脂质体转染前庭椭圆囊上皮细胞的影响因素

利用阳离子脂质体- Lipofectamine TM 2000介导真核表达质粒(pRK5-EGFP)转染椭圆囊上皮细胞(UEC).当UEC培养至60%～100%融合时,用不同脂质体/DNA,分别转染6～24 h,发现UEC融合80%～90%,DNA(μg)/脂质体(μl)=1∶3,转染8 h时转染效率最高.认为LipofectamineTM 2000可有效的介导真核表达质粒转染UEC,其转染效率与细胞生长状态、脂质体/DNA、转染时间直接相关.     

逍遥散对慢性应激大鼠海马区Npas2基因表达的影响及其DNA甲基化修饰机制研究

目的采用逍遥散干预慢性应激损伤模型大鼠,观察其海马区神经PAS域蛋白2(neuronal PASdomain protein 2,Npas2)基因的表达及其DNA特定区域甲基化的修饰情况。方法将90只雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组、慢性应激模型组和逍遥散治疗组,共3组,每组30只。造模采用Cart多相慢性应激大鼠模型并加以改进,逍遥散治疗组在造模同时每天给予逍遥散2 m L,连续造模21 d。采用RT-PCR一步法及免疫组织化学染色法测定各组大鼠海马区Npas2基因及其蛋白表达情况,基因甲基化检测采用SequenomMass ARRAY法。结果慢性应激损伤大鼠海马Npas2m RNA及其相应蛋白表达有明显变化,与空白对照组和逍遥散治疗组比较差异均有统计学意义,但其m RNA及相应蛋白表达变化趋势不一致,其基因某些特定区域的甲基化程度有升高的趋势(个别位点有统计学差异)。逍遥散治疗能够明显逆转慢性应激引起的Npas2m RNA及其相应蛋白的表达变化,相应区域DNA甲基化程度表现出下调趋势(个别位点有统计学差异)。结论 Npas2基因参与了慢性应激损伤过程,其表达变化可能与其基因某些特定位点的甲基化修饰变化有关,逍遥散能够逆转这种表达改变,可能是通过调节Npas2基因特定位点的甲基化程度发挥作用。     

β-arrestin 1促进急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞衰老

目的:探讨β-arrestin1对急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞衰老的作用及其可能机制。方法:收集T-ALL患者骨髓样本和对照样本,应用RT-PCR和Western blot检测β-arrestin1在T-ALL患者中的表达,统计分析β-arrestin1的表达与T-ALL患者临床病理特征及预后的关系。构建稳定敲低或过表达β-arrestin1 Jurkat细胞株,应用CCK-8检测Jurkat细胞数,β-半乳糖苷酶染色(SA-β-gal)法检测β-arrestin1对Jurkat细胞衰老的作用,应用RNA-Seq与KEGG数据交叉分析筛选可能的信号通路,Western blot验证信号通路关键位点。结果:β-arrestin1在T-ALL患者样本中表达降低(P 0.01),且β-arrestin1的表达与外周血白细胞数(r=-0.601)、外周血原始细胞数(r=-0.516)和髓外浸润(r=-0.359)呈负相关,与化疗敏感性(r=0.393)呈正相关。利用敲低或过表达β-arrestin1的稳定Jurkat细胞株发现,β-arrestin1降低Jurkat细胞数(P 0.05),促进Jurkat细胞衰老(P0.05)。RNA-Seq与KEGG数据交叉分析发现,T-ALL患者中β-arrestin1可能通过Ras-p16-pRb-E2F1调控细胞衰老。经Western blot验证发现,β-arrestin1促进Ras和p16的表达,抑制pRB和E2F1的表达(P 0.05)。结论:β-arrestin1可能通过Ras-p16-pRb-E2F1促进T-ALL细胞衰老,延缓T-ALL疾病进程,这为阐释T-ALL新的发病机制提供理论依据。     

新生大鼠耳蜗基底膜上皮细胞层的分离：酶消化与机械解剖可否使分离部分细胞失去活性

目的：探讨利用酶消化和机械解剖相结合方法分离新生大鼠耳蜗上皮细胞层的方法。方法：实验于2003-02／06在解放军总医院耳鼻咽喉科研究所进行。取新出生SD大鼠耳蜗基底膜后，将其放人含有嗜热菌蛋白酶的D．Hank溶液中，37℃孵箱孵育25min进行酶消化，然后在高倍显微镜下应用自制的超细钨丝刀进行显微机械分离。对分离的耳蜗上皮细胞层进行半薄切片硼砂甲苯胺蓝染色与耳蜗冰冻切片苏木精一伊红染色进行形态对比。结果：①分离后的耳蜗基底膜上皮层在显微镜下呈透明的薄片样组织，其内的各种细胞形态保持完好。②硼砂甲苯胺蓝染色与苏木精一伊红染色进行形态比较发现，分离的耳蜗基底膜上皮层只含有基底膜上的上皮组织，包括耳蜗感觉上皮和非感觉上皮，即只有内毛细胞、外毛细胞、小上皮嵴、大上皮嵴和支持细胞，是纯净的上皮组织而没有任何的结缔组织。结论：利用37℃和25min时间的酶消化法及机械解剖相结合的实验技术可以分离出纯粹的耳蜗上皮细胞层，为进一步纯化上皮内的各种细胞，进行各种基因转染试验以及耳蜗内的各种基础实验建立细胞模型并提供有效地实验手段。     

窄带CE-Chirp声诱发的ASSR在婴儿听力筛查及诊断中的应用

目的探讨窄带CE-Chirp声诱发的听性稳态反应(ASSR)在婴儿听力筛查及诊断中应用的可行性。方法对10例(20耳)耳声发射听力筛查双耳未通过的婴儿(观察组)行ASSR筛查,年龄2～12个月,平均6个月。对照组为10例(20耳)听力正常且耳声发射听力筛查通过的婴儿,年龄为1～11个月,平均6个月。观察组婴儿自然睡眠或测试前口服10%的水合氯醛溶液后进入睡眠,对照组婴儿在自然睡眠下进行测试。应用丹麦国际听力(Inter-acoustics)的EclipseASSR1.02系统,刺激声为窄带(NB)CE-Chirp声,刺激重复率为90次/秒。耳机型号为ER-3A插入式气导耳机。刺激声强度≤80dBnHL时,4个频率双耳同时给声(0.5、1、2、4kHz);刺激声强度>80dBnHL时,单频率双耳给声。初始给声强度为30dBnHL,4个频率都引出反应,判定为ASSR筛查通过;若某个频率未引出,则以20dB一档提高刺激声强度直至引出反应后,再采用降10升5的方法,分别找到每个频率的反应阈。结果观察组10例(20耳)中有2耳(10%)ASSR检查通过,ASSR检查未通过的18耳分别得出500、1000、2000、4000Hz的听阈所用时间为2.4～36.1分钟,平均24.5分钟;对照组10例(20耳)ASSR检查均通过,所用时间为45秒～5.5分钟,平均3.2分钟。结论 NBCE-Chirp ASSR具有快速、特异性高的特点,可用于婴儿听力筛查和频率特异性听力评估。     

17例大学生水痘诊治分析

为了提高学校医务工作者对水痘的认识,预防水痘在校园内的流行,现将公安海警学院门诊2009年3月至2010年5月17例大学生水痘的诊治情况分析如下。     

Sirt1过表达间充质干细胞对小鼠前列腺癌移植瘤生长的影响

目的 探讨沉默信息调节因子2相关酶1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,Sirt1)过表达的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对小鼠前列腺癌移植瘤生长的影响及其可能的机制?方法 通过Sirt1腺病毒载体转染MSCs,构建过表达Sirt1的MSCs,Western blot检测Sirt1的表达?将前列腺癌RM-1细胞分别连同过表达Sirt1的MSCs(RM-1+MSCs-Sirt1组)?经绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)修饰的MSCs(RM-1+MSCs-GFP组)或未修饰的MSCs(RM-1+MSCs组)移植到C57BL/6小鼠腋窝皮下,建立小鼠前列腺癌皮下移植瘤模型,以未经处理的MSCs为空白对照组,RM-1细胞单独移植为对照组(RM-1组)?观察小鼠肿瘤生长情况,第10天处死小鼠,称取瘤重?获取肿瘤组织,流式细胞术检测自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)百分数?结果 成功建立了过表达Sirt1的MSCs细胞株,实验结束时,所有小鼠均存活?空白对照组小鼠实验全程未见成瘤,其余各组小鼠成瘤率为100%?实验结束时,RM-1+MSCs组?RM-1+MSCs-GFP组和RM-1+MSCs-Sirt1组小鼠皮下肿瘤重量分别为(1.51±0.06) g?(1.58±0.05) g和(0.71±0.04) g,与RM-1组的(1.10±0.05) g比较,差异均有统计学意义(P<0.05)?RM-1+MSCs-Sirt1组移植瘤组织中NK细胞数量显著高于RM-1+MSCs-GFP组?RM-1+MSCs组和空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)?结论 过表达Sirt1的MSCs可抑制小鼠前列腺癌皮下移植瘤生长,机制可能是过表达Sirt1的MSCs可募集更多的NK细胞,从而增强对肿瘤细胞的免疫杀伤作用?     

雌激素相关受体亚型在乳腺癌和前列腺癌中的作用及其机制的研究进展

雌激素相关受体(estrogen-related receptor,ERR)是一类缺乏天然配体的转录因子,属于孤儿核受体家族中的成员.ERR包括雌激素相关受体α(ERRα)、雌激素相关受体β(ERRβ)、雌激素相关受体γ(ERRγ)三个亚型,其受体与乳腺癌和前列腺癌的发生、进展、转移及耐药等过程密切相关,本文对ERRα、ERRβ、ERRγ在乳腺癌和前列腺癌中的作用及其机制作一综述.     

逍遥散对慢性应激损伤模型大鼠海马区Cacnb4基因表达的影响

目的:本研究用逍遥散干预慢性应激损伤模型大鼠,观察其海马区Cacnb4基因的表达情况。方法:以60只Wistar大鼠随机分为空白对照组、慢性应激模型组、逍遥散治疗组3组,每组20只。造模方法采用Cart多相性慢性应激大鼠模型并加以改进,逍遥散治疗组在造模同时给予逍遥散2m L/(只·d),连续造模21 d,于第22天处死大鼠并取材。采用RT-PCR一步法及免疫组化检测方法测定各组大鼠海马区域Cacnb4基因及其蛋白表达情况。结果:慢性应激模型组大鼠海马Cacnb4mRNA及其相应蛋白表达均显著上调,中药复方逍遥散可从基因及蛋白水平同时纠正这种上调的表达变化。结论:电压依赖型钙离子通道β4辅助亚基的表达变化参与了慢性应激损伤过程,逍遥散对慢性应激所致神经细胞损伤可能通过调节这一基因发挥保护性作用。