当归补血汤对ox-LDL激活RAW264.7细胞核转录因子-κBp65蛋白表达的影响

目的 通过当归补血汤对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)激活单核细胞核转录因子-κBp65(NF-κBp65)信号转导通路的作用研究,探讨当归补血汤早期阻断动脉粥样硬化病变发展进程的可能性及其机理.方法 新西兰大耳白兔随机分为对照血清组、含药血清组,分别灌胃生理盐水和当归补血汤药液制备血清.将RAW264.7细胞悬液接种于培养瓶中,培养24 h,分为空白对照组、ox-LDL组、抑制剂组、含药血清组,除空白对照组外其余各组均加入100 mg/L ox-LDL刺激细胞.孵育4 h,收集细胞.免疫组化法检测NF-κBp65的表达,免疫印迹法检测RAW264.7细胞中NF-κBp65的蛋白活化量.结果 ox-LDL组细胞浆和核内可见大量棕黄色阳性颗粒,含药血清组棕黄色阳性颗粒较少;ox-LDL组蛋白条带灰度比值为1.288 3±0.013 9,含药血清组为0.918 9±0.015 3,与ox-LDL组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 当归补血汤可下调经ox-LDL刺激后RAW264.7细胞中NF-κBp65的蛋白表达及活化,因此阻断NF-κB信号转导通路可能是当归补血汤抗动脉粥样硬化的作用机理之一.     

当归补血汤对氧化低密度脂蛋白激活RAW264.7细胞中核转录因子-κBp65 mRNA表达的影响

【目的】观察当归补血汤含药血清对氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)激活小鼠单核细胞系RAW264.7细胞中核转录因子-κBp65(NF-κBp65)mRNA表达的影响。【方法】将新西兰兔8只随机分为空白血清组和含药血清组,每组各4只,分别灌胃生理盐水和当归补血汤水煎液(剂量为8.4g·kg-1·d-1),分离血清。将RAW264.7细胞悬液接种于培养瓶中,培养24h,分为空白对照组、Ox-LDL组、PAR组(终浓度为10μmol/L的小菊白内酯)、体积分数10%的含药血清组。除空白对照组外,其他各组分别加入100μg/mLOx-LDL刺激4h,收集细胞。采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞NF-κBp65 mRNA的表达量。【结果】Ox-LDL组与空白对照组比较,NF-κBp65 mRNA的表达量增加(P0.05);含药血清组与Ox-LDL组比较,NF-κBp65 mRNA的表达量减少(P0.05)。【结论】当归补血汤含药血清能下调NF-κBp65 mRNA的表达量,抑制、阻断NF-κBp65的表达可能是当归补血汤抗动脉粥样硬化的作用机制之一。     

阿魏酸对RAW264.7源性泡沫细胞脂代谢及炎症反应的影响

目的:通过体外细胞实验研究阿魏酸对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的泡沫化巨噬细胞脂代谢及炎症反应的影响,并通过过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)-炎症通路探讨阿魏酸抗动脉粥样硬化(AS)的分子作用机制。方法:ox-LDL诱导RAW264.7源性巨噬细胞形成泡沫细胞,CCK8法观察阿魏酸对泡沫细胞模型细胞活性的干预作用;油红O染色法鉴定细胞泡沫化及阿魏酸对脂质沉积的干预作用;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;蛋白免疫印迹法(Western Blot)测定细胞PPARγ、TNF-α的蛋白表达水平。结果:CCK8结果显示,ox-LDL呈浓度依赖性诱导细胞损伤;阿魏酸25μM以下对RAW264.7细胞无毒性作用,阿魏酸12.5μM、25μM浓度对ox-LDL诱导的细胞活性下降具有保护作用。油红O染色显示,ox-LDL诱导后细胞内可见红色脂滴,提示泡沫细胞模型制备成功,阿魏酸干预后脂质沉积减少。ELISA结果显示,与正常组比较,ox-LDL组细胞培养上清IL-10浓度降低,IL-1β、TNF-α浓度升高,阿魏酸干预后IL-10浓度升高,IL-1β、TNF-α浓度降低(P0.05,P0.01);Western Blot结果显示,与模型组相比较,阿魏酸干预组PPARγ蛋白表达水平升高,TNF-α表达下降,PPARγ抑制剂的加入可削弱阿魏酸的干预作用(P0.05,P0.01)。结论:阿魏酸可通过激活PPARγ改善ox-LDL诱导的RAW264.7源性泡沫细胞脂质沉积,改善炎症反应,恢复巨噬细胞功能,这可能是以阿魏酸为主要成分中药及复方治疗AS的分子机制之一。     

当归补血汤含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导肥大心肌细胞能量代谢的影响

目的:探讨当归补血汤含药血清对心衰后心肌能量代谢的影响。方法:体外培养心肌细胞,实验分为空白对照组、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组、AngⅡ+缬沙坦组、AngⅡ+含药血清组;分别用塞唑蓝(MTT)法检测各组心肌细胞总蛋白含量和细胞活力;酶联免疫法检测乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性;激光共聚焦显微镜观察线粒体膜电位(MMP)变化。结果:与空白对照组比较,AngⅡ组心肌细胞总蛋白含量、细胞活力、LDH、SDH活性及MMP显著升高(P0.05);与AngⅡ组比较,AngⅡ+含药血清组心肌细胞总蛋白含量、细胞活力、LDH、SDH活性及MMP显著降低(P0.05)。结论:当归补血汤含药血清能通过抑制肥大心肌细胞LDH、SDH活性及MMP的病理性升高起到改善心肌能量代谢障碍,保护心肌细胞的作用。     

当归补血汤通过miR-27a/TGF-β1/Smad3通路抑制HK-2细胞纤维化作用及机制研究

  目的  探讨当归补血汤通过miR-27a调控HK-2细胞纤维化的机制。  方法  HK-2细胞分为对照组、高糖组、高糖+空白血清组、高糖+当归补血汤含药血清组。采用MTT法检测各组细胞增殖情况; 采用Western blot法检测纤维化相关因子波形蛋白(Vimentin)、Ⅳ型胶原(COL Ⅳ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、p-Smad3/Smad3和转化生长因子(TGF)-β1蛋白的表达情况; qPCR法检测miR-27a及纤维化相关因子mRNA的表达情况; 通过转染miR-27a抑制剂及Smad3-siRNA并向培养基中加入TGF-β1, 观察miR-27a的表达和纤维化相关蛋白表达的情况。  结果  MTT结果显示, 与对照组相比, 高糖组细胞增殖率明显降低(P < 0.05, P < 0.001), 当归补血汤含药血清作用24、48 h后细胞增殖率明显提高(P < 0.05, P < 0.001)。Western blot结果显示, 当归补血汤含药血清明显抑制高糖诱导的HK-2细胞纤维化相关蛋白COL Ⅳ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1、p-Smad3/Smad3的表达(P < 0.05, P < 0.01)。qPCR结果显示, 当归补血汤含药血清明显抑制高糖诱导的HK-2细胞COL Ⅳ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1 mRNA和miR-27a的表达(P < 0.05, P < 0.01)。TGF-β1处理细胞后, 细胞纤维化加重, miR-27a的表达升高(P < 0.05, P < 0.01), 当归补血汤含药血清可明显降低TGF-β1诱导的纤维化细胞中miR-27a的表达升高(P < 0.001)。转染miR-27a抑制剂及Smad3-siRNA可明显降低TGF-β1诱导的细胞纤维化蛋白COL Ⅳ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1、p-Smad3/Smad3表达的升高(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  当归补血汤含药血清可促进HK-2细胞增殖, 并通过miR-27a/TGF-β1/Smad3信号通路调控HK-2细胞纤维化。      

祛湿通络方对肺炎支原体感染的RAW264.7细胞TNF-α、IL-6表达的影响

[目的]观察祛湿通络方含药血清对肺炎支原体(MP)感染的RAW264.7细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)表达的影响。[方法] 1)祛湿通络方含药血清的制备:SD大鼠随机分为空白对照组、中药低、中、高剂量组、阿奇霉素组,各组均连续给药7 d。2)MP感染的RAW264.7细胞炎症模型建立:模型组和各给药组分别加入MP菌液100μL,空白对照组加入100μL DMEM完全培养液,置于培养箱中培养2 h。3)酶联免疫吸附(ELISA)法检测祛湿通络方对MP感染的RAW264.7细胞TNF-α、IL-6表达的影响。[结果]与空白对照组比较,MP感染的RAW264.7细胞TNF-α、IL-6的分泌均显著上升(P0.05);与模型组比较,各给药组对TNF-α、IL-6均有不同程度的下调作用(P0.05),其中阿奇霉素组对TNF-α、IL-6的调节作用最优,中药低、中、高剂量组呈现剂量依赖性。[结论]祛湿通络方对MP感染的RAW264.7细胞TNF-α、IL-6的高表达具有下调作用,且呈剂量依赖性,这可能是祛湿通络方减轻炎症反应的机制之一。     

黄芪、当归药对及当归补血汤对小鼠巨噬细胞吞噬氧化低密度脂蛋白的作用

[目的]研究不同比例的黄芪、当归药对及当归补血汤含药血清对小鼠巨噬细胞(RAW264.7)吞噬氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)的作用.[方法](1)实验设6组:正常对照组,空白血清组,1∶1、2∶1、3∶1、5∶1(芪、归质量比)含药血清组,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测作用于RAW264.7细胞24 h后的吸光度(D)值;(2)实验设7组:正常对照组,OX-LDL组,空白血清组,1∶1、2:1、3:1、5:1含药血清组,除正常对照组外,各组均与50 mg/L的OX-LDL作用48 h后,采用油红O染色鉴定细胞对脂质的吞噬.[结果]MTI检测结果表明不同比例含药血清组均可显著降低D值(P＜0.05或P＜0.01);油红O染色发现不同比例含药血清组细胞内可见大量红染脂滴,吞噬了OX-LDL的巨噬细胞(即泡沫细胞)大量破裂死亡,尤以5∶1组最为明显.[结论]当归补血汤(芪、归质量比5∶1)可通过抑制巨噬细胞吞噬OX-LDL形成泡沫细胞、减少泡沫细胞形成来达到减小或消除动脉粥样硬化斑块的作用.     

苗药头花蓼提取物血清药理学研究方法的建立及验证

目的：建立并验证头花蓼提取物血清药理学研究方法。方法以大鼠为含药血清的供体,MTT法确定空白血清及含药血清对小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7细胞)活性的影响,采用10 ng/mL脂多糖(LPS)建立RAW264.7细胞炎症损伤模型,Griess试剂法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的释放量,以确定体系中的血清添加量和大鼠取血时间。以NO、TNF-α为指标测定含药血清的抗炎活性。结果大鼠按人临床用药等效剂量的27倍给予头花蓼水提醇沉提取物,与模型组相比,体系中加入1.5%(V/V)末次给药后90 min的含药血清能够显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞释放NO (P<0.001)。同时,该方法制备的含药血清能够显著抑制细胞释放NO和TNF-α(P<0.01或P<0.001)。结论本实验条件下制备的头花蓼含药血清具有明显的抗炎作用,该血清药理学方法可用于头花蓼提取物含药血清药效及作用机制研究。     

炎调方对巨噬细胞中HSP70表达及其效应的影响

目的:观察炎调方药物血清对离体巨噬细胞中热休克蛋白70(HSP70)及其他相关细胞因子的调控效应,以验证炎调方治疗脓毒症的作用途径和位点。方法:培养大鼠巨噬细胞RAW 264.7,将培养后的巨噬细胞RAW 264.7分为空白对照组(RAW 264.7+培养液)、正常血清组(RAW 264.7+正常大鼠血清)、炎调方药物血清组(RAW 264.7+炎调方药物血清),每组设4个平行孔。采用MTT比色法测定细胞增殖,确定炎调方药物血清的无毒性剂量范围;采用qRT-PCR方法检测细胞HSP70、核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1β、IL-8的mRNA表达;采用Western blot方法检测细胞HSP70、NF-κB蛋白表达,以ELISA方法检测细胞TNF-α、IL-1β、IL-8蛋白表达。结果:炎调方药物血清的无毒性浓度范围包括10%~30%,故后续实验选取20%浓度的炎调方药物血清进行。正常血清组的各项指标与空白对照组比较,其差异均无统计学意义(P0.05);与空白对照组和正常血清组比较,炎调方药物血清组RAW 264.7细胞的HSP70 mRNA和蛋白表达均明显升高(P0.01),NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-8的mRNA和蛋白表达均明显降低(P0.01)。结论:炎调方治疗脓毒症的作用机制可能是上调HSP70的表达,进而抑制NF-κB的活化和相关细胞因子的表达。     

灯盏乙素对OX-LDL损伤的RAW264.7细胞中PKC和TNF-α表达的影响

目的 研究灯盏乙素(scutellarin)对OX-LDL诱导损伤的巨噬细胞RAW264.7脂质吞噬能力及对PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达调控的影响.方法 体外培养小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,复制OX-LDL诱导损伤模型,通过油红O染色检测脂质吞噬及试剂盒检测细胞损伤模型胆固醇酯的含量.Western blot和RT-PCR方法检测RAW264.7细胞中PKC和TNF-α表达变化.结果(1)油红O结果显示:与正常对照组比较,模型组细胞红染程度明显高于正常对照组;与模型组比较,辛伐他汀组、灯盏乙素50和100μmol/L组细胞红染程度均低于模型组;(2)胆固醇酯含量检测显示:与正常对照组比较,各时间点模型组细胞CE/TC值均明显升高;与模型组比较,各时间点用药组细胞CE/TC值均降低.(3)WB和RT-PCR结果显示:与正常对照组比较,模型组PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达升高;与模型组比较,辛伐他汀组(simvastatin)PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达降低,且灯盏乙素组呈浓度依赖性下调PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达.结论(1)灯盏乙素能明显抑制OX-LDL诱导损伤的RAW264.7细胞脂质吞噬能力.(2)灯盏乙素能够明显下调OX-LDL诱导损伤的RAW264.7中PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达水平.     

灯盏乙素对OX-LDL损伤的RAW264.7细胞中PKC和TNF-α表达的影响

目的 研究灯盏乙素(scutellarin)对OX-LDL诱导损伤的巨噬细胞RAW264.7脂质吞噬能力及对PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达调控的影响.方法 体外培养小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,复制OX-LDL诱导损伤模型,通过油红O染色检测脂质吞噬及试剂盒检测细胞损伤模型胆固醇酯的含量.Western blot和RT-PCR方法检测RAW264.7细胞中PKC和TNF-α表达变化.结果(1)油红O结果显示:与正常对照组比较,模型组细胞红染程度明显高于正常对照组;与模型组比较,辛伐他汀组、灯盏乙素50和100μmol/L组细胞红染程度均低于模型组;(2)胆固醇酯含量检测显示:与正常对照组比较,各时间点模型组细胞CE/TC值均明显升高;与模型组比较,各时间点用药组细胞CE/TC值均降低.(3)WB和RT-PCR结果显示:与正常对照组比较,模型组PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达升高;与模型组比较,辛伐他汀组(simvastatin)PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达降低,且灯盏乙素组呈浓度依赖性下调PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达.结论(1)灯盏乙素能明显抑制OX-LDL诱导损伤的RAW264.7细胞脂质吞噬能力.(2)灯盏乙素能够明显下调OX-LDL诱导损伤的RAW264.7中PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达水平.     

褪黑素对ox-LDL所致巨噬细胞TNF-α释放及核因子κB活性的影响

目的探讨褪黑素对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）所致的巨噬细胞肿瘤坏死因子α（TNF-α）释放及核因子κB活性的影响。方法以ox-LDL、ox-LDL加不同浓度的褪黑素处理RAW264.7小鼠巨噬细胞,采用酶联免疫吸附测定细胞上清液中TNF-α的浓度,免疫印迹法检测p65/核因子κB的核移位,凝胶电泳迁移率分析核因子κB与DNA的结合活性。结果褪黑素能够显著减少ox-LDL所致的巨噬细胞TNF-α的释放,且p65/核因子κB的核移位减少,核因子κB与DNA的结合活性降低。结论褪黑素减少ox-LDL所致的巨噬细胞TNF-α的释放与其调节核因子κB的活性有关。     

黄精粗多糖对体外培养小鼠脾淋巴细胞及巨噬细胞免疫活性的影响

[目的]探讨黄精粗多糖对体外培养小鼠脾淋巴细胞及巨噬细胞(RAW 264.7)免疫活性的影响.[方法]设置空白对照组及给药质量浓度分别为1 000,500,250,125 mg/L的黄精粗多糖组,分别与小鼠的脾细胞、巨噬细胞(RAW 264.7)共同培养.采用ELISA法检测共同培养后的细胞上清液中免疫因子IL-2,IL-6,IFN-γ和TNF-α的含量变化,利用MTT比色法测定黄精粗多糖对巨噬细胞(RAW 264.7)增殖作用的影响,Griess法测定细胞上清液中一氧化氮的水平,RT-PCR检测iNOS mRNA的表达情况.[结果]与空白对照组比较,各质量浓度黄精粗多糖组免疫因子IL-2,IL-6,IFN-γ和TNF-α含量明显增加(P<0.05),促进巨噬细胞(RAW 264.7)的增殖(P<0.05),一氧化氮分泌量及iNOS mRNA水平均明显增高(P<0.01).[结论]黄精粗多糖可增强体外培养小鼠脾淋巴细胞及巨噬细胞的免疫活性.     

下瘀血汤含药血清对脂多糖诱导活化的RAW264.7细胞表达MMP2,9/TIMP1,2的调控作用

目的:观察下瘀血汤药物血清对脂多糖(LPS)诱导活化后RAW 264.7细胞表达基质金属蛋白酶(MMP-2,9)及基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP-1,2)的影响,以探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法:100 g/L LPS刺激RAW264.7细胞,ELISA法分别测定0.5 h,1 h,2 h,4 h,6 h,12 h细胞培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,选择模型时间点;生化法测定RAW264.7细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量,分析10%和20%的正常大鼠血清和下瘀血汤药物血清的细胞毒性;Western blot法检测RAW 264.7细胞MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的蛋白表达。结果:与10%浓度的正常大鼠血清相比,10%下瘀血汤药物血清对RAW264.7细胞的无毒性作用。LPS刺激细胞培养1 h时,细胞培养上清中TNF-α含量开始增加;4 h时达到最高;6 h时开始下降。与相应时间点正常组相比,4 h、6 h模型组RAW 264.7细胞MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2蛋白表达均显著升高(P0.01);与相应时间点模型组相比,4 h、6 h下瘀血汤药物血清组上述指标均降低,其中6 h组RAW 264.7细胞MMP-2蛋白表达、4 h与6 h细胞MMP-9、TIMP-1和TIMP-2蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:下瘀血汤可能通过抑制枯否细胞(KCs)活化,抑制其MMP2,9/TIMP1,2的表达而发挥抗肝纤维化的作用。     

Notch1信号参与脂多糖诱导的巨噬细胞活化

[目的]探讨Notch1对脂多糖(LPS)介导巨噬细胞活化的影响.[方法]体外培养RAW264.7细胞,给予LPS 100μg/L处理8h后利用RT-PCR方法检测RAW264.7细胞Notch1和Hes1 mRNA表达水平;给予Notch1信号抑制剂DAPT10μmol/L预处理1 h后利用ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素(IL)-6水平,采用Western blot法检测细胞TNF-α和IL-6蛋白表达水平.[结果]给予LPS刺激RAW264.7细胞后可明显提高Notch1和Hes1 mRNA表达(P<0.05),LPS提高RAW264.7细胞TNF-α和IL-6的表达和释放作用可明显被DAPT抑制(P<0.05),但TNF-α和IL-6表达水平仍显著高于对照组(P<0.05).[结论]巨噬细胞中Notch1信号参与LPS诱导细胞因子TNF-α和IL-6的表达和释放过程.     

β-葡聚糖对巨噬细胞的增殖及ERK5通路的影响

目的:探讨β-葡聚糖对于小鼠巨噬细胞RAW 264.7的生长增殖和诱导细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,以及细胞外信号调节激酶5(ERK5)信号通路在这一过程中的表达。方法:以不同浓度(12.5,25,50,100,200和400μg/m l)的β-葡聚糖刺激体外培养小鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞后,用四唑盐比色实验(MTT)检测细胞的生长增殖;瑞氏染色法检测RAW 264.7细胞的吞噬活性;用ELISA方法测定培养上清液中TNF-α的表达量;蛋白质印迹法检测ERK5及磷酸化ERK5(p-ERK5)表达情况。结果:MTT实验结果显示不同浓度的β-葡聚糖对细胞的增殖有不同程度的促进作用,其中以100μg/m l浓度时促进作用最大,大剂量时则对细胞增殖产生抑制作用。在浓度为100μg/m l时,TNF-α的表达量达到峰值,ERK5和p-ERK5被活化。结论:一定浓度的葡聚糖对小鼠巨噬细胞的增殖和吞噬有明显的促进作用,细胞外信号调节激酶5信号通路参与了这一过程。     

胆汁酸G-蛋白偶联受体通过p38 MAPK通路诱导巨噬细胞IL-1β、TNF-α和IL-6的转录

目的观察胆汁酸G-蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor for bile acids,TGR5)被齐墩果酸(oleanolicacid,OA)激活后对RAW264.7细胞白细胞介素-1(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)转录的影响及其机制的探讨。方法通过实时荧光定量(Real-time)PCR法检测OA作用不同时间RAW264.7细胞和原代枯否细胞IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA的表达;并进一步分析在RAW264.7细胞中加入3种不同信号通路的抑制剂对上述3种炎症因子mRNA表达的影响。OA作用RAW264.7细胞和原代枯否细胞不同时间后,Western blot分析p38 MAPK的磷酸化水平。结果 OA刺激RAW264.7细胞6、12、24 h后,IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达明显升高。OA作用于分离的原代枯否细胞3 h和6 h后,也可观察到相同的结果。p38 MAPK特异性抑制剂SB203580可以明显地抑制OA诱导的RAW264.7细胞内IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA的表达,但PKA和NF-κB的抑制剂无此作用。RAW264.7细胞和原代枯否细胞经OA刺激后,p38 MAPK磷酸化水平明显增强。结论 TGR5可能通过活化p38 MAPK磷酸化诱导炎症细胞IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA的表达,提示TGR5在无其他刺激因素作用下,具有诱导炎症因子表达的作用。     

小剂量茶碱对大鼠气道平滑肌细胞表达NF-κB与ICAM-1的影响

目的:观察小剂量茶碱对培养的大鼠气道平滑肌细胞表达核因子κB(NF-κB)与细胞间黏附分子1(ICAM-1)的影响,探讨小剂量茶碱在气道发挥抗炎作用的可能机制。方法:体外培养正常大鼠鼠婴的气道平滑肌细胞,将培养出的细胞随机分为3组:空白对照组、肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激组、茶碱干预组。采用免疫组织化学SP法检测经TNF-α刺激的大鼠的气道平滑肌细胞中加入不同浓度的茶碱共同培养4 h,以及加入同一浓度茶碱共同培养不同时间,NF-κB活性和ICAM-1表达的变化。结果:TNF-α刺激组与空白对照组的NF-κB活性和ICAM-1表达相比较,差异均有显著性(P<0.05)。经TNF-α刺激的大鼠的气道平滑肌细胞中加入5,10,15 mg/L的茶碱共同培养4 h,NF-κB活性和ICAM-1表达均有所下降。与TNF-α刺激组相比,5 mg/L组无统计学差异(P>0.05),余两组差异均有显著性(P<0.05)。且茶碱干预组内两两比较,差异均有显著性(P<0.05)。经TNF-α刺激的大鼠的气道平滑肌细胞中加入10 mg/L茶碱共同培养2,4,24 h。与TNF-α刺激组相比,茶碱处理组的差异均有显著性(P<0.05)。但茶碱处理组内不同处理时间两两比较,差异无显著性(P>0.05)。结论:茶碱可能通过抑制气道平滑肌细胞NF-κB活性和ICAM-1的表达,进而减少炎症细胞在气道的浸润。     

TGR5 induces IL-1β, TNF-α and IL-6 mRNA transcription by p38 MAPK pathway in mouse macrophages

目的 观察胆汁酸G-蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor for bile acids,TGR5)被齐墩果酸(oleanolic acid,OA)激活后对RAW264.7细胞白细胞介素-1(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor α,TNF-α)和白细胞介素-6( interleukin-6,IL-6)转录的影响及其机制的探讨.方法 通过实时荧光定量(Real-time)PCR法检测OA作用不同时间RAW264.7细胞和原代枯否细胞IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA的表达;并进一步分析在RAW264.7细胞中加入3种不同信号通路的抑制剂对上述3种炎症因子mRNA表达的影响.OA作用RAW264.7细胞和原代枯否细胞不同时间后,Western blot分析p38 MAPK的磷酸化水平.结果 OA刺激RAW264.7细胞6、12、24h后,IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达明显升高.OA作用于分离的原代枯否细胞3h和6h后,也可观察到相同的结果.p38 MAPK特异性抑制剂SB203580可以明显地抑制OA诱导的RAW264.7细胞内IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA的表达,但PKA和NF-KB的抑制剂无此作用.RAW264.7细胞和原代枯否细胞经OA刺激后,p38 MAPK磷酸化水平明显增强.结论 TGR5可能通过活化p38 MAPK磷酸化诱导炎症细胞IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA的表达,提示TGR5在无其他刺激因素作用下,具有诱导炎症因子表达的作用.     

过表达KLF4对RAW264.7巨噬细胞ABCA1表达和胆固醇蓄积的影响

目的观察KLF4过表达对小鼠巨噬细胞(RAW264.7)胆固醇蓄积的影响及对ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)表达的影响。方法构建KLF4过表达的RAW264.7细胞株。将细胞分为三组:对照组、ox-LDL组、KLF4过表达+ox-LDL组,后两组加入终浓度为30 μg/mL的ox-LDL处理24 h。分别运用油红O染色观察细胞质脂滴变化,高效液相色谱法（HPLC）检测细胞内总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量,Western blot法检测各组细胞ABCA1及KLF4蛋白表达。结果泡沫细胞模型组的细胞内存在大量的红色脂滴,KLF4及ABCA1蛋白表达及胆固醇含量较对照组升高;KLF4过表达细胞经ox-LDL处理后,细胞内脂滴较模型组明显减少,胆固醇含量下降,ABCA1蛋白表达进一步升高。结论KLF4可上调巨噬细胞ABCA1的表达,抑制ox-LDL诱导的RAW264.7巨噬细胞胆固醇蓄积。