腹泻患者肠道菌群数量变化及ERIC-PCR指纹图谱分析

目的了解粪检有白细胞的腹泻患者与健康者肠道菌群变化及指纹图谱差异。方法提取解放军第252医院临床门诊30名健康成人和30例腹泻成人的粪便总DNA为模板,分为对照组和腹泻组。荧光定量法测定肠道内双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠埃希菌、肠球菌的菌群数量,ERIC-PCR指纹图谱法检查各组肠道菌群组成多样性差异。结果两组肠道菌群数量:对照组粪便中双歧杆菌为(8.85±0.57)拷贝/g,乳酸杆菌为(8.36±0.45)拷贝/g;腹泻组粪便中双歧杆菌为(8.28±0.68)拷贝/g,乳酸杆菌为(7.79±0.39)拷贝/g;与对照组比较,腹泻组中该两种细菌数量明显减少(P<0.05)。大肠埃希菌和肠球菌数量在两组之间差异无统计学意义(P>0.05)。腹泻患者肠道菌群ERIC-PCR指纹图谱条带明显减少。结论腹泻患者的肠道菌群结构发生了改变,菌群数量明显减少。     

残留型精神分裂症患者肠道菌群特点初探

目的:初探残留型精神分裂症患者的肠道菌群特点。方法:选取20名残留型精神分裂症患者作为观察组,20名健康人作为对照组,对两组人群的粪便样本进行检测。通过"各个样品的总基因组DNA提取"、"16S r DNA的荧光PCR扩增"、"PCR扩增产物纯化"、"PCR纯化产物酶切"、"酶切产物脱盐"、"电泳进样体系和电泳参数"、"T-RFLP图谱生成"和"T-RFLP数据处理"等7个步骤而得出相应的结果。结果:两组的肠道微生物群落之间存在明显的差异。结论:残留型精神分裂症的肠道菌群与健康人存在差异。     

参苓白术散对脾虚湿困证溃疡性结肠炎大鼠结肠菌群的影响

目的观察参苓白术散对脾虚湿困证溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠菌群的影响,探讨参苓白术散治疗UC的作用机制。方法将40只Wistar大鼠,随机分为正常对照组、脾虚湿困证UC模型组、参苓白术散组、阳性对照药组。采用传统中医学病因与现代医学病因相结合的方法复制UC模型,给药治疗后,提取结肠内容物细菌总DNA,应用肠杆菌基因间重复共有序列基因扩增(ERIC-PCR)技术进行菌群分析。结果 4组大鼠的结肠内容物菌丛存在整体差异,模型组ERIC-PCR指纹图谱DNA条带较少,存在6条分布较一致的主带;而其他3组ERIC-PCR指纹图谱DNA条带较多,且主带位置分布无统一趋势,其中参苓白术散组ERIC-PCR指纹图谱与正常组最为接近。结论 UC可能存在较单一的肠道优势菌,参苓白术散对脾虚湿困证UC结肠菌群的失衡具有明显的调整作用,可使肠道优势菌种类增加,恢复菌群平衡状态,从而促进损伤肠组织的恢复。     

慢传输便秘大鼠肠道菌群的ERIC-PCR指纹图谱分析

目的 应用细菌基因共有重复序列指纹图谱技术,探讨慢传输便秘肠道菌群的变化.方法 选取Wistar大鼠30只,随机分为对照组15只、造模组15只,造模组给予易蒙停灌胃.收集每24 h排出粪便,计数排便粒数,称量粪便质量,及24 h进食量及进水量,通过碳末灌胃测定肠道传输时间.留取造模组与对照组不同时段粪便,提取肠道细菌DNA,进行ERIC-PCR指纹图谱分析.结果 造模组大鼠24 h内排便粒数、排便质量、进食量较对照组明显减少,进水量没有明显差异.造模组大鼠肠道传输时间明显高于对照组.造模组大鼠肠道菌群ERIC-PCR结果优势条带依然存在,但是较对照组及给药前条带增多且亮度增高.结论 易蒙停给药致慢传输便秘大鼠造模成功,造模组大鼠肠道菌群较对照组ERIC-PCR结果可能存在细菌数量及种类增多.     

T-RFLP分析系统性红斑狼疮患者肠道微生物群落结构

目的:探讨本地区系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)患者和健康人群肠道微生物菌群结构比例的差异。方法:设立健康组和SLE组,分别收集其粪便提取DNA并扩增纯化,利用末端限制性长度多样性(Terminal restriction fragment length polymorphism,T-RFLP)技术测序16S r DNA,比较两组之间的肠道微生物菌群结构比例差异。结果:通过16S r DNA进行T-RFLP测序结果显示,健康组和SLE组肠道微生物群落有所不同,SLE组厚壁菌(Firmicutes)和拟杆菌(Bacteroidetes)在微生物群落中的比例明显低于健康组。结论:系统性红斑狼疮患者与健康人群的肠道微生物群落结构存在明显差异,本研究结果为通过改变肠道微生物群落结构来预防和治疗SLE提供了相关的理论依据。     

维吾尔医异常体液分型支气管哮喘患者肠道菌群多样性变化研究

目的了解维吾尔医异常体液分型支气管哮喘患者肠道菌群多样性及结构组成特征,探究肠道菌群与维吾尔医异常体液分型的相互关系。方法以52例维吾尔医异常体液分型哮喘急性发作期患者及25例对照进行病例-对照研究,采集粪便样品,运用PCR-DGGE指纹图谱技术分析粪便菌总DNA,得到反映肠道微生物菌群结构特征的DNA指纹图。结果异常黑胆质性哮喘患者的肠道菌DNA条带有8～28条,平均16条;非异常黑胆质性哮喘患者的肠道菌DNA条带有7～31条,平均18条;对照组肠道菌DNA条带有14～36条,平均24条。异常黑胆质哮喘组与非异常黑胆质哮喘组间肠道菌群的多样性指数明显低于对照组,哮喘患者的肠道菌类群种类、丰富度明显降低(P<0.05),维吾尔医异常体液分型组间多样性指数比较差异无统计学意义。多变量统计分析表明,异常黑胆质哮喘组、非异常黑胆质哮喘组与对照组样本分类明显,3组间肠道菌群结构组成差异有统计学意义。结论肠道菌群结构改变与维吾尔医异常体液分型有关,哮喘患者肠道菌群在分子水平上发生明显改变,多样性显著降低。     

ERIC-PCR指纹图谱分析逍遥散对抑郁模型大鼠肠道菌群的影响

目的探讨逍遥散对抑郁模型大鼠肠道菌群的影响。方法用肠杆菌的基因间重复共有序列(ERIC)为引物的聚合酶链式反应(PCR)指纹图谱技术分析抑郁模型大鼠及逍遥散干预后肠道菌群结构特征,SD大鼠随机分为健康对照组、模型组、盐酸氟西汀组和逍遥散组。复制慢性温和不可预知应激抑郁模型(CUMS),造模3周恢复1周后无菌收集回肠、盲肠和结肠内容物,利用ERIC-PCR技术比较肠道不同部位菌群多态性结构,分析抑郁模型大鼠及逍遥散干预后大鼠肠道菌群的结构变化。结果行为学结果表明CUMS模型复制成功;ERIC-PCR、聚类分析、主成分分析和Shannon-Wiener指数进行验证结果显示大鼠盲肠菌群结构失调,而氟西汀和逍遥散均有良好恢复作用。结论本研究建立了大鼠肠道菌群ERIC-PCR分析方法,并采用聚类分析、主成分分析和Shannon-Wiener指数进行验证,发现CUMS能够引起大鼠肠道菌群发生明显改变,其中盲肠菌群结构的变化最为显著,而逍遥散具有扶持正常菌群生长和调整菌群失调的作用。本文为逍遥散抗抑郁机制研究提供了新的思路和方法。     

妊娠期糖尿病肠道菌群变化及临床价值分析

目的:探讨妊娠期糖尿病肠道变化规律,并分析其临床价值。方法:选取100名妊娠期糖尿病患者、100例正常妊娠人群和100名健康体检女性作为研究对象。收集各组粪便标本,采用粪便细菌基因组DNA提取试剂盒提取粪便肠道菌群DNA,并用16SrDNA测序技术检测肠道菌群;记录妊娠期糖尿病患者血糖相关指标(空腹血糖、空腹胰岛素和胰岛素抵抗指数)和妊娠不良结局。比较各组肠道菌群优势菌群,并分析其与血糖相关指标及妊娠不良结局的关系。结果:共鉴定出9门属肠道内细菌,各组均以厚壁菌门、拟杆菌菌门、变形菌门和放线菌门为主,三组肠道菌群种各优势菌门属比例比较,差异有统计学意义(P<0.05)。经Spearman相关分析,FBG、FINS和IR与厚壁菌门和放线菌门均呈明显正相关(P<0.05),而FBG、FINS和IR与拟杆菌菌门和变形菌门呈明显负相关(P<0.05)。与正常妊娠组比较,糖尿病妊娠组妊娠不良结局总发生率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与正常妊娠结局组比较,不良结局发生组肠道菌群中厚壁菌门和放线菌门比例明显升高,而拟杆菌菌门、变形菌门和其它菌门比例则明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:与正常妊娠女性比较,妊娠期糖尿病患者肠道菌群结构及比例改变明显,对其诊断及妊娠不良结局预测有一定价值。     

基于16S rDNA测序的帕金森病患者肠道菌群初步分析

目的对帕金森病患者的肠道菌群进行初步分析。方法收集2018年10月～2019年4月某三甲医院收治的7例帕金森病患者及7例健康对照者的粪便样本,提取菌群DNA,选取细菌16S r DNA的V3～V4区序列进行基因扩增及Illumina测序,生物信息学分析肠道菌群测序数据。结果 Alpha多样性分析中,Chao指数、Ace指数、Shannon指数、Simpson指数在两组样本间无显著统计学差异(P0.05)。在界、门分类水平上PD组及健康对照组物种数目相等,在纲、目、科、属、种、OTU分类水平上PD组所包含的物种数目依次高于健康对照组。受试样本中肠道菌群结构由4个主要的菌门组成,分别为厚壁菌门、拟杆菌门、变形菌门和放线菌门。在PD组中,检测到了12种显著升高的肠道菌群组分(P0.05)。结论帕金森病患者与健康对照者的肠道菌群结构在大体上是相似的,有部分菌群在两组间存在着差异,深入分析肠道菌群变化有望为研究帕金森病的发病机制、疾病预防及治疗提供新思路。     

尿酸酶缺失大鼠肠道菌群的变化

  目的  观察雄性尿酸酶缺失大鼠（Kunming-DY,即KDY大鼠）肠道和新鲜粪便的菌群变化。  方法  与同性别同日龄野生型SD大鼠对照,选取45日龄雄性尿酸酶缺失大鼠称体质量,乌拉坦麻醉后解剖取血制备血清,将小肠依次分成18段,结肠分成2段（每段5 cm）。用磷钨酸法检测血清尿酸含量,用DNA提取试剂盒提取各肠段和新鲜粪便DNA,采用特异性16s rDNA引物扩增后进行高通量测序,将测序结果与数据库比对在门、纲、目、科和属水平鉴定菌群。  结果  45 d日龄时,KDY大鼠体质量下降（P < 0.05）,但血尿酸水平明显升高（P < 0.05）,肠道菌群多样性呈降低趋势（P < 0.05）,但粪便菌群多样无明显变化（P > 0.05）。KDY大鼠肠道和粪便中乳酸杆菌属丰度明显增加（P < 0.05）。  结论  相比野生型SD大鼠,KDY大鼠肠道菌群多样性下降,但肠道和粪便中的乳酸杆菌属丰度明显增加。     

宁波地区人群肠道菌群的特点及对结直肠癌与癌前病变发生和发展的影响

目的 探讨肠道细菌在健康人类、大肠肿瘤患者和大肠息肉患者之间的差异,分析微生物对大肠息肉及大肠肿瘤的发生、进展的影响。 方法 样本来源于常规做肠镜检查患者的粪便以及术前愿意参加实验的患者,分为3大组:肠镜检查健康组、息肉组和大肠腺癌组,同时以高血压为独立的考察因素,健康组和息肉组又各分为高血压和非高血压2个亚组,样本经过DNA提取后,16SrRNA基因全长扩增和V3、V4区PCR扩增,采用DGGE预评判提取DNA质量,采用高通量测序技术分析各样本中细菌的种类和丰度,并通过主成分分析探讨不同分组患者肠道细菌的多样性和群落结构差异。 结果 不同分组患者的肠道细菌具有较高的多样性,在获得的所有OTUs中,厚壁菌门、拟杆菌门、变形菌门、梭杆菌门分别占44.9%、28.4%、18.6%和5.5%,这4门的OTUs累计占97.4%。这些构成了大多数样本中的优势菌,但不同样本中优势细菌的组成有显著的区别。各分组的多样性指数统计分析发现,不同组之间的多样性指数差异不显著。健康人肠道细菌群落结构与肿瘤患者有着显著差异,结肠息肉患者的肠道细菌群落结构与健康人群的肠道细菌群落结构差异显著。健康组中非高血压和高血压组的肠道细菌群落结构差异无统计学意义,结肠息肉组中非高血压和高血压组的肠道细菌群落结构差异无统计学意义。 结论 肠道菌群的变化可能影响或导致结肠息肉和结肠肿瘤的发生、发展,观察肠道菌群的变化有助于研究结肠癌发展的微环境及机制,而高血压对健康人和肠道息肉患者的肠道菌群变化的无显著影响。      

实时荧光PCR定量检测粪便中Akkermansia muciniphila方法研究

目的 建立实时荧光PCR定量检测粪便中Akkermansia muciniphila （A. muciniphila）的方法,为A. muciniphila的定量检测及深入研究提供技术支持。 方法 建立SYBR Green Ⅰ 荧光PCR 定量检测A. muciniphila的方法,利用A. muciniphila标准品制备标准曲线,评价该方法的灵敏度、特异性、抗干扰性及重复性,并对30例人粪便样本进行检测。 结果 标准曲线线性关系良好（R2=0.999）;方法灵敏度可达到1.0×102CFU/mL;该方法可特异性扩增A. muciniphila,不受其他肠道细菌的影响;组内和组间重复性较好,Ct值的变异系数均小于2%;30例人粪便样品中A. muciniphila阳性率为73%,Ct值为17.40～31.77。 结论 本研究建立的实时荧光PCR定量检测粪便中A. muciniphila的方法简便、快速、经济,且具有良好的灵敏度、特异性、抗干扰性和重复性,适用于实际粪便样品的检测。     

实时荧光定量PCR法检测人粪便中双歧杆菌方法的建立及评价 

目的：建立利用实时荧光定量PCR法检测人粪便中双歧杆菌浓度的方法,为检测人肠道内菌群浓度提供有效手段。方法：提取60例儿童粪便样本中细菌总DNA。选择细
菌种属的特异性基因16SrRNA作为扩增区,依据双歧杆菌的16SrRNA序列共设计3条引物,以常规PCR扩增出的16SrRNA部分基因片段制作标准品,应用SYBR Green Ⅰ双链嵌合染料,对连续稀释的标准品及待测样本进行分析,建立绝对定量的标准曲线,同时计算出待测样本双歧杆菌浓度;根据可检测到的标准品最低拷贝数计算反应灵敏度;分析PCR产物熔解曲线评价反应特异性;重复检测梯度稀释的标准品,用相同浓度标准品的Ct值变异系数（CV）评价反应稳定性。结果：常规PCR扩增出双歧杆菌16SrRNA部分基因片段长度约为613 bp,测序结果正确,成功构建了双歧杆菌实时荧光定量PCR反应中的标准品;生成的标准曲线R2=0.999,最低检测限度为每个反应1.48×102个拷贝;实时荧光定量PCR产物的熔解曲线为单峰。对待测样本分批进行荧光定量PCR检测,各组间每微升1.48×103~1.48×107个拷贝浓度标准品Ct值的变异系数为2.94%、3.39%、3.54%、3.08%和3.34%。60份儿童粪便样本双歧杆菌浓度对数值为7.77±0.86（拷贝数?g-1湿便）。结论：本研究所建立的实时荧光定量PCR法敏感性高、特异性强,且重复性好,适用于检测人粪便中双歧杆菌的浓度。     

七叶树皂苷-Ia的人肠内细菌生物转化产物及其抗肿瘤活性研究

目的:探讨人肠内细菌和短乳杆菌粗酶转化七叶树皂苷-Ia,阐明转化产物结构,研究其抗肿瘤活性.方法:采用人肠内细菌和短乳杆菌粗酶分别与七叶树皂苷-Ia共温孵方法,通过色谱技术分离、纯化转化产物,应用波谱技术确定转化产物结构.结果:七叶树皂苷-Ia可由人肠内细菌和短乳杆菌粗酶转化产生异七叶树皂苷Ia、去酰基七叶树皂苷I、21β-O-巴豆酰基原七叶树皂苷元和原七叶树皂苷元.去酰基七叶树皂苷I对小鼠肉瘤S-180、肝癌和肺癌细胞的生长具有抑制作用.结论:七叶树皂苷-Ia是"前药",人肠内细菌和短乳杆菌粗酶能够转化七叶树皂苷-Ia;转化产物去酰基七叶树皂苷I有抗肿瘤活性,是有开发潜力的抗肿瘤候选药物.     

T-RFLP快速分析慢性腹泻患者肠道菌群及其应用研究

目的建立快速检测分析人体肠道菌群的方法,协助慢性腹泻病原学诊断。方法上游引物的5'端用6-FAM进行荧光标记,PCR 反应结束后选择适当的限制性内切酶酶切消化,在测序仪上通过毛细管电泳即可检测5'末端荧光标记的限制性片段。利用不同细菌产生的不同峰谱达到快速对细菌定性、定量的目的。对30例慢性腹泻患者和22例健康人进行肠道菌群分析,从而探讨菌群变化情况。结果该法能够对人体肠道菌群进行定性和定量分析,30例腹泻患者均发现肠道菌群紊乱。结论该法快速、特异、敏感。一个样品中能同时检测多种细菌,是一种很有希望的新技术。     

The Relationship of Oxalobacter Formigenes and Calcium Oxalate Calculi

ＴｈｅＲｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｏｆＯｘａｌｏｂａｃｔｅｒＦｏｒｍｉｇｅｎｅｓａｎｄＣａｌｃｉｕｍＯｘａｌａｔｅＣａｌｃｕｌｉＨＡＮＪｉａｎ－ｚｈｉ（韩见知）；ＺＨＡＮＧＸｕ（张旭）；ＬＩＪｉａ－ｇｕｉ（李家贵）；ＺＨＡＮＧＹｏｎｇ－ｓｈａｎｇ（章咏裳...     

集约化动物养殖区饲料-粪便-饮用水中β受体激动剂的残留特征及其健康风险

目的 以中国东部某养殖区为例,探讨β受体激动剂的饲料添加情况和粪便残留特征,评估饮用水中β受体激动剂的人体健康风险。 方法 利用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)检测不同养殖场饲料(n=70)、粪便(n=75)和饮用水(n=59)中12种β受体激动剂的含量,利用Kruskal-Wallis检验分析其在不同畜种粪便间的差异性,通过每日允许摄入量(ADI)评估其健康风险。 结果 该地区各类样品中均存在β受体激动剂残留。饲料中12种β受体激动剂的检出率均高于50%,其中溴布特罗检出率高达100%,非诺特罗浓度最高(102.94 μg/kg)。粪便中β受体激动剂的检出率高于80%,其中溴布特罗和溴代克伦特罗的检出率达到100%,浓度最高为非诺特罗(395.84 μg/kg)。不同畜禽粪便的β受体激动剂存在浓度差异,除特布他林外,其他11种物质均以牛粪中残留浓度最高(P<0.05)。饮用水中亦检出所有12种β受体激动剂,且检出率大部分在80%以上,其中溴布特罗检出率达到100%,非诺特罗浓度最高(30.09 ng/L)。通过单一饮用水暴露,克伦特罗和莱克多巴胺非致癌健康风险较低。 结论 该养殖区饲料中存在添加β受体激动剂的情况并导致较高的粪便残留,已通过环境扩散引起饮用水的污染,需引起相关部门的高度重视。     

Caco-2细胞与肠道菌共培养初建体外模拟肠道共生模型

 【目的】构建体外模拟肠道共生系统,用于评价食源性抗菌药及其耐药菌作用于肠道菌群时对人体健康造成的危害风险。【方法】21d体外培养构建Caco-2细胞三维肠上皮,分成无菌对照组、混合的正常菌群组、沙门氏菌组、混合菌群-沙门氏菌组4组,制备混悬液,各组分别单独和混合培养4h,荧光定量PCR法测试共培养前后各菌16SrDNA菌量变化,电阻仪测试跨膜上皮电阻(TEER)数量;免疫荧光染色观察紧密连接蛋白ZO-1变化,评价三维肠上皮屏障功能的改变。【结果】 在体外共培养模型内,4种肠道菌混合培养4h后同单独培养组间比较,细菌量增长无统计学差异（P＞0.05)）;需氧菌的增长速度明显高于厌氧菌(P＜0.01),厌氧菌:需氧菌浓度比接近100:1,厌氧菌仍为优势菌。TEER和ZO-1免疫荧光染色结果均提示混合肠道菌群对Caco-2细胞三维肠上皮无明显破坏,侵入性沙门氏菌可显著降低TEER值,并观察到模型的ZO-1结构受到破坏。这种破坏作用在混合肠道菌群加沙门氏菌群组较轻。【结论】 Caco-2细胞三维肠上皮同乳双歧杆菌、植物乳酸杆菌、大肠杆菌和粪肠球菌组成的混合菌群体外共培养能建立稳定的体外肠上皮模型,并具有生物学活性;正常肠道菌群对侵入性沙门氏菌有拮抗作用。该模型可进一步完善作为食源性抗菌药、耐药菌与肠道系统相互作用研究模型的基础。     

Culture and immunological detection of Tropheryma whippelii from the duodenum of a patient with Whipple disease

CONTEXT: Culture of Tropheryma whippelii has been established only once, in human fibroblast cell lines from a heart valve inoculum. Molecular-based diagnostic techniques, although highly sensitive, may be less specific. New diagnostic tools involving isolation of bacteria from contaminated intestinal biopsies and immunohistological detection need to be developed. OBJECTIVE: To describe a novel method for detection and culture of T whippelii strains. DESIGN, SETTING, AND SUBJECTS: Laboratory analysis of duodenal biopsy specimens from a patient with typical relapsing Whipple disease with intestinal involvement, performed Marseille, France, in March 2000. Biopsy specimens were decontaminated with antimicrobial agents and inoculated onto cell cultures. Mouse anti-T whippelii polyclonal antibodies were used to detect T whippelii in fixed specimens taken from the patient before and after relapse, compared with specimens from 10 controls. The genotype of the isolate was determined by amplification and sequencing of 2 DNA fragments (ITS and 23S rRNA). MAIN OUTCOME MEASURE: Isolation and genotyping of a new strain(s) of T whippelii from the case patient's biopsy specimens. RESULTS: A strain was grown from the case patient's intestinal specimen that has a genotype different from the first strain isolated. During 2 episodes of Whipple disease, T whippelii bacteria were detected by immunochemistry in the patient's duodenal biopsy specimens, but not in controls. CONCLUSIONS: A second strain of T whippelii has been isolated and a protocol for isolation from the intestine has been proven to be efficient. Immunodetection of T whippelii in intestinal biopsy specimens may provide a useful tool for the diagnosis and follow-up of patients with Whipple disease. Both techniques need further evaluation and confirmation.     

华蟾毒精和羟基华蟾毒精的人肠内细菌代谢研究

目的：研究人肠内细菌对蟾酥中主要成分华蟾毒精和羟基华蟾毒精的代谢。方法：采用体外人肠内细菌粗酶与华蟾毒精和羟基华蟾毒精温孵法;根据波谱学和化学数据鉴定代谢产物的结构;根据原形化合物和代谢产物的体外抑制人癌细胞系(HCT-8、KB、BGC、BIU 和HeLa )的生长评价其抗肿瘤活性。结果：华蟾毒精可由人肠内细菌代谢产生去乙酰基华蟾毒精;羟基华蟾毒精可由人肠内细菌代谢产生去乙酰基羟基华蟾毒精;原形化合物具有强抑制人癌细胞生长的活性,而其代谢产物无活性。结论：华蟾毒精和羟基华蟾毒精由肠内细菌代谢而失活。