动脉粥样硬化(As)损伤作用的机制。方法制备当归补血汤含药血清,台盼蓝染色法检测细胞活性,免疫印迹法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的蛋白活性变化。结果RAW264.7细胞培养3 d后,台盼蓝染色细胞活力95%。免疫印迹法检测结果显示,氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激RAW264.7细胞后TNF-α蛋白活性明显增强,当归补血汤含药血清组与ox-LDL组比较有差异(P0.05);ox-LDL刺激RAW264.7细胞后ICAM-1蛋白活性明显增强,当归补血汤含药血清组与ox-LDL组比较有差异(P0.05)。结论当归补血汤含药血清一定程度上能减少TNF-α、ICAM-1的蛋白表达,减少TNF-α、ICAM-1的表达可能是当归补血汤抗As损伤作用的机制之一。     

当归补血汤对氧化低密度脂蛋白激活RAW264.7细胞中核转录因子-κBp65 mRNA表达的影响

【目的】观察当归补血汤含药血清对氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)激活小鼠单核细胞系RAW264.7细胞中核转录因子-κBp65(NF-κBp65)mRNA表达的影响。【方法】将新西兰兔8只随机分为空白血清组和含药血清组,每组各4只,分别灌胃生理盐水和当归补血汤水煎液(剂量为8.4g·kg-1·d-1),分离血清。将RAW264.7细胞悬液接种于培养瓶中,培养24h,分为空白对照组、Ox-LDL组、PAR组(终浓度为10μmol/L的小菊白内酯)、体积分数10%的含药血清组。除空白对照组外,其他各组分别加入100μg/mLOx-LDL刺激4h,收集细胞。采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞NF-κBp65 mRNA的表达量。【结果】Ox-LDL组与空白对照组比较,NF-κBp65 mRNA的表达量增加(P0.05);含药血清组与Ox-LDL组比较,NF-κBp65 mRNA的表达量减少(P0.05)。【结论】当归补血汤含药血清能下调NF-κBp65 mRNA的表达量,抑制、阻断NF-κBp65的表达可能是当归补血汤抗动脉粥样硬化的作用机制之一。     

当归补血汤对ox-LDL激活RAW264.7细胞核转录因子-κBp65蛋白表达的影响

目的 通过当归补血汤对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)激活单核细胞核转录因子-κBp65(NF-κBp65)信号转导通路的作用研究,探讨当归补血汤早期阻断动脉粥样硬化病变发展进程的可能性及其机理.方法 新西兰大耳白兔随机分为对照血清组、含药血清组,分别灌胃生理盐水和当归补血汤药液制备血清.将RAW264.7细胞悬液接种于培养瓶中,培养24 h,分为空白对照组、ox-LDL组、抑制剂组、含药血清组,除空白对照组外其余各组均加入100 mg/L ox-LDL刺激细胞.孵育4 h,收集细胞.免疫组化法检测NF-κBp65的表达,免疫印迹法检测RAW264.7细胞中NF-κBp65的蛋白活化量.结果 ox-LDL组细胞浆和核内可见大量棕黄色阳性颗粒,含药血清组棕黄色阳性颗粒较少;ox-LDL组蛋白条带灰度比值为1.288 3±0.013 9,含药血清组为0.918 9±0.015 3,与ox-LDL组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 当归补血汤可下调经ox-LDL刺激后RAW264.7细胞中NF-κBp65的蛋白表达及活化,因此阻断NF-κB信号转导通路可能是当归补血汤抗动脉粥样硬化的作用机理之一.     

当归补血汤含药血清抗动脉粥样硬化的机理研究--对氧化修饰低密度脂蛋白趋化单核细胞作用的影响

[目的]观察当归补血汤含药血清对氧化修饰低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoproteins,OxLDLs)趋化单核细胞(monocyte8,MC)作用的影响.[方法]新西兰兔6只,随机分为当归补血汤组、单味当归组和单味黄芪组,以相应药物灌胃3 d,2次/d,第3天给药后1 h心脏取血分离含药血清,并设自由趋化组(正常组)和OxLDLs组(模型组)作对照,用趋化小室微孔滤膜法检测各组OxLDLs趋化MC的数目及成像.[结果]当归补血汤组中OxLDLs趋化MC数目比模型组减少(P＜0.01),而黄芪含药血清和当归含药血清组MC数目与模型组无显著性差异.[结论]当归补血汤全方可抑制OxLDLs对MC的趋化性,从而时MC向血管内皮下聚集而导致泡沫细胞的形成并进而引起的动脉粥样硬化起一定的抑制作用;而当归和黄芪单独使用未见此效应.     

灯盏乙素对OX-LDL损伤的RAW264.7细胞中PKC和TNF-α表达的影响

目的 研究灯盏乙素(scutellarin)对OX-LDL诱导损伤的巨噬细胞RAW264.7脂质吞噬能力及对PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达调控的影响.方法 体外培养小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,复制OX-LDL诱导损伤模型,通过油红O染色检测脂质吞噬及试剂盒检测细胞损伤模型胆固醇酯的含量.Western blot和RT-PCR方法检测RAW264.7细胞中PKC和TNF-α表达变化.结果(1)油红O结果显示:与正常对照组比较,模型组细胞红染程度明显高于正常对照组;与模型组比较,辛伐他汀组、灯盏乙素50和100μmol/L组细胞红染程度均低于模型组;(2)胆固醇酯含量检测显示:与正常对照组比较,各时间点模型组细胞CE/TC值均明显升高;与模型组比较,各时间点用药组细胞CE/TC值均降低.(3)WB和RT-PCR结果显示:与正常对照组比较,模型组PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达升高;与模型组比较,辛伐他汀组(simvastatin)PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达降低,且灯盏乙素组呈浓度依赖性下调PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达.结论(1)灯盏乙素能明显抑制OX-LDL诱导损伤的RAW264.7细胞脂质吞噬能力.(2)灯盏乙素能够明显下调OX-LDL诱导损伤的RAW264.7中PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达水平.     

灯盏乙素对OX-LDL损伤的RAW264.7细胞中PKC和TNF-α表达的影响

目的 研究灯盏乙素(scutellarin)对OX-LDL诱导损伤的巨噬细胞RAW264.7脂质吞噬能力及对PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达调控的影响.方法 体外培养小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,复制OX-LDL诱导损伤模型,通过油红O染色检测脂质吞噬及试剂盒检测细胞损伤模型胆固醇酯的含量.Western blot和RT-PCR方法检测RAW264.7细胞中PKC和TNF-α表达变化.结果(1)油红O结果显示:与正常对照组比较,模型组细胞红染程度明显高于正常对照组;与模型组比较,辛伐他汀组、灯盏乙素50和100μmol/L组细胞红染程度均低于模型组;(2)胆固醇酯含量检测显示:与正常对照组比较,各时间点模型组细胞CE/TC值均明显升高;与模型组比较,各时间点用药组细胞CE/TC值均降低.(3)WB和RT-PCR结果显示:与正常对照组比较,模型组PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达升高;与模型组比较,辛伐他汀组(simvastatin)PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达降低,且灯盏乙素组呈浓度依赖性下调PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达.结论(1)灯盏乙素能明显抑制OX-LDL诱导损伤的RAW264.7细胞脂质吞噬能力.(2)灯盏乙素能够明显下调OX-LDL诱导损伤的RAW264.7中PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达水平.     

单核细胞来源的微颗粒通过PPAR-α-SR-BI途径促进RAW264.7泡沫细胞形成的研究

目的 研究单核细胞来源微颗粒对泡沫细胞形成的影响。方法 用氧化低密度脂蛋白或者低密度脂蛋白刺激RAW264.7细胞形成泡沫细胞,采用油红染色法对阳性的泡沫细胞进行染色,通过real-time PCR和Western印迹法测定微颗粒对RAW264.7细胞的受体或酶CD36、SR-A、ACAT1、nCEH、ABCA1、ABCG1、SR-BI的影响。结果 单核细胞来源的微颗粒影响RAW264.7细胞的活力;单核细胞来源的微颗粒可促进RAW264.7细胞的泡沫化形成;低浓度(20μl/ml)微颗粒可轻微促进巨噬细胞对低密度脂蛋白的吞噬,但对氧化低密度脂蛋白的吞噬却没有影响;过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)的激动剂可增强泡沫细胞形成,拮抗剂作用相反。单核细胞来源微颗粒可下调SR-BI在mRNA和蛋白质水平的表达。PPAR-α激动剂可下调单核细胞来源微颗粒对RAW264.7巨噬细胞中SR-BI蛋白表达,PPAR-α拮抗剂没有影响。结论 单核细胞来源的微颗粒通过引起过氧化物酶体增殖物激活受体-α的表达,进而使巨噬细胞表面SR-BI的表达降低,从而促进RAW264.7泡沫细胞形成。     

黄芪-当归配伍对大鼠血管内膜增生模型细胞外基质的影响

目的研究黄芪和当归配伍对大鼠血管内膜增生血管壁细胞外基质的影响。方法将SD大鼠随机分为黄芪与当归(简称芪归)1∶1、芪归5∶1(3.9 g/kg)配伍组及单用黄芪组(2.17 g/kg)、单用当归组(1.08 g/kg)、阳性药物阿托伐他汀对照组(0.1 g/kg)和假手术组,采用球囊导管损伤大鼠血管内皮造成胸腹主动脉血管内膜增生模型,同时灌胃黄芪、当归不同比例配伍药物,连续给药14 d后,取胸腹主动脉,用western blot法检测增生内膜中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织基质金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)蛋白表达,免疫组化法检测增生内膜中Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、纤维联接蛋白(FN)表达。结果与模型组比较,单用当归组、芪归1∶1组、阿托伐他汀组Col-Ⅰ、FN、MMP-9表达显著降低(P0.01,P0.05)。芪归5∶1组Col-Ⅰ、MMP-9表达强度显著低于模型组(P0.05);单用黄芪组MMP-9表达强度显著低于模型组(P0.05)。单用黄芪组Col-Ⅰ、FN的表达强度与模型组比较差异无统计学意义(P0.05),芪归5∶1组FN的表达强度与模型组比较差异无统计学意义(P0.05)。各组间TIMP的表达强度差异无统计学意义(P0.05)。结论黄芪-当归配伍可抑制血管内膜增生时血管壁细胞外基质沉积,其中当归为其主要的效应药物,黄芪-当归1∶1配伍的作用强于两药单用及其5∶1配伍。     

钙激活钾通道KCa3.1对巨噬细胞吞噬功能的抑制性调节作用

目的 观察巨噬细胞膜的钙激活钾通道KCa3.1与吞噬功能的关系.方法 通过光镜下半定量观察RAW264.7巨噬细胞吞噬鸡红细胞,以及采用流式细胞术定量检测RAW264.7巨噬细胞吞噬异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的大肠杆菌(FITC-tagged E.coli)等方法,研究正常RAW264.7细胞的吞噬活动,以及阻断KCa3.1通道后RAW264.7细胞吞噬能力的改变.结果 光镜检测结果显示,未受吞噬刺激因子激活的对照RAW264.7细胞对鸡红细胞有较弱的吞噬能力,其吞噬率为1.67％±0.29％;用KCa3.1通道选择性阻断剂TRAM-34(20nmol/L)处理RAW264.7细胞后,吞噬率增高至5.08％±0.38％,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01),且单个RAW264.7细胞吞噬鸡红细胞的个数也明显增加.流式细胞术结果显示,阻断KCa3.1通道后,RAW264.7细胞吞噬FITC标记的大肠杆菌的数量明显增多,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论 KCa3.1通道的活动对RAW264.7巨噬细胞的吞噬活性有抑制性调节作用.     

人胆固醇酯水解酶在RAW 264.7巨噬细胞内瞬时表达对胆固醇代谢的影响

目的:以RAW264.7小鼠单核巨噬细胞为研究对象,探讨人胆同醇酯水解酶(Human cholesteryl ester hydrolase,hCEH)在鼠巨噬细胞内瞬时表达,对细胞内胆固醇代谢产生的影响.方法:利用FuGENE HD转染试剂将pEGFP-Nr-hCEH质粒,转染RAW264.7小鼠单核巨噬细胞.24h后将巨噬细胞与氧化型低密度脂蛋白(Oxidized low density lipoprotein,oX-LDL)(100mg/L),共同孵育48 h.荧光显微镜观察及Western blot检测细胞内CEH的表达.油红O染色观察细胞内脂滴堆积情况,高效液相色谱检测细胞内游离胆固醇(Free cholesterol,FC)和胆固醇酯(Cholesterol esters,cE)含量.结果:转染72 h后,荧光细胞数最多,转染率接近40%.Westernblot检测显示,hCEH蛋白在鼠巨噬细胞内大量表达并部分抑制鼠胆固醇酯水解酶(Cholestery lester hydrolase,CEH)表达.转染hCEH组与OX-LDL诱导组相比,油红O染色阳性细胞数显著减少,细胞内总胆同醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量明显下降.结论:hCEH基因在RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞内成功表达,减少细胞内胆固醇水平,抑制泡沫细胞的形成.     

复方苦芪甘胶囊制备工艺的研究

目的：优选复方苦芪甘的最佳提取工艺。方法：采用正交设计L9（3^4）法，以总浸膏量、总皂苷含量和苦参总碱含量为指标，综合评分考察。结果：最佳提取工艺为药材加20倍量50％乙醇，回流提取5h，共提取3次。结论：优选得到的工艺是合理的。     

地榆、地榆片、地榆炭的质量标准研究

目的：建立地榆、地榆片、地榆炭的质量标准。方法：采用UV法测定鞣质的含量,检测波长：760 nm。采用HPLC法测定没食子酸的含量,色谱柱：依利特Hypersil C18（200 mm×4.6 mm,10μm）,柱温：30℃,以甲醇-0.05%磷酸溶液（1.5∶98.5）为流动相,流速：1.0 ml/min,检测波长：262 nm。结果：UV法测定鞣质含量扣除干酪素的干扰,含量明显提高。HPLC法测定没食子酸其进样量在0.036 2-0.326 2μg范围内具有良好的线性关系（r=1.000 0）,平均回收率为97.6%,RSD为0.87%。结论：测定方法灵敏、准确,重现性好,可作为地榆、地榆片、地榆炭的质量控制方法。     

复方苦芪甘胶囊制备工艺的研究

目的:优选复方苦芪甘的最佳提取工艺。方法:采用正交设计L9(34)法,以总浸膏量、总皂苷含量和苦参总碱含量为指标,综合评分考察。结果:最佳提取工艺为药材加20倍量50%乙醇,回流提取5h,共提取3次。结论:优选得到的工艺是合理的。     

黑柴胡与柴胡的生药学比较研究

目的:对柴胡及黑柴胡进行生药学比较,为其鉴别提供实验依据。方法:采用性状鉴别、显微鉴别2种方法,对柴胡与黑柴胡进行比较研究。结果:黑柴胡与柴胡在性状、显微特征方面存在较大差异。结论:黑柴胡不宜作柴胡的代用品,临床应加强中药材的质量控制。     

怀山药与淮南山药、铁杆山药的生药学鉴别

目的:为扩大正品山药的药源提供科学依据。方法:采用药材性状、粉末显微特征、薄层色谱对三种山药进行实验研究。结果:怀山药、淮南山药、铁杆山药三个品种有一定差异,但它们的主要成分相同。结论:根据实验结果认为,淮南山药、铁杆山药在怀山药供不应求的时候可作为它的替代品应用。     

党参、黄芪对中枢神经系统作用的比较研究

目的 研究党参、黄芪对中枢神经系统的作用，并进行比较。方法 观察党参、黄芪对戊巴比妥钠及乙醚引起睡眠作用的影响；采用水迷宫实验方法。结果 党参及黄芪均能延长戊巴比妥钠及乙醚引起的睡眠时间。党参、黄芪能显著改善东莨菪碱所致小鼠学习记忆障碍。结论 党参延长戊巴比妥钠及乙醚引起睡眠时间作用优于黄芪；党参改善东莨菪碱所致大鼠学习记忆障碍作用优于黄芪。     

柴胡黄芩配伍抗病毒增效作用的临床应用

目的：探讨中药柴胡与黄芩配伍抗病毒增效作用的临床疗效。方法：选取我院2012年1月～2012年12月间因流感病毒引起感冒、发热的患者60例,随机分成治疗组和对照组,每组30例。对照组患者采用病毒唑进行抗病毒治疗,治疗组在采用病毒唑治疗的基础上,联合柴胡一黄芩配伍进行抗病毒治疗,对两组患者的抗病毒疗效进行统计学分析。结果：经过2W的治疗后,治疗组的总有效率为93．33％,对照组的总有效率为86．67％,两组患者的总有效率和复发率具有显著差异（P〈0．05）。结论：柴胡黄芩药对具有较好的抗病毒增效效果,适宜临床治疗,也是中西医相结合疗效较好的体现,值得推广。     

柴胡及柴胡类复方的抗抑郁研究现状

柴胡为常用疏肝解郁中药,其抗抑郁作用备受中医界关注,通过检索近年来国内外有关柴胡的文献,对以柴胡为主要药物的复方的临床疗效和现代的药理学研究现状进行了分析和总结,发现柴胡作为肝经引经药,逍遥散、柴胡疏肝散、小柴胡汤、柴胡龙骨牡蛎汤等经方治疗抗抑郁证临床疗效显著。药理实验研究也提示柴胡类经方及一些自拟的经验方已经成为治疗抑郁证的主要方剂,其中单味药柴胡发挥了明显的抗抑郁作用,是重要的抗抑郁中药之一,且柴胡的有效组分柴胡皂苷是发挥抗抑郁作用的主要成分,药理机理可能涉及单胺类递质及受体表达、乙酰胆碱转移酶蛋白及基因表达、抗免疫炎症损伤及抗凋亡等途径。因此,对柴胡抗抑郁作用的深入研究,对揭示抑郁症发病机制、研发抗抑郁新药均具有参考价值。     

Review of Astragali Radix

Astragali Radix (AR), known as Huangqi in China, is one of the most popular herbal medicines learnt worldwide to reinforce Qi (the vital energy). AR is traditionally prepared from the dried roots of Astragalus membranaceus or A. membranaceus var. mongholicus. It has been reported to have cardiotonic, hepatoprotective, hypotensive, immunostimulant, anti-aging, anti-oxidative, antidiabetic, and anti-inflammatory activities. The bioactive compounds were found to be flavonoids, saponins, polysaccharides, amino acids, and some trace elements. The present paper reviews the studies on AR including history, phytochemistry studies, pharmacological functions, and clinical application in recent years.     

附子甘草配伍研究进展

附子和甘草均为常用中药,临床上配伍应用非常广泛。将从“减毒”和“增效”2个方面综述近年来附子、甘草配伍研究所取得的进展。对近年研究成果的综合和分析提示,甘草所含的三萜皂苷和黄酮类化合物是其对附子发挥“减毒增效”作用的主要物质基础。附子配伍甘草减毒的机制可概括为煎煮过程、用药过程两个环节;而二者配伍的增效作用则主要表现为各自有效成分之间的协同作用。然而,二者配伍的具体物质基础和机制仍不完全清楚,甚至有相左的研究结果出现,因此还需要进一步深入研究。